--- title: "\"МУК 4.1.1968-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имазетапира в воде, почве, семенах и масле сои методом газожидкостной хроматографии. Методические указания\"" number: "МУК 4.1.1968-05" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1968-05" --- ## "МУК 4.1.1968-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имазетапира в воде, почве, семенах и масле сои методом газожидкостной хроматографии. Методические указания" # "МУК 4.1.1968-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств имазетапира в воде, почве, семенах и масле сои методом газожидкостной хроматографии. Методические указания" (утв. Роспотребнадзором 21.04.2005) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2005 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
21 апреля 2005 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ИМАЗЕТАПИРА** **В ВОДЕ, ПОЧВЕ, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ СОИ МЕТОДОМ** **ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.1968-05**
Дата введения
1 июля 2005 года 1. Вводная часть Действующее вещество: имазетапир. Структурная формула (не приводится). (RS)-5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидозолин-2-ил) никотиновая кислота (IUPAC). Эмпирическая формула: C H N O . 15 19 3 3 Мол. масса: 289,3. Химически чистый препарат - неокрашенные кристаллы. Температура плавления: 169 - 173 °C. V < 0,013 mPa (60 °C). p Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 1,04 (pH 5), 1,49 ow (pH 7), 1,20 (pH 9). Растворимость (25 °C): в воде 1,4 г/л, в ацетоне 48,2 г/л, дихлорметане 185 г/л, метаноле 105 г/л, диметилсульфоксиде 422 г/л, изопропаноле 17 г/л, гептане 0,9 г/л. Разлагается при 180 °C, быстро деградирует на свету, DT 3 дня. 50 В растениях быстро метаболизирует. В бобах сои период полураспада 1,6 дня. В почве период полураспада DT 1 - 3 месяца. 50 Препарат малотоксичен для теплокровных. Оральная токсичность (LD ) для 50 крыс > 5000 мг/кг. Гигиенические нормативы ОДУ в воде водоемов 0,7 мг/куб. дм (общ.), ОДК в почве 0,1 мг/кг, МДУ в семенах и масле сои 0,5 мг/кг. Область применения Системный гербицид против сорной растительности на посевах бобовых культур.
2. Методика определения имазетапира в воде, почве,
семенах и масле сои методом газожидкостной хроматографии #### 2.1 Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Определение имазетапира основано на извлечении гербицида подкисленной смесью ацетона и гексана, очистке экстракта путем перераспределения между несмешивающимися жидкими фазами и на колонке с силикагелем. Количественное определение имазетапира проводится методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора. ##### 2.1.2 Избирательность метода Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб и сочетанием условий хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает. ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода представлена в таблице. Таблица **МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА** | Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % (для каждого объекта n = 24) | Стандартное отклонение S, % | Доверительный интервал среднего, %, n = 24, P = 0,95 | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Вода | 0,25 | 0,25 - 2,0 | 82,25 | 5,65 | 5,10 | | Соя, семена | 0,25 | 0,25 - 2,0 | 79,7 | 6,45 | 5,15 | | Соя, масло | 0,25 | 0,25 - 2,0 | 75,98 | 7,65 | 5,20 | | Почва | 0,05 | 0,05 - 0,40 | 76,58 | 7,55 | 5,20 | #### 2.2 Реактивы, материалы Имазетапир, аналитический стандарт с массовой долей основного вещества не менее 98% Азот газообразный высокой чистоты ТУ 301-07-25 Ацетон, ос.ч. 9-5 ТУ 2633-039-4493179-00 или ч.д.а. ГОСТ 2603-79 Вода дистиллированная ГОСТ 7602-76 н-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3375-78 Натрия бикарбонат, х.ч. [ГОСТ 4201-79](https://bukva.ai/docs/gost-4201-79) Натрий сернокислый безводный, ч.д.а. [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) Натрия хлорид, х.ч. ГОСТ 4233-77 Соляная кислота, х.ч. ГОСТ 3118-78 Стекловата Силикагель 60 для хроматографии (0,040 - 0,063 мм), (Merck, Германия) Серная кислота ос.