---
title: "\"МУК 4.1.2013-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тетраметрина в мясе, печени, жире и молоке сельскохозяйственных животных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии\""
number: "МУК 4.1.2013-05"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-2013-05"
---

## "МУК 4.1.2013-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тетраметрина в мясе, печени, жире и молоке сельскохозяйственных животных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

# "МУК 4.1.2013-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тетраметрина в мясе, печени, жире и молоке сельскохозяйственных животных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

(утв. Роспотребнадзором 17.10.2005)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 17 октября 2005 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

17 октября 2005 года

</div>



#### <a id="p100185"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТЕТРАМЕТРИНА В МЯСЕ,**
**ПЕЧЕНИ, ЖИРЕ И МОЛОКЕ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ**
**МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<div align="center">

<a id="p100004"></a>**МУК 4.1.2013-05**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения:

</div>

<div align="center">

с момента утверждения

</div>


1. <a id="p100005"></a>Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

<div align="center">

4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

</div>


<a id="p100009"></a>Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в мясе, печени, жире и молоке сельскохозяйственных животных массовых концентраций тетраметрина в диапазоне 0,1 - 2,0 мг/кг.
<a id="p100010"></a>Тетраметрин - действующее вещество ветеринарного препарата НЕОСТОМАЗАН 55 г/л (д.в. тетраметрин 50 г/л + циперметрин 5 г/л), фирма-производитель "Сева Санте Анималь" (Франция).
<a id="p100011"></a>(1RS,3RS;1RS,3RS)-2,2-диметил-3-(2-метилпроп-1-енил)циклопропанкарбоновой кислоты циклогекс-1-ен-1,2-дикарбоксимидометиловый эфир (IUPAC).
<a id="p100012"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100013"></a>    C  H  NO .
     19 25  4
<a id="p100014"></a>    Мол. масса: 331,4.
<a id="p100015"></a>    Бесцветное   кристаллическое  вещество  со  слабым  запахом  пиретрума.
Температура  плавления  -  68  -  70 °С. Давление паров при 25 °С: 2,1 мПа.
Плотность  -  1,1  (20  °С).  Растворимость  в  органических растворителях:
ацетон,   этанол,   метанол,  гексан,  н-октанол  -  более  20  г/куб.  дм.
Растворимость   в   воде  -  1,83  мг/куб.  дм  (при  25  °С).  Коэффициент
распределения в системе октанол/вода: K   log Р - 4,6 (25 °С).
                                       ow
<a id="p100016"></a>    Тетраметрин  разрушается  в  щелочах  и сильных кислотах: DT  : 16 - 20
                                                                50
дней  (pH  5),  1  день  (pH  7),  менее 1 часа (pH 9). Устойчив в кетонах,
хлороформе, ксилоле. Стабилен при хранении до 50 °С.
<a id="p100017"></a>    Краткая токсикологическая характеристика
<a id="p100018"></a>    Острая  пероральная  токсичность  (LD  )  для  крыс - более 5000 мг/кг;
                                         50
острая  дермальная  токсичность  (LD  )  для  кроликов > 2000 мг/кг; острая
                                    50
ингаляционная токсичность (LK  ) для крыс > 2,73 мг/куб. дм (4 часа).
                             50
<a id="p100019"></a>Область применения препарата
<a id="p100020"></a>Тетраметрин - инсектицид класса пиретроидов.
<a id="p100021"></a>Препарат Неостомазан 55 г/л (д.в. циперметрин 50 г/л + тетраметрин 5 г/л) рекомендуется для борьбы с эктопаразитами (мухами, вшами, блохами, иксодовыми клещами) животных - крупного рогатого скота, овец, лошадей, а также для лечения и профилактики псороптоза, демадекоза и чесотки.
<a id="p100022"></a>Рекомендуемые МДУ тетраметрина в мышцах, печени, почках, жире, молоке - 0,2 мг/кг.


## 1. <a id="p100023"></a>Метрологические характеристики метода


<a id="p100024"></a>Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и [2](#p100033).

