МУК 4.1.1941-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств бенсульфурон-метила в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
Актуально на 01.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.1941-05. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств бенсульфурон-метила в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии". МУК 4.1.1941-05. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1941-05
(утв. Роспотребнадзором 18.01.2005)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32). Документ введен в действие с 18 апреля 2005 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека
Г. Г. Онищенко
18 января 2005 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ БЕНСУЛЬФУРОН-МЕТИЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
18 апреля 2005 года
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
1. Вводная часть
Торговое наименование: Лондакс.
Фирма-производитель: Дюпон де Немур Интернэшнл С.А.
Действующее вещество: бенсульфурон-метил.
Структурная формула (не приводится).
альфа-(4,6-диметоксипиримидин-2-илкарбамоилсульфамоил)-о-толуидиновая кислота (номенклатура IUPAC).
Эмпирическая формула: C H № O S. 16 18 4 7
Физическое состояние: белое светло-желтое кристаллическое вещество без запаха.
Растворимость в воде (мг/л, 25 °С): 2,9 (рН 5); 12 (рН 6); 120 (рН 7); 1200 (рН 8).
Растворимость в органических растворителях (г/л, 20 °С): ацетон — 1,38; ацетонитрил — 5,38; гексан — 0,01; хлористый метилен — 1,72; этилацетат — 1,66.
Температура плавления: 185 — 188 °С.
Острая пероральная токсичность для крыс LD > 5000 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность для кролика LD > 2000 мг/кг; острая ингаляционная 50 токсичность для крыс LC > 7,5 мг/л воздуха. 50
Гигиенические нормативы: ПДК в воде — 0,04 мг/л, МДУ для зерна риса — 0,02 мг/кг, ПДК в почве — 0,02 мг/кг.
Область применения: бенсульфурон-метил — действующее вещество гербицида Лондакс 600 г/кг СТС, применяемого для борьбы с сорняками в посевах риса с нормой расхода 50 — 100 г/га.
2. Методика определения бенсульфурон-метила в воде, зерне и соломе риса и почве методом высокоэффективной жидкостной хроматографии
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Метод основан на определении бенсульфурон-метила на высокоэффективном жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектором. Бенсульфурон-метил экстрагируется: из почвы — водой с рН 10, из зерна и соломы риса — хлористым метиленом и из воды — хлороформом. При анализе почвы и растительной массы экстракт очищают сначала перераспределением между несмешивающимися растворителями, а затем на патроне Диапак С16. Очищенные и сконцентрированные упариванием экстракты анализируют методом ВЭЖХ с использованием обращенно-фазной колонки.
2.1.2 Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии других пестицидов, применяемых при возделывании риса.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и 2.
| Анализируемый объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение | Доверительный интервал среднего результата, +/-, % |
|---|---|---|---|---|---|
| Вода | 0,02 | 0,02 — 0,40 | 85,5 | 7,2 | 3,2 |
| Зерно риса | 0,01 | 0,01 — 0,10 | 82,1 | 6,9 | 3,0 |
| Солома риса | 0,04 | 0,04 — 0,40 | 82,8 | 5,5 | 2,4 |
| Почва | 0,01 | 0,01 — 0,20 | 78,6 | 8,0 | 3,5 |
| Объект | Добавлено, мг/кг | Обнаружено, мг/кг | Доверительный интервал, +/- (Р = 0,95, n = 5) | Полнота определения, % |
|---|---|---|---|---|
| Вода | 0,0200 0,0400 0,0800 0,4000 | 0,0156 0,0328 0,0734 0,3618 | 0,0001 0,0032 0,0142 0,0192 | 78,0 82,0 91,7 90,4 |
| Зерно риса | 0,0100 0,0200 0,0400 0,1000 | 0,0081 0,0173 0,0312 0,0830 | 0,0005 0,0006 0,0037 0,0106 | 81,2 86,3 78,0 83,0 |
| Солома риса | 0,0400 0,0800 0,1600 0,4000 | 0,0360 0,0654 0,1327 0,3080 | 0,0020 0,0015 0,0054 0,0084 | 90,0 81,2 82,9 77,0 |
| Почва | 0,0100 0,0200 0,0400 0,2000 | 0,0075 0,0160 0,0304 0,1670 | 0,0005 0,0023 0,0035 0,0184 | 74,8 80,0 76,0 83,5 |
2.2. Реактивы, материалы и оборудование
2.2.1 Реактивы и материалы
Бенсульфурон-метил 99% (Дюпон де Немур Интернэшнл С.А.)
