МУК 4.1.1905-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств триадименола в зерне и соломе риса, ягодах и соке винограда газохроматографическим методом
(утв. Минздравом России 01.01.2004)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 № 01/14262-8-32).
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
1 января 2004 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРИАДИМЕНОЛА В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА, ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
1. Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
1. ВВОДНАЯ ЧАСТЬ
Фирма-производитель: Байер КропСайенс АГ (Германия).
Действующее вещество: триадименол.
(1RS,2RS;1RS,2SR)-1-(4-хлорфенокси)-3,3-диметил-1-(1Н-1,2,4-триазол-1-ил)бутан-2-ол (ИЮПАК).
бета-(4-хлорфенокси)-альфа-(1,1-диметилэтил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол (С.А.).
Структурная формула (не приводится).
Эмпирическая формула: C H ClN O . 14 18 3 2
Существует в виде смеси диастереоизомеров.
Бесцветное кристаллическое вещество со слабым характерным запахом.
Температура плавления: 110 °С. -4
Давление паров: 4 - 6 х 10 мПа при 20 °С. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 3,2.
ow
Растворимость (г/л) при 20 °С: дихлорметан — 200 — 500, изопропанол — 50 — 100, гексан — 0,1 — 1, толуол — 20 — 50, вода — 0,033 — 0,066.
Вещество устойчиво к гидролизу при pH 5 — 9 и фотолизу.
Триадименол медленно разрушается в почве (DT = 110 — 375 дней). 50
Краткая токсикологическая характеристика:
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс 700 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность (LD ) для крыс — более 5000 мг/кг; острая 50 ингаляционная токсичность (LC ) для крыс — более 0,9 мг/л воздуха. 50
Триадименол не вызывает раздражения кожи и слизистой оболочки глаз у кроликов. LC для рыб 17,4 - 27,3 мг/л (96 час.).
50
Триадименол не токсичен для птиц, пчел, дождевых червей и водорослей.
Гигиенические нормативы для триадименола в России: ОДК в почве — 0,02 мг/кг; ОДУ в воде водоемов — 0,05 мг/куб. дм; ПДК в воздухе рабочей зоны — 0,5 мг/куб. м; МДУ для зерна хлебных злаков и проса — на уровне чувствительности метода; ВМДУ для винограда — 0,05 мг/кг.
Триадименол — системный фунгицид широкого спектра действия. Эффективен против возбудителей мучнистой росы, различных видов ржавчины, септориоза, твердой и пыльной головни, тифулеза, гельминтоспориоза, листовых пятнистостей на зерновых злаках, овощных и плодовых культурах, виноградниках. Используется как для обработки вегетирующих растений, так и для протравливания семян. Часто применяется в комбинациях с другими фунгицидами. Триадименол входит в состав комбинированного фунгицида Фалькон, КЭ, содержащего в 1 л препарата 250 г спироксамина, 167 г тебуконазола и 43 г триадименола. В настоящее время этот препарат проходит регистрационные испытания в России в качестве средства борьбы с пирикуляриозом риса и оидиумом винограда.
2. МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТРИАДИМЕНОЛА В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА, ЯГОДАХ И СОКЕ ВИНОГРАДА ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
2.1. Основные положения
2.1.1 Принцип метода
Методика основана на газохроматографическом определении триадименола с ТИД на неподвижной фазе OV-17 после экстракции его из ягод ацетоном, из зерна и соломы — водным ацетоном и из виноградного сока — дихлорметаном, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и на колонке с силикагелем.
Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
2.1.2 Избирательность метода
В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании риса и винограда.
2.1.3 Метрологическая характеристика метода
МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА
| Анализируемый | Метрологические параметры, P = 0,95, n = 20 | |||||
| объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение S, % | Относительное отклонение, % | Доверительный интервал среднего, % |
| Зерно | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 84,8 | 6,6 | 2,9 | +/- 6,1 |
| Солома | 0,04 | 0,04 — 0,4 | 82,0 | 3,2 | 1,4 | +/- 3,0 |
| Ягоды | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 83,9 | 3,4 | 1,5 | +/- 3,2 |
| Сок | 0,02 | 0,02 — 0,2 | 87,6 | 5,1 | 2,3 | +/- 4,8 |
2.2. Реактивы, растворы, материалы
Триадименол с содержанием д.в. 96,7% (Байер, Германия)
Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72
Калия перманганат, ГОСТ 20490-75
Кальция хлорид, х.ч., ГОСТ 4161-77
Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76
Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77
Метилен хлористый, ГОСТ 19433-88
Натрий двууглекислый, ГОСТ 83-79
Натрия гидроксид, х.ч., ГОСТ 4328-77
Натрия сульфат безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76
Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77
Толуол, ГОСТ 5789-78
Этилацетат, ГОСТ 22300-76
Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан — этилацетат (3:7, по объему)
Азот газообразный, о.с.ч., ГОСТ 9293-74
Водород, получаемый из генератора водорода, ГОСТ 3023-80
Воздух из баллона, ГОСТ 9010-80
Силикагель (0,063 — 0,2 мм) для адсорбционной хроматографии (Мерк, Германия) I степени активности
Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 6-09-1678
2.3. Приборы, аппаратура, посуда
Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с ТИД на азотсодержащие вещества с -14 пределом детектирования не выше 2,82 х 10 г/с или аналогичный
Колонка хроматографическая набивная стеклянная, 2000 х 3 мм, неподвижная фаза — 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 — 0,15 мм)
Колонка капиллярная ZB1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex, США, или аналогичная
Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф по ТУ 64-1-2850
Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74
Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75
Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73
Гомогенизатор, МРТУ 42-1505-63
Колонка для адсорбционной хроматографии, 25 х 1,8 см
Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная
Ротационный испаритель тип ИР-1М, ТУ 25-11-917-74
Воронки делительные вместимостью 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82
Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100 и 250 мл, ГОСТ 9737-70
Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82
Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 и 1000 мл, ГОСТ 1770-74
Колбы грушевидные вместимостью 100 и 250 мл, ГОСТ 25336-82
Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74Е
Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75
Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 1770-74
2.4. Отбор проб
Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79). Зерно и солому риса подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при комнатной температуре. Виноград хранят в стеклянной посуде в холодильнике при температуре не выше +4 °С не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С. Перед анализом зерно и солому размалывают на лабораторной мельнице, а ягоды измельчают.
