--- title: "\"МУК 4.1.1974-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пираклостробина в зерне, соломе и зеленой массе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.1974-05" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1974-05" --- ## "МУК 4.1.1974-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пираклостробина в зерне, соломе и зеленой массе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.1974-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств пираклостробина в зерне, соломе и зеленой массе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 21.04.2005) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2005 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
21 апреля 2005 года
#### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПИРАКЛОСТРОБИНА** **В ЗЕРНЕ, СОЛОМЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР** **МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1974-05**
Дата введения
1 июля 2005 года
## 1. Вводная часть Название действующего вещества по ИСО: пираклостробин. Название действующего вещества по ИЮПАК: метил N-{2-[1-(4-хлорфенил)-1H-пиразол-3-илоксиметил]фенил}(N-метокси)карбамат. Структурная формула (не приводится). Эмпирическая формула: C H ClN O . 19 18 3 4 Молекулярная масса: 387,8. Химически чистый пираклостробин представляет собой белый или светло-бежевый кристаллический порошок без запаха. Температура плавления: 63,7 - 65,2 °С. -5 Давление паров 2,6 х 10 мПа (при 20 °С). Коэффициент распределения октанол - вода K log P 3,99 (22 °С). ow Растворимость в воде 1,9 мг/л (при 20 °С). Растворимость в органических растворителях (г/л при 20 °С): ацетон - более 200, ацетонитрил - более 980, изопропанол - 40, метанол - 140. Стабилен в течение более 30 дней при рН 5,7 и температуре 25 °С; подвержен фотолизу в воде - ДТ составляет менее 2 часов. 50 Краткая токсикологическая характеристика Пираклостробин относится к малоопасным по острой оральной (СД для 50 крыс - более 5000 мг/кг), дермальной токсичности (СД для крыс - более 50 2000 мг/кг) и умеренно опасным веществам по ингаляционной токсичности (СК 50 4 ч для крыс 4000 - 7000 мг/куб. м). Он не вызывает раздражения слизистых оболочек глаз и кожи и не обладает мутагенным, тератогенным, эмбриотоксическим, канцерогенным действием. Гигиенические нормативы МДУ в зерне хлебных злаков 0,1 мг/кг. Область применения препарата Пираклостробин - фунгицид из группы стробилуринов контактного и глубинного действия с длительным защитным эффектом. Высокоэффективен против возбудителей ложной и мучнистой настоящей росы. Рекомендуется для борьбы с фитопатогенными грибами на зерновых, овощных и плодовых культурах. ## 2. Методика определения остаточных количеств пираклостробина в зерне, соломе и зеленой массе зерновых колосовых культур методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Методика основана на определении пираклостробина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием ультрафиолетового детектора после его экстракции из образцов органическим растворителем, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на концентрирующих патронах на основе силикагеля (Диапак-Амин и Диапак С16). Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки. ##### 2.1.2 Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода представлена в таблице. Таблица **МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА ОПРЕДЕЛЕНИЯ**
Метрологические параметры, р = 0,95, n = 20
Анализируемый объектпредел обнаружения (мг/л)диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/л)среднее значение определения, %стандартное отклонение S, %доверительный интервал среднего результата, %, +/-
Зерно0,020,02 - 0,2083,22,3781,11
Зеленая масса0,020,02 - 0,20782,7871,31
Солома0,020,02 - 0,2079,42,8981,36
##### 2.1.3 Избирательность метода В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании зерновых колосовых культур. ### 2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование ##### 2.2.1 Реактивы, материалы и растворы Пираклостробин, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9%, фирма БАСФ Ацетон, осч, 9 - 5 ТУ 2633-00-4-11291058-94 Ацетонитрил ТУ 6-09-3534-87 Вода бидистиллированная, деионизированная ГОСТ 7602-72 н-Гексан, ч ТУ 6-09-3375 Калий марганцово-кислый, чда ГОСТ 20490-75 Кальций хлористый, хч ГОСТ 4161-76 Кислота серная концентрированная, ч ГОСТ 4204-77 Кислота соляная, концентрированная ГОСТ 857-88 Кислота уксусная, ледяная ГОСТ 61-75 