МУК 4.1.2001-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств квизалофоп-П-тефурила по основному метаболиту квизалофопу-П в семенах рапса и растительных маслах (рапса, сои, подсолнечника) методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
(утв. Роспотребнадзором 22.07.2005)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 1 октября 2005 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
22 июля 2005 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ КВИЗАЛОФОП-П-ТЕФУРИЛА ПО ОСНОВНОМУ МЕТАБОЛИТУ КВИЗАЛОФОПУ-П В СЕМЕНАХ РАПСА И РАСТИТЕЛЬНЫХ МАСЛАХ (РАПСА, СОИ, ПОДСОЛНЕЧНИКА) МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1 октября 2005 года
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана; Всероссийским институтом защиты растений при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, (протокол № 2 от 16.06.2005).
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в семенах рапса и растительных маслах (рапса, сои, подсолнечника) массовых концентраций квизалофоп-П-тефурила по метаболиту квизалофопу-П в диапазоне 0,02 — 0,2 мг/кг.
Квизалофоп-П-тефурил — действующее вещество препарата ПАНТЕРА, КЭ (40 г/л), фирма-производитель «Кромптон» (Англия).
(R)-2-[4-(6=хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси]пропионовой кислоты тетрагидрофурфуриловый эфир (IUPAC).
Структурная формула (не приводится).
C H ClN O . 22 21 2 5
Кристаллический порошок белого цвета без запаха. Температура плавления -3
72,5 - 74,5 °С. Давление паров при 25 °С: 7,9 х 10 мПа. Растворимость в органических растворителях (г/куб. дм): метанол - 64; толуол - 652;
н-гексан — 12. Растворимость в воде — 4 мг/куб. дм (при 25 °С). Коэффициент распределения в системе октанол/вода: K log P — 4,32. ow
Квизалофоп-П-тефурил стабилен при комнатной температуре (в герметичной упаковке) не менее года, при 55 °С - не менее 14-ти дней, на свету - не менее 7-ми дней. Стабильность в водных растворах: DT (22 °С) - 82 дня
50
(нейтральная среда); 8,1 дня (pH 5); 7 час. (pH 9).
Основным продуктом гидролитического разложения (метаболитом) квизалофоп-П-тефурила является Квизалофоп-П (кислота).
Краткая токсикологическая характеристика:
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 1012 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность (LD ) для кроликов > 2000 мг/кг; острая 50 ингаляционная токсичность (LK ) для крыс > 4,8 мг/куб. дм (4 часа). 50
2-[4-(6-хлорхиноксалин-2-илокси)фенокси]пропионовая кислота.
Структурная формула (не приводится).
C H ClN O . 17 13 2 4
Кристаллический порошок белого цвета. Давление паров при 20 °С: 8,7 х -7
10 мПа. Растворимость в воде 3 мг/куб. дм (при 20 °С). Вещество хорошо растворимо в метаноле, этаноле, ацетоне, ксилоле, умеренно в ацетонитриле. Коэффициент распределения в системе октанол/вода: K log P - 4,32.
ow
Вещество относительно стабильно в кислой среде, период полураспада в почве до 60-ти дней.
Квизалофоп-П является основным биологически активным метаболитом, определяемым в растениях и почве.
Квизалофоп-П-тефурил — послевсходовый гербицид для борьбы с однолетними и многолетними злаковыми сорными растениями при возделывании овощных и технических культур.
Гигиенические нормативы: МДУ в картофеле, моркови, томатах, капусте, подсолнечнике (семена), сое (семена), свекле сахарной, кормовой, столовой — 0,04 мг/кг; луке (репка), подсолнечнике (масло), сое (масло) — 0,06 мг/кг.
1. Метрологические характеристики метода
Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и 2.
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20 | ||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % | |
| Семена рапса | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 86,00 | 7,49 | 10,4 |
| Растительное масло (рапса) | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 89,80 | 5,53 | 7,7 |
(5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)
| Среда | Внесено квизалофопа-П, мг/кг | Обнаружено квизалофопа-П, мг/кг | Полнота извлечения, % |
|---|---|---|---|
| Семена | 0,02 0,04 0,1 0,2 | 0,017328 +/- 0,003723 0,033877 +/- 0,004753 0,085099 +/- 0,012797 0,169332 +/- 0,025369 | 89,54 84,69 85,10 84,67 |
| Масло | 0,02 0,04 0,1 0,2 | 0,017845 +/- 0,002737 0,035282 +/- 0,003918 0,090569 +/- 0,012616 0,182424 +/- 0,021874 | 89,22 88,21 90,57 91,21 |
2. Метод измерений
Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором (УФ) после экстракции из анализируемой пробы семян смесью ацетонитрил — вода — уксусная кислота, масла — ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на колонке с кизельгелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы — 2 нг.
