МУК 4.1.1918-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение остаточных количеств Пропетамфоса в молоке и мясе методом газожидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Роспотребнадзором 03.08.2004)

Утверждаю Руководитель Федеральной

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ПРОПЕТАМФОСА В МОЛОКЕ И МЯСЕ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.1918-04

Дата введения: с момента утверждения

1. Разработаны Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева, Учебно-научным центром «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» (авторы В.А. Калинин, Т.С. Калинина, Н.В. Устименко).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко.

3. Введены впервые.

1. Вводная часть

Эмпирическая формула: C_{10}H_{20}NO_{4}PS

Молекулярная масса: 281,3

Физическое состояние технического продукта — желтоватая маслянистая жидкость.

Давление насыщенного пара 1,9 мПа при 20 °C.

Коэффициент перераспределения октанол/вода: logK_{ow} = 3,82 .

Растворимость: в воде — 110 мг/л; хорошо смешивается с ацетоном, этанолом, метанолом, гексаном, диэтиловым эфиром, диметилсульфоксидом, хлороформом и ксиленом.

Стабилен при хранении и на свету. Гидролитическая стабильность: DT_{50} 11 дней при pH 3; 1 год при pH 6 и 41 день при pH 9. В водной среде не разлагается в течение 70 ч.

pKa 13.67.

В почве сохраняется в течение 2 — 3 месяцев.

Краткая токсикологическая характеристика: Пропетамфос относится к веществам, опасным по острой пероральной ( \text{ЛД}_{50} крысы — 59,5 — 119,0 мг/кг) и ингаляционной токсичности ( \text{ЛД}_{50} крысы — 4 ч — 690 — 1500 мг/м3), но умеренно опасным по дермальной ( \text{ЛД}_{50} крысы — 2260 — 2850 мг/кг).

В России гигиенические нормативы не установлены.

Область применения препарата. Пропетамфос — инсектицид контактного и кишечного действия из группы органических соединений фосфора с длительным защитным эффектом. Он эффективно подавляет развитие синантропных насекомых (тараканы, мухи, моли, муравьи, комары) и эктопаразитов животных (личинки оводов, клещи и др.). Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Блотик для применения в качестве ветеринарного препарата.

2. Методика определения Пропетамфоса в молоке и мясе методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Методика основана на определении Пропетамфоса методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора на фосфор после экстракции из анализируемой пробы ацетоном, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися растворителями и/или на колонке с силикагелем.

Идентификация проводится по времени удерживания. Количественное определение — методом абсолютной калибровки.

2.1.2 Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1.

Таблица 1

Метрологические параметры, p = 0,95, n = 20
Анализируемый объект	Предел обнаружения, мг/кг (мг/л)	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение, S	Доверительный интервал, среднего результата, %, +/-
Молоко	0,01	0,01 — 0,50	85,3	1,322	85,30 +/- 0,62
Мясо	0,02	0,02 — 0,50	78,6	1,164	78,60 +/- 0,54

2.1.3 Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в ветеринарии.

2.2. Реактивы, материалы, приборы, оборудование

2.2.1 Реактивы, растворы и материалы

Пропетамфос (фирма Каллиопе С.А.С.)
Азот, ос.ч.	ГОСТ 9203-74
Ацетон, ч.д.а.	ГОСТ 6006-78
Ацетонитрил, ч.д.а.	ТУ 6-09-3534-87
Водород газообразный из баллона	ГОСТ 3022-80
н-Гексан, ч.д.а.	ТУ 6-09-3375-78
Насадки для набивных хроматографических колонок:
Инертон-супер с 3% OV-17 (0,16 — 0,20 мм)
Инертон-супер с 5% XE-60 (0,12 — 0,16 мм)
Натрий сернокислый, безводный, х.ч.	ГОСТ 4166-76
Натрий хлористый, х.ч.	ГОСТ 4233-77
Силикагель-60, для колончатой хроматографии
Толуол, ч.д.а.	ГОСТ 5789-78
Целит 545
Этилацетат, ч.д.а.	ГОСТ 22300-76
Эфир диэтиловый, ч.д.а. ГОСТ 6265-74
Эфир петролейный	ТУ МХП-1867-48
	2.2.2. Посуда и оборудование

Воронки делительные объемом 250 мл	ГОСТ 25336-82Е
Воронки для фильтрования стеклянные	ГОСТ 8613-75
Встряхиватель механический	ТУ 64-1-1081-73
Испаритель ротационный вакуумный ИР-1М	ТУ 25-11-917-74
Колбы мерные вместимостью 100 мл	ГОСТ 1770-74
Колонки хроматографические стеклянные, длиной 2 м, внутренним диаметром 2 — 3 мм
Концентраторы грушевидные (конические) НШ29 КГУ-100-14/19, ТС	ГОСТ 10394-72
Микрошприц МШ-1А ГОСТ 20292-74Е
Палочки стеклянные
Пипетки мерные на 0,1; 1,0; 5,0; 10,0 мл	ГОСТ 20292-74
Пипетки мерные вместимостью 0,1, 1,0 и 5,0 мл	ГОСТ 20292-74
Стаканы стеклянные емкостью 500 мл	ГОСТ 25336-82Е
Фильтры бумажные «красная лента»	ТУ 6-09-016-78-86
Хроматограф газовый «Цвет-600» с термоионным детектором с пределом детектирования по фосфору (в метафосе) не ниже 8 \times 10^{3}\text{А}/\text{мг}/\text{с} или аналогичный
	2.3. Отбор проб
	Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.1979), утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР. Пробы воды и масла хранят в стеклянной герметично закрытой таре в холодильнике при температуре 4 °C; пробы яблок, зеленой массы рапса, а также клубней картофеля в полиэтиленовой таре — в морозильнике при температуре -18 °C; пробы зерна, семян рапса в бумажных или тканевых мешочках — в сухом, хорошо проветриваемом шкафу, недоступном для грызунов.