Метилен хлористый, хч ТУ 6-09-2662-77 Натрия гидрокарбонат, хч [ГОСТ 2156-76](https://bukva.ai/docs/932) Натрий сернокислый безводный, хч [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233-77 Патроны концентрирующие Диапак-Амин (0,6 г) ТУ 4215-002-05451931-94 Патроны концентрирующие Диапак С16 (0,6 г) ТУ 4215-002-05451931-94 Фосфора пентоксид, ч МРТУ 6-09-5759-69 Этиловый эфир уксусной кислоты, чда [ГОСТ 223000-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) Фаза подвижная для ВЭЖХ: ацетонитрил - 600 мл, вода - 300 мл, ледяная уксусная кислота- 1 мл Фильтры бумажные "красная лента" ТУ 6-09-1678-86 Фильтры для очистки растворителей диаметром 20 мм с отверстиями пор 20 мкм, фирма Уотерс. Перед началом эксперимента проверяют чистоту ацетонитрила, ацетона, гексана и хлористого метилена. Для этого досуха выпаривают на ротационном вакуумном испарителе 200 мл растворителя, добавляют в концентратор 1 мл ацетонитрила, тщательно обмывают стенки концентратора и хроматографируют при 270 нм. При недостаточной чистоте растворителей проводят их очистку. Бидистиллят кипятят в течение 6 ч с марганцово-кислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют. Ацетон перегоняют над небольшим количеством перманганата калия. (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика, Москва, 1976. С. 438 - 439.) Ацетонитрил перегоняют. н-Гексан встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают бледно-розовым раствором перманганата калия до тех пор, пока раствор не перестанет обесцвечиваться водой, затем промывают водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика. М., 1976. 441 с.). Хлористый метилен встряхивают с концентрированной серной кислотой, промывают водным раствором карбоната натрия, водой, сушат над безводным хлористым кальцием и перегоняют над оксидом (V) фосфора (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика. М., 1976. 440 с.). ##### 2.2.2 Приборы и оборудование Аллонж прямой с отводом для вакуума для работы с концентрирующими патронами Диапак-Амин, Диапак-С, Диапак С16 Ванна ультразвуковая Весы аналитические ВЛА-200 или аналогичные ГОСТ 34104-80Е Весы лабораторные общего назначения с наибольшим ГОСТ 19491-74 пределом взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности +/- 0,038 г Воронки делительные на 250 и 500 мл ГОСТ 25336-82Е Воронки конические стеклянные диаметром 50 - 60 мм ГОСТ 25336-82Е Встряхиватель механический или аналогичный ТУ 64-673М Испаритель ротационный вакуумный ИР-1М или аналогичный ТУ 25-11-917-74 Колбы конические плоскодонные на 500 и 1000 мл ГОСТ 9737-70 Колбы мерные на 25, 50 и 100 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм, внутренним диаметром 4,6 мм, Symmetri Shield RP18, зернение 5 мкм, фирма Уотерс Концентраторы грушевидные и круглодонные объемом 50, ГОСТ 10394-75 100 и 250 мл, КТУ-100-14/19 Микрошприц для жидкостного хроматографа на 50 - 100 мкл Насос водоструйный ГОСТ 10696-75 Пипетки мерные на 1,0; 2,0; и 5,0 мл [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74) Предколонка хроматографическая стальная Symmetry C 18 длиной 20 мм, внутренним диаметром 3,9 мм, зернение 5 мкм, фирма Уотерс Стаканы стеклянные на 100 - 500 мл ГОСТ 25366-80Е. Хроматограф жидкостный Уотерс 510 с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичного типа. ### 2.3. Подготовка к определению ##### 2.3.1 Подготовка и кондиционирование колонки для жидкостной хроматографии Хроматографическую колонку Symmetry Shield RP18 устанавливают в термостате хроматографа и стабилизируют при температуре 25 °С и скорости потока подвижной фазы 1 мл/мин. 3 - 4 ч. ##### 2.3.2 Приготовление стандартных растворов Взвешивают 100 мг пираклостробина в мерной колбе объемом 100 мл. Навеску растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартный раствор с концентрацией пираклостробина 1,0 мг/мл). Затем 1,0 мл стандартного раствора с концентрацией 1,0 мг/мл отбирают пипеткой в мерную колбу объемом 100 мл и доводят объем до метки ацетонитрилом при перемешивании (стандартный раствор с концентрацией пираклостробина 10,0 мкг/мл). Стандартные растворы можно хранить в холодильнике в течение трех месяцев. Методом последовательного разведения ацетонитрилом готовят растворы, содержащие по 5,0; 2,0; 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/мл и используют эти растворы для хроматографического исследования и внесения в контрольные образцы. ##### 2.3.3 Приготовление растворов для жидкостной хроматографии Для приготовления подвижной фазы используют свежеперегнанные ацетонитрил и очищенную воду. Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ. В плоскодонную колбу объемом 1 л помещают 600 мл ацетонитрила, 300 мл очищенной воды и 1 мл ледяной уксусной кислоты. Смесь тщательно перемешивают, пропускают через нее газообразный гелий со скоростью 20 мл/мин. в течение 5 минут, после чего помещают в ультразвуковую ванну для удаления растворенных газов на 1 минуту. Полученный раствор используют в качестве подвижной фазы. ##### 2.3.4 Построение калибровочного графика Для построения калибровочного графика вводят в хроматограф последовательно 3 раза по 20 мкл каждого из стандартных растворов, содержащих пираклостробин с концентрациями 1,0; 0,5; 0,2 и 0,1 мкг/мл, измеряют площадь пиков, рассчитывают среднее значение площади пика для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации пираклостробина. ##### 2.3.5 Подготовка концентрирующего патрона Диапак-Амин (0,6 г) для очистки экстракта Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 мл/мин. Патрон Диапак-Амин устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов). Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 10 мл смеси гексан - ацетон в соотношении 1:1 и 10 мл гексана. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона! 2.3.5.1. Проверка хроматографического поведения пираклостробина на концентрирующем патроне Диапак-Амин. Из стандартного раствора пираклостробина в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/мл, отбирают 1 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, помещают на 10 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Концентратор тщательно обмывают последовательно двумя порциями по 10 мл смеси гексан - ацетон в соотношении 9:1 и также вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие пираклостробин, и объединяют их. ##### 2.3.6 Подготовка концентрирующего патрона Диапак С16 (0,6 г) для очистки экстракта Все процедуры происходят с использованием вакуума, скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 мл/мин. При работе на патронах Диапак С16 используют очищенную воду. Патрон Диапак С16 устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов). Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 10 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:1 и 20 мл воды. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона! 2.3.6.1. Проверка хроматографического поведения пираклостробина на концентрирующем патроне Диапак С16. Из стандартного раствора пираклостробина в ацетонитриле, содержащего 1 мкг/мл, отбирают 1 мл, помещают в круглодонную колбу объемом 100 мл и выпаривают на ротационном вакуумном испарителе досуха при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 10 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл воды, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:4 и смесь вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:2 и вносят на патрон. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Концентратор обмывают тремя порциями по 10 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:1 (при анализе образцов зерна - тем же объемом смеси ацетонитрил - вода - ледяная уксусная кислота в соотношении 600:300:1) и также вносят на патрон. Элюат после прохождения каждой порции собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и хроматографируют. Определяют фракции, содержащие пираклостробин, и объединяют их. ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Замороженные образцы зеленой массы хранят в морозильной камере при температуре не выше 18 °С. ### 2.5. Описание определения ##### 2.5.1 Зерно ###### 2.5.1.1 Экстракция и предварительная очистка. Образец размолотого на лабораторной мельнице зерна массой 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 10 мл дистиллированной воды и выдерживают при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем туда же прибавляют 30 мл ацетонитрила и экстрагируют в течение 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин. на механическом встряхивателе. Экстракт переносят через бумажный фильтр "красная лента" в коническую колбу объемом 250 мл с 5 г поваренной соли. Экстракцию повторяют еще 3 раза, используя по 30 мл ацетонитрила и экстрагируя по 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин. на механическом встряхивателе. После фильтрования экстракты объединяют в конической колбе с 5 г поваренной соли, перемешивают и оставляют на 10 