ч. 11-5 [ГОСТ 14262-78](https://bukva.ai/docs/standart-gost-14262-78) Хлороформ, х.ч., перегнанный [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76) Фильтры бумажные "Синяя лента", диаметр 50 мм ТУ 6-09-1181-76 Фильтры бумажные "красная лента", диаметр 100 мм ТУ 2642-001-42624157-98 Универсальная индикаторная бумага ТУ 6-09-1181-76 #### 2.3 Приборы и посуда Газовый хроматограф серии "Кристалл 2000М" с ТИД или аналогичный по своим техническим характеристикам Колонка кварцевая капиллярная длиной 20 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1 (толщина слоя 1,5 мкм) Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 34104-80Е или аналогичные Весы технические ВЛКТ-500 ГОСТ 24104-80 Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ ТУ 1-01-0593-79 Ванна ультразвуковая типа УЗВ-1/100 ТН ТУ 3444-003-26285789-97 Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М ТУ 25-11-917-74 или аналогичный Микрошприц МШ-10, МШ-10М ТУ 2-833-106 Насос водоструйный МРТУ 42 861-4 Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС ГОСТ 10384-72 Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС ГОСТ 10384-72 Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82 Воронки делительные на 250, 500 мл ВД-3-500 ГОСТ 8613-75 Цилиндры мерные на 100 куб. см [ГОСТ 1774-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Колбы мерные на 100 куб. см [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см ГОСТ 22292-74 Стаканы химические ГОСТ 25336-82Е Колонка стеклянная хроматографическая длиной 30 см, диаметром 10 мм #### 2.4 Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с действующим ГОСТом. Для длительного хранения семена подсушивают при комнатной температуре в отсутствие света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы семян доводят до стандартной влажности и измельчают. Масло хранят в холодильнике. #### 2.5 Подготовка к определению ##### 2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей Перед началом работы рекомендуется проверить чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C до объема 1,0 мл и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками. Гексан и хлороформ встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции, затем промывают водой, после чего сушат над щелочью и перегоняют. ##### 2.5.2 Кондиционирование колонки Перед началом анализа кварцевую капиллярную колонку, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре термостата 280 °C в течение 6 - 8 ч. ##### 2.5.3 Приготовление стандартного
и градуировочных растворов
Основной раствор имазетапира готовят, количественно перенося 100 мг аналитического стандарта имазетапира в мерную колбу на 100 мл, растворяют навеску в ацетоне. Из полученного раствора имазетапира с концентрацией 1 мг/мл готовят рабочие растворы с концентрациями 2,5; 5; 10; 20 мкг/мл последовательным разбавлением ацетоном. Растворы хранят в холодильнике 3 - 5 дней. При определении полноты извлечения для внесения имазетапира в анализируемую матрицу используют градуировочные растворы в ацетоне - для воды и почвы или гексане (1 мл основного стандартного раствора разбавляют в мерной колбе на 100 мл гексаном и последующие растворы готовят последовательным разбавлением гексаном) - для семян и масла. В 100 мл воды и 10 мл масла вносят по 1 мл соответствующего градуировочного раствора и выдерживают в течение 2 часов, периодически тщательно перемешивая растворы. Затем ацетон отдувают струей инертного газа. Внесение имазетапира в твердые матрицы (семена и почву) осуществляют, добавляя по 10 - 50 мл соответствующих градуировочных растворов к навеске (10 г семян и 50 г почвы). Пробы подсушивают в тяге при периодическом тщательном перемешивании до полного испарения растворителя. Полученные образцы анализируют по [п. 2.6](#p100095). ##### 2.5.4 Построение градуировочного графика Для построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика от концентрации имазетапира в растворе в хроматограф вводят по 1 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты (площади) пиков и строят график зависимости среднего значения высоты, мм, (площади, мВ x с) пика от концентрации имазетапира в градуировочном растворе (мкг/мл). ##### 2.5.5 Подготовка колонки с силикагелем
