--- title: "\"МУК 4.1.1906-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств спироксамина в зерне и соломе риса методом газожидкостной хроматографии\"" number: "МУК 4.1.1906-04" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1906-04" --- ## "МУК 4.1.1906-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств спироксамина в зерне и соломе риса методом газожидкостной хроматографии" # "МУК 4.1.1906-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств спироксамина в зерне и соломе риса методом газожидкостной хроматографии" (утв. Минздравом России 01.01.2004) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
1 января 2004 года
#### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИРОКСАМИНА** **В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МУК 4.1.1906-04** 1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко. 4. Введены впервые. ## 1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ Фирма-производитель: Байер КропСайенс АГ (Германия). Торговое название: Фалькон. Действующее вещество: спироксамин. 8-третбутил-1,4-диоксаспиро[4,5]декан-2-илметил(этил)(пропил)амин (ИЮПАК). 8-(1,1-диметилэтил)-N-этил-N-пропил-1,4-диоксаспиро[4,5]декан-2-метанамин (С.А.). Структурная формула (не приводится). Эмпирическая формула: C H NO . 18 35 2 Молекулярная масса: 297,5. Существует в виде смеси диастереоизомеров 1 и 2 в соотношении 49 - 56%; 51 - 44%. Ниже приведены (если не указано особо) свойства для смеси диастереоизомеров. Вязкая жидкость бледно-желтого цвета без запаха. Температура кипения: 120 °С (с разложением). Давление паров: 9,7 mPa (20 °С) для изомера 1,17 mPa (25 °С) для изомера 2. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 2,79 для изомера ow 1; K log P = 2,92 для изомера 2. ow Хорошо растворим в органических растворителях: растворимость при 20 °С в ацетоне, гексане, дихлорметане, пропаноле, ацетонитриле, толуоле более 200 г/л. Растворимость (г/л) в воде при 20 °С: при pH 3 - более 200; при pH 7 - 0,47 (изомер 1) и 0,34 (изомер 2); при pH 9 - 0,014 (изомер 1) и 0,01 (изомер 2). Вещество устойчиво к гидролизу при pH 5 - 9 и относительно стабильно на свету (DT = 50,5 дня). 50 Спироксамин достаточно быстро разрушается в почве (DT = 35 - 64 дня). 50 Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс - 560 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность ( LD ) для крыс - более 1600 мг/кг; острая 50 ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - 2772 мг/куб. м воздуха. 50 Спироксамин вызывает раздражение слизистой оболочки кожи у кроликов. LC 50 для рыб - 18,5 мг/л (96 час.). Спироксамин практически нетоксичен для птиц, пчел, дождевых червей и водорослей. Гигиенические нормативы для спироксамина в России: ОДК в почве - 0,4 мг/кг; ПДК в воде водоемов - 0,0025 мг/куб. дм; ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,3 мг/куб. м; МДУ для зерна хлебных злаков - 0,2 мг/кг, ВМДУ для винограда - 0,1 мг/кг. Область применения препарата: Спироксамин - системный фунгицид, обладающий защитным, лечебным и искореняющим действием. Эффективен против возбудителей мучнистой росы и ржавчины на зерновых злаках и оидиума на винограде. Чаще всего применяется в комбинациях с другими фунгицидами, особенно триазолами. Спироксамин входит в состав комбинированного фунгицида Фалькон, КЭ, содержащего в 1 л препарата 250 г спироксамина, 167 г тебуконазола и 43 г триадименола. В настоящее время этот препарат проходит регистрационные испытания в России в качестве средства борьбы с пирикуляриозом риса при применении путем авиаобработки. ## 2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИРОКСАМИНА В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Методика основана на газохроматографическом определении спироксамина с ТИД на неподвижной фазе OV-17 после экстракции его из растительного материала водным ацетоном, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с оксидом алюминия. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки. ##### 2.1.2 Избирательность метода В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании риса. ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода Таблица
**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА**
Анализируемый объектМетрологические параметры, P = 0,95, n = 20
Предел обнаружения, мг/кгДиапазон определяемых концентраций, мг/кгСреднее значение определения, %Стандартное отклонение S, %Относительное отклонение, %Доверительный интервал среднего, %
Зерно0,10,1 - 1,084,73,21,4+/- 3,0
Солома0,20,2 - 2,085,44,42,0+/- 4,1
