МУК 4.1.1967-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 21.04.2005)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 1 июля 2005 года.
Утверждаю
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере защиты
прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
21 апреля 2005 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ КРЕЗОКСИМ-МЕТИЛА В ОГУРЦАХ, ТОМАТАХ, ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.1967-05
1 июля 2005 года
1. Вводная часть
Действующее вещество: крезоксим-метил (BAS 490 F).
(Е)-метил-2-метоксиимино-2-/2-(о-толилокси-метил)фенил/ацетат (ИЮПАК).
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H NO . 18 19 4
Белое кристаллическое вещество со слабым запахом.
Температура плавления: 97,2 — 101,7 °C. -3
Давление паров при 20 °C: 2,3 х 10 мПа. Растворимость (г/л) при 20 °C: вода - 0,002, гептан - 1,7, толуол -
111, дихлорметан — 939, метанол — 14,9, ацетон — 217, этилацетат — 123.
Стабильность к гидролизу при 20 °C: DT = 34 дня (pH 7), 7 часов 50 (pH 9).
В биологически активных почвах в аэробных условиях крезоксим-метил быстро разрушается: DT = менее 3 дней.
90
Краткая токсикологическая характеристика
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — более 5000 мг/кг; 50 острая дермальная токсичность (LD ) для крыс — более 2000 мг/кг. 50
Крезоксим-метил не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика, не обладает мутагенными и сенсибилизирующими
свойствами.
Крезоксим-метил нетоксичен для пчел, дождевых червей, полезных насекомых и птиц.
ВМДУ в огурцах, томатах и винограде — 0,5 мг/кг.
Крезоксим-метил — синтетический фунгицид из класса стробилуринов, являющихся продуцентами гриба Strobilurus tenacellus. Вещество эффективно против широкого круга грибных патогенов хлебных злаков, овощных, кормовых, технических и плодовых культур. Обладает защитным, лечебным и искореняющим действием.
2. Методика определения остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1. Принцип метода
Метод основан на газохроматографическом определении крезоксим-метила на неподвижной фазе OV-17 с использованием электронозахватного детектора (ЭЗД) после экстракции препарата из сока гексаном, из растительного материала водным ацетоном, предварительной очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и окончательной очистки экстрактов на колонке с силикагелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2. Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании огурцов, томатов и винограда.
2.1.3. Метрологическая характеристика метода
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА
| Анализируемый | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | |||||
| объект | предел обнаружения, мг/куб. дм, мг/кг | диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм, мг/кг | среднее значение определения, % | стандартное отклонение S,% | относительное отклонение DS, % | доверительный интервал среднего, % |
| Огурцы | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 91,8 | 2,3 | 1,0 | +/- 2,1 |
| Томаты | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 90,7 | 2,3 | 1,0 | +/- 2,1 |
| Виноград | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 90,0 | 3,3 | 1,5 | +/- 3,1 |
| Сок | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 92,4 | 2,8 | 1,2 | +/- 2,6 |
2.2. Реактивы, растворы и материалы
Крезоксим-метил, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9% (БАСФ, Германия)
Вода дистиллированная ГОСТ 7602-72 Гексан, ч. ТУ 6-09-3375-78
Дихлорметан ГОСТ 12794-80
Калий углекислый, х.ч. ГОСТ 4221-76
Калия перманганат, х.ч. ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид, х.ч. ГОСТ 4161-77
Натрия гидроксид, х.ч. ГОСТ 4328-77
Натрия сульфат безводный, х.ч. ГОСТ 4166-76
Натрий двууглекислый, х.ч. ГОСТ 83-79
Натрия хлорид, х.ч. ГОСТ 4233-77
Этилацетат ГОСТ 22300-76
Элюент № 1 для колоночной хроматографии:
смесь гексан-этилацетат (9:1, по объему)
Элюент № 2 для колоночной хроматографии:
смесь гексан-этилацетат (8:2, по объему)
Азот газообразный, о.с.ч. ГОСТ 0203-74
Силикагель (0,063 — 0,2 мм) для адсорбционной хроматографии (Вельм, Германия) I степени активности или силикагель КСК (60 — 100 меш)
Целит 535 (2 — 15 мкм) (Серва, Германия) или аналогичный
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с электронозахватным детектором с пределом детектирования по Линдану не выше -14 3,18 x 10 г/с или аналогичный
Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1500 х 2 мм, неподвижная фаза — 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 — 0,15 мм)
Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 2000 х 2 мм, неподвижная фаза — 5% SE-30 на Инертоне N-AW-DMCS (0,16 — 0,20 мм)
Колонка капиллярная для ГЖХ ZB-1, длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex, США или аналогичная
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф ТУ 64-1-2850 Весы аналитические типа ВЛР-200 ГОСТ 19401-74 Водоструйный насос ГОСТ 10696-75 Гомогенизатор МРТУ 42-1505-63
или аналогичный
Прибор для перегонки при атмосферном давлении
Ротационный испаритель, тип ИР-1М ТУ 25-11-917-76 Баня водяная ТУ 46-22-603-75
Воронки делительные вместимостью 100 мл ГОСТ 25336-82
Воронки для фильтрования, стеклянные ГОСТ 8613-75 Колба Бунзена ГОСТ 5614-75 Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 10 и 100 мл ГОСТ 9737-70
Колбы мерные вместимостью 25, 50 и 100 мл ГОСТ 1770-74
Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл ГОСТ 20292-74Е
Пробирки градуированные с притертыми
пробками вместимостью 5 и 10 мл ГОСТ 10515-75 Стаканы стеклянные емкостью 400 мл ГОСТ 6236-72
Цилиндры мерные вместимостью 50, 100 и 250 мл ГОСТ 1770-74
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79). Отобранные пробы огурцов, томатов и винограда хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °C. Перед анализом ягоды и плоды измельчают.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2,5%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона
10 г KMnO и 2 г K CO ).