для очистки экстракта
Силикагель прогревают в термостате при 120 °C в течение 3 часов и охлаждают до комнатной температуры. На дно стеклянной колонки помещают стекловату, слой 0,5 см безводного сульфата натрия и заполняют через воронку суспензией 5 г силикагеля в 25 мл гексана при открытом кране колонки, сверху вносят слой 1 см безводного сульфата натрия. Затем колонку промывают 10 мл гексана и закрывают кран, когда уровень растворителя достигнет верхнего края сорбента. Колонка готова к работе. ##### 2.5.6 Проверка хроматографического поведения
имазетапира на колонке с силикагелем
В подготовленную колонку пипеткой вносят 1 мл стандартного раствора имазетапира и дают впитаться. После этого в колонку вносят 5 мл смеси гексан-ацетон (3:2), элюат отбрасывают. Имазетапир элюируют 30 мл смеси гексан-ацетон (1:5), отбирая фракции по 5 мл, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. Фракции, содержащие имазетапир, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. Рассчитывают содержание имазетапира в элюате, определяя полноту его извлечения из колонки и необходимый для этого объем элюента. Примечание: профиль вымывания имазетапира может изменяться при использовании силикагеля новой партии или другой марки. ##### 2.5.7 Подготовка приборов и средств измерения Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации. #### 2.6 Проведение определения ##### 2.6.1 Экстракция и очистка экстрактов 2.6.1.1. Вода. В делительную воронку помещают 100 мл анализируемой воды, устанавливают pH 2, добавляя по каплям 0,5 М HCl. Затем в ту же делительную воронку вносят 30 мл хлороформа и встряхивают в течение 2 - 3 мин. После разделения слоев нижний хлороформенный слой отделяют, а к водной фазе добавляют 30 мл хлороформа и путем встряхивания перераспределяют имазетапир в органическую фазу. Процедуру повторяют трижды. Хлороформенные экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия и для анализа отбирают 1/10 часть суммарного хлороформного экстракта. Растворитель отгоняют на ротационном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. 2.6.1.2. Семена сои. Навеску размолотых в лабораторной мельнице семян (10 г) помещают в коническую колбу объемом 250 мл и экстрагируют имазетапир 50 мл смеси 1 М HCl-ацетон (1:99) на ультразвуковой бане в течение 15 мин. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера, используя бумажный фильтр "синяя лента". Пробу на фильтре дважды по 50 мл промывают экстрагирующей смесью. Объединенный фильтрат переносят в делительную воронку, добавляют 50 мл дистиллированной воды и подкисляют до pH 2. В делительную воронку приливают 30 мл гексана, встряхивают делительную воронку в течение 2 мин. и после полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают. Промывку гексаном повторяют дважды порциями по 30 мл. К промытому гексаном водно-ацетоновому экстракту добавляют 30 мл хлороформа и экстрагируют имазетапир путем встряхивания в течение 2 мин. Экстракцию повторяют дважды порциями хлороформа по 25 мл. Хлороформенные экстракты объединяют, переносят в делительную воронку и приливают 25 мл 5% раствора бикарбоната натрия. Переэкстрагируют имазетапир в щелочную среду, встряхивая воронку в течение 2 мин. Нижний хлороформенный слой отбрасывают и в бикарбонатный слой осторожно по каплям добавляют 1 М серную кислоту. Делительную воронку на штативе в вытяжном шкафу осторожно покачивают в вертикальном положении, не закрывая горлышко притертой пробкой, до полной дегазации содержимого делительной воронки. Затем в делительную воронку добавляют 30 мл хлороформа и опять осторожно, приоткрывая периодически запорный кран, встряхивают в течение 2 - 5 мин. После разделения фаз хлороформенный слой фильтруют через бумажный фильтр "красная лента" с безводным сульфатом натрия, а к оставшемуся в делительной воронке бикарбонатному слою добавляют 30 мл хлороформа и повторяют процедуру еще 2 раза. Промывают осушитель и фильтр 20 мл хлороформа и объединяют с собранными хлороформенными экстрактами, выпаривают досуха на ротационном испарителе и растворяют остаток в 1 мл ацетона. При необходимости проводят очистку на колонке с силикагелем по [п. 2.6.2](#p100101). 