### 2.2. Реактивы, растворы, материалы Спироксамин с содержанием д.в. 97,4% (Байер, Германия). Ацетон, ГОСТ 2603-79. Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72. Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78. Калия перманганат, ГОСТ 20490-75. Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77. Калий углекислый, х.ч., [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76). Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77. Натрий двууглекислый, ГОСТ 83-79. Натрия гидроксид, х.ч., ГОСТ 4328-77. Натрия сульфат безводный, х.ч., [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76). Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77. Этилацетат, [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76). Элюент N 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан - этилацетат (8:2, по объему). Алюминия оксид, нейтральный для адсорбционной хроматографии (Реанал, Венгрия), II степени активности по Брокману. Азот газообразный, о.с.ч., ГОСТ 9293-74. Водород, получаемый из генератора водорода, ГОСТ 3023-80. Воздух из баллона, ГОСТ 9010-80. Стекловата. Фильтры бумажные синяя лента, ТУ 6-09-1678. ### 2.3. Приборы, аппаратура, посуда Хроматограф газовый "Кристалл 2000М" с ТИД на азотсодержащие вещества -14 с пределом детектирования не выше 2,82 х 10 г/с или аналогичный. Колонка хроматографическая набивная стеклянная, 2000 х 3 мм, неподвижная фаза - 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм). Колонка капиллярная ZB-1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex, США, или аналогичная. Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф по ТУ 64-1-2850. Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74. Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75. Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73. Иономер ЭВ-74, ГОСТ 22261-76, или аналогичный. Колонка для адсорбционной хроматографии, 25 х 1,8 см. Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная. Ротационный испаритель, тип ИР-1М, ТУ 25-11. Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-73. Воронки делительные вместимостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82. Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75. Колба Бунзена, ГОСТ 5614-75. Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100 и 250 мл, ГОСТ 9737-70. Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82. Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Колбы грушевидные вместимостью 100 и 250 мл, ГОСТ 25336-82. Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, [ГОСТ 20292-74Е](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74). Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75. Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Зерно и солому риса подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Перед анализом зерно и солому размалывают на лабораторной мельнице. ### 2.5. Подготовка к определению ##### 2.5.1 Подготовка и кондиционирование колонки Готовую насадку (3% OV-17 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 °С в течение 8 - 10 часов. Капиллярную колонку с фазой ZB-1 устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 240 °С в течение 8 - 10 часов. ##### 2.5.2 Подготовка и очистка реактивов и растворителей Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ). 4 2 3 Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют. ##### 2.5.3 Приготовление 0,1 М раствора гидроксида натрия 4 г NaOH переносят в мерную колбу емкостью 1 л, добавляют 500 - 600 мл дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения вещества, охлаждают раствор до комнатной температуры и доводят водой до метки. ##### 2.5.4 Приготовление стандартных растворов Основной стандартный раствор спироксамина с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,0103 г препарата, содержащего 97,4% д.в., в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца. Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,25; 0,5; 1,25 и 2,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора спироксамина соответствующим последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более недели. ##### 2.5.5 Построение калибровочного графика Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора спироксамина с концентрацией 0,25; 0,5; 1,25 и 2,5 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение суммарной площади хроматографических пиков изомеров спироксамина для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости суммарной площади хроматографических пиков изомеров в мВ х с от концентрации спироксамина в растворе в мкг/мл. ##### 2.5.6 Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 10 г оксида алюминия в 20 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 25 мл смеси гексан - этилацетат (8:2, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова для работы. ##### 2.5.7 Проверка хроматографического поведения спироксамина на колонке с оксидом алюминия В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора спироксамина с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл гексана и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл гексана, затем 40 мл элюента N 1 (гексан - этилацетат, 8:2) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют на содержание спироксамина по [п. 2.7](#p100121). Фракции, содержащие спироксамин, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл гексана и вновь анализируют по [п. 2.7](#p100121). Рассчитывают содержание спироксамина в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента. Примечание: Профиль вымывания спироксамина может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей. ### 2.6. Описание определения ##### 2.6.1 Экстракция спироксамина К навеске размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) добавляют 100 мл 70%-ного водного ацетона и суспензию перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл указанного выше водного ацетона. Из объединенного экстракта отбирают половину объема (около 70 мл) раствора, эквивалентного 5 г зерна или 2,5 г соломы. Дальнейшую очистку проводят по п. п. 2.6.2 и [2.6.3](#p100118). ##### 2.6.2 Очистка экстракта Отобранные аликвоты растительного экстракта (из [п. 2.6.1](#p100114)) упаривают до водной фазы (объем 15 мл) на роторном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, приливают 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия и доводят pH раствора до 8,5 0,1 М раствором гидроксида натрия, контролируя щелочность раствора с помощью иономера. Раствор переносят в делительную воронку емкостью 200 мл, приливают 30 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 минуты. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную фазу обрабатывают гексаном еще два раза (30 + 20 мл). Объединенный гексановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. ##### 2.6.3 Очистка на колонке с оксидом алюминия Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по [п. 2.6.2](#p100116) экстрактов растительного материала, количественно переносят тремя 1-мл порциями гексана в подготовленную хроматографическую колонку [(п. 2.5.6)](#p100107). Колонку промывают 50 мл гексана, которые отбрасывают. Спироксамин элюируют 25 мл смеси гексан - этилацетат (8:2, по объему) и элюат собирают в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют на содержание спироксамина по п. 2.7. ### 2.7. Условия хроматографирования ##### 2.7.1 Метод ГЖХ с насадочными колонками Хроматограф газовый "Кристалл 2000М" с термоионным детектором на -14 азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше 2,82 х 10 г/с. Колонка стеклянная спиральная 2000 х 3 мм; неподвижная фаза - 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,125 - 0,150 мм). Температура детектора 330 °С, инжектора 250 °С, термостата колонки 205 °С. Скорость потока газа-носителя (азота) - 30 мл/мин., водорода - 11,4 мл/мин., воздуха - 200 мл/мин. Объем вводимой пробы - 2 мкл. Время удерживания спироксамина: 3 мин. 20 сек. (изомер 1) и 3 мин. 57 сек. (изомер 2). Линейный диапазон детектирования: 0,5 - 5 нг. Альтернативная неподвижная фаза: 3% OV-61 на Хромосорбе W/HP (0,125 - 0,15 мм); колонка стеклянная 1000 х 3 мм; температура колонки - 180 °С, испарителя - 250 °С, детектора - 330 °С. Время удерживания спироксамина: 1 мин. 46 сек. (изомер 1) и 2 мин. 7 сек. (изомер 2). Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю суммарную площадь хроматографических пиков изомеров спироксамина. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 2,5 мкг/мл, разбавляют гексаном. ##### 2.7.2 Метод ГЖХ с капиллярными колонками Хроматограф газовый "Кристалл 2000М" с термоионным детектором. Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм (SE-30). Температура термостата колонки программированная: начальная температура - 180 °С, выдержка 2 минуты; нагрев колонки по 20°/мин. до температуры 210 °С, выдержка 6 минут; нагрев колонки по 20°/мин. до 250 °С, выдержка 5 минут. Температура термостата испарителя - 250 °С, детектора - 330 °С. Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 22,7 мл/мин.; газ для поддува в детектор - азот, расход - 20 мл/мин. Расход водорода - 11,8 мл/мин., воздуха - 200 мл/мин. Деление потока: 1:2. Абсолютное время удерживания спироксамина: 7 мин. 58 сек. (изомер 1), 9 мин. 4 сек. (изомер 2). Объем вводимой пробы - 2 мкл. Линейный диапазон детектирования: 0,25 - 2,5 нг. Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю суммарную площадь хроматографических пиков изомеров спироксамина. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют гексаном. ### 2.8. Обработка результатов анализа Содержание спироксамина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: H х A х V 1 X = ----------, H х m 0 где: X - содержание спироксамина в пробе, мг/кг; H - суммарная площадь пиков изомеров спироксамина в образце, мВ х с; 1 H - суммарная площадь пиков изомеров спироксамина в стандарте, мВ х с; 0 A - концентрация стандартного раствора спироксамина, мкг/мл; V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m - масса анализируемой части образца, г (для зерна - 5 г, для соломы - 2,5 г). ## 3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами. ## 4. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95). ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа. ## 5. РАЗРАБОТЧИКИ ВНИИ фитопатологии. ---