2.4. Подготовка к определению

2.4.1 Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор Пропетамфоса с концентрацией 100 мкг/мл готовят растворением 0,0010 г вещества в мерной колбе на 100 мл в этилацетате. Раствор хранится при комнатной температуре в течение 10 дней.

Рабочие стандартные растворы Пропетамфоса с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,50 мкг/мл готовят из раствора, содержащего 100 мкг/мл вещества, соответствующим последовательным разбавлением этилацетатом. Растворы хранятся при комнатной температуре в течение 10 дней.

2.4.2 Построение градуировочного графика

В испаритель хроматографа вводят по 1 мкл рабочего стандартного раствора Пропетамфоса с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,50 мкг/мл. Строят градуировочный график зависимости высоты хроматографического пика (мм) от содержания Пропетамфоса в хроматографическом объеме (нг).

2.4.3 Приготовление колонки

2.5. Проведение определения

2.5.1. Молоко. Навеску молока 50 г интенсивно перемешивают в стакане на гомогенизаторе или высокоскоростной мешалке с 200 мл ацетона в течение 3 мин или встряхивают в течение 30 мин. Экстракт переносят в центрифужный стакан и центрифугируют в течение 5 мин при 3000 об/мин. Супернатант переносят в концентратор. Осадок в стакане экстрагируют путем встряхивания с 50 мл ацетона. Экстракты объединяют в концентраторе и упаривают ацетон. Оставшуюся жидкость переносят в делительную воронку и экстрагируют Пропетамфос гексаном три раза по 20 мл. Гексановую фракцию пропускают через безводный сернокислый натрий и упаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °C. Сухой остаток растворяют в 5 — 10 мл этилацетата и аликвоту 3 — 5 мкл хроматографируют.

2.5.2. Мясо. Навеску измельченного на мясорубке мяса 20 — 100 г помещают в стакан гомогенизатора, добавляют 20 г целита 545 и 200 мл ацетона и гомогенизируют при максимальной скорости в течение 3 мин. Переносят экстракт на воронку Бюхнера с бумажным фильтром и фильтруют под вакуумом. Остаток на фильтре возвращают в стакан гомогенизатора, добавляют 150 мл ацетона и гомогенизируют еще 2 мин. Встряхивают дополнительно субстрат на механическом встряхивателе 30 мин и фильтруют экстракт через воронку Бюхнера. Экстракты объединяют и упаривают ацетон на ротационном испарителе при t° = 40 °C.

Остаток в концентраторе переносят 100 мл петролейного эфира в делительную воронку объемом 250 мл. Обмывают концентратор двумя порциями по 25 мл ацетонитрила, содержащего 5% воды. Смыв переносят в делительную воронку. Встряхивают воронку 30 мин, дают жидкостям расслоиться и нижнюю фракцию сливают в концентратор. Повторяют экстракцию ацетонитрилом еще 3 раза (50 + 50 + 50 мл). Ацетонитрильные экстракты объединяют и упаривают досуха на ротационном испарителе при t° = 40 °C.

Растворяют остаток в 10 мл н-гексана и переносят на заранее подготовленную колонку с силикагелем. Обмывают концентратор дважды 15 мл н-гексана, перенося гексановый экстракт на колонку. Гексановые экстракты, прошедшие через колонку, отбрасывают.

Элюируют Пропетамфос из колонки 80 мл смеси толуола с диэтиловым эфиром (75:25). Элюат из колонки собирают и упаривают досуха при t° = 40 °C. Остаток растворяют в 10 мл толуола или этилацетата и хроматографируют, вводя в хроматограф 2 — 5 мкл раствора.

2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов

2.6.1 Условия хроматографирования

Газовый хроматограф «Цвет-550» или «Цвет-600» с термоионным детектором.

Неподвижная фаза: Инертон-супер с 3% OV-17 (0,16 — 0,20 мм).

Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 3 мм.

Температура термостата колонки — 200 °C;

испарителя — 240 °C;

детектора — 340 °C.

Скорость газа-носителя (азота) — 50 мл/мин.

Скорость водорода — 17 мл/мин.

Скорость воздуха — 200 мл/мин.

Показания аттенюатора — 16 \times 10^{9}\text{Ом} .

Скорость движения диаграммной ленты — 240 мм/ч.

Хроматографируемый объем — 1 - 5 мкл.

Абсолютное время удерживания — 2 мин 27 с.

Линейный диапазон детектирования — 0,05 — 0,5 нг.

Пробы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют этилацетатом или толуолом.

Альтернативная хроматографическая фаза: Инертон-супер с 5% XE-60 (0,16 — 0,20 мм).

Колонка стеклянная длиной 2 м, внутренним диаметром 2 мм.

Температура термостата колонки — 180 °C.

испарителя — 250 °C;

детектора или

переходной камеры — 360 °C.

Скорость газа-носителя (азота) — 35 мл/мин.

Скорость водорода — 11 мл/мин.

Скорость воздуха — 140 мл/мин.

Абсолютное время удерживания — 3 мин 45 с.

Линейный диапазон детектирования — 0,05 — 0,5 нг.

Пробы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.6.2 Обработка результатов анализа

Содержание Пропетамфоса в пробах молока и мяса рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

где:

X — содержание Пропетамфоса в пробе, мг/кг;

H_{1} — высота пика в образце, мм;

H_{0} — высота пика Пропетамфоса в стандарте, мм;

A — концентрация стандартного раствора, мкг/мл;

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

---