<div align="right">

<a id="p100025"></a>Таблица 1

<a id="p100026"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ**

</div>



<table>
<colgroup><col width="19%"><col width="11%"><col width="19%"><col width="18%"><col width="15%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td colspan="5">Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>Предел обнаружения, мг/кг</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Стандартное отклонение, S, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td>Мясо</td><td>0,1</td><td>0,1 - 2,0</td><td>74,83</td><td>2,68</td><td>3,7</td></tr>
<tr><td>Печень</td><td>0,1</td><td>0,1 - 2,0</td><td>75,24</td><td>2,59</td><td>3,6</td></tr>
<tr><td>Жир</td><td>0,1</td><td>0,1 - 2,0</td><td>74,47</td><td>1,94</td><td>2,7</td></tr>
<tr><td>Молоко</td><td>0,1</td><td>0,1 - 2,0</td><td>76,07</td><td>2,92</td><td>4,0</td></tr>
</table>


<div align="right">

<a id="p100032"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100033"></a>**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ТЕТРАМЕТРИНА ИЗ МЯСА, ПЕЧЕНИ,**<br>
**ЖИРА, ГОВЯДИНЫ И КОРОВЬЕГО МОЛОКА (5 ПОВТОРНОСТЕЙ**

</div>

**ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**


| Среда | Внесено тетраметрина, мг/кг | Обнаружено тетраметрина, мг/кг | Полнота извлечения, % |
| --- | --- | --- | --- |
| Мясо (говядина) | 0,1 0,2 0,5 1,0 | 0,07281 +/- 0,00915 0,15361 +/- 0,02156 0,29968 +/- 0,01489 0,76884 +/- 0,08825 | 72,81 74,74 74,92 76,88 |
| Печень | 0,1 0,2 0,5 1,0 | 0,07583 +/- 0,01123 0,15000 +/- 0,00952 0,29867 +/- 0,00806 0,75460 +/- 0,09187 | 75,83 75,00 74,67 75,46 |
| Жир | 0,1 0,2 0,5 1,0 | 0,07476 +/- 0,00768 0,14803 +/- 0,00928 0,29977 +/- 0,01391 0,74100 +/- 0,06145 | 74,76 74,02 75,01 74,10 |
| Молоко | 0,1 0,2 0,5 1,0 | 0,07458 +/- 0,01099 0,15433 +/- 0,01813 0,30227 +/- 0,02299 0,79226 +/- 0,07222 | 74,58 77,16 75,96 76,76 |



## 2. <a id="p100051"></a>Метод измерений


<a id="p100052"></a>Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором (УФ) после экстракции из анализируемой пробы ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на колонке с флорисилом.
<a id="p100053"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
<a id="p100054"></a>Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы - 50 нг.


## 3. <a id="p100055"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



### <a id="p100056"></a>3.1. Средства измерений


<a id="p100057"></a>Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым         Номер Госреестра 15945-97
детектором с переменной длиной волны (фирмы
Perkin-Elmer, США)
<a id="p100058"></a>Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
<a id="p100059"></a>Весы лабораторные общего назначения с ГОСТ 7328
наибольшим пределом взвешивания до 500 г и
пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г
<a id="p100060"></a>Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2 [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100061"></a>Меры массы ГОСТ 7328
<a id="p100062"></a>Пипетки градуированные 2-го класса точности [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см
<a id="p100063"></a>Пробирки градуированные вместимостью 10 куб. см [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100064"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
вместимостью 25, 50, 100, 200 и 1000 куб. см
<a id="p100065"></a>Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100066"></a>3.2. Реактивы


<a id="p100067"></a>Тетраметрин, аналитический стандарт с
содержанием основного вещества 99,2%
"Сева Санте Анималь" (Франция)
<a id="p100068"></a>Ацетонитрил для хроматографии, хч                 ТУ-6-09-4326-76
<a id="p100069"></a>Вода деионизованная                               ГОСТ 6702
<a id="p100070"></a>н-Гексан, хч                                      ТУ-6-09-3375
<a id="p100071"></a>Диэтиловый эфир                                   ОСТ 84-2005-88
<a id="p100072"></a>Метиловый спирт (метанол), хч [ГОСТ 6995](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77)
<a id="p100073"></a>Метилен хлористый (дихлорметан), хч [ГОСТ 12794](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80)
<a id="p100074"></a>Натрий сернокислый безводный, хч [ГОСТ 4166](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100075"></a>Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233
<a id="p100076"></a>Флорисил (60 - 100 меш), адсорбент для
хроматографии ("Флука", Швейцария)
<a id="p100077"></a>Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.


