---
title: "\"МУК 4.1.1954-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств этилентиомочевины в картофеле, огурцах, томатах, томатном соке, луке, винограде и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии\""
number: "МУК 4.1.1954-05"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1954-05"
---

## "МУК 4.1.1954-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств этилентиомочевины в картофеле, огурцах, томатах, томатном соке, луке, винограде и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

# "МУК 4.1.1954-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств этилентиомочевины в картофеле, огурцах, томатах, томатном соке, луке, винограде и виноградном соке методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

(утв. Роспотребнадзором 18.01.2005)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 18 апреля 2005 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

18 января 2005 года

</div>



#### <a id="p100227"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЭТИЛЕНТИОМОЧЕВИНЫ**
**В КАРТОФЕЛЕ, ОГУРЦАХ, ТОМАТАХ, ТОМАТНОМ СОКЕ, ЛУКЕ,**
**ВИНОГРАДЕ И ВИНОГРАДНОМ СОКЕ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<div align="center">

<a id="p100004"></a>**МУК 4.1.1954-05**

</div>


<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

<div align="center">

18 апреля 2005 года

</div>


1. <a id="p100005"></a>Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

<a id="p100009"></a>Настоящие Методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации этилентиомочевины в картофеле, огурцах, томатах и томатном соке в диапазоне 0,002 - 0,04 мг/кг, луке, винограде и виноградном соке в диапазоне 0,004 - 0,04 мг/кг.
<a id="p100010"></a>Этилентиомочевина - продукт метаболизма пестицида класса этиленбисдитиокарбаматов манкоцеба - действующего вещества препарата МЕТАКСИЛ, СП (640 г/кг манкоцеба + 80 г/кг металаксила), производитель ЗАО Фирма "Август" (Россия).
<a id="p100011"></a>Этилентиомочевина (ЭТМ) - имидазолидин-2-тион (IUPAC).

                                    __
                                   /  \
                                  N    N
                                   \  /
                                    \/
                                    ||
                                    S

<a id="p100012"></a>                                                                   C H N S.
                                                                    3 6 2
<a id="p100013"></a>                                                         Мол. масса 102,17.
<a id="p100014"></a>Белое кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления: 203 - 204 °С. Практически нерастворима в ацетоне, диэтиловом эфире, хлороформе, бензоле, керосине, умеренно растворима в метаноле, этаноле, уксусной кислоте, этиленгликоле, пиридине. Растворимость в воде - 20 г/куб. дм (25 °С); 90 г/куб. дм (60 °С), 440 г/куб. дм (90 °С).
<a id="p100015"></a>    Острая  пероральная токсичность (LD  ) для крыс - 550 - 1832 мг/кг; для
                                       50
мышей - 2400 - 4000 мг/кг.
<a id="p100016"></a>Гигиенические нормативы:
<a id="p100017"></a>ДСД - 0,001 мг/кг массы тела.
<a id="p100018"></a>МДУ во всех растительных и пищевых продуктах - 0,02 мг/кг.
<a id="p100019"></a>Область применения препарата
<a id="p100020"></a>Препарат МЕТАКСИЛ, СП (640 г/кг манкоцеба + 80 г/кг металаксила) рекомендуется в качестве фунгицида на виноградной лозе, картофеле, огурцах, томатах открытого грунта, луке.

1. <a id="p100021"></a>Метрологические характеристики метода

<a id="p100022"></a>Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и [2](#p100035).

<a id="p100023"></a>Таблица 1

<div align="center">

<a id="p100024"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ**

</div>



<table>
<colgroup><col width="22%"><col width="18%"><col width="19%"><col width="12%"><col width="11%"><col width="19%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td colspan="5">Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20</td></tr>
<tr><td>Предел обнаружения, мг/кг</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Стандартное отклонение, S, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, +/-, %</td></tr>
<tr><td>Лук (репка)</td><td>0,004</td><td>0,004 - 0,04</td><td>90,8</td><td>1,3</td><td>3,7</td></tr>
<tr><td>Виноград (ягоды)</td><td>0,004</td><td>0,004 - 0,04</td><td>74,7</td><td>1,4</td><td>3,9</td></tr>
<tr><td>Виноградный сок</td><td>0,004</td><td>0,004 - 0,04</td><td>83,5</td><td>1,6</td><td>4,5</td></tr>
<tr><td>Огурцы</td><td>0,002 <a href="#p100033">&lt;*&gt;</a></td><td>0,002 - 0,04</td><td>77,0</td><td>1,3</td><td>2,8</td></tr>
<tr><td>Томаты, томатный сок</td><td>0,002 <a href="#p100033">&lt;*&gt;</a></td><td>0,002 - 0,04</td><td>76,0</td><td>1,4</td><td>3,0</td></tr>
<tr><td>Картофель</td><td>0,002 <a href="#p100033">&lt;*&gt;</a></td><td>0,002 - 0,04</td><td>73,5</td><td>1,6</td><td>3,3</td></tr>
</table>