2.6.1.3. Масло сои. 10 г масла помещают в делительную воронку объемом 250 мл, добавляют 100 мл смеси 1 М HCl-гексан-ацетон в соотношении 1:29:70 и перемешивают. Затем добавляют 50 мл дистиллированной воды и встряхивают воронку в течение двух минут. После разделения слоев гексановую фазу отбрасывают, а к водно-ацетоновой фазе приливают 15 мл гексана и встряхивают в делительной воронке в течение 2 мин. После разделения слоев гексановую фазу отбрасывают. Операцию повторяют дважды. К промытому гексаном водно-ацетоновому экстракту приливают 50 мл хлороформа и далее поступают, как в [п. 2.6.1.2](#p100098). 2.6.1.4. Почву сушат на воздухе, просеивают через сито (100 меш), берут навеску 50 г, помещают в коническую колбу на 250 мл и приливают 100 мл экстрагирующей смеси 1 М HCl-ацетон (1:99). Колбу помещают в ультразвуковую ванну на 15 минут. После экстракции пробу фильтруют через воронку Бюхнера, используя бумажный фильтр "синяя лента". Промывают пробу на фильтре экстрагирующей смесью дважды по 100 мл. Фильтраты объединяют, перенося в делительную воронку на 1000 мл, и прибавляют 50 мл гексана. Воронку встряхивают в течение 2 мин., собирают водно-ацетоновый слой, а гексановый слой отбрасывают. Операцию промывки повторяют дважды, добавляя по 50 мл гексана. Водно-ацетоновые слои объединяют, для анализа отбирают 1/5 часть водно-ацетонового экстракта, переносят ее в делительную воронку, приливают 30 мл хлороформа и далее поступают, как в [п. 2.6.1.2](#p100098). ##### 2.6.2 Очистка экстрактов на колонке с силикагелем Растворенный в 1 - 2 мл ацетона сухой остаток пипеткой количественно переносят в хроматографическую колонку, колбочку ополаскивают еще 1 - 2 мл ацетона и вносят в колонку, после чего открывают кран и дают раствору впитаться в сорбент. Затем в колонку вносят 5 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 3:2, элюат отбрасывают. Имазетапир элюируют 30 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:5, элюат собирают и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. ##### 2.6.3 Условия хроматографирования Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ТИД. Колонка кварцевая капиллярная длиной 20 м, внутренним диаметром 0,53 мм с неподвижной фазой НР-1 (толщина слоя 1,5 мкм). Температура термостата колонки программируется от 140 °C (30 с) до 200 °C со скоростью 10 °C/мин., от 200 °C (10 с) до 230 °C со скоростью 20 °C/мин. Температура термостатов испарителя 280 °C, детектора 370 °C. Скорость газа-носителя 1 (азот) через колонку 5 куб. см/мин., газа-носителя 3 (азот) 5 куб. см/мин. Сброс газа-носителя 2 (азот) закрыт в течение 30 с, далее расход 15 куб. см/мин. Расход водорода 12,8 куб. см/мин. Расход воздуха 220 куб. см/мин. Объем вводимой пробы 1 мкл. Время удерживания имазетапира 10 мин. 20 с. ##### 2.6.4 Обработка результатов анализа Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле: H x C x V 2 X = ----------, H x P x R 1 где: H - высота (площадь) пика имазетапира в стандартном растворе, мм; 1 H - высота (площадь) пика имазетапира в анализируемой пробе, мм; 2 V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; P - навеска анализируемого образца, г; C - концентрация имазетапира в стандартном растворе, мкг/мл; R - коэффициент извлечения имазетапира из матрицы (для масла 0,76). Содержание остаточных количеств имазетапира в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений. 3. Требования техники безопасности При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции "Основные правила безопасной работы в химической лаборатории", общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В. 4. Контроль погрешности измерений Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ ИСО 5725-1-6.2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений". 5. Разработчики Долженко В.И., Цибульская И.А., Карпова Л.М. Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, Санкт-Петербург. ---