мин. при комнатной температуре. Затем экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 мл и выделившийся нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой пропускают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. К сухому остатку в концентраторе добавляют 5 мл ацетона и тщательно обмывают его стенки, затем туда же добавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 г поваренной соли и перемешивают до полного растворения соли. Полученную смесь переносят в делительную воронку объемом 250 мл, концентратор обмывают 30 мл гексана, который помещают в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают ее в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой переносят в коническую колбу объемом 250 мл, а верхний гексановый слой собирают в другую коническую колбу объемом 250 мл, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водный слой возвращают в делительную воронку и экстрагируют пираклостробин еще двумя порция гексана объемом по 30 мл. Водный слой отбрасывают, а гексановый экстракт, пропущенный через слой безводного сульфата натрия, переносят в сухую делительную воронку объемом 250 мл, осушитель обмывают 10 мл гексана и объединяют смыв с основным экстрактом. Пираклостробин экстрагируют из гексана тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают через безводный сульфат натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. ###### 2.5.1.2 Очистка на концентрирующих патронах. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона, помещают на 10 с в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон Диапак-Амин. Концентратор тщательно обмывают 10 мл смеси гексан - ацетон в соотношении 9:1 и также вносят на патрон. Элюаты объединяют и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила, помещают на 10 секунд в ультразвуковую ванну и тщательно обмывают стенки концентратора. Затем в концентратор добавляют 9 мл воды, тщательно перемешивают и полученный раствор вносят на патрон Диапак С16. Элюат отбрасывают. Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:4 и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Концентратор обмывают 10 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 1:2 и вносят на патрон. Элюат отбрасывают. Пираклостробин элюируют 20 мл смеси ацетонитрил - вода - ледяная уксусная кислота в соотношении 600:300:1. Элюат собирают в концентратор, выпаривают досуха, сухой остаток растворяют в 2 мл ацетонитрила и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф. ##### 2.5.2 Зеленая масса Образец измельченной зеленой массы массой 10 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 50 мл ацетонитрила и экстрагируют в течение 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин. на механическом встряхивателе. Экстракт переносят через бумажный фильтр "красная лента" в коническую колбу объемом 250 мл с 5 г поваренной соли. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя по 50 мл ацетонитрила и экстрагируя по 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин. на механическом встряхивателе. После фильтрования экстракты объединяют в конической колбе с 5 г поваренной соли, перемешивают и оставляют на 10 мин. при комнатной температуре. Затем экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 мл и выделившийся нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой пропускают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. К сухому остатку в концентраторе добавляют 5 мл ацетона и тщательно обмывают его стенки, затем туда же добавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 г поваренной соли и перемешивают до полного растворения соли. Полученную смесь переносят в делительную воронку объемом 250 мл, концентратор обмывают 30 мл гексана, который помещают в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают ее в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в коническую колбу объемом 250 мл, а верхний гексановый слой собирают в коническую колбу объемом 250 мл, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водный слой возвращают в делительную воронку и экстрагируют пираклостробин еще двумя порциями гексана объемом по 30 мл. Водный слой отбрасывают, а гексановый экстракт, пропущенный через слой безводного сульфата натрия, переносят в сухую делительную воронку объемом 250 мл, осушитель обмывают 10 мл гексана и объединяют смыв с основным экстрактом. Пираклостробин экстрагируют из гексана тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают через безводный сульфат натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Далее проводят очистку экстракта на концентрирующих патронах, как указано в [разделе 2.5.1.2](#p100134), элюируя пираклостробин с патрона Диапак С16 смесью ацетонитрил - вода в соотношении 1:1. Элюат выпаривают досуха и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф. ##### 2.5.3 Солома Образец измельченной на лабораторной мельнице соломы массой 5 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл, прибавляют 75 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 9:1 и экстрагируют в течение 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин. на механическом встряхивателе. Экстракт переносят через бумажный фильтр "красная лента" в коническую колбу объемом 250 мл с 5 г поваренной соли. Экстракцию повторяют еще 2 раза, используя по 50 мл смеси ацетонитрил - вода в соотношении 9:1 и экстрагируя по 5 мин. на ультразвуковой ванне и дополнительно 5 мин. на механическом встряхивателе. После фильтрования экстракты объединяют в конической колбе с 5 г поваренной соли, перемешивают и оставляют на 10 мин. при комнатной температуре. Затем экстракт переносят в делительную воронку объемом 250 мл и выделившийся нижний водный слой отбрасывают. Верхний ацетонитрильный слой пропускают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. К сухому остатку в концентраторе добавляют 5 мл ацетона и тщательно обмывают его стенки, затем туда же добавляют 100 мл дистиллированной воды, 5 г поваренной соли и перемешивают до полного растворения соли. Полученную смесь переносят в делительную воронку объемом 250 мл, концентратор обмывают 30 мл гексана, который помещают в ту же делительную воронку и интенсивно встряхивают ее в течение 2 мин. После полного разделения фаз в делительной воронке нижний водный слой помещают в коническую колбу объемом 250 мл, а верхний гексановый слой собирают в коническую колбу объемом 250 мл, пропуская через слой безводного сульфата натрия. Водный слой возвращают в делительную воронку и экстрагируют пираклостробин еще двумя порциями гексана объемом по 30 мл. Водный слой отбрасывают, а гексановый экстракт, пропущенный через слой безводного сульфата натрия, переносят в сухую делительную воронку объемом 250 мл, осушитель обмывают 10 мл гексана и объединяют смыв с основным экстрактом. Пираклостробин экстрагируют из гексана тремя порциями ацетонитрила объемом по 30 мл, интенсивно встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После разделения слоев нижний ацетонитрильный слой собирают через безводный сульфат натрия в концентратор объемом 250 мл и выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 30 °С. Далее проводят очистку экстракта на концентрирующих патронах, как указано в [разделе 2.5.1.2](#p100134), элюируя пираклостробин с патрона Диапак С16 смесью ацетонитрил - вода в соотношении 1:1. Элюат выпаривают досуха и аликвоту 20 мкл вводят в хроматограф. ### 2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов ##### 2.6.1 Условия хроматографирования Хроматограф "Waters" или другой с аналогичными характеристиками с ультрафиолетовым детектором с изменяемой длиной волны. Колонка стальная Symmetry Shield RP18, 4,6 мм х 25 см, зернением 5 мкм. Предколонка стальная Symmetry RP18, 3,9 мм х 2 см, зернением 5 мкм. Температура колонки: 25 °С. Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - ледяная уксусная кислота в соотношении 600:300:1. Длина волны 270 нм. Время выхода пираклостробина 9,8 - 10,4 мин. Чувствительность 0,005 ед. оптической плотности на шкалу. Объем вводимой пробы 20 мкл. Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг. ##### 2.6.2 Обработка результатов анализа Содержание пираклостробина рассчитывают по формуле: S х А х V пр Х = ------------- х Р, 100 х S х m ст где: X - содержание пираклостробина в пробе, мг/кг или мг/л; S - высота (площадь) пика стандарта, мм; ст S - высота (площадь) пика образца, мм; пр А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m - масса анализируемого образца, г (мл); Р - содержание пираклостробина в аналитическом стандарте, %. ## 3. Требования техники безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами. ## 4. Разработчики Калинин В.А., Довгилевич Е.В., Довгилевич А.В., Устименко Н.В. Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева. 127550, Москва, ул. Тимирязевская, 53, стр. 2, УНКЦ "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". Телефон: 976-37-68; факс: 976-43-26. ---