--- title: "\"МУК 4.1.1941-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств бенсульфурон-метила в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии\"" number: "МУК 4.1.1941-05" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1941-05" --- ## "МУК 4.1.1941-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств бенсульфурон-метила в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" # "МУК 4.1.1941-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств бенсульфурон-метила в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Роспотребнадзором 18.01.2005) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 18 апреля 2005 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
18 января 2005 года
#### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ БЕНСУЛЬФУРОН-МЕТИЛА** **В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ** **ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**
**МУК 4.1.1941-05**
Дата введения
18 апреля 2005 года
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
4. Введены впервые.
## 1. Вводная часть Торговое наименование: Лондакс. Фирма-производитель: Дюпон де Немур Интернэшнл С.А. Действующее вещество: бенсульфурон-метил. Структурная формула (не приводится). альфа-(4,6-диметоксипиримидин-2-илкарбамоилсульфамоил)-о-толуидиновая кислота (номенклатура IUPAC). Эмпирическая формула: C H N O S. 16 18 4 7 Молекулярная масса: 410,4. Физическое состояние: белое светло-желтое кристаллическое вещество без запаха. Растворимость в воде (мг/л, 25 °С): 2,9 (рН 5); 12 (рН 6); 120 (рН 7); 1200 (рН 8). Растворимость в органических растворителях (г/л, 20 °С): ацетон - 1,38; ацетонитрил - 5,38; гексан - 0,01; хлористый метилен - 1,72; этилацетат - 1,66. Температура плавления: 185 - 188 °С. Острая пероральная токсичность для крыс LD > 5000 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность для кролика LD > 2000 мг/кг; острая ингаляционная 50 токсичность для крыс LC > 7,5 мг/л воздуха. 50 Гигиенические нормативы: ПДК в воде - 0,04 мг/л, МДУ для зерна риса - 0,02 мг/кг, ПДК в почве - 0,02 мг/кг. Область применения: бенсульфурон-метил - действующее вещество гербицида Лондакс 600 г/кг СТС, применяемого для борьбы с сорняками в посевах риса с нормой расхода 50 - 100 г/га. ## 2. Методика определения бенсульфурон-метила в воде, зерне и соломе риса и почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Метод основан на определении бенсульфурон-метила на высокоэффективном жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектором. Бенсульфурон-метил экстрагируется: из почвы - водой с рН 10, из зерна и соломы риса - хлористым метиленом и из воды - хлороформом. При анализе почвы и растительной массы экстракт очищают сначала перераспределением между несмешивающимися растворителями, а затем на патроне Диапак С16. Очищенные и сконцентрированные упариванием экстракты анализируют методом ВЭЖХ с использованием обращенно-фазной колонки. ##### 2.1.2 Избирательность метода В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии других пестицидов, применяемых при возделывании риса. ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и [2](#p100041).
Таблица 1
**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ И СТАТИСТИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ**
(Р = 0,95, n = 20)
| Анализируемый объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Вода | 0,02 | 0,02 - 0,40 | 85,5 | 7,2 | 3,2 | | Зерно риса | 0,01 | 0,01 - 0,10 | 82,1 | 6,9 | 3,0 | | Солома риса | 0,04 | 0,04 - 0,40 | 82,8 | 5,5 | 2,4 | | Почва | 0,01 | 0,01 - 0,20 | 78,6 | 8,0 | 3,5 |
Таблица 2