Аммиак водный 25%-ный, чда, ГОСТ 3760-79
Ацетонитрил для хроматографии, ТУ-6-09-4326-76
Вода бидистиллированная деионизированная, ГОСТ 7602-72
Кислота уксусная ледяная, хч, ГОСТ 61-75
Метанол, хч, ГОСТ 6995-77
Орто-фосфорная кислота, хч, имп., фирмы «Нева реактив»
Сульфат натрия безводный, чда, ГОСТ 4166-76
Толуол, хч, ГОСТ 5789-78
Фильтры бумажные «синяя лента», ТУ 6-09-1678-77
Хлористый метилен, ТУ 6-09-2662-77
2.2.2 Приборы, аппаратура и посуда
Аппарат для встряхивания, ТУ 64-1-1081-73, или аналогичный
Вакуумный роторный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный
Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные
Весы лабораторные технические ВЛТК-500 или аналогичные
Воронки конические стеклянные диаметром 50 — 60 мм, ГОСТ 25336-82Е
Делительные воронки на 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82Е
Колбы конические емкостью 250 — 500 мл, ГОСТ 10394-72
Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 23932-79
Колбы мерные на 100 мл, ГОСТ 1770-74
Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм и внутренним диаметром 4 мм, зернение 5 мкм, Диасфер-110 С18, ЗАО «БиоХиммак СТ»
Концентраторы грушевидные на 50 и 100 мл, КТУ-100-14/19, ГОСТ 10394-75
Концентрирующие патроны ДИАПАК С16, ЗАО «БиоХиммак СТ», ТУ 4215-002-05451931-94
Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная
Микрошприц на 50 мкл для жидкостного хроматографа
Пипетки мерные на 1,0; 2,0 и 5,0 мл, ГОСТ 20292
Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный
Хроматограф жидкостной высокоэффективный Кратос с ультрафиолетовым детектором Кратос 2500 с изменяемой длиной волны и чувствительностью не ниже 0,005 единиц адсорбции на шкалу или другой аналогичный
Центрифуга 10000 об./мин. с центрифужными стаканами на 200 мл
Цилиндры мерные на 25, 50, 100 мл, 250 мл и 500 мл, ГОСТ 1770-74Е
2.3. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов», утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР от 21.08.79 № 2051-79. Перед анализом зерно размалывают на мельнице, солому режут на части по 0,5 см. Образцы почвы и воды хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С.
2.4. Подготовка к определению
2.4.1 Подготовка растворителей
Очистку растворителей осуществляют общепринятыми методами (А. Гордон, Р. Форд. Спутник химика, М., «Мир», 1976).
2.4.2 Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор 100 мкг/мл бенсульфурон-метила готовят в 100 мл мерной колбе, растворяя 10 мг действующего вещества в ацетонитриле. Из основного стандартного раствора бенсульфурон-метила методом последовательного разбавления готовят калибровочные растворы вещества в подвижной фазе с концентрациями: 0,1; 0,2; 0,5 и 1 мкг/мл. Рабочие стандартные растворы готовят в день анализа, основной стандартный раствор можно хранить при -18 °С в течение 3 месяцев.
2.4.3 Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика снимают хроматограммы стандартных растворов, вводя в инжектор хроматографа последовательно 3 раза по 50 мкл каждого стандартного раствора. Измеряют площади пиков, рассчитывают их средние значения для каждой концентрации и строят график зависимости площади пика от концентрации бенсульфурон-метила.
2.4.4 Проверка хроматографического поведения бенсульфурон-метила на патроне Диапак С16
Все процедуры с патронами проводят с использованием вакуума (скорость потока растворов через патрон не должна превышать 5 мл/мин.). Патрон устанавливают на аллонж с отводом для вакуума, сверху в патрон вставляют шприц с разъемом типа Люер объемом не менее 10 мл. Нельзя допускать высыхания поверхности патрона в процессе его кондиционирования и при очистке на нем экстрактов!
