МУК 4.1.1970-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) в зеленой массе пастбищных трав методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 31.10.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.1970-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) в зеленой массе пастбищных трав методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.1970-05. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1970-05
(утв. Роспотребнадзором 21.04.2005)
Примечание
Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 1 июля 2005 года.
Утверждаю
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
21 апреля 2005 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФИПРОНИЛА И ЕГО МЕТАБОЛИТОВ (MB 46513, MB 45950, MB 46136) В ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ПАСТБИЩНЫХ ТРАВ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.1970-05
1 июля 2005 года
1. Вводная часть
Название действующего вещества по ИСО: фипронил.
Название по ИЮПАК: фипронил — (+/-)-5-амино-1-(2,6-дихлор-альфа,альфа,альфа-трифтор-p-толил)-4-трифторметилсульфинил-пиразол-3-карбонитрил(1).
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H Cl F N OS (1). 12 4 2 6 4
Химически чистый фипронил представляет собой бесцветное кристаллическое вещество с плесневым запахом. -4
Давление насыщенного пара 3,7 x 10 мПа при 20 °C.
Температура плавления: 195,5 — 203,0 °C.
Коэффициент перераспределения октанол/вода: K lg P = 4,00 при 20 °C. ow
Растворимость (г/100 мл): дихлорметан — 2,23, ацетон — 54,59, этилацетат — 26,49, н-гексан — 0,003 (28 мг/л), метанол — 13,75, 1-октанол — 1,22, вода — 1,9 — 2,4 мг/л (независимо от pH). Фипронил термически стабилен, не разрушается в присутствии металлов. Гидролитически стоек в водной среде при pH 5 — 7; при pH 9 гидролизуется на 50% за 28 дней.
В растениях соединение в результате окисления метаболизируется до фипронил-сульфона. В почве в период 30 и более дней наряду с сульфоном образуется соответствующий сульфид в результате восстановления сульфоксидной группы, а также амид за счет гидролиза нитрильной группы.
Фипронил относится к чрезвычайно опасным веществам по острой пероральной (ЛД (крысы) 97 мг/кг), ингаляционной [ЛК (4 ч) для крыс - 50 50 682 мг/кв. м воздуха] и накожной (ЛД для кроликов - 354 мг/кг)
50
токсичности. Высокотоксичен для пчел и других полезных насекомых. Основные метаболиты фипронила также являются опасными веществами для человека и
теплокровных животных.
Фипронил — инсектицид из группы фенилпиразолов контактного, кишечного и частично системного действия с длительным защитным эффектом. Он эффективно подавляет развитие вредителей из отрядов жесткокрылых и прямокрылых в посевах зерновых культур и на плантациях картофеля при норме расхода 5 — 12,5 г д.в./га, а также почвообитающих вредителей при обработке семян зерновых культур.
Основные метаболиты фипронила
Фипронил-сульфон (MB 46136) — (+/-)-5-амино-1-(2,6-дихлор-альфа,альфа,альфа-трифтор-р-толил)-4-трифторметилсульфонил-пиразол-3-карбонитрил (2).
MB 45950 — (+/-)-5-амино-1-(2,6-дихлор-альфа,альфа,альфа-трифтор-р-толил)-4-трифторметилсульфидо-пиразол-3-карбонитрил (3).
MB 46513 — (+/-)-5-амино-1-(2,6-дихлор-альфа,альфа,альфа-трифтор-р-толил)-4-трифторметил-пиразол-3-карбонитрил (4).
Физико-химические свойства метаболитов фипронила фирмой не представлены.
MB 46513, MB 45950, MB 46136 относятся к опасным веществам по острой токсичности. MB 46513 может образовываться на растениях в результате фотолиза фипронила.
2. Методика определения фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) методом капиллярной газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на определении фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) методом газожидкостной хроматографии с использованием капиллярной колонки и детектора по захвату электронов после их экстракции из образцов органическим растворителем, концентрирования экстракта упариванием в вакууме и очистки на колонках с флоризилом и патронах Диапак. Идентификация веществ проводится по времени удерживания, а количественное определение — методом абсолютной калибровки.
2.1.2 Метрологическая характеристика метода
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
| Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | |||||
| Анализируемый объект | предел обнаружения фипронила и его метаболитов (МВ 46513, МВ 45950, МВ 46136), мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/кг | среднее значение определения, % | стандартное отклонение S, % | доверительный интервал среднего результата, %, +/- |
| Пастбищная трава с преобладанием полыни | 0,005 | 0,1 — 0,005 | 82 — 91 | 5,9 — 9,7 | 4,5 — 7,8 |
2.1.3 Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при обработке пастбищ (производные фенокси- и гетарилоксикарбоновых кислот, хлор- и фосфорорганические соединения, пиретроиды).