**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕНСУЛЬФУРОН-МЕТИЛА В ВОДЕ,**
**ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА**
| Объект | Добавлено, мг/кг | Обнаружено, мг/кг | Доверительный интервал, +/- (Р = 0,95, n = 5) | Полнота определения, % | | --- | --- | --- | --- | --- | | Вода | 0,0200 0,0400 0,0800 0,4000 | 0,0156 0,0328 0,0734 0,3618 | 0,0001 0,0032 0,0142 0,0192 | 78,0 82,0 91,7 90,4 | | Зерно риса | 0,0100 0,0200 0,0400 0,1000 | 0,0081 0,0173 0,0312 0,0830 | 0,0005 0,0006 0,0037 0,0106 | 81,2 86,3 78,0 83,0 | | Солома риса | 0,0400 0,0800 0,1600 0,4000 | 0,0360 0,0654 0,1327 0,3080 | 0,0020 0,0015 0,0054 0,0084 | 90,0 81,2 82,9 77,0 | | Почва | 0,0100 0,0200 0,0400 0,2000 | 0,0075 0,0160 0,0304 0,1670 | 0,0005 0,0023 0,0035 0,0184 | 74,8 80,0 76,0 83,5 | ### 2.2. Реактивы, материалы и оборудование ##### 2.2.1 Реактивы и материалы Бенсульфурон-метил 99% (Дюпон де Немур Интернэшнл С.А.) Аммиак водный 25%-ный, чда, ГОСТ 3760-79 Ацетонитрил для хроматографии, ТУ-6-09-4326-76 Вода бидистиллированная деионизированная, ГОСТ 7602-72 Гексан, хч, ТУ 6-09-3375-78 Кислота уксусная ледяная, хч, ГОСТ 61-75 Метанол, хч, [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) Орто-фосфорная кислота, хч, имп., фирмы "Нева реактив" Сульфат натрия безводный, чда, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76) Толуол, хч, [ГОСТ 5789-78](https://bukva.ai/docs/gost-5789-78) Фильтры бумажные "синяя лента", ТУ 6-09-1678-77 Хлористый метилен, ТУ 6-09-2662-77 Хлороформ, хч, ГОСТ 20015-74 ##### 2.2.2 Приборы, аппаратура и посуда Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный Вакуумный роторный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные Весы лабораторные технические ВЛТК-500 или аналогичные Воронки конические стеклянные диаметром 50 - 60 мм, ГОСТ 25336-82Е Делительные воронки на 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82Е Колбы конические емкостью 250 - 500 мл, ГОСТ 10394-72 Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 23932-79 Колбы мерные на 100 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм и внутренним диаметром 4 мм, зернение 5 мкм, Диасфер-110 С18, ЗАО "БиоХиммак СТ" Концентраторы грушевидные на 50 и 100 мл, КТУ-100-14/19, ГОСТ 10394-75 Концентрирующие патроны ДИАПАК С16, ЗАО "БиоХиммак СТ", ТУ 4215-002-05451931-94 Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная Микрошприц на 50 мкл для жидкостного хроматографа Пипетки мерные на 1,0; 2,0 и 5,0 мл, [ГОСТ 20292](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74) Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный Стекловата Хроматограф жидкостной высокоэффективный Кратос с ультрафиолетовым детектором Кратос 2500 с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичный Центрифуга 10000 об./мин. с центрифужными стаканами на 200 мл Цилиндры мерные на 25, 50, 100 мл, 250 мл и 500 мл, [ГОСТ 1770-74Е](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) ### 2.3. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР от 21.08.79 N 2051-79. Перед анализом зерно размалывают на мельнице, солому режут на части по 0,5 см. Образцы почвы и воды хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С. ### 2.4. Подготовка к определению ##### 2.4.1 Подготовка растворителей Очистку растворителей осуществляют общепринятыми методами (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика, М., "Мир", 1976). ##### 2.4.2 Приготовление стандартных растворов Основной стандартный раствор 100 мкг/мл бенсульфурон-метила готовят в 100 мл мерной колбе, растворяя 10 мг действующего вещества в ацетонитриле. Из основного стандартного раствора бенсульфурон-метила методом последовательного разбавления готовят калибровочные растворы вещества в подвижной фазе с концентрациями: 0,1; 0,2; 0,5 и 1 мкг/мл. Рабочие стандартные растворы готовят в день анализа, основной стандартный раствор можно хранить при -18 °С в течение 3 месяцев. ##### 2.4.3 Построение калибровочного графика Для построения калибровочного графика снимают хроматограммы стандартных растворов, вводя в инжектор хроматографа последовательно 3 раза по 50 мкл каждого стандартного раствора. Измеряют площади пиков, рассчитывают их средние значения для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации бенсульфурон-метила. ##### 2.4.4 Проверка хроматографического поведения бенсульфурон-метила на патроне Диапак С16 Все процедуры с патронами проводят с использованием вакуума (скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 мл/мин.). Патрон устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона в процессе его кондиционирования и при очистке на нем экстрактов! При анализе зерна и соломы риса. Предварительно патрон Диапак С16 кондиционируют, пропуская через него 10 мл ацетонитрила и 10 мл 0,15 М раствора гидроксида аммония. На кондиционированный патрон наносят 0,1 мкг бенсульфурон-метила в 10 мл 0,15 М раствора гидроксида аммония. Затем бенсульфурон-метил элюируют последовательно десятью 1-мл порциями ацетонитрила. Каждую фракцию упаривают отдельно, после чего сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы и аликвоту 50 мкл вводят в хроматограф. Рассчитывают содержание бенсульфурон-метила в каждой фракции и определяют объем элюата, необходимый для наиболее полного элюирования вещества с патрона. Для данной методики он равен 5 мл ацетонитрила. При анализе почвы. Кондиционирование патрона Диапак С16 проводят, последовательно промывая его 10 мл метанола, 10 мл дистиллированной воды и 10 мл дистиллированной воды с рН 10. На кондиционированный патрон наносят 0,1 мкг бенсульфурон-метила в 10 мл дистиллированной воды с рН 10. Промывают его 10 мл дистиллированной воды. Затем бенсульфурон-метил последовательно элюируют десятью 1-мл порциями метанола. Каждую фракцию упаривают отдельно, после чего сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы и аликвоту 50 мкл вводят в хроматограф. Рассчитывают содержание бенсульфурон-метила в каждой фракции и определяют объем элюента, необходимый для наиболее полного элюирования вещества с патрона. Для данной методики он равен 5 мл метанола. ##### 2.4.5 Приготовление подвижной фазы Готовят 0,05%-ный раствор орто-фосфорной кислоты. Для приготовления подвижной фазы 430 мл ацетонитрила смешивают с 570 мл 0,05%-ного раствора орто-фосфорной кислоты и дегазируют в ультразвуковой бане в течение 1 мин. ### 2.5. Описание методики ##### 2.5.1 Вода Пробу воды объемом 100 мл доводят до рН 4,0 добавлением 0,1 М HCl, помещают в делительную воронку на 250 мл, добавляют 50 мл хлороформа и встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой хлороформа сливают в концентратор на 250 мл, пропуская его через воронку с безводным сульфатом натрия. Процедуру повторяют. К объединенному хлороформенному экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты и упаривают его на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют. ##### 2.5.2 Зерно риса Экстракция. В коническую плоскодонную колбу на 250 мл помещают 10 г размолотого зерна риса, приливают 50 мл хлористого метилена и встряхивают в течение 30 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр. Процедуру экстракции повторяют. Экстракт объединяют и упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Первичная очистка. Сухой остаток растворяют в 30 мл ацетонитрила, переносят в делительную воронку на 100 мл и добавляют 30 мл н-гексана. Воронку встряхивают 2 мин. и гексановую фазу отбрасывают. Повторяют эту процедуру. Объединенный ацетонитриловый экстракт упаривают досуха при 35 °С. Очистка на Диапак С16. Сухой остаток растворяют в 10 мл 0,15 М гидроксида аммония и пропускают по каплям через кондиционированный патрон Диапак С16. Испарительную колбу обмывают 5 мл 0,15 М гидроксида аммония и этот раствор также пропускают через патрон. Дают раствору полностью стечь и бенсульфурон-метил снимают с патрона 5 мл ацетонитрила. Элюат упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток перед анализом растворяют в 1 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют. ##### 2.5.3 Солома риса Экстракция. В коническую плоскодонную колбу на 250 мл помещают 5 г мелко нарезанной соломы риса, приливают 50 мл 0,5%-ной уксусной кислоты в хлористом метилене и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Процедуру экстракции повторяют. Первичная очистка. Экстракт объединяют и упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при температуре не более 35 °С. Остаток растворяют в 30 мл ацетонитрила, переносят в делительную воронку на 100 мл и добавляют 30 мл н-гексана. Воронку встряхивают 2 мин. и гексановую фазу