<a id="p100032"></a>

---

<a id="p100033"></a><*> При соотношении сигнал/шум, равном 5.

<div align="right">

<a id="p100034"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100035"></a>**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ЭТМ ИЗ ЛУКА, ВИНОГРАДА И ВИНОГРАДНОГО**<br>
**СОКА, ОГУРЦОВ, ТОМАТОВ (ТОМАТНОГО СОКА), КАРТОФЕЛЯ**<br>
**(5 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**

</div>



| Среда | Внесено ЭТМ, мг/кг | Обнаружено ЭТМ, мг/кг | Полнота извлечения, % |
| --- | --- | --- | --- |
| Лук (репка) | 0,004 0,008 0,02 0,04 | 0,0036488 +/- 0,0003935 0,0071832 +/- 0,0004143 0,0180160 +/- 0,0012147 0,0367860 +/- 0,0034592 | 91,2 89,8 90,1 92 |
| Виноград (ягоды) | 0,004 0,008 0,02 0,04 | 0,0030570 +/- 0,0003338 0,0059824 +/- 0,0007715 0,0148670 +/- 0,0006182 0,0293200 +/- 0,0034620 | 76,4 74,8 74,3 73,3 |
| Виноградный сок | 0,004 0,008 0,02 0,04 | 0,0034766 +/- 0,0001487 0,0068238 +/- 0,0005195 0,0160948 +/- 0,0008527 0,0324636 +/- 0,0023484 | 86,9 85,3 80,5 81,2 |
| Огурцы | 0,002 0,01 0,02 0,04 | 0,00147 +/- 0,000084 0,00764 +/- 0,00036 0,01562 +/- 0,00064 0,03200 +/- 0,00124 | 73,5 76,4 74,3 73,3 |
| Томаты (томатный сок) | 0,002 0,01 0,02 0,04 | 0,001464 +/- 0,000088 0,00754 +/- 0,00033 0,01548 +/- 0,00068 0,03120 +/- 0,00124 | 73,2 75,4 77,4 78,0 |
| Картофель | 0,004 0,01 0,02 0,04 | 0,002812 +/- 0,000184 0,00736 +/- 0,00037 0,01500 +/- 0,00074 0,03008 +/- 0,00140 | 70,3 73,6 75,0 75,2 |


2. <a id="p100061"></a>Метод измерений

<a id="p100062"></a>Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемых проб метанолом, очистки экстракта на колонке с оксидом алюминия.

<div align="center">

<a id="p100063"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.<br>
<a id="p100064"></a>В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания лука, винограда, огурцов, томатов, картофеля.

3. <a id="p100065"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства,

</div>

реактивы и материалы


#### <a id="p100066"></a>3.1 Средства измерений


<a id="p100067"></a>Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором
с переменной длиной волны, оборудованный термостатом колонок
<a id="p100068"></a>Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
<a id="p100069"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом ГОСТ 7328
взвешивания до 500 г и пределом допустимой погрешности
+/- 0,038 г
<a id="p100070"></a>Меры массы ГОСТ 7328
<a id="p100071"></a>Колбы мерные 2-50-2, 2-100-2,2-500-2 и 2-1000-2 [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100072"></a>Пипетки градуированные 2-го класса точности вместимостью [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
1,0; 2,0; 5,0; 10 куб. см

<div align="center">

<a id="p100073"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности вместимостью [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)

</div>

10, 25, 50, 250 и 1000 куб. см
<a id="p100074"></a>Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


#### <a id="p100075"></a>3.2 Реактивы


<a id="p100076"></a>Этилентиомочевина, аналитический стандарт с содержанием
д.в. 99,0% (ВНИИХСЗР, Россия) или другого производителя
<a id="p100077"></a>Алюминий оксид для хроматографии, нейтральный
(фирмы "Реанал", Венгрия)
<a id="p100078"></a>Вода  бидистиллированная деионизованная или

<div align="center">

перегнанная над KMnO

</div>

                    4
<a id="p100079"></a>Кальция хлорид, хч                                               ГОСТ 4161
<a id="p100080"></a>Метиловый спирт (метанол), хч [ГОСТ 6995](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77)
<a id="p100081"></a>Метилен хлористый (дихлорметан), хч [ГОСТ 12794](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80)


#### <a id="p100082"></a>3.3 Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100083"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с                ТУ 64-1-2851-78
Баня ультразвуковая фирмы Донау (Швейцария)
или FINNSONIC OY (Финляндия)
<a id="p100084"></a>Бумажные фильтры "белая лента" обеззоленные         ТУ 6-09-2678-77
<a id="p100085"></a>Воронка Бюхнера ГОСТ 25336
<a id="p100086"></a>Воронки с фильтром Шота N 3                         ГОСТ 8682
<a id="p100087"></a>Воронки химические конусные диаметром 30 - 37 ГОСТ 25336
и 60 мм
<a id="p100088"></a>Гомогенизатор
<a id="p100089"></a>Груша резиновая
<a id="p100090"></a>Источник чистого сжатого воздуха (баллон или
безмасляный компрессор) или любого инертного газа
<a id="p100091"></a>Колба Бунзена ГОСТ 25336
<a id="p100092"></a>Колбы плоскодонные с пришлифованными пробками [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
вместимостью 200 - 250 куб. см
<a id="p100093"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью ГОСТ 25336
10, 100, 150 и 250 куб. см
<a id="p100094"></a>Колонка стеклянная внутренним диаметром
13 - 15 мм, высотой 30 - 40 см
<a id="p100095"></a>Мелкая терка для овощей
<a id="p100096"></a>Мембранные фильтры капроновые или фторопластовые    ТУ 6-55-221-1323-93
диаметром 47 мм, размер пор 0,45 мкм
<a id="p100097"></a>Мешалка магнитная MR 3001 фирмы Heidolph
<a id="p100098"></a>Набор для фильтрации проб для ВЭЖХ фирмы
"MILLIPOR" с капроновыми мембранами, размер
пор 0,2 мкм
<a id="p100099"></a>Набор для фильтрации растворителей через мембрану
<a id="p100100"></a>Насос водоструйный                                  ГОСТ 10696
<a id="p100101"></a>Переход с боковым отводом                           ГОСТ 8682
<a id="p100102"></a>Прибор для получения особо чистой
(деионизованной) воды "Водолей"
<a id="p100103"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М,             ТУ 25-11-917-74
ротационный вакуумный испаритель В-169
фирмы Buchi (Швейцария) или Laborota 4000
фирмы "Heidolph" (Германия)
<a id="p100104"></a>Стаканы химические вместимостью 50 и 100 куб. см ГОСТ 25336
<a id="p100105"></a>Стекловата
<a id="p100106"></a>Стеклянные палочки
<a id="p100107"></a>Трубка хлоркальциевая ГОСТ 25336
<a id="p100108"></a>Установка для перегонки растворителей
<a id="p100109"></a>Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см,
внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb
S5 ODS 2, зернением 5 мкм

<div align="center">

<a id="p100110"></a>Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см,

</div>

внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Zorbax SB
С18, зернением 5 мкм
<a id="p100111"></a>Шкаф сушильный ШС-1/80 СПУ ПГИЖ 6819454.006         ТУ 3443-010-00141798-01

<div align="center">

<a id="p100112"></a>Шприц для ввода образцов для жидкостного

</div>

хроматографа вместимостью 50 - 100 куб. мм
<a id="p100113"></a>Допускается применение другого оборудования и хроматографических колонок с аналогичными техническими характеристиками, обеспечивающими аналогичное разделение.

<div align="center">

4. <a id="p100114"></a>Требования безопасности

</div>


<a id="p100115"></a>4.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005).
<a id="p100116"></a>4.2. При выполнении измерений с использованием газового и жидкостного хроматографов соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТом 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. <a id="p100117"></a>Требования к квалификации операторов

<a id="p100118"></a>К выполнению измерений допускают лиц, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.

