МУК 4.1.1965-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств флутриафола в плодах яблони, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии. Методические указания
(утв. Роспотребнадзором 21.04.2005)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 1 июля 2005 года.
Утверждаю
Руководитель
Федеральной службы
по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
21 апреля 2005 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЛУТРИАФОЛА В ПЛОДАХ ЯБЛОНИ, ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МУК 4.1.1965-05
1 июля 2005 года
1. Вводная часть
Действующее вещество: флутриафол.
Структурная формула (не приводится).
СА: (+/-)-альфа-(2-фторфенил)-альфа-(4-фторфенил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол.
Эмпирическая формула: C H F № O. 16 13 2 3
Твердое белое кристаллическое вещество.
Температура плавления: 130 °C. -6
Давление паров при 20 °C 7,1 х 10 mPa. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 2,3 (20 °C).
ow
Растворимость (20 °C) в воде 130 мг/л, хорошо растворим в ацетоне - 190 г/л, дихлорметане - 150 г/л, метаноле - 69 г/л, слабо растворим
в гексане — 0,3 г/л.
В почве период полураспада DT 65 — 125 дней. 50
Оральная токсичность (LD ) для крыс 1480 мг/кг. 50
МДУ (мг/кг) виноград — н.д., яблоки — 0,05*.
Фунгицид широкого спектра действия для борьбы с болезнями листа и колоса зерновых культур, также применяется для защиты плодовых, зернобобовых и других культур. Используется для борьбы с почвенными, семенными и аэрогенными инфекциями.
2. Методика определения флутриафола в плодах яблони, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод определения флутриафола в винограде и яблоках основан на экстракции пестицида органическими растворителями, очистке перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и, при необходимости, на колонке с флорисилом. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с использованием детектора электронного захвата (ДЭЗ).
2.1.2 Избирательность метода
Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в таблице.
МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА
| Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % (n = 24) | Стандартное отклонение S, % | Доверительный интервал среднего, %, n = 24, P = 0,95 |
|---|---|---|---|---|---|
| Яблоня, плоды | 0,05 | 0,05 — 0,5 | 85,8 | 5,40 | 4,95 |
| Виноград, ягоды | 0,025 | 0,025 — 0,5 | 83,4 | 5,75 | 4,15 |
| Виноград, сок | 0,025 | 0,025 — 0,5 | 83,0 | 5,95 | 4,15 |
2.2. Реактивы, материалы
Флутриафол, аналитический стандарт
Ацетон, ос.ч. ТУ 2633-039-4493179-00
Вода дистиллированная ГОСТ 7602-76 н-Гексан, х.ч. ТУ 6-09-3375-78
Натрий сернокислый безводный, ч.д.а. ГОСТ 4166-76
Натрия хлорид, х.ч. ГОСТ 4233-77
Серная кислота ос.ч. 11-5 ГОСТ 14262-78
Флорисил 150 — 250 мкм (Merck, Германия)
Хлористый метилен, ч.д.а. ТУ-2631-020-11291058-96
2.3. Приборы и посуда
Газовый хроматограф Кристалл 2000М или аналогичный с ДЭЗ
Колонка кварцевая капиллярная 30 м х 0,32 мм с неподвижной фазой НР-1 (0,25 мкм)
Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 34104-80Е или аналогичные
Весы технические ВЛКТ-500 ГОСТ 24104-80
Установка ультразвуковая "Серьга" ТУ 3.836.008 Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М ТУ 25-11-917-74
или аналогичный
Микрошприц МШ-10, МШ-10М ТУ 2-833-106 Насос водоструйный МРТУ 42861-64 Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС ГОСТ 10384-72 Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС ГОСТ 10384-72
Воронки лабораторные В-75-110 ГОСТ 25336-82
Воронки делительные на 500, 1000 мл ВД-3-500 ГОСТ 8613-75
Цилиндры мерные на 100 куб. см, 500 куб. см ГОСТ 1774-74
Колбы мерные на 100 куб. см ГОСТ 1770-74
Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см ГОСТ 22292-74
Стаканы химические ГОСТ 25336-82Е
Колонка стеклянная хроматографическая длиной 30 см, диаметром 10 мм
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (от 21.08.79 № 2051-79).
2.5. Подготовка к определению
2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.
Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя упаривают на вакуумном ротационном испарителе до объема 1 мл и хроматографируют. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.
2.5.2 Кондиционирование колонки
Перед началом анализа колонку, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250 °C в течение 8 — 10 часов.
2.5.3 Приготовление стандартного
и градуировочных растворов
Для приготовления стандартного раствора с концентрацией 100 мг/мл количественно переносят 20 мг аналитического стандарта флутриафола в мерную колбу на 200 мл и растворяют навеску в ацетоне. Из полученного раствора готовят градуировочные растворы с концентрациями 5, 10, 25, 50 мкг/мл методом последовательного разбавления ацетоном.
Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют соответствующий стандартный раствор флутриафола в ацетоне.
2.5.4 Построение градуировочного графика
Для построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика от концентрации флутриафола в растворе в хроматограф вводят по 1 мкл градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты или площади пиков и строят график зависимости среднего значения высоты, мм, (площади, мВ х с) пика от концентрации флутриафола в градуировочном растворе (мкг/мл).
2.5.5 Подготовка колонки с флорисилом
для очистки экстракта
В нижнюю часть колонки помещают тампон из стекловаты, затем слой 0,5 см безводного сульфата натрия и заполняют через воронку суспензией 5 г флорисила в 25 мл гексана при открытом кране колонки. Затем вносят слой 1 см безводного сульфата натрия и подключают выход колонки к водоструйному насосу для уплотнения слоя сорбента. После этого колонку промывают 15 мл гексана, затем смесью гексан-ацетон в соотношении 2:3 и закрывают кран, когда уровень растворителя достигнет верхнего края сорбента. Колонка готова к работе.
2.5.6 Проверка хроматографического поведения
флутриафола на колонке с флорисилом
В подготовленную колонку пипеткой вносят 1 мл стандартного раствора флутриафола и дают впитаться. После этого вносят 10 мл смеси гексан-ацетон (2:3), элюат отбрасывают. Элюирование флутриафола проводят 40 мл смеси гексан-ацетон (1:5), отбирая фракции по 5 мл, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют фракции, содержащие флутриафол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. Рассчитывают содержание флутриафола в элюате, определяют полноту извлечения препарата из колонки и необходимый для этого объем элюирующей смеси.
Примечание: профиль вымывания флутриафола может измениться при использовании флорисила другой партии.
2.5.7 Подготовка приборов и средств измерения
Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.
2.6. Проведение определения
2.6.1. Экстракция и очистка экстрактов
2.6.1.1. Плоды яблони. Навеску измельченных плодов 50 г помещают в коническую колбу объемом 250 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через складчатый фильтр «красная лента» в делительную воронку объемом 1000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями по 100 мл ацетона. После третьей экстракции осадок переносят на фильтр, колбу ополаскивают 20 мл ацетона и вносят в делительную воронку через фильтр с осадком. К объединенному экстракту добавляют 100 мл дистиллированной воды и промывают 20 мл гексана, встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают и промывку повторяют дважды порциями по 20 мл гексана. Промытый гексаном водно-ацетоновый экстракт концентрируют на роторном испарителе до объема 130 — 150 мл и переносят в делительную воронку, ополаскивая концентратор. Переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая воронку в течение 2 мин. Нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия, затем промывают осушитель 10 мл хлористого метилена. Объединенный дихлорметановый экстракт упаривают досуха и проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.
2.6.1.2. Ягоды винограда. Навеску размолотых ягод 50 г помещают в коническую колбу объемом 500 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Экстракт фильтруют через складчатый фильтр «красная лента» в делительную воронку объемом 1000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями экстрагента по 150 мл, после чего остаток переносят на фильтр, колбу и осадок промывают 20 — 30 мл ацетона. К объединенному экстракту в делительную воронку добавляют 20 мл гексана и встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз 90% нижнего водно-ацетонового слоя отделяют. После этого эмульсию пограничного слоя разбивают внесением в него малого количества хлористого натрия. Остатки водно-ацетонового слоя собирают, гексановый слой отбрасывают. Объединенный водно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе до объема 150 — 180 мл и переносят в делительную воронку. Флутриафол переэкстрагируют в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2 мин. Нижние органические слои собирают, фильтруя через безводный сульфат натрия. Объединенный экстракт выпаривают досуха на роторном испарителе. Далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.
2.6.1.3. Сок винограда. 50 мл сока помещают в делительную воронку объемом 500 мл, добавляют 50 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:9 и встряхивают в течение 2 — 3 мин. Гексановый слой отбрасывают. К собранному водно-ацетоновому слою добавляют 5 мл гексана и интенсивно встряхивают в делительной воронке. После полного разделения фаз собирают водно-ацетоновый слой, гексановый слой отбрасывают. Объединенный экстракт переносят в чистую делительную воронку, добавляют 25 — 30 мл дистиллированной воды и переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл. Дихлорметановый экстракт фильтруют через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха на роторном испарителе. Далее проводят очистку на колонке с флорисилом по п. 2.6.2.
2.6.2. Очистка экстрактов на колонке с флорисилом
Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси гексан-ацетон (3:2). Пипеткой количественно вносят анализируемую пробу в хроматографическую колонку. Колбу ополаскивают еще 2 мл той же смеси и раствор вносят в хроматографическую колонку, затем открывают кран и дают раствору впитаться в сорбент. После этого в колонку вносят 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 2:3, элюат отбрасывают. Флутриафол элюируют 10 мл смеси гексан-ацетон в соотношении 1:5, элюат собирают и выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.
2.6.3. Условия хроматографирования
Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» с ДЭЗ или аналогичный.
Колонка кварцевая капиллярная 30 м х 0,32 мм с неподвижной фазой НР-1 (0,25 мкм).
Температура колонки программируется от 200 °C (4 мин.) до 220 °C со скоростью 10 °C/мин.
Температура испарителя 250 °C, детектора 280 °C.
Скорость газа-носителя (азот) через колонку 3 куб. см/мин.
Время удерживания флутриафола 10 мин. 29 +/- 2 с.
2.6.6. Обработка результатов анализа
Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание флутриафола в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:
H x C x V x V
2 1
H x P x V
1 2
где: H — высота (площадь) пика флутриафола в стандартном растворе, 1 мм (мВ x с); H — высота (площадь) пика флутриафола в анализируемой пробе, 2 мм (мВ x с); V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; P — навеска анализируемого образца, г; C — концентрация флутриафола в стандартном растворе, мкг/мл;
V и V - дозируемые в хроматограф объемы стандартного и анализируемого
1 2
растворов, мкл.
Концентрацию флутриафола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор флутриафола 50 мкг/мл, разбавляют.
3. Требования техники безопасности
При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции «Основные правила безопасной работы в химической лаборатории», общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-2003. «ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа».
5. Разработчики
Долженко В.И., Цибульская И.А., Карпова Л.М.
Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, г. Санкт-Петербург.