отбрасывают. Эту процедуру повторяют. Ацетонитриловый экстракт упаривают досуха при температуре не более 35 °С. Сухой остаток растворяют в 100 мл 0,15 М гидроксида аммония, переносят в делительную воронку на 250 мл и чистят 10 мл хлористого метилена, который затем отбрасывают. Процедуру повторяют. Водную фазу подкисляют до рН 4,0 разбавленной HCl, добавляют 0,5 мл ледяной уксусной кислоты и экстрагируют бенсульфурон-метил двумя 30 мл порциями хлористого метилена по две минуты. Объединенный экстракт упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Очистка на Диапак С16. Кондиционируют патрон 10 мл ацетонитрила и 10 мл 0,15 М гидроксида аммония. Сухой остаток растворяют в 10 мл 0,15 М гидроксида аммония и пропускают по каплям через Диапак С16. Испарительную колбу обмывают 5 мл 0,15 М гидроксида аммония и этот раствор также пропускают через патрон. Дают раствору полностью стечь и бенсульфурон-метил снимают с патрона 5 мл ацетонитрила. Элюат упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе и перед анализом на хроматографе растворяют в 1 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют. ##### 2.5.4 Почва Экстракция. 20 г почвы помещают в 500 мл коническую плоскодонную колбу, приливают 250 мл дистиллированной воды с рН 10 (нужный рН устанавливается с помощью гидроксида аммония) и встряхивают на механическом встряхивателе в течение 10 мин. Содержимое переносят в центрифужный стакан и центрифугируют в течение 15 мин. со скоростью 7000 об./мин. Раствор декантируют в цилиндр на 250 мл через воронку со стекловатой. Первичная очистка. Аликвоту 125 мл переносят в делительную воронку на 250 мл, добавляют 30 мл смеси толуол - хлористый метилен в соотношении 9:1, встряхивают 1 мин. и оставляют для расслоения фаз на 20 - 30 мин. Нижний водный слой переносят в чистую делительную воронку на 250 мл, подкисляют до рН 2,5 с помощью 10%-ной HCl. Из подкисленного водного раствора бенсульфурон-метил экстрагируют 3 раза 30-ю мл хлористого метилена с добавлением 0,25 мл ледяной уксусной кислоты. Для полного разделения фаз используют центрифугирование. Объединенный хлористометиленовый экстракт переносят в колбу-концентратор через воронку с безводным сульфатом натрия и упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток растворяют в 5 мл дистиллированной воды с рН 10. Очистка на патроне Диапак С16. Кондиционирование патрона Диапак С16, проводят последовательно промывая его 10 мл метанола, 10 мл дистиллированной воды и 10 мл дистиллированной воды с рН 10. Количественно наносят образец на патрон и промывают его 10 мл дистиллированной воды. Бенсульфурон-метил с патрона элюируют 5 мл метанола. Элюат упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток перед анализом растворяют в 1 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют. ### 2.6. Условия хроматографирования Хроматограф "Knauer 2500" с УФ-детектором Колонка Диасфер-110-С18 размером 4,0 х 250 мм и зернением 5 мкм Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,05%-ный раствор H PO в соотношении 3 4 43:57
Скорость подвижной фазы - 1 мл/мин.
Время удерживания бенсульфурон-метила 14 - 16 мин. (зависит от температуры помещения, если колонка не термостатируется) Вводимый объем 50 мкл ### 2.7. Обработка результатов анализа Содержание бенсульфурон-метила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: Н х С х V 1 ст С = ------------- х Р, Н х m х 100 ст С - содержание бенсульфурон-метила в анализируемом объеме (мг/кг); Н - площадь пика бенсульфурон-метила анализируемого образца (отн. 1 ед.); Н - площадь пика бенсульфурон-метила стандартного раствора (отн. ст ед.); С - концентрация стандартного раствора бенсульфурон-метила (мкг/мл); ст
V - объем экстракта (мл);
m - масса анализируемого образца (г); Р - содержание бенсульфурон-метила в аналитическом стандарте (%). ## 3. Требования техники безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами. ## 4. Разработчики Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии.
143050, Московская обл., Одинцовский р-н, п/о Б. Вяземы.
Телефон: 592-92-63.
---