В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания рапса, подсолнечника, сои.
3. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
3.1. Средства измерений
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором с Номер Госреестра переменной длиной волны (фирмы Perkin-Elmer, США) 15945-97
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
Весы лабораторные общего назначения, с наибольшим ГОСТ 7328 пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г
Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2 и 2-1000-2 ГОСТ 1770
Пипетки градуированные 2-го класса точности ГОСТ 29227 вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см
Пробирки градуированные вместимостью 10 куб. см ГОСТ 1770
Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью 25, ГОСТ 1770 50, 100, 200 и 1000 куб. см
Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.
3.2. Реактивы
Квизалофоп-П-тефурил, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 99,2% (фирма Кромптон)
Квизалофоп-П, аналитический стандарт с содержанием основного вещества 98,4% (фирма Кромптон)
Кизельгель 60 для колоночной хроматографии, 30 — 60 мкм (Riedel-de-Haen, Германия)
Ацетонитрил для хроматографии, хч ТУ-6-09-4326-76 Вода деионизованная ГОСТ 6702 н-Гексан, хч ТУ-6-09-3375 Изопропиловый спирт (пропанол-2), хч ТУ 6-09-402-75 Калий гидроксид, осч ОСТ 6-01-301
Кислота орто-фосфорная, хч, 85% ГОСТ 6552
Кислота уксусная, ледяная, хч ГОСТ 61
Метиловый спирт (метанол), хч ГОСТ 6995
Метилен хлористый (дихлорметан), хч ГОСТ 12794
Натрий сернокислый, безводный, хч ГОСТ 4166
Этиловый эфир уксусной кислоты, ч ГОСТ 22300
Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.
3.3. Вспомогательные устройства, материалы
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78
Аквадистиллятор ГОСТ 22340
Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
Бумажные фильтры «красная лента», обеззоленные или ТУ 6-09-2678-77 фильтры из хроматографической бумаги Ватман 3ММ
Воронки делительные вместимостью 250 и 500 куб. см ГОСТ 25336
Воронки конусные диаметром 30 — 37 и 60 мм ГОСТ 25336
Индикаторная бумага универсальная
Колбы плоскодонные вместимостью 100, 250 и 400 куб. см ГОСТ 9737
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10, 100 и 250 ГОСТ 9737 куб. см
Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм
Мешалка магнитная ММ-5 ТУ 25-11.834-80
Набор для фильтрации растворителей через мембрану
Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 10696 Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ротационный ТУ 25-11-917-74
вакуумный испаритель В-169 фирмы Buchi, Швейцария
Стаканы химические вместимостью 100 и 250 куб. см ГОСТ 25336
Стеклянная колонка длиной 25 см, внутренним диаметром 8 — 10 мм
Установка для перегонки растворителей
Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Кромасил 100 С18 зернением 8 мкм
Шприц для ввода образцов для жидкостного хроматографа вместимостью 50 — 100 куб. мм
Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
4. Требования безопасности
4.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостной хроматограф.
4.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны». Организация обучения работников безопасности труда — по ГОСТ 12.0.004.
5. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
6. Условия измерений
При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
7. Подготовка к выполнению измерений
Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с кизельгелем для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке.
7.1 Подготовка органических растворителей
7.1.1 Очистка ацетонитрила
Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.
7.1.2 Очистка этилацетата
Этилацетат промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.
7.1.3 Очистка н-гексана и хлористого метилена
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
7.2 Приготовление смеси растворителей для экстракции
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 900 куб. см ацетонитрила, 100 куб. см дистиллированной воды и 1 куб. см уксусной кислоты, тщательно перемешивают.
7.3 Приготовление 0,2% раствора уксусной кислоты в этилацетате
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 600 — 700 куб. см этилацетата, вносят 2 куб. см уксусной кислоты, тщательно перемешивают.
7.4 Приготовление 0,2 н раствора гидроксида калия
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 11,2 г гидроксида калия, растворяют в 600 — 700 куб. см деионизованной воды, доводят водой до метки, тщательно перемешивают.
