--- title: "\"МУК 4.1.1970-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) в зеленой массе пастбищных трав методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.1970-05" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1970-05" --- ## "МУК 4.1.1970-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) в зеленой массе пастбищных трав методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.1970-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) в зеленой массе пастбищных трав методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 21.04.2005) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2005 года.
Утверждаю
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
21 апреля 2005 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФИПРОНИЛА** **И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ (MB 46513, MB 45950, MB 46136)** **В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ПАСТБИЩНЫХ ТРАВ МЕТОДОМ** **КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1970-05**
Дата введения
1 июля 2005 года ## 1. Вводная часть Название действующего вещества по ИСО: фипронил. Название по ИЮПАК: фипронил - (+/-)-5-амино-1-(2,6-дихлор-альфа,альфа,альфа-трифтор-p-толил)-4-трифторметилсульфинил-пиразол-3-карбонитрил(1). Структурная формула (не приводится). Эмпирическая формула: C H Cl F N OS (1). 12 4 2 6 4 Молекулярная масса: 437,2. Химически чистый фипронил представляет собой бесцветное кристаллическое вещество с плесневым запахом. -4 Давление насыщенного пара 3,7 x 10 мПа при 20 °C. Температура плавления: 195,5 - 203,0 °C. Коэффициент перераспределения октанол/вода: K lg P = 4,00 при 20 °C. ow Растворимость (г/100 мл): дихлорметан - 2,23, ацетон - 54,59, этилацетат - 26,49, н-гексан - 0,003 (28 мг/л), метанол - 13,75, 1-октанол - 1,22, вода - 1,9 - 2,4 мг/л (независимо от pH). Фипронил термически стабилен, не разрушается в присутствии металлов. Гидролитически стоек в водной среде при pH 5 - 7; при pH 9 гидролизуется на 50% за 28 дней. В растениях соединение в результате окисления метаболизируется до фипронил-сульфона. В почве в период 30 и более дней наряду с сульфоном образуется соответствующий сульфид в результате восстановления сульфоксидной группы, а также амид за счет гидролиза нитрильной группы. Фипронил относится к чрезвычайно опасным веществам по острой пероральной (ЛД (крысы) 97 мг/кг), ингаляционной [ЛК (4 ч) для крыс - 50 50 682 мг/кв. м воздуха] и накожной (ЛД для кроликов - 354 мг/кг) 50 токсичности. Высокотоксичен для пчел и других полезных насекомых. Основные метаболиты фипронила также являются опасными веществами для человека и теплокровных животных. Фипронил - инсектицид из группы фенилпиразолов контактного, кишечного и частично системного действия с длительным защитным эффектом. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых и прямокрылых в посевах зерновых культур и на плантациях картофеля при норме расхода 5 - 12,5 г д.в./га, а также почвообитающих вредителей при обработке семян зерновых культур. ### Основные метаболиты фипронила Фипронил-сульфон (MB 46136) - (+/-)-5-амино-1-(2,6-дихлор-альфа,альфа,альфа-трифтор-р-толил)-4-трифторметилсульфонил-пиразол-3-карбонитрил (2). MB 45950 - (+/-)-5-амино-1-(2,6-дихлор-альфа,альфа,альфа-трифтор-р-толил)-4-трифторметилсульфидо-пиразол-3-карбонитрил (3). MB 46513 - (+/-)-5-амино-1-(2,6-дихлор-альфа,альфа,альфа-трифтор-р-толил)-4-трифторметил-пиразол-3-карбонитрил (4). Физико-химические свойства метаболитов фипронила фирмой не представлены. MB 46513, MB 45950, MB 46136 относятся к опасным веществам по острой токсичности. MB 46513 может образовываться на растениях в результате фотолиза фипронила. ## 2. Методика определения фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) методом капиллярной газожидкостной хроматографии ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Метод основан на определении фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) методом газожидкостной хроматографии с использованием капиллярной колонки и детектора по захвату электронов после их экстракции из образцов органическим растворителем, концентрирования экстракта упариванием в вакууме и очистки на колонках с флоризилом и патронах Диапак. Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение - методом абсолютной калибровки. ##### 2.1.2 Метрологическая характеристика метода Таблица **МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**
Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20