### <a id="p100078"></a>3.3. Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100079"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с              ТУ 64-1-2851-78
<a id="p100080"></a>Аквадистиллятор [ГОСТ 22340](https://bukva.ai/docs/gost-22340-89)
<a id="p100081"></a>Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
<a id="p100082"></a>Бумажные фильтры "красная лента" обеззоленные     ТУ 6-09-2678-77
или фильтры из хроматографической бумаги
<a id="p100083"></a>Ватман 3ММ
<a id="p100084"></a>Воронки делительные вместимостью 250 и 500 ГОСТ 25336
куб. см
<a id="p100085"></a>Воронки конусные диаметром 30 - 37 и 60 мм ГОСТ 25336
<a id="p100086"></a>Груша резиновая
<a id="p100087"></a>Дефлегматор елочный                               ГОСТ 9773
<a id="p100088"></a>Индикаторная бумага универсальная
<a id="p100089"></a>Колбы плоскодонные вместимостью 100, 250 и [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
400 куб. см
<a id="p100090"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
10, 100 и 250 куб. см
<a id="p100091"></a>Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм
<a id="p100092"></a>Набор для фильтрации растворителей через мембрану
<a id="p100093"></a>Насос водоструйный вакуумный                      ГОСТ 10696
<a id="p100094"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М            ТУ 25-11-917-74
или ротационный вакуумный испаритель В-169
фирмы Buchi, Швейцария
<a id="p100095"></a>Стаканы химические вместимостью 100 и 250 ГОСТ 25336
куб. см
<a id="p100096"></a>Стекловата
<a id="p100097"></a>Стеклянная колонка длиной 25 см, внутренним
диаметром 8 - 10 мм
<a id="p100098"></a>Стеклянные палочки
<a id="p100099"></a>Установка для перегонки растворителей
<a id="p100100"></a>Хроматографическая колонка стальная длиной
25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая
<a id="p100101"></a>Кромасил 100 С18, зернением 8 мкм
<a id="p100102"></a>Центрифуга                                        ТУ 42-219-79
<a id="p100103"></a>Шприц для ввода образцов для жидкостного
хроматографа вместимостью 50 - 100 куб. мм
<a id="p100104"></a>Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100105"></a>Требования безопасности


<a id="p100106"></a>4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф.
<a id="p100107"></a>4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны". Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.


## 5. <a id="p100108"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100109"></a>К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
<a id="p100110"></a>К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.


## 6. <a id="p100111"></a>Условия измерений


<a id="p100112"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100113"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100114"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100115"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100116"></a>Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление градуировочных растворов и раствора внесения, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с флорисилом для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке.


### <a id="p100117"></a>7.1. Подготовка органических растворителей



##### <a id="p100118"></a>7.1.1 Очистка ацетонитрила

<a id="p100119"></a>Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

##### <a id="p100120"></a>7.1.2 Очистка н-гексана и хлористого метилена

<a id="p100121"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.


### <a id="p100122"></a>7.2. Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ


<a id="p100123"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помешают 680 куб. см ацетонитрила, 320 куб. см деионизированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.


### <a id="p100124"></a>7.3. Кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100125"></a>Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по [п. 7.2](#p100122)) при скорости подачи растворителя 1,5 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.


### <a id="p100126"></a>7.4. Приготовление градуировочных растворов и растворов внесения



##### <a id="p100127"></a>7.4.1 Исходный раствор тетраметрина (концентрация 500 мкг/куб. см)

<a id="p100128"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,05 г тетраметрина, растворяют в 50 - 70 куб. см метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.
<a id="p100129"></a>Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.

##### <a id="p100130"></a>7.4.2 Рабочие растворы N 1 - 5 тетраметрина (концентрация 2,5 - 50,0 мкг/куб. см)

<a id="p100131"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см исходного раствора с концентрацией 500 мкг/куб. см [(п. 7.4.1)](#p100127), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией тетраметрина 5; 10; 25 и 50 мкг/куб. см соответственно.
<a id="p100132"></a>Для приготовления раствора N 1 с концентрацией тетраметрина 2,5 мкг/куб. см в мерную колбу вместимостью 50 куб. см помещают 1,0 куб. см исходного раствора с концентрацией 500 мкг/куб. см [(п. 7.4.1)](#p100127), доводят до метки ацетонитрилом, тщательно перемешивают.
<a id="p100133"></a>Растворы хранятся в холодильнике не более месяца.
<a id="p100134"></a>Рабочие растворы используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения тетраметрина из исследуемых образцов.


### <a id="p100135"></a>7.5. Установление градуировочной характеристики


<a id="p100136"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации тетраметрина в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 5-ти растворам для градуировки N 1 - 5.
<a id="p100137"></a>В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.4](#p100162). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.


### <a id="p100138"></a>7.6. Подготовка колонки с флорисилом для очистки экстракта


<a id="p100139"></a>Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, насыпают 5 г флорисила, медленно наливают в колонку (при открытом кране) 15 - 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонка готова к работе.


### <a id="p100140"></a>7.7. Проверка хроматографического поведения тетраметрина на колонке с флорисилом


<a id="p100141"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 1 куб. см рабочего раствора N 5 с концентрацией тетраметрина 50 мкг/куб. см [(п. 7.4.2)](#p100130), растворитель упаривают досуха, остаток растворяют в 5 куб. см гексана и наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.6](#p100138). Колбу обмывают трижды порциями гексана по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Промывают колонку 50 куб. см гексана, элюат отбрасывают.
<a id="p100142"></a>Затем колонку промывают 120 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см ацетонитрила, анализируют по [п. 9.4](#p100162).
<a id="p100143"></a>Фракции, содержащие тетраметрин, объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100144"></a>Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый объем элюента.
<a id="p100145"></a>Примечание: Проверку хроматографического поведения тетраметрина следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.


## 8. <a id="p100146"></a>Отбор проб


<a id="p100147"></a>Отбор продуктов питания осуществляется в соответствии с требованиями ГОСТов на исследуемые продукты: [ГОСТ 7269-79](https://bukva.ai/docs/gost-7269-79) "Мясо", [ГОСТ 3622-68](https://bukva.ai/docs/gost-3622-68) "Молоко и молочные продукты".
<a id="p100148"></a>Обобранные образцы продуктов герметично упаковывают в полиэтиленовые мешки, стеклянные банки с притертыми крышками. Образцы анализируют непосредственно после отбора проб или хранят в морозильной камере при -18 °С.
<a id="p100149"></a>Непосредственно перед анализом образцы размораживают, пробы органов и тканей массой 200 - 300 г тщательно измельчают с использованием гомогенизатора. Пробу гомогенизированного образца мяса печени и жира, а также молока массой 50 г взвешивают на аналитических весах в плоскодонных колбах вместимостью 250 куб. см.


## 9. <a id="p100150"></a>Выполнение определения



### <a id="p100151"></a>9.1. Экстракция


<a id="p100152"></a>К пробе гомогенизированного образца органов животных, а также молока массой 50 г, помещенной в колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 100 куб. см ацетонитрила, тщательно перемешивают путем встряхивания в течение 5 мин., выдерживают на ультразвуковой бане 1 мин., затем на встряхивателе 30 мин. и помещают на 12 - 15 часов в холодильник (4 - 6 °С).
<a id="p100153"></a>Надосадочную жидкость осторожно переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см, фильтруя ее через тампон из стекловаты, помещенный в конусную химическую воронку.
<a id="p100154"></a>Для более полного разделения фаз эмульсионный слой пробы молока переносят в центрифужные стаканы и центрифугируют при 3000 об./мин. в течение 5 мин., затем отделившийся раствор объединяют с первой порцией надосадочной жидкости в круглодонной колбе.
<a id="p100155"></a>Раствор упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не более 40 °С до объема 40 - 50 куб. см (приблизительно в 2 раза), внимательно следя за процессом, не допуская вспенивания и переброса жидкости, затем очищают перераспределением по п. 9.2.