2.2. Реактивы, материалы, приборы и оборудование
2.2.1. Реактивы и материалы
Фипронил, аналитический стандарт фирмы
Байер с содержанием д.в. 99,3%.
Фипронил-сульфон (MB 46136), аналитический стандарт фирмы Байер с содержанием д.в. 99,3%
MB 46513, аналитический стандарт фирмы Байер с содержанием д.в. 99,3%
MB 46950, аналитический стандарт фирмы Байер с содержанием д.в. 99,3%
Ацетонитрил ТУ 6-09-3534-87 Вода дистиллированная ГОСТ 7602-72 Гексан, ч. ТУ 6-09-3375-78
Вода бидистиллированная <*>, деионизированная ГОСТ 7602-72 --------------------------------
<*> Бидистиллят кипятят в течение 6 часов с марганцовокислым калием, добавленным из расчета 1 г/л, и затем перегоняют.
Натрий сернокислый безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, х.ч. ГОСТ 4233-77
Диапак С-16 (0,6 г) ТУ 4215-002-05451931-94
Флоризил для колоночной хроматографии, 60 — 100 меш, фирма Мерк или аналогичный
Этиловый эфир уксусной кислоты, х.ч. ГОСТ 22300-76
2.2.2. Приборы и оборудование
Баня водяная ТУ 46-22-603-75 Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 34104-80Е
или аналогичные
Водоструйный насос ГОСТ 10696-75 Воронки делительные на 250 мл ГОСТ 10054-75 Воронки для фильтрования, стеклянные ГОСТ 8613-75 Встряхиватель механический ТУ 64-1-1081-73
Колбы конические плоскодонные на 100 и 250 мл, КПШ-100, КПШ-250 ГОСТ 10394-72
Колбы мерные на 25, 50, 100 мл ГОСТ 1770-74
Колонки хроматографические, стеклянные или пластиковые, длина 150 — 250 мм, диаметр 15 мм
Концентраторы грушевидные (конические)
**НШ29 КГУ-100-14/19, ТС ГОСТ 10394-72** Микрошприц на 1 и 10 мкл ТУ 2.833.106
Пипетки мерные на 0,1; 1,0; 5,0; 10 мл ГОСТ 20292-74
Ротационный испаритель ИР-1М ТУ 25-11-917-74 Стаканы стеклянные на 100 мл ГОСТ 6236-72
Фильтры бумажные «красная лента» ТУ 6-09-1678-86
Хроматограф газовый «Кристалл-2000М» с детектором по захвату электронов и пределом детектирования -14 по Линдану не выше 4 x 10 г/куб. см
Шприц медицинский с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл
2.3. Подготовка к определению
2.3.1 Подготовка и кондиционирование колонок
для газожидкостной хроматографии
2.3.1.1. Новую капиллярную колонку DB-1701 [(14% — цианопропилфенил) — метилполисилоксан] или другую, аналогичную по характеристикам, устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе гелия с линейной скоростью 20 см/мин. при температуре 250 °C в течение 8 — 10 часов.
2.3.2 Приготовление стандартных растворов
Взвешивают 50 мг фипронила или его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) в мерной колбе на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят объем до метки ацетонитрилом (стандартные растворы № 1, концентрация 1 мг/мл).
Стандартные растворы № 1 можно хранить в холодильнике в течение 6 месяцев.
Методом последовательного разбавления готовят стандартные растворы фипронила и его метаболитов (MB 46513, MB 45950, MB 46136) в ацетонитриле с концентрацией 0,1; 0,02; 0,05 и 0,01 мкг/мл для построения калибровочных графиков. Для приготовления стандартных растворов фипронила можно использовать толуол.
2.3.3 Подготовка колонки для очистки экстракта
В пластиковую или стеклянную колонку диаметром 15 мм помещают примерно 4 г флоризила с размером зерен 60 — 100 меш и, аккуратно постукивая по стенкам колонки, формируют слой адсорбента высотой 5 см. Сверху на флоризил насыпают 1 г безводного сульфата натрия. Колонку промывают 20 мл смеси этилацетата с гексаном в соотношении 1:1 и высушивают при комнатной температуре.
2.3.4 Подготовка патронов Диапак C (0,6 г)
16
для очистки экстракта
Все процедуры происходят с использованием вакуума.
Патрон Диапак C устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху 16 в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл (используют как емкость для элюентов).
Кондиционирование: концентрирующий патрон промывают последовательно 5 мл ацетонитрила и 10 мл воды бидистиллированной, деионизированной. Элюат отбрасывают.
Нельзя допускать высыхания поверхности патрона!