При анализе зерна и соломы риса. Предварительно патрон Диапак С16 кондиционируют, пропуская через него 10 мл ацетонитрила и 10 мл 0,15 М раствора гидроксида аммония. На кондиционированный патрон наносят 0,1 мкг бенсульфурон-метила в 10 мл 0,15 М раствора гидроксида аммония. Затем бенсульфурон-метил элюируют последовательно десятью 1-мл порциями ацетонитрила. Каждую фракцию упаривают отдельно, после чего сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы и аликвоту 50 мкл вводят в хроматограф. Рассчитывают содержание бенсульфурон-метила в каждой фракции и определяют объем элюата, необходимый для наиболее полного элюирования вещества с патрона. Для данной методики он равен 5 мл ацетонитрила.
При анализе почвы. Кондиционирование патрона Диапак С16 проводят, последовательно промывая его 10 мл метанола, 10 мл дистиллированной воды и 10 мл дистиллированной воды с рН 10. На кондиционированный патрон наносят 0,1 мкг бенсульфурон-метила в 10 мл дистиллированной воды с рН 10. Промывают его 10 мл дистиллированной воды. Затем бенсульфурон-метил последовательно элюируют десятью 1-мл порциями метанола. Каждую фракцию упаривают отдельно, после чего сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы и аликвоту 50 мкл вводят в хроматограф. Рассчитывают содержание бенсульфурон-метила в каждой фракции и определяют объем элюента, необходимый для наиболее полного элюирования вещества с патрона. Для данной методики он равен 5 мл метанола.
2.4.5 Приготовление подвижной фазы
Готовят 0,05%-ный раствор орто-фосфорной кислоты. Для приготовления подвижной фазы 430 мл ацетонитрила смешивают с 570 мл 0,05%-ного раствора орто-фосфорной кислоты и дегазируют в ультразвуковой бане в течение 1 мин.
2.5. Описание методики
2.5.1 Вода
Пробу воды объемом 100 мл доводят до рН 4,0 добавлением 0,1 М HCl, помещают в делительную воронку на 250 мл, добавляют 50 мл хлороформа и встряхивают в течение 2 мин. После полного разделения фаз нижний слой хлороформа сливают в концентратор на 250 мл, пропуская его через воронку с безводным сульфатом натрия. Процедуру повторяют. К объединенному хлороформенному экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты и упаривают его на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют.
2.5.2 Зерно риса
Экстракция. В коническую плоскодонную колбу на 250 мл помещают 10 г размолотого зерна риса, приливают 50 мл хлористого метилена и встряхивают в течение 30 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр. Процедуру экстракции повторяют. Экстракт объединяют и упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С.
Первичная очистка. Сухой остаток растворяют в 30 мл ацетонитрила, переносят в делительную воронку на 100 мл и добавляют 30 мл н-гексана. Воронку встряхивают 2 мин. и гексановую фазу отбрасывают. Повторяют эту процедуру. Объединенный ацетонитриловый экстракт упаривают досуха при 35 °С.
Очистка на Диапак С16. Сухой остаток растворяют в 10 мл 0,15 М гидроксида аммония и пропускают по каплям через кондиционированный патрон Диапак С16. Испарительную колбу обмывают 5 мл 0,15 М гидроксида аммония и этот раствор также пропускают через патрон. Дают раствору полностью стечь и бенсульфурон-метил снимают с патрона 5 мл ацетонитрила. Элюат упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток перед анализом растворяют в 1 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют.
2.5.3 Солома риса
Экстракция. В коническую плоскодонную колбу на 250 мл помещают 5 г мелко нарезанной соломы риса, приливают 50 мл 0,5%-ной уксусной кислоты в хлористом метилене и встряхивают в течение 30 мин. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Процедуру экстракции повторяют.
