МУК 4.1.1906-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств спироксамина в зерне и соломе риса методом газожидкостной хроматографии
Актуально на 31.10.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.1906-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств спироксамина в зерне и соломе риса методом газожидкостной хроматографии". МУК 4.1.1906-04. https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1906-04
(утв. Минздравом России 01.01.2004)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32).
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
1 января 2004 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИРОКСАМИНА В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ
Фирма-производитель: Байер КропСайенс АГ (Германия).
Действующее вещество: спироксамин.
8-третбутил-1,4-диоксаспиро[4,5]декан-2-илметил(этил)(пропил)амин (ИЮПАК).
8-(1,1-диметилэтил)-N-этил-N-пропил-1,4-диоксаспиро[4,5]декан-2-метанамин (С.А.).
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H NO . 18 35 2
Существует в виде смеси диастереоизомеров 1 и 2 в соотношении 49 — 56%; 51 — 44%.
Ниже приведены (если не указано особо) свойства для смеси диастереоизомеров.
Вязкая жидкость бледно-желтого цвета без запаха.
Температура кипения: 120 °С (с разложением).
Давление паров: 9,7 mPa (20 °С) для изомера 1,17 mPa (25 °С) для изомера 2.
Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 2,79 для изомера ow 1; K log P = 2,92 для изомера 2. ow
Хорошо растворим в органических растворителях: растворимость при 20 °С в ацетоне, гексане, дихлорметане, пропаноле, ацетонитриле, толуоле более 200 г/л. Растворимость (г/л) в воде при 20 °С: при pH 3 — более 200; при pH 7 — 0,47 (изомер 1) и 0,34 (изомер 2); при pH 9 — 0,014 (изомер 1) и 0,01 (изомер 2).
Вещество устойчиво к гидролизу при pH 5 — 9 и относительно стабильно на свету (DT = 50,5 дня). 50
Спироксамин достаточно быстро разрушается в почве (DT = 35 — 64 дня). 50
Краткая токсикологическая характеристика:
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 560 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность ( LD ) для крыс — более 1600 мг/кг; острая 50 ингаляционная токсичность (LC ) для крыс — 2772 мг/куб. м воздуха. 50 Спироксамин вызывает раздражение слизистой оболочки кожи у кроликов. LC 50 для рыб — 18,5 мг/л (96 час.).
Спироксамин практически нетоксичен для птиц, пчел, дождевых червей и водорослей.
Гигиенические нормативы для спироксамина в России: ОДК в почве — 0,4 мг/кг; ПДК в воде водоемов — 0,0025 мг/куб. дм; ОБУВ в воздухе рабочей зоны — 0,3 мг/куб. м; МДУ для зерна хлебных злаков — 0,2 мг/кг, ВМДУ для винограда — 0,1 мг/кг.
Спироксамин — системный фунгицид, обладающий защитным, лечебным и искореняющим действием. Эффективен против возбудителей мучнистой росы и ржавчины на зерновых злаках и оидиума на винограде. Чаще всего применяется в комбинациях с другими фунгицидами, особенно триазолами. Спироксамин входит в состав комбинированного фунгицида Фалькон, КЭ, содержащего в 1 л препарата 250 г спироксамина, 167 г тебуконазола и 43 г триадименола. В настоящее время этот препарат проходит регистрационные испытания в России в качестве средства борьбы с пирикуляриозом риса при применении путем авиаобработки.
2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ СПИРОКСАМИНА В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Методика основана на газохроматографическом определении спироксамина с ТИД на неподвижной фазе OV-17 после экстракции его из растительного материала водным ацетоном, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с оксидом алюминия.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2 Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании риса.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода
| Анализируемый объект | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | |||||
| Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение S, % | Относительное отклонение, % | Доверительный интервал среднего, % | |
| Зерно | 0,1 | 0,1 — 1,0 | 84,7 | 3,2 | 1,4 | +/- 3,0 |
| Солома | 0,2 | 0,2 — 2,0 | 85,4 | 4,4 | 2,0 | +/- 4,1 |
2.2. Реактивы, растворы, материалы
Спироксамин с содержанием д.в. 97,4% (Байер, Германия).
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.
Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.
Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77.
Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.
Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77.
Натрий двууглекислый, ГОСТ 83-79.
Натрия гидроксид, х.ч., ГОСТ 4328-77.
Натрия сульфат безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.
Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.
Этилацетат, ГОСТ 22300-76.
Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан — этилацетат (8:2, по объему).
Алюминия оксид, нейтральный для адсорбционной хроматографии (Реанал, Венгрия), II степени активности по Брокману.
Азот газообразный, о.с.ч., ГОСТ 9293-74.
Водород, получаемый из генератора водорода, ГОСТ 3023-80.
Воздух из баллона, ГОСТ 9010-80.
Фильтры бумажные синяя лента, ТУ 6-09-1678.
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с ТИД на азотсодержащие вещества -14 с пределом детектирования не выше 2,82 х 10 г/с или аналогичный.
Колонка хроматографическая набивная стеклянная, 2000 х 3 мм, неподвижная фаза — 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 — 0,15 мм).
Колонка капиллярная ZB-1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex, США, или аналогичная.
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф по ТУ 64-1-2850.
Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74.
Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.
Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73.
Иономер ЭВ-74, ГОСТ 22261-76, или аналогичный.
Колонка для адсорбционной хроматографии, 25 х 1,8 см.
Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная.
Ротационный испаритель, тип ИР-1М, ТУ 25-11.
Воронка Бюхнера, ГОСТ 9147-73.
Воронки делительные вместимостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100 и 250 мл, ГОСТ 9737-70.
Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 мл, ГОСТ 1770-74.
Колбы грушевидные вместимостью 100 и 250 мл, ГОСТ 25336-82.
Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74Е.
Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75.
Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 1770-74.
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79). Зерно и солому риса подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Перед анализом зерно и солому размалывают на лабораторной мельнице.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1 Подготовка и кондиционирование колонки
Готовую насадку (3% OV-17 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 °С в течение 8 — 10 часов.
Капиллярную колонку с фазой ZB-1 устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 240 °С в течение 8 — 10 часов.
2.5.2 Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ). 4 2 3
Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
2.5.3 Приготовление 0,1 М раствора гидроксида натрия
4 г NaOH переносят в мерную колбу емкостью 1 л, добавляют 500 — 600 мл дистиллированной воды, перемешивают до полного растворения вещества, охлаждают раствор до комнатной температуры и доводят водой до метки.
2.5.4 Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор спироксамина с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,0103 г препарата, содержащего 97,4% д.в., в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,25; 0,5; 1,25 и 2,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора спироксамина соответствующим последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более недели.
2.5.5 Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора спироксамина с концентрацией 0,25; 0,5; 1,25 и 2,5 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение суммарной площади хроматографических пиков изомеров спироксамина для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости суммарной площади хроматографических пиков изомеров в мВ х с от концентрации спироксамина в растворе в мкг/мл.
2.5.6 Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 10 г оксида алюминия в 20 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 25 мл смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова для работы.
2.5.7 Проверка хроматографического поведения спироксамина на колонке с оксидом алюминия
В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора спироксамина с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл гексана и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл гексана, затем 40 мл элюента № 1 (гексан — этилацетат, 8:2) со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют на содержание спироксамина по п. 2.7.
Фракции, содержащие спироксамин, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл гексана и вновь анализируют по п. 2.7. Рассчитывают содержание спироксамина в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
Примечание: Профиль вымывания спироксамина может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.6. Описание определения
2.6.1 Экстракция спироксамина
К навеске размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) добавляют 100 мл 70%-ного водного ацетона и суспензию перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл указанного выше водного ацетона. Из объединенного экстракта отбирают половину объема (около 70 мл) раствора, эквивалентного 5 г зерна или 2,5 г соломы. Дальнейшую очистку проводят по п. п. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.2 Очистка экстракта
Отобранные аликвоты растительного экстракта (из п. 2.6.1) упаривают до водной фазы (объем 15 мл) на роторном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в химический стакан вместимостью 100 мл, приливают 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия и доводят pH раствора до 8,5 0,1 М раствором гидроксида натрия, контролируя щелочность раствора с помощью иономера. Раствор переносят в делительную воронку емкостью 200 мл, приливают 30 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 минуты. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную фазу обрабатывают гексаном еще два раза (30 + 20 мл). Объединенный гексановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С.
2.6.3 Очистка на колонке с оксидом алюминия
Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.2 экстрактов растительного материала, количественно переносят тремя 1-мл порциями гексана в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.6).
Колонку промывают 50 мл гексана, которые отбрасывают. Спироксамин элюируют 25 мл смеси гексан — этилацетат (8:2, по объему) и элюат собирают в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл гексана и анализируют на содержание спироксамина по п. 2.7.
2.7. Условия хроматографирования
2.7.1 Метод ГЖХ с насадочными колонками
Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с термоионным детектором на -14 азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше 2,82 х 10 г/с.
Колонка стеклянная спиральная 2000 х 3 мм; неподвижная фаза — 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,125 — 0,150 мм).
Температура детектора 330 °С, инжектора 250 °С, термостата колонки 205 °С.
Скорость потока газа-носителя (азота) — 30 мл/мин., водорода — 11,4 мл/мин., воздуха — 200 мл/мин.
Время удерживания спироксамина: 3 мин. 20 сек. (изомер 1) и 3 мин. 57 сек. (изомер 2).
Линейный диапазон детектирования: 0,5 — 5 нг.
Альтернативная неподвижная фаза: 3% OV-61 на Хромосорбе W/HP (0,125 — 0,15 мм); колонка стеклянная 1000 х 3 мм; температура колонки — 180 °С, испарителя — 250 °С, детектора — 330 °С.
Время удерживания спироксамина: 1 мин. 46 сек. (изомер 1) и 2 мин. 7 сек. (изомер 2).
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю суммарную площадь хроматографических пиков изомеров спироксамина.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 2,5 мкг/мл, разбавляют гексаном.
2.7.2 Метод ГЖХ с капиллярными колонками
Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с термоионным детектором.
Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм (SE-30).
Температура термостата колонки программированная: начальная температура — 180 °С, выдержка 2 минуты; нагрев колонки по 20°/мин. до температуры 210 °С, выдержка 6 минут; нагрев колонки по 20°/мин. до 250 °С, выдержка 5 минут. Температура термостата испарителя — 250 °С, детектора — 330 °С.
Газовый режим: газ-носитель — азот, общий расход — 22,7 мл/мин.; газ для поддува в детектор — азот, расход — 20 мл/мин. Расход водорода — 11,8 мл/мин., воздуха — 200 мл/мин.
Абсолютное время удерживания спироксамина: 7 мин. 58 сек. (изомер 1), 9 мин. 4 сек. (изомер 2).
Линейный диапазон детектирования: 0,25 — 2,5 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю суммарную площадь хроматографических пиков изомеров спироксамина.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют гексаном.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание спироксамина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
H х A х V
1
где:
X - содержание спироксамина в пробе, мг/кг;
H - суммарная площадь пиков изомеров спироксамина в образце, мВ х с;
1
H - суммарная площадь пиков изомеров спироксамина в стандарте, мВ х с;
0
A - концентрация стандартного раствора спироксамина, мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
m - масса анализируемой части образца, г (для зерна - 5 г, для соломы
- 2,5 г).
3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
4. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.