4 2 3
Этилацетат промывают равным объемом 5%-го раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °C в течение 3 ч.
2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки
Готовую насадку (3% OV-17 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270 °C в течение 8 — 10 ч.
2.5.3. Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор крезоксим-метила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,9% д.в., в этилацетате в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Рабочие растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора крезоксим-метила соответствующим последовательным разбавлением этилацетатом. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более трех дней.
При изучении полноты открывания крезоксим-метила в модельных матрицах используются ацетоновые растворы вещества.
2.5.4. Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора крезоксим-метила с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ x с от концентрации крезоксим-метила в растворе в мкг/мл.
2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,2 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 25 мл смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
2.5.6. Проверка хроматографического поведения крезоксим-метила на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 1 мл стандартного раствора крезоксим-метила с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан-этилацетат (95:5, по объему) и наносят на колонку. Промывают колонку 40 мл смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) и затем 50 мл смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на содержание крезоксим-метила по п. 2.7.1.
Фракции, содержащие крезоксим-метил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание крезоксим-метила в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
Примечание: Профиль вымывания крезоксим-метила может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.6. Описание определения
2.6.1. Экстракция крезоксим-метила и очистка экстракта
2.6.1.1. Огурцы, томаты, виноград. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему), гомогенизируют 3 минуты при 10000 об./мин. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 30 мл), эквивалентную 5 г растительного материала, и упаривают ее до водной фазы на роторном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 20 мл гексана. Смесь встряхивают в течение 1 мин. и после ее расслоения отделяют гексановый слой, который пропускают через стеклянный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, в грушевидную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию водной фракции гексаном повторяют еще два раза (по 20 мл). Объединенный гексановый экстракт, содержащий крезоксим-метил, выпаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.
2.6.1.2. Виноградный сок. К 10 мл свежевыжатого сока добавляют 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия и содержимое переносят в делительную воронку емкостью 100 мл. В воронку добавляют 20 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную фазу обрабатывают гексаном еще два раза (по 20 мл). Объединенный гексановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °C. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.
2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем
Остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов растительного материала (из 2.6.1.1 и 2.6.1.2), количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-этилацетат (95:5, по объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 30 мл смеси гексан-этилацетат (9:1), которые отбрасывают. Крезоксим-метил элюируют 35 мл смеси гексан-этилацетат (8:2), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °C. Сухой остаток экстракта сока растворяют в 10 мл, а экстрактов огурцов, томатов и винограда — в 5 мл этилацетата и анализируют на содержание крезоксим-метила по п. 2.7.1.
2.7. Условия хроматографирования
2.7.1. Метод ГЖХ с насадочными колонками
Хроматограф газовый «Кристалл — 2000 М» с электронозахватным детектором
63 -14 (Ni ) с пределом детектирования по Линдану не выше 3,18 x 10 г/куб. см.
Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1500 х 3 мм; неподвижная фаза — 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 — 0,15 мм).
Температура детектора 300 °C, инжектора — 270 °C, термостата колонки — 240 °C.
Скорость потока газа-носителя (азота) — 30 мл/мин.; поддув — 25 мл/мин.
Время удерживания крезоксим-метила — 3 мин. 10 с.
Предел детектирования — 0,1 нг.
Линейный диапазон детектирования — 0,1 — 1,0 нг.
Альтернативная неподвижная фаза: 5% SE-30 на Инертоне N-AW DMCS (0,16 — 0,20 мм); колонка стеклянная 2000 х 2 мм; условия хроматографирования те же.
Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика крезоксим-метила.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.
2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками
Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с электронозахватным детектором.
Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм (SE-30).
Температура термостата испарителя — 250 °C, детектора — 300 °C, термостата колонки в программируемом режиме: 120 °C — 1 мин.; 20°/мин. до 250 °C; выдержка — 5 мин.
Газовый режим: газ-носитель — азот, общий расход — 33 мл/мин.; газ для поддува в детектор — азот, расход — 30 мл/мин.
Абсолютное время удерживания крезоксим-метила: 9 мин. 34 с.
Линейный диапазон детектирования: 0,02 — 0,5 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика крезоксим-метила.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание крезоксим-метила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
H x A x V
1
где: X — содержание крезоксим-метила в пробе, мг/кг или мг/куб. дм; H — площадь пика образца, мВ x с; 1 H — площадь пика стандарта, мВ x с; 0 A — концентрация стандартного раствора крезоксим-метила, мкг/мл; V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m — объем (мл) или масса (г) анализируемой части образца (для сока — 10 мл; для плодов и ягод — 5 г).
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.
5. Разработчики
Дубовая Л.В., Талалакина Т.Н., Макеев А.М.
ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.