### <a id="p100156"></a>9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей


<a id="p100157"></a>Сконцентрированный раствор, полученный по [п. 9.1](#p100151), переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, вносят в нее 150 куб. см деионизованной воды, 5 куб. см насыщенного раствора хлористого натрия и 50 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (1:1, по объему), интенсивно встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний слой возвращают в круглодонную колбу, верхний фильтруют через 2-см слой сульфата натрия (помещенный в конусную химическую воронку на бумажном фильтре) в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см. Водную фазу переносят в делительную воронку и операцию экстракции повторяют новой порцией смеси гексан - диэтиловый эфир (1:1, по объему) объемом 50 куб. см.
<a id="p100158"></a>Профильтрованный объединенный экстракт упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 20 куб. см ацетонитрила, насыщенного гексаном, и переносят в делительную воронку вместимостью 150 куб. см, добавляют 20 куб. см гексана, интенсивно встряхивают в течение 1 мин. Разделившиеся фазы переносят в отдельные конические колбы. Нижний ацетонитрильный слой возвращают в делительную воронку, вносят новую порцию гексана объемом 20 куб. см и операцию экстракции повторяют. Затем нижний ацетонитрильный слой переносят в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см, к оставшемуся в воронке гексану приливают ранее отделенный гексановый слой, вносят 10 куб. см ацетонитрила, насыщенного гексаном, встряхивают 1 мин. После разделения фаз нижний ацетонитрильный слой объединяют с первым экстрактом, помещенным в круглодонную колбу, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.3.


### <a id="p100159"></a>9.3. Очистка экстракта на колонке с флорисилом


<a id="p100160"></a>Остаток, полученный по [п. 9.2](#p100156), находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 5 куб. см гексана и наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.6](#p100138). Колбу обмывают трижды порциями гексана по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Промывают колонку 50 куб. см гексана, элюат отбрасывают.
<a id="p100161"></a>Тетраметрин элюируют с колонки 100 куб. см смеси гексан - диэтиловый эфир (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек., собирая элюат в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 40 °С, остаток в колбе растворяют в 2 куб. см ацетонитрила и анализируют содержание тетраметрина по п. 9.4.


### <a id="p100162"></a>9.4. Условия хроматографирования


<a id="p100163"></a>Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
<a id="p100164"></a>Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Кромасил 100 С18, зернением 8 мкм.
<a id="p100165"></a>Температура колонки: комнатная.
<a id="p100166"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (680:320, по объему).
<a id="p100167"></a>Скорость потока элюента: 1,5 куб. см/мин.
<a id="p100168"></a>Рабочая длина волны: 280 нм.
<a id="p100169"></a>Чувствительность: 0,01 ед. абсорбции на шкалу.
<a id="p100170"></a>Объем вводимой пробы: 20 куб. мм.
<a id="p100171"></a>Ориентировочное время выхода тетраметрина: 10,3 - 10,5 мин.
<a id="p100172"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор тетраметрина с концентрацией 50 мкг/куб. см, разбавляют ацетонитрилом.


## 10. <a id="p100173"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100174"></a>Содержание тетраметрина в пробе (Х, мг/кг) рассчитывают по формуле:

                                    А х V
<a id="p100175"></a>                                Х = -----,
                                      m

<a id="p100176"></a>где:
<a id="p100177"></a>А - концентрация тетраметрина, найденная по градуировочному графику, мкг/куб. см;
<a id="p100178"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
<a id="p100179"></a>m - масса анализируемого образца, г.


## 11. <a id="p100180"></a>Контроль погрешности измерений


<a id="p100181"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".


## 12. <a id="p100182"></a>Разработчики


<a id="p100183"></a>Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана).



<a id="p100184"></a>

---