6. <a id="p100119"></a>Условия измерений

<a id="p100120"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100121"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят согласно ГОСТу 15150 при температуре воздуха (20 +/- 5) °С, атмосферном давлении 630 - 800 мм рт. ст. и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100122"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

<div align="center">

7. <a id="p100123"></a>Подготовка к определению

</div>


<a id="p100124"></a>Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей, подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографической колонки, приготовление градуировочных растворов, построение градуировочной характеристики, подготовка колонки для очистки экстракта, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с оксидом алюминия.


#### <a id="p100125"></a>7.1 Подготовка органических растворителей


<a id="p100126"></a>Метилен хлористый последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, далее водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом. Хранят над безводным сульфатом натрия.
<a id="p100127"></a>Метанол подвергают перегонке при атмосферном давлении с дефлегматором.


#### <a id="p100128"></a>7.2 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ


<a id="p100129"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 990 куб. см бидистиллированной воды, добавляют 10 куб. см метанола, перемешивают, фильтруют и дегазируют.


#### <a id="p100130"></a>7.3 Кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100131"></a>Промывают колонку подвижной фазой для ВЭЖХ со скоростью подачи растворителя 0,3 куб. см/мин. (анализ по [п. 9.3.1](#p100188)) или 1 куб. см/мин. (анализ по [п. 9.3.2](#p100200)) до установления стабильной базовой линии.


#### <a id="p100132"></a>7.4 Приготовление растворов для градуировки



##### <a id="p100133"></a>7.4.1 Исследование проб лука, винограда и виноградного сока


###### <a id="p100134"></a>7.4.1.1 Исходный раствор для градуировки (концентрация 1 мг/куб. см)

<a id="p100135"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,1 г ЭТМ, доводят до метки бидистиллированной водой, тщательно перемешивают.
<a id="p100136"></a>Исходный раствор хранится в холодильнике в течение 3-х месяцев в плотно закрытой посуде.
<a id="p100137"></a>Растворы N 1 - 6 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного раствора.
<a id="p100138"></a>7.4.1.2. Раствор N 1 для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного раствора для градуировки с концентрацией 1 мг/куб. см, доводят до метки бидистиллированной водой, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
<a id="p100139"></a>Этот раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения ЭТМ из исследуемых образцов.
<a id="p100140"></a>7.4.1.3. Раствор N 2 для градуировки (концентрация 1 мкг/куб. см). В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см раствора N 1 для градуировки с концентрацией 10 мкг/куб. см, доводят до метки бидистиллированной водой, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
<a id="p100141"></a>7.4.1.4. Рабочие растворы N 3 - 6 для градуировки (соответствуют концентрациям 0,01 - 0,1 мкг/куб. см).
<a id="p100142"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают с помощью пипетки по 1; 2; 5 и 10 куб. см раствора N 2 с концентрацией 1 мкг/куб. см [(п. 7.4.1.3)](#p100140), доводят до метки бидистиллированной водой, тщательно перемешивают, получают рабочие растворы ЭТМ N 3 - 6 с концентрациями 0,01; 0,02; 0,05 и 0,1 мкг/куб. см соответственно.
<a id="p100143"></a>Растворы хранятся в холодильнике в течение недели.

##### <a id="p100144"></a>7.4.2 Исследование проб картофеля, огурцов, томатов и томатного сока


###### <a id="p100145"></a>7.4.2.1 Исходный раствор для градуировки (концентрация 100 мкг/куб. см)

<a id="p100146"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,01 г ЭТМ, доводят до метки метанолом, тщательно перемешивают.
<a id="p100147"></a>Исходный раствор хранится в морозильной камере при -12 °С не более 15 дней.

###### <a id="p100148"></a>7.4.2.2 Раствор N 1а для градуировки (концентрация 5 мкг/куб. см)

<a id="p100149"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 5 куб. см исходного раствора для градуировки с концентрацией 100 мкг/куб. см [(п. 7.4.2.1)](#p100145), доводят до метки подвижной фазой для ВЭЖХ [(п. 7.2)](#p100128).
<a id="p100150"></a>7.4.2.3. Рабочие растворы N 2а - 5а для градуировки (соответствуют концентрациям 0,025 - 0,5 мкг/куб. см).
<a id="p100151"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают с помощью пипетки по 0,5; 2,5; 5 и 10 куб. см раствора N 1 с концентрацией 5 мкг/куб. см [(п. 7.4.2.2)](#p100148), доводят до метки подвижной фазой для ВЭЖХ [(п. 7.2)](#p100128), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы ЭТМ N 2а - 5а с концентрациями 0,025; 0,125; 0,25 и 0,5 мкг/куб. см соответственно.
<a id="p100152"></a>Растворы хранятся в холодильнике не более суток.


#### <a id="p100153"></a>7.5 Построение градуировочной характеристики


<a id="p100154"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации ЭТМ в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 3 - 6 или 2а - 5а.
<a id="p100155"></a>В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.3.1](#p100188) или [9.3.2](#p100200). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.


#### <a id="p100156"></a>7.6 Подготовка колонки с оксидом алюминия

<div align="center">

для очистки экстракта

</div>


<a id="p100157"></a>Оксид алюминия, помещенный на воронку Бюхнера, промывают трижды порциями метанола, равными объему сорбента, сушат разряжением, создаваемым водоструйным насосом, затем активируют в сушильном шкафу при 140 - 150 °С в течение 15-ти часов, охлаждают в эксикаторе.
<a id="p100158"></a>При исследовании проб лука, винограда и виноградного сока нижнюю часть стеклянной колонки длиной 35 - 40 см, внутренним диаметром 13 - 15 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 20 г оксида алюминия в 30 - 35 куб. см хлористого метилена. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. После этого колонка готова к работе.
<a id="p100159"></a>При исследовании проб картофеля, огурцов, томатов и томатного сока используют суспензию 7,5 г оксида алюминия в 20 куб. см дихлорметана, а также колонку длиной 30 см.


#### <a id="p100160"></a>7.7 Проверка хроматографического поведения ЭТМ

на колонке с оксидом алюминия


##### <a id="p100161"></a>7.7.1 Лук, виноград и виноградный сок

<a id="p100162"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,5 куб. см раствора N 2 для градуировки [(п. 7.4.1.3)](#p100140), добавляют 8 куб. см метанола, перемешивают и наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.6](#p100156). Промывают колонку 100 куб. см смеси хлористый метилен - метанол (19:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 5-ти куб. см бидистиллированной воды, анализируют на содержание ЭТМ по [п. 9.3.1](#p100188).

##### <a id="p100163"></a>7.7.2 Картофель, огурцы, томаты и томатный сок

<a id="p100164"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,05 куб. см исходного раствора с концентрацией ЭТМ 100 мкг/куб. см в метаноле [(п. 7.4.2.1)](#p100145), удаляют растворитель слабым потоком чистого сжатого воздуха или инертного газа, остаток количественно переносят тремя порциями (1,5 + 1,5 + 2 куб. см) водного метанола (150 мг воды в 5 куб. см метанола) на колонку, подготовленную по [п. 7.6](#p100156). Промывают колонку 90 куб. см смеси хлористый метилен - метанол (19:1, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек. Фракционно (по 6 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 1 - 2-х куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ [(п. 7.2)](#p100128), анализируют на содержание ЭТМ по [п. 9.3.2](#p100200).
<a id="p100165"></a>Фракции, содержащие ЭТМ, объединяют и вновь анализируют.
<a id="p100166"></a>Рассчитывают уровень вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
<a id="p100167"></a>ПРИМЕЧАНИЕ: Проверку хроматографического поведения ЭТМ следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.

<div align="center">

8. <a id="p100168"></a>Отбор проб

<a id="p100169"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79, N 2051-79.

</div>

<a id="p100170"></a>Отобранные пробы лука, винограда и виноградного сока анализируют в день отбора или хранят при 4 °С в течение 10-ти дней, срок хранения образцов огурцов, томатов, картофеля - не более недели.
<a id="p100171"></a>Для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре -18 °С. Непосредственно перед анализом образцы лука и винограда измельчают на гомогенизаторе, огурцов, томатов, картофеля - при помощи терки для овощей.

9. <a id="p100172"></a>Выполнение определения


#### <a id="p100173"></a>9.1 Экстракция



##### <a id="p100174"></a>9.1.1 Лук, виноград, виноградный сок

<div align="center">

<a id="p100175"></a>Образец измельченного лука, ягод винограда или виноградного сока массой 20 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 - 250 куб. см, вносят 100 куб. см метанола. Колбы с образцами лука и ягод винограда встряхивают на механическом встряхивателе в течение 45-ти минут. Образец виноградного сока помещают на 2 часа в холодильник (4 - 6 °С).

</div>

<a id="p100176"></a>Затем растворы фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр "красная лента" под вакуумом. Осадок на фильтре промывают дважды по 20 куб. см метанола. Экстракт и промывку переносят в мерный цилиндр вместимостью 200 куб. см с пришлифованной пробкой, перемешивают, измеряют объем раствора, 1/2 его часть (эквивалентную 10 г образца) переносят в круглодонную колбу и упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 45 °С до получения малоподвижной вязкой массы. Колбу с остатком отсоединяют от роторного испарителя. Оставшиеся капли конденсата выше уровня исходного фильтрата (около шлифа грушевидной колбы) удаляют с помощью фильтровальной бумаги. Для более полного освобождения от летучих продуктов содержимое колбы продувают слабой струей сжатого воздуха в течение 10 - 15 мин.
<a id="p100177"></a>Далее проводят очистку экстракта по [п. 9.2.1](#p100181).

##### <a id="p100178"></a>9.1.2 Картофель, огурцы, томаты, томатный сок

<a id="p100179"></a>Образец измельченных огурцов, картофеля, томатов или томатного сока массой 25 г помещают в коническую колбу вместимостью 200 - 250 куб. см, вносят 50 куб. см метанола. Содержимое колбы интенсивно перемешивают в течение 30-ти минут на магнитной мешалке. Полученный экстракт переносят на фильтр Шота, присоединенный через переходник к грушевидной колбе вместимостью 200 куб. см, и фильтруют с помощью водоструйного насоса. Осадок растительного материала на фильтре промывают 25 куб. см метанола, фильтруя промывной раствор в ту же грушевидную колбу. Фильтрат упаривают при температуре не выше 60 °С до получения малоподвижной (томаты, томатный сок) или практически не текучей (огурцы, картофель) вязкой массы. Колбу с остатком отсоединяют от роторного испарителя. Оставшиеся капли конденсата выше уровня исходного фильтрата (около шлифа грушевидной колбы) удаляют с помощью фильтровальной бумаги. Для более полного освобождения от летучих продуктов содержимое колбы продувают слабой струей сжатого воздуха или инертного газа в течение 20 - 30 мин.


#### <a id="p100180"></a>9.2 Очистка экстракта



##### <a id="p100181"></a>9.2.1 Лук, виноград, виноградный сок

<div align="center">

<a id="p100182"></a>Высушенный экстракт, полученный по [п. 9.1.1](#p100174), растворяют при перемешивании и температуре 38 - 42 °С в 2 куб. см метанола и 0,5 куб. см бидистиллированной воды, помещая колбу на ультразвуковую баню. Затем в колбу вносят порциями по 2 куб. см еще 6 куб. см метанола. После прибавления последней порции колбу закрывают пришлифованной пробкой и помещают на ультразвуковую баню на 2 - 3 мин.

</div>

<a id="p100183"></a>Полученный водно-метанольный раствор переносят в подготовленную по [п. 7.3](#p100130) колонку, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. ЭТМ элюируют с колонки 70 куб. см смеси хлористый метилен - метанол (19:1, по объему), собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 150 куб. см. Раствор упаривают при температуре не выше 45 °С почти досуха, затем продувают слабой струей сжатого воздуха досуха. Остаток растворяют в 4 куб. см бидистиллированной воды, помещая колбу на ультразвуковую баню. Раствор фильтруют при помощи набора для фильтрации проб (или через плотный тампон из стекловаты, помещенный в конусную воронку) и анализируют на содержание ЭТМ по [п. 9.3](#p100187).

##### <a id="p100184"></a>9.2.2 Огурцы, томаты, томатный сок, картофель

<a id="p100185"></a>Высушенный экстракт, полученный по [п. 9.1.2](#p100178), растворяют при медленном перемешивании и температуре 38 - 42 °С в 1 куб. см метанола и строго определенного количества бидистиллированной воды, помещая колбу на ультразвуковую баню. Количество добавляемой воды составляет 145, 150 и 350 куб. мм соответственно для огурцов, томатов (томатного сока) и картофеля. Операция растворения высушенного экстракта занимает достаточно длительное время (от одного до 2-х часов). Затем в колбу вносят порциями по 1 куб. см еще 4 куб. см метанола. После прибавления каждой порции метанола содержимое колбы осторожно перемешивают, после прибавления последней порции колбу закрывают пришлифованной пробкой и помещают на ультразвуковую баню на 10 мин.
<a id="p100186"></a>Полученный водно-метанольный раствор переносят в подготовленную по [п. 7.3](#p100130) колонку, дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. ЭТМ элюируют с колонки 60 куб. см смеси хлористый метилен - метанол (19:1, по объему), собирая элюат в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают при температуре не выше 50 °С почти досуха, затем продувают слабой струей сжатого воздуха или инертного газа досуха. Остаток растворяют в 2 куб. см бидистиллированной воды, помещая колбу на ультразвуковую баню. Раствор фильтруют при помощи набора для фильтрации проб (или через плотный тампон из стекловаты, помещенный в конусную воронку) и анализируют на содержание ЭТМ по [п. 9.3](#p100187).


#### <a id="p100187"></a>9.3 Условия хроматографирования



##### <a id="p100188"></a>9.3.1 Лук, виноград, виноградный сок

<a id="p100189"></a>Хроматограф жидкостной с ультрафиолетовым детектором (Perkin-Elmer, США)
<a id="p100190"></a>Колонка хроматографическая стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм
<a id="p100191"></a>Температура колонки: комнатная
<a id="p100192"></a>Скорость потока элюента: 0,3 куб. см/мин.
<a id="p100193"></a>Рабочая длина волны: 233 нм
<a id="p100194"></a>Чувствительность: 0,02 ед. абсорбции на шкалу
<a id="p100195"></a>Объем вводимой пробы: 20 мкл
<a id="p100196"></a>Подвижная фаза: вода - метанол (99:1, по объему)
<a id="p100197"></a>Ориентировочное время выхода ЭТМ: 4,6 - 4,9 мин.
<a id="p100198"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,2 - 2,0 нг
<a id="p100199"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочные растворы с концентрацией 0,1 мкг/куб. см, разбавляют бидистиллированной водой.

##### <a id="p100200"></a>9.3.2 Огурцы, томаты, томатный сок, картофель

<a id="p100201"></a>Хроматограф жидкостной с ультрафиолетовым детектором, модель 1100 (Agilent Technologies, США)
<a id="p100202"></a>Колонка хроматографическая стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,6 мм, содержащая Zorbax SB С18, зернением 5 мкм
<a id="p100203"></a>Температура термостата колонки: 25 °С
<a id="p100204"></a>Скорость потока элюента: 1 куб. см/мин.
<a id="p100205"></a>Рабочая длина волны: 233 нм
<a id="p100206"></a>Чувствительность: 0,007 ед. абсорбции на шкалу

<div align="center">

<a id="p100207"></a>Объем вводимой пробы: 50 мкл

</div>

<a id="p100208"></a>Подвижная фаза: вода - метанол (99:1, по объему)
<a id="p100209"></a>Ориентировочное время выхода ЭТМ: 4,5 мин.
<a id="p100210"></a>Линейный диапазон детектирования 0,5 - 10 нг
<a id="p100211"></a>Образцы, дающие пики большие, чем градуировочные растворы с концентрацией 0,5 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой [(п. 7.2)](#p100128).

10. <a id="p100212"></a>Обработка результатов анализа

<a id="p100213"></a>Содержание ЭТМ в пробе рассчитывают по формуле:

                                  (А х К) V
<a id="p100214"></a>                              Х = ---------,
                                      m

<a id="p100215"></a>где:
<a id="p100216"></a>Х - содержание ЭТМ в пробе, мг/кг;

<div align="center">

<a id="p100217"></a>А - концентрация ЭТМ, найденная по градуировочному графику, мкг/куб. см;

</div>

<a id="p100218"></a>V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
<a id="p100219"></a>m - масса анализируемого образца, г.
<a id="p100220"></a>К - коэффициент пересчета, учитывающий объем экстрактов проб, используемый для анализа, равный для лука, винограда и виноградного сока - 2, для огурцов, томатов, томатного сока, картофеля - 1.

<div align="center">

11. <a id="p100221"></a>Контроль погрешности измерений

</div>


<a id="p100222"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-1-6.2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-4-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".

12. <a id="p100223"></a>Разработчики

<a id="p100224"></a>Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана, Федеральный центр Госсанэпиднадзора - лук, виноград, виноградный сок.

<div align="center">

<a id="p100225"></a>ЗАО Фирма "Август" - огурцы, томаты, томатный сок, картофель.

</div>




<a id="p100226"></a>

---