Анализируемый объектпредел обнаружения фипронила и его метаболитов (МВ 46513, МВ 45950, МВ 46136), мг/кгдиапазон определяемых концентраций, мг/кгсреднее значение определения, %стандартное отклонение S, %доверительный интервал среднего результата, %, +/-
Пастбищная трава с преобладанием полыни0,0050,1 - 0,00582 - 915,9 - 9,74,5 - 7,8
##### 2.1.3 Избирательность метода В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при обработке пастбищ (производные фенокси- и гетарилоксикарбоновых кислот, хлор- и фосфорорганические соединения, пиретроиды). ### 2.2. Реактивы, материалы, приборы и оборудование #### 2.2.1. Реактивы и материалы Фипронил, аналитический стандарт фирмы Байер с содержанием д.в. 99,3%. Фипронил-сульфон (MB 46136), аналитический стандарт фирмы Байер с содержанием д.в. 99,3% MB 46513, аналитический стандарт фирмы Байер с содержанием д.в. 99,3% MB 46950, аналитический стандарт фирмы Байер с содержанием д.в. 99,3% Азот ос.ч. ГОСТ 9293-74 Ацетонитрил ТУ 6-09-3534-87 Вода дистиллированная ГОСТ 7602-72 Гексан, ч. ТУ 6-09-3375-78 Гелий, ос.ч. Вода бидистиллированная <*>, деионизированная ГОСТ 7602-72 -------------------------------- <*> Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют. Натрий сернокислый безводный, х.ч. [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77 Патроны концентрирующие Диапак С-16 (0,6 г) ТУ 4215-002-05451931-94 Флоризил для колоночной хроматографии, 60 - 100 меш, фирма Мерк или аналогичный
Хлористый метилен ГОСТ 19433-88
Этиловый эфир уксусной кислоты, х.ч. [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) #### 2.2.2. Приборы и оборудование Аллонж с отводом для вакуума Баня водяная ТУ 46-22-603-75 Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 34104-80Е или аналогичные Водоструйный насос ГОСТ 10696-75 Воронки делительные на 250 мл ГОСТ 10054-75 Воронки для фильтрования, стеклянные ГОСТ 8613-75 Встряхиватель механический ТУ 64-1-1081-73 Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 мл, КПШ-100, КПШ-250 ГОСТ 10394-72 Колбы мерные на 25, 50, 100 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Колонки хроматографические, стеклянные или пластиковые, длина 150 - 250 мм, диаметр 15 мм Концентраторы грушевидные (конические) **НШ29 КГУ-100-14/19, ТС ГОСТ 10394-72** Микрошприц на 1 и 10 мкл ТУ 2.833.106 Насос вакуумный Пипетки мерные на 0,1; 1,0; 5,0; 10 мл [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74) Ротационный испаритель ИР-1М ТУ 25-11-917-74 Стаканы стеклянные на 100 мл ГОСТ 6236-72 Стеклянные палочки Фильтры бумажные "красная лента" ТУ 6-09-1678-86 Хроматограф газовый "Кристалл-2000М" с детектором по захвату электронов и пределом детектирования -14 по Линдану не выше 4 x 10 г/куб. см Шприц медицинский с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл ### 2.3. Подготовка к определению ##### 2.3.1 Подготовка и кондиционирование колонок для газожидкостной хроматографии 2.3.1.1. Новую капиллярную колонку DB-1701 [(14% - цианопропилфенил) - метилполисилоксан] или другую, аналогичную по характеристикам, устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе гелия с линейной скоростью 20 см/мин. при температуре 250 °C в течение 8 - 10 часов. ##### 2.3.2 Приготовление стандартных растворов Взвешивают 50 мг фипронила или его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартные растворы N 1, концентрация 1 мг/мл). Стандартные растворы N 1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев. Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) в ацетонитриле с концентрацией 0,1; 0,02; 0,05 и 0,01 мкг/мл для построения калибровочных графиков. Для приготовления стандартных растворов фипронила можно использовать толуол. ##### 2.3.3 Подготовка колонки для очистки экстракта В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают примерно 4 г флоризила с размером зерен 60 - 100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента высотой 5 см. Сверху на флоризил насыпают 1 г безводного сульфата натрия. Колонку промывают 20 мл смеси этилацетата с гексаном в соотношении 1:1 и высушивают при комнатной температуре. ##### 2.3.4 Подготовка патронов Диапак C (0,6 г) 16 для очистки экстракта Все процедуры происходят с использованием вакуума. Патрон Диапак C устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху 16 в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов). Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 5 мл ацетонитрила и 10 мл воды бидистиллированной, деионизированной. Элюат отбрасывают. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона! ### 2.4. Проведение определения ##### 2.4.1 Пастбищная трава с преобладанием полыни К навеске 10 г измельченной пастбищной травы в конической колбе емкостью 250 мл добавляют 75 мл ацетонитрила. Встряхивают смесь в течение 1 ч на встряхивателе. Экстракт фильтруют в делительную воронку через бумажный фильтр "красная лента". Повторяют экстракцию ацетонитрилом еще раз, используя 50 мл растворителя и встряхивая смесь на встряхивателе в течение 0,5 ч. Экстракты объединяют в делительной воронке. Добавляют в делительную воронку к объединенным экстрактам 30 мл насыщенного раствора хлорида натрия и встряхивают смесь 1 - 2 мин. Водный слой (нижний) отбрасывают. К ацетонитриловому раствору добавляют 40 мл гексана и смесь встряхивают в воронке 1 - 2 мин. Нижнюю ацетонитрильную фазу после разделения слоев в делительной воронке фильтруют через безводный сульфат натрия в концентратор. Гексановый (верхний) слой отбрасывают. Растворитель выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Остаток в концентраторе растворяют в 5 мл ацетонитрила и добавляют 40 мл воды. Смесь переносят в делительную воронку и экстрагируют хлористым метиленом трижды порциями по 20 мл. Сливают из делительной воронки каждый раз нижний слой в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Объединенные экстракты выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. К сухому остатку в концентраторе добавляют 1 мл этилацетата и 4 мл гексана, тщательно обмывают стенки колбы, добиваясь полного растворения осадка, и переносят раствор на колонку с флоризилом для очистки образцов, подготовленную в соответствии с [п. 2.3.3](#p100087). Последовательно промывают колонку 10 мл гексана, 5 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и 2 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1. Элюат отбрасывают. Далее анализируемые вещества смывают с колонки 10 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1, собирая элюат в концентратор. Растворитель выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Остаток в концентраторе растворяют в 2 мл ацетонитрила и 8 мл воды, перегнанной с перманганатом калия, и наносят его на патрон Диапак C , 16 кондиционированный в соответствии с [п. 2.3.4](#p100089). Промывают патрон 10 мл смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:9. Элюат отбрасывают. Далее патрон Диапак C промывают 10 мл смеси ацетонитрила с водой в 16 соотношении 85:15, собирая элюат в концентратор. Растворитель выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетонитрила и вводят в хроматограф 1 мкл пробы в условиях, указанных в [п. 2.5.1](#p100103). ### 2.5. Условия хроматографирования и обработка результатов #### 2.5.1. Условия хроматографирования Хроматограф "Кристалл-2000М" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов с пределом детектирования по Линдану не выше 4 x -14 10 г/куб. см. Колонка капиллярная, длина 15 см, диаметр 0,32 мм, неподвижная фаза DB - 1701 [(14% - цианопропилфенил) - метилполисилоксан]. Температура испарителя - 270 °C, детектора - 320 °C. Температура термостата: программированная. Начальная температура колонки 180 °C выдержка 2 мин., нагрев колонки 5 градусов в мин. до температуры 250 °C. Длительность анализа - 25 мин. Режим ввода - нормальный. Сброс пробы - 1:20. Газовый режим: азот - поддув в детектор 10 мл/мин.; гелий - на колонку: линейная скорость - 11 см/с. Абсолютное время удерживания: фипронила - 13 мин. 43 с. MB 46513 - 11 мин. 04 с. MB 45950 - 13 мин. 17 с. MB 46136 - 18 мин. 33 с. Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,01 - 0,1 нг. Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрациями фипронила и его метаболитов 0,1 мкг/мл соответственно, разбавляют. #### 2.5.2. Обработка результатов анализа Содержание фипронила и/или его метаболитов в пробах рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: H x A x V 1 X = ------------ x P, H x m x 100 0 где: X - содержание фипронила и/или метаболитов в пробе, мг/кг; H - высота пика образца, мм; 1 H - высота пика стандарта, мм; 0 A - концентрация стандартного раствора, мкг/мл; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования (мл); m - масса или объем анализируемого образца, г или мл; P - содержание фипронила и/или метаболитов в аналитическом стандарте. ## 3. Требования техники безопасности Необходимо соблюдать требования безопасности при работе в химических лабораториях. ## 4. Разработчики Калинин В.А., Калинина Т.С., Рыбакова О.И., Довгилевич Е.В., Довгилевич А.В. Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева. Учебно-научный консультационный центр "Агроэкология пестицидов и агрохимикатов". 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (095)976-37-68, факс: (095)976-43-26. ---