Первичная очистка. Экстракт объединяют и упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при температуре не более 35 °С. Остаток растворяют в 30 мл ацетонитрила, переносят в делительную воронку на 100 мл и добавляют 30 мл н-гексана. Воронку встряхивают 2 мин. и гексановую фазу отбрасывают. Эту процедуру повторяют. Ацетонитриловый экстракт упаривают досуха при температуре не более 35 °С. Сухой остаток растворяют в 100 мл 0,15 М гидроксида аммония, переносят в делительную воронку на 250 мл и чистят 10 мл хлористого метилена, который затем отбрасывают. Процедуру повторяют. Водную фазу подкисляют до рН 4,0 разбавленной HCl, добавляют 0,5 мл ледяной уксусной кислоты и экстрагируют бенсульфурон-метил двумя 30 мл порциями хлористого метилена по две минуты. Объединенный экстракт упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С.
Очистка на Диапак С16. Кондиционируют патрон 10 мл ацетонитрила и 10 мл 0,15 М гидроксида аммония. Сухой остаток растворяют в 10 мл 0,15 М гидроксида аммония и пропускают по каплям через Диапак С16. Испарительную колбу обмывают 5 мл 0,15 М гидроксида аммония и этот раствор также пропускают через патрон. Дают раствору полностью стечь и бенсульфурон-метил снимают с патрона 5 мл ацетонитрила. Элюат упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе и перед анализом на хроматографе растворяют в 1 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют.
2.5.4 Почва
Экстракция. 20 г почвы помещают в 500 мл коническую плоскодонную колбу, приливают 250 мл дистиллированной воды с рН 10 (нужный рН устанавливается с помощью гидроксида аммония) и встряхивают на механическом встряхивателе в течение 10 мин. Содержимое переносят в центрифужный стакан и центрифугируют в течение 15 мин. со скоростью 7000 об./мин. Раствор декантируют в цилиндр на 250 мл через воронку со стекловатой.
Первичная очистка. Аликвоту 125 мл переносят в делительную воронку на 250 мл, добавляют 30 мл смеси толуол — хлористый метилен в соотношении 9:1, встряхивают 1 мин. и оставляют для расслоения фаз на 20 — 30 мин. Нижний водный слой переносят в чистую делительную воронку на 250 мл, подкисляют до рН 2,5 с помощью 10%-ной HCl. Из подкисленного водного раствора бенсульфурон-метил экстрагируют 3 раза 30-ю мл хлористого метилена с добавлением 0,25 мл ледяной уксусной кислоты. Для полного разделения фаз используют центрифугирование. Объединенный хлористометиленовый экстракт переносят в колбу-концентратор через воронку с безводным сульфатом натрия и упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток растворяют в 5 мл дистиллированной воды с рН 10.
Очистка на патроне Диапак С16. Кондиционирование патрона Диапак С16, проводят последовательно промывая его 10 мл метанола, 10 мл дистиллированной воды и 10 мл дистиллированной воды с рН 10. Количественно наносят образец на патрон и промывают его 10 мл дистиллированной воды. Бенсульфурон-метил с патрона элюируют 5 мл метанола. Элюат упаривают досуха на вакуумном роторном испарителе при 35 °С. Сухой остаток перед анализом растворяют в 1 мл подвижной фазы и 50 мкл аликвоту хроматографируют.
2.6. Условия хроматографирования
Хроматограф «Knauer 2500» с УФ-детектором
Колонка Диасфер-110-С18 размером 4,0 х 250 мм и зернением 5 мкм
Подвижная фаза: ацетонитрил - 0,05%-ный раствор H PO в соотношении 3 4
43:57
Время удерживания бенсульфурон-метила 14 — 16 мин. (зависит от температуры помещения, если колонка не термостатируется)
2.7. Обработка результатов анализа
Содержание бенсульфурон-метила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
Н х С х V
1 ст
С = ------------- х Р, Н х m х 100 ст
С - содержание бенсульфурон-метила в анализируемом объеме (мг/кг);
Н - площадь пика бенсульфурон-метила анализируемого образца (отн.
1
ед.); Н — площадь пика бенсульфурон-метила стандартного раствора (отн. ст ед.); С — концентрация стандартного раствора бенсульфурон-метила (мкг/мл); ст
V - объем экстракта (мл);
m - масса анализируемого образца (г);
Р - содержание бенсульфурон-метила в аналитическом стандарте (%).
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
4. Разработчики
Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии.