--- title: "\"МУК 4.1.1907-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тебуконазола в зерне и соломе риса, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии\"" number: "МУК 4.1.1907-04" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1907-04" --- ## "МУК 4.1.1907-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тебуконазола в зерне и соломе риса, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии" # "МУК 4.1.1907-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств тебуконазола в зерне и соломе риса, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии" (утв. Минздравом России 01.01.2004) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
1 января 2004 года
#### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТЕБУКОНАЗОЛА** **В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА, ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА** **МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МУК 4.1.1907-04** 1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко. 4. Введены впервые. ## 1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ Фирма-производитель: Байер КропСайенс АГ (Германия). Торговое название: Фалькон. Действующее вещество: тебуконазол. (RS)-1-п-хлорфенил-4,4-диметил-3-(1H-1,2,4-триазол-1-илметил)пентан-3-ол (ИЮПАК). (+/-)-альфа-[2-(4-хлорфенил)этил]-альфа-(1,1-диметилэтил)-1H-1,2,4-триазол-1-этанол (С.А.). Структурная формула (не приводится). Эмпирическая формула: C H ClN O. 16 22 3 Молекулярная масса: 307,8. Существует в виде смеси рацематов. Бесцветное кристаллическое вещество. Температура плавления: 105 °С. -3 Давление паров: 1,7 х 10 мПа при 20 °С. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 3,7. ow Растворимость (г/л) при 20 °С: дихлорметан - более 200, изопропанол, толуол - 50 - 100, гексан - менее 0,1, вода - 0,036. Вещество устойчиво к гидролизу при pH 5 - 9 и фотолизу. Тебуконазол медленно разрушается в почве и слабо передвигается по почвенному профилю. Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс - 3000 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность (LD ) для крыс - более 5000 мг/кг; острая 50 ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - 5,1 мг/л воздуха. Тебуконазол 50 вызывает слабое раздражение слизистой оболочки глаз у кроликов. LC для 50 рыб - 5,7 мг/л (96 час.). Тебуконазол нетоксичен для птиц, пчел, дождевых червей и водорослей. Гигиенические нормативы для тебуконазола в России: ОДК в почве - 0,4 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,025 мг/куб. дм; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,4 мг/куб. м; МДУ для зерна хлебных злаков - 0,2 мг/кг, ВМДУ для винограда - 0,1 мг/кг. Область применения препарата: Тебуконазол - системный фунгицид широкого спектра действия. Эффективен против возбудителей мучнистой росы, ржавчины, септориоза, фузариоза, головни на зерновых злаках, серой гнили винограда, антракноза льна. Используется как для обработки вегетирующих растений, так и для протравливания семян. Иногда применяется в комбинациях с другими фунгицидами. Тебуконазол входит в состав комбинированного фунгицида Фалькон, КЭ, содержащего в 1 л препарата 250 г спироксамина, 167 г тебуконазола и 43 г триадименола. В настоящее время этот препарат проходит регистрационные испытания в России в качестве средства борьбы с пирикуляриозом риса и оидиумом винограда. ## 2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТЕБУКОНАЗОЛА В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА, ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Методика основана на газохроматографическом определении тебуконазола с ТИД на неподвижной фазе OV-17 после экстракции его из ягод ацетоном, из зерна и соломы водным ацетоном и из виноградного сока дихлорметаном, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки. ##### 2.1.2 Избирательность метода В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании риса и винограда. ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода Таблица **МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА**
АнализируемыйМетрологические параметры, P = 0,95, n = 20
объектПредел обнаружения, мг/кгДиапазон определяемых концентраций, мг/кгСреднее значение определения, %Стандартное отклонение S, %Относительное отклонение, %Доверительный интервал среднего, %
Зерно0,050,05 - 0,584,35,82,6+/- 5,4
Солома0,10,1 - 1,084,63,91,7+/- 3,6
Ягоды0,050,05 - 0,586,04,21,9+/- 3,9
Сок0,050,05 - 0,585,75,12,3+/- 4,8
### 2.2. Реактивы, растворы, материалы Тебуконазол с содержанием д.в. 97,4% (Байер, Германия). Ацетон, ГОСТ 2603-79. Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78. Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72. Калия перманганат, ГОСТ 20490-75. Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77. Калий углекислый, х.ч., [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76). Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77. Метилен хлористый, ГОСТ 19433-88. Натрий двууглекислый, ГОСТ 83-79. Натрия гидроксид, х.ч., ГОСТ 4328-77. Натрия сульфат безводный, х.ч., [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76). Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77. Толуол, [ГОСТ 5789-78](https://bukva.ai/docs/gost-5789-78). Этилацетат, [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76). Элюент N 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан - этилацетат (2:8, по объему). Азот газообразный, о.с.ч., ГОСТ 9293-74. Водород, получаемый из генератора водорода, ГОСТ 3023-80. Воздух из баллона, ГОСТ 9010-80. Силикагель (0,063 - 0,2 мм) для адсорбционной хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности. Стекловата. Фильтры бумажные синяя лента, ТУ 6-09-1678. ### 2.3. Приборы, аппаратура, посуда Хроматограф газовый "Кристалл 2000М" с ТИД на азотсодержащие вещества с -14 пределом детектирования не выше 2,82 х 10 г/с или аналогичный. Колонка хроматографическая набивная стеклянная, 2000 х 3 мм, неподвижная фаза - 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм). Колонка капиллярная ZB-1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex, США, или аналогичная. Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф по ТУ 64-1-2850. Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74. Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75. Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73. Гомогенизатор, МРТУ 42-1505-63. Колонка для адсорбционной хроматографии, 25 х 1,8 см. Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная. Ротационный испаритель, тип ИР-1М, ТУ 25-11. Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-73. Воронки делительные вместимостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82. Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75. Колба Бунзена, ГОСТ 5614-75. Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100 и 250 мл, ГОСТ 9737-70. Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82. Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Колбы грушевидные вместимостью 100 и 250 мл, ГОСТ 25336-82. Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, [ГОСТ 20292-74Е](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74). Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75. Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Зерно и солому риса подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Виноград хранят в стеклянной посуде в холодильнике при температуре не выше +4 °С не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С. Перед анализом зерно и солому размалывают на лабораторной мельнице, а ягоды измельчают. ### 2.5. Подготовка к определению ##### 2.5.1 Подготовка и кондиционирование колонки Готовую насадку (3% OV-17 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270 °С в течение 8 - 10 часов. Капиллярную колонку с фазой ZB-1 устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 280 °С в течение 8 - 10 часов. ##### 2.5.2 Подготовка и очистка реактивов и растворителей Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ). 4 2 3 Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют. Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 3 часов. ##### 2.5.3 Приготовление стандартных растворов Основной стандартный раствор тебуконазола с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,0103 г препарата, содержащего 97,4% д.в., в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца. Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора тебуконазола соответствующим последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более недели. ##### 2.5.4 Построение калибровочного графика Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора тебуконазола с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ х с от концентрации тебуконазола в растворе в мкг/мл. ##### 2.5.5 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 3 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 25 мл смеси гексан - этилацетат (2:8, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова для работы. ##### 2.5.6 Проверка хроматографического поведения тебуконазола на колонке с силикагелем В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора тебуконазола с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл гексана и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл смеси гексан - этилацетат (1:1, по объему), затем 60 мл элюента N 1 (гексан - этилацетат, 2:8) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл толуола и анализируют на содержание тебуконазола по [п. 2.7](#p100123). Фракции, содержащие тебуконазол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл толуола и вновь анализируют по [п. 2.7](#p100123). Рассчитывают содержание тебуконазола в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента. Примечание: Профиль вымывания тебуконазола может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей. ### 2.6. Описание определения ##### 2.6.1 Экстракция тебуконазола 2.6.1.1. Зерно, солома. К навеске размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) добавляют 100 мл 70%-ного водного ацетона и суспензию перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл указанного выше водного ацетона. Из объединенного экстракта отбирают половину объема (около 70 мл) раствора, эквивалентного 5 г зерна или 2,5 г соломы. Дальнейшую очистку проводят по [п. п. 2.6.2](#p100119) и [2.6.3](#p100121). 2.6.1.2. Ягоды. К навеске (20 г) измельченного материала добавляют 100 мл ацетона и гомогенизируют 3 минуты при 10000 об./мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл ацетона. Из объединенного ацетонового экстракта отбирают половину объема (около 75 мл) раствора, эквивалентного 10 г ягод. Дальнейшую очистку проводят по [п. п. 2.6.2](#p100119) и [2.6.3](#p100121). 2.6.1.3. Сок. К 10 мл свежевыжатого сока добавляют 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия и содержимое переносят в делительную воронку емкостью 100 мл. В воронку добавляют 30 мл хлористого метилена и смесь встряхивают в течение 1 минуты. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную фазу обрабатывают хлористым метиленом еще два раза (30 + 20 мл). Объединенный дихлорметановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 5 мл толуола и анализируют на содержание тебуконазола по [п. 2.7](#p100123). ##### 2.6.2 Очистка экстракта Отобранные аликвоты растительного экстракта (из [п. п. 2.6.1.1](#p100116) и [2.6.1.2](#p100117)) упаривают до водной фазы (объем 5 - 15 мл) на роторном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия, 30 мл хлористого метилена и смесь встряхивают в течение 1 минуты. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную фазу обрабатывают хлористым метиленом еще два раза (30 + 20 мл). Объединенный дихлорметановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. ##### 2.6.3 Очистка на колонке с силикагелем Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по [п. 2.6.2](#p100119) экстрактов растительного материала, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан - этилацетат (8:2) в подготовленную хроматографическую колонку [(п. 2.5.5)](#p100108). Колонку промывают 40 мл смеси гексан - этилацетат (1:1, по объему), которые отбрасывают. Тебуконазол элюируют 50 мл элюента N 1 (гексан - этилацетат, 2:8) и элюат собирают в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстрактов зерна и соломы растворяют в 2,5 мл экстракта ягод, в 5 мл толуола и анализируют на содержание тебуконазола по п. 2.7. ### 2.7. Условия хроматографирования ##### 2.7.1 Метод ГЖХ с насадочными колонками Хроматограф газовый "Кристалл 2000М" с термоионным детектором на -14 азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше 2,82 х 10 г/с. Колонка стеклянная спиральная 1000 х 3 мм; неподвижная фаза - 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,125 - 0,150 мм). Температура детектора 330 °С, инжектора 270 °С, термостата колонки 245 °С. Скорость потока газа-носителя (азота) - 30 мл/мин., водорода - 10,8 мл/мин., воздуха - 200 мл/мин. Объем вводимой пробы - 2 мкл. Время удерживания тебуконазола: 3 мин. 20 сек. Линейный диапазон детектирования: 0,2 - 2 нг. Альтернативная неподвижная фаза: 3% OV-61 на Хромосорбе W/HP (0,16 - 0,20 мм); колонка стеклянная 1000 х 3 мм; температура колонки - 230 °С, испарителя - 270 °С, детектора - 330 °С. Время удерживания тебуконазола: 2 мин. 34 сек. Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика тебуконазола. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют толуолом. ##### 2.7.2 Метод ГЖХ с капиллярными колонками Хроматограф газовый "Кристалл 2000М" с термоионным детектором. Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм (SE-30). Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 160 °С, выдержка 1 минуту; нагрев колонки по 25°/мин. до температуры 240 °С, выдержка 0 минут; нагрев колонки по 4°/мин. до температуры 265 °С, выдержка 5 минут; нагрев колонки по 25°/мин. до температуры 280 °С, выдержка 5 минут. Температура термостата испарителя - 270 °С, детектора - 330 °С. Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 22,7 мл/мин.; газ для поддува в детектор - азот, расход - 20 мл/мин. Расход водорода - 11,8 мл/мин., воздуха - 200 мл/мин. Деление потока: 1:2. Абсолютное время удерживания тебуконазола: 10 мин. 36 сек. Объем вводимой пробы - 2 мкл. Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 1,5 нг. Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика тебуконазола. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют толуолом. ### 2.8. Обработка результатов анализа Содержание тебуконазола рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: H х A х V 1 X = ----------, H х m 0 где: X - содержание тебуконазола в пробе, мг/кг; H - площадь пика образца, мВ х с; 1 H - площадь пика стандарта, мВ х с; 0 A - концентрация стандартного раствора тебуконазола, мкг/мл; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m - масса анализируемой части образца, г (для зерна - 5 г, для соломы - 2,5 г, для ягод - 10 г, для сока - 10 мл). ## 3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами. ## 4. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95). ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа. ## 5. РАЗРАБОТЧИКИ ВНИИ фитопатологии. ---