7.5 Приготовление 6 н раствора серной кислоты
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 400 — 500 куб. см деионизованной воды, вносят 336 куб. см концентрированной серной кислоты, перемешивают, доводят водой до метки, вновь перемешивают.
7.6 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ
В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают куб. 550 см ацетонитрила, 450 куб. см деионизированной воды, 1 куб. см орто-фосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.
7.7 Кондиционирование хроматографической колонки
Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по п. 7.6) при скорости подачи растворителя 1,0 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.
7.8 Приготовление градуировочных растворов
7.8.1. Исходный раствор квизалофопа-П для градуировки (концентрация 500 мкг/куб. см).
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г квизалофопа-П, растворяют в 50 — 70 куб. см метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев.
Растворы № 1 — 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.
7.8.2. Раствор № 1 квизалофопа-П для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см).
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 2,0 куб. см исходного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.8.1), доводят до метки подвижной фазой (приготовленной по п. 7.6), тщательно перемешивают.
Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
7.8.3. Рабочие растворы № 2 — 5 квизалофопа-П для градуировки (концентрация 0,1 — 1,0 мкг/куб. см).
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 1,0; 2,0; 5,0 и 10,0 куб. см раствора № 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см (п. 7.8.2), доводят до метки подвижной фазой, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы № 2 — 5 с концентрацией квизалофопа-П 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/куб. см соответственно. Растворы хранятся в холодильнике не более недели.
7.9 Приготовление растворов внесения для оценки полноты извлечения квизалофопа-П из исследуемых образцов
7.9.1 Исходный раствор квизалофопа-П (концентрация 100 мкг/куб. см).
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г квизалофопа-П, растворяют в 50 — 70 куб. см изопропилового спирта, доводят им же до метки, тщательно перемешивают.
7.9.2. Основной раствор квизалофопа-П для внесения (концентрация 10 мкг/куб. см).
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10,0 куб. см исходного раствора с концентрацией 100 мкг/куб. см (п. 7.9.1), доводят до метки изопропанолом, тщательно перемешивают.
Раствор хранится в холодильнике не более 2-х недель.
7.10 Установление градуировочной характеристики
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади (высоты) пика от концентрации квизалофопа-П в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки № 2 — 5.
В испаритель хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по п. 9.3. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.
7.11 Подготовка колонки с кизельгелем для очистки экстракта
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8 — 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г кизельгеля в 15 — 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1,5 см. После этого колонка готова к работе.
7.12 Проверка хроматографического поведения квизалофопа-П на колонке с кизельгелем
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помешают 0,5 куб. см основного раствора квизалофопа-П для внесения с концентрацией квизалофопа-П 10 мкг/куб. см (п. 7.9.2), растворитель упаривают досуха, добавляют 1 куб. см этилацетата, помещают на ультразвуковую баню на 1 мин., вносят 4 куб. см гексана, перемешивают, вновь помещают на ультразвуковую баню на 1 мин. и наносят на колонку, подготовленную по п. 7.11. Промывают колонку последовательно 30 куб. см гексана, 25 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему), затем 25 куб. см смеси гексан — этилацетат (1:1, по объему) и 30 куб. см этилацетата, элюат отбрасывают.
Затем колонку промывают 70 куб. см 2%-ным раствором уксусной кислоты в этилацетате (п. 7.3) со скоростью 1 — 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см подвижной фазы, анализируют содержание квизалофопа-П по п. 9.3.
Фракции, содержащие квизалофоп-П, объединяют и вновь анализируют.
Устанавливают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
Примечание: Проверку хроматографического поведения квизалофопа-П следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.
8. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с правилами, определенными ГОСТ 10852-86.
Отобранные пробы семян рапса хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более 10-ти дней. Для длительного хранения образцы замораживают и хранят при температуре -18 °С.
Пробы масла (помещенные в стеклянные флаконы) хранят в холодильнике в течение месяца.
9. Выполнение определения
9.1. Семена рапса
9.1.1 Экстракция
Образец измельченных семян массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 400 куб. см, вносят 100 куб. см смеси ацетонитрил — вода — уксусная кислота (90:10:1, по объему) и помещают на встряхиватель на 1 час.
Раствор фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр «красная лента» под вакуумом. Осадок на фильтре трижды промывают смесью ацетонитрил — вода — уксусная кислота (90:10:1, по объему) порциями по 40 и 30 куб. см (дважды). Экстракт и промывки переносят в мерный цилиндр вместимостью 200 — 250 куб. см с пришлифованной пробкой, перемешивают. Далее половину раствора (соответствующую массе анализируемого образца 10 г) переносят в делительную воронку вместимостью 500 куб. см и проводят очистку экстракта по п. 9.1.2.
9.1.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
К экстракту, полученному по п. 9.1.1, помещенному в делительную воронку вместимостью 500 куб. см, добавляют 0,1 н раствора гидроксида калия, перемешивают и оставляют на 30 мин. Затем в делительную воронку вносят 50 куб. см гексана, интенсивно ее встряхивают в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют и отбрасывают. Операцию промывки щелочного раствора повторяют еще дважды, используя по 30 куб. см гексана.
Далее раствор в делительной воронке подкисляют с помощью 6 н раствора серной кислоты до pH 3 (контролируя его значение по универсальной индикаторной бумаге). Вносят в воронку 50 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний органическим слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см.
Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя по 40 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по п. 9.1.3.
9.1.3 Очистка экстракта на колонке с кизельгелем
Остаток, полученный по п. 9.1.2, находящийся в круглодонной колбе, растворяют в 2-х куб. см этилацетата, помещая на ультразвуковую баню на 1 мин., добавляют 8 куб. см гексана, перемешивают, вновь помещают на ультразвуковую баню на 1 мин. Затем раствор наносят на колонку, подготовленную по п. 7.11. Колбу обмывают трижды порциями гексана по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Промывают колонку последовательно 30 куб. см гексана, 25 куб. см смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему), 25 куб. см смеси гексан — этилацетат (1:1, по объему) и 30 куб. см этилацетата, элюат отбрасывают.
Квизалофоп-П элюируют с колонки 50 куб. см 0,2%-ной уксусной кислоты в этилацетате со скоростью 1 — 2 капли в сек., собирая элюат в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С, остаток в колбе растворяют в 2-х куб. см подвижной фазы и анализируют содержание квизалофопа-П по п. 9.3.
9.2. Масло
9.2.1 Экстракция
Образец масла массой 10 г помешают в коническую колбу вместимостью 200 — 250 куб. см, вносят 50 куб. см ацетонитрила и помещают на магнитную мешалку на 15 мин. После полного разделения фаз верхний ацетонитрильный слой осторожно декантируют через бумажный фильтр, помещенный в конусную воронку, в круглодонную колбу вместимостью 150 — 200 куб. см. Экстракцию повторяют еще дважды порциями ацетонитрила по 30 куб. см. Объединенный отфильтрованный экстракт, помещенный в круглодонную колбу, упаривают досуха при температуре не выше 35 °С и подвергают очистке по п. 9.2.2.
9.2.2 Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Объединенный отфильтрованный экстракт переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см гексана, интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз нижний ацетонитрильный слой отделяют, перенося в коническую колбу. Верхний гексановый слой отбрасывают. Ацетонитрильную фазу вновь переносят в делительную воронку и повторяют операцию промывки еще дважды, используя по 30 куб. см гексана. Ацетонитрильный раствор переносят в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см и подвергают очистке на колонке с кизельгелем по п. 9.1.3.
9.3. Условия хроматографирования
Измерения выполняют при следующих режимных параметрах:
Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Кромасил 100 С 18 зернением 8 мкм
Температура колонки: комнатная
Подвижная фаза: ацетонитрил — вода — орто-фосфорная кислота (550:450:1, по объему)
Скорость потока элюента: 1,0 куб. см/мин
Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу
Объем вводимой пробы: 20 куб. мм
Ориентировочное время выхода квизалофопа-П: 9,5 — 9,8 мин
Образцы, дающие пики большие, чем градуировочный раствор квизалофопа-П с концентрацией 1 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ (подготовленной по п. 7.7).
10. Обработка результатов анализа
Содержание квизалофоп-П-тефурила в пробе (Х, мг/кг) по основному метаболиту квизалофопу-П рассчитывают по формуле:
А х V х К
А — концентрация квизалофопа-П, найденная по градуировочному графику, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m — масса анализируемого образца, г;
К — коэффициент пересчета содержания квизалофопа-П на квизалофоп-П-тефурил, равный 1,24 (по соотношению молекулярных масс).
11. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».