2.4. Проведение определения
2.4.1 Пастбищная трава с преобладанием полыни
К навеске 10 г измельченной пастбищной травы в конической колбе емкостью 250 мл добавляют 75 мл ацетонитрила. Встряхивают смесь в течение 1 ч на встряхивателе. Экстракт фильтруют в делительную воронку через бумажный фильтр «красная лента». Повторяют экстракцию ацетонитрилом еще раз, используя 50 мл растворителя и встряхивая смесь на встряхивателе в течение 0,5 ч. Экстракты объединяют в делительной воронке.
Добавляют в делительную воронку к объединенным экстрактам 30 мл насыщенного раствора хлорида натрия и встряхивают смесь 1 — 2 мин. Водный слой (нижний) отбрасывают. К ацетонитриловому раствору добавляют 40 мл гексана и смесь встряхивают в воронке 1 — 2 мин. Нижнюю ацетонитрильную фазу после разделения слоев в делительной воронке фильтруют через безводный сульфат натрия в концентратор. Гексановый (верхний) слой отбрасывают. Растворитель выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C.
Остаток в концентраторе растворяют в 5 мл ацетонитрила и добавляют 40 мл воды. Смесь переносят в делительную воронку и экстрагируют хлористым метиленом трижды порциями по 20 мл. Сливают из делительной воронки каждый раз нижний слой в концентратор, пропуская его через безводный сульфат натрия. Объединенные экстракты выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C.
К сухому остатку в концентраторе добавляют 1 мл этилацетата и 4 мл гексана, тщательно обмывают стенки колбы, добиваясь полного растворения осадка, и переносят раствор на колонку с флоризилом для очистки образцов, подготовленную в соответствии с п. 2.3.3. Последовательно промывают колонку 10 мл гексана, 5 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 4:1 и 2 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1. Элюат отбрасывают. Далее анализируемые вещества смывают с колонки 10 мл смеси гексана с этилацетатом в соотношении 1:1, собирая элюат в концентратор. Растворитель выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C.
Остаток в концентраторе растворяют в 2 мл ацетонитрила и 8 мл воды, перегнанной с перманганатом калия, и наносят его на патрон Диапак C ,
16
кондиционированный в соответствии с п. 2.3.4. Промывают патрон 10 мл смеси ацетонитрила с водой в соотношении 1:9. Элюат отбрасывают.
Далее патрон Диапак C промывают 10 мл смеси ацетонитрила с водой в 16
соотношении 85:15, собирая элюат в концентратор. Растворитель выпаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 5 мл ацетонитрила и вводят в хроматограф
1 мкл пробы в условиях, указанных в п. 2.5.1.
2.5. Условия хроматографирования и обработка результатов
2.5.1. Условия хроматографирования
Хроматограф "Кристалл-2000М" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов с пределом детектирования по Линдану не выше 4 x
-14
10 г/куб. см. Колонка капиллярная, длина 15 см, диаметр 0,32 мм, неподвижная фаза DB - 1701 [(14% - цианопропилфенил) - метилполисилоксан]. Температура
испарителя — 270 °C, детектора — 320 °C.
Температура термостата: программированная.
Начальная температура колонки 180 °C выдержка 2 мин., нагрев колонки 5 градусов в мин. до температуры 250 °C.
Длительность анализа — 25 мин. Режим ввода — нормальный. Сброс пробы — 1:20.
Газовый режим: азот — поддув в детектор 10 мл/мин.;
гелий — на колонку: линейная скорость — 11 см/с.
Абсолютное время удерживания: фипронила — 13 мин. 43 с.
Линейность детектирования сохраняется в пределах 0,01 — 0,1 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрациями фипронила и его метаболитов 0,1 мкг/мл соответственно, разбавляют.
2.5.2. Обработка результатов анализа
Содержание фипронила и/или его метаболитов в пробах рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
H x A x V
1
X = ------------ x P, H x m x 100 0
где: X — содержание фипронила и/или метаболитов в пробе, мг/кг; H — высота пика образца, мм; 1 H — высота пика стандарта, мм; 0 A — концентрация стандартного раствора, мкг/мл; V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования (мл); m — масса или объем анализируемого образца, г или мл; P — содержание фипронила и/или метаболитов в аналитическом стандарте.
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать требования безопасности при работе в химических лабораториях.
4. Разработчики
Калинин В.А., Калинина Т.С., Рыбакова О.И., Довгилевич Е.В., Довгилевич А.В.
Московская сельскохозяйственная академия им. К.А. Тимирязева.
Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов». 127550, Москва, Тимирязевская ул., д. 53/1. Телефон: (095)976-37-68, факс: (095)976-43-26.