2.5. Подготовка к определению
2.5.1 Подготовка и кондиционирование колонки
Готовую насадку (3% OV-17 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270 °С в течение 8 — 10 часов.
Капиллярную колонку с фазой ZB1 устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 °С в течение 8 — 10 часов.
2.5.2 Подготовка и очистка реактивов и растворителей
Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего его сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ). 4 2 3
Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.
Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 3 часов.
2.5.3 Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор триадименола с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,0103 г препарата, содержащего 96,7% д.в., в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.
Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора триадименола соответствующим последовательным разбавлением ацетоном. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более недели.
2.5.4 Построение калибровочного графика
Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора триадименола с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ х с от концентрации триадименола в растворе в мкг/мл.
2.5.5 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта
В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 3 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 25 мл смеси гексан — этилацетат (3:7, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова для работы.
2.5.6 Проверка хроматографического поведения триадименола на колонке с силикагелем
В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора триадименола с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан — этилацетат (7:3) и наносят на колонку. Промывают колонку 50 мл смеси гексан — этилацетат (6:4, по объему), затем 60 мл элюента № 1 (гексан — этилацетат, 3:7) со скоростью 1 — 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 мл толуола и анализируют на содержание триадименола по п. 2.7.
Фракции, содержащие триадименол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл толуола и вновь анализируют по п. 2.7. Рассчитывают содержание триадименола в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.
Примечание: Профиль вымывания триадименола может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.
2.6. Описание определения
2.6.1 Экстракция триадименола
2.6.1.1. Зерно, солома. К навеске размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) добавляют 100 мл 70%-ного водного ацетона и суспензию перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл указанного выше водного ацетона. Из объединенного экстракта отбирают половину объема (около 70 мл) раствора, эквивалентного 5 г зерна или 2,5 г соломы. Дальнейшую очистку проводят по п. п. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.1.2. Ягоды. К навеске (20 г) измельченного материала добавляют 100 мл ацетона и гомогенизируют 3 минуты при 10000 об./мин. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл ацетона. Из объединенного ацетонового экстракта отбирают половину объема (около 75 мл) раствора, эквивалентного 10 г ягод. Дальнейшую очистку проводят по п. п. 2.6.2 и 2.6.3.
2.6.1.3. Сок. К 10 мл свежевыжатого сока добавляют 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия и содержимое переносят в делительную воронку емкостью 100 мл. В воронку добавляют 30 мл хлористого метилена и смесь встряхивают в течение 1 минуты. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную фазу обрабатывают хлористым метиленом еще два раза (30 + 20 мл). Объединенный дихлорметановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 4 мл толуола и анализируют на содержание триадименола по п. 2.7.
2.6.2 Очистка экстракта
Отобранные аликвоты растительного экстракта (из п. п. 2.6.1.1 и 2.6.1.2) упаривают до водной фазы (объем 5 — 15 мл) на роторном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия, 30 мл хлористого метилена и смесь встряхивают в течение 1 минуты. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную фазу обрабатывают хлористым метиленом еще два раза (30 + 20 мл). Объединенный дихлорметановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С.
2.6.3 Очистка на колонке с силикагелем
Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.2 экстрактов растительного материала, количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан — этилацетат (7:3) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Колонку промывают 50 мл смеси гексан — этилацетат (6:4, по объему), которые отбрасывают. Триадименол элюируют 50 мл элюента № 1 (гексан — этилацетат, 3:7), и элюат собирают в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстрактов зерна и соломы растворяют в 2 мл экстракта ягод в 4 мл толуола и анализируют на содержание триадименола по п. 2.7.
2.7. Условия хроматографирования
2.7.1 Метод ГЖХ с насадочными колонками
Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с термоионным детектором на -14 азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше 2,82 x 10 г/с.
Колонка стеклянная спиральная 1000 х 3 мм, неподвижная фаза — 3% OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,125 — 0,150 мм).
Температура детектора 330 °С, инжектора — 260 °С, термостата колонки программированная: начальная температура — 200 °С, выдержка 1 минута; нагрев колонки по 10° в минуту до 220 °С, выдержка 5 минут.
Скорость потока газа-носителя (азота) — 32 мл/мин.; водорода — 11,2 мл/мин., воздуха — 200 мл/мин.
Время удерживания триадименола: 4 мин. 20 сек.
Линейный диапазон детектирования: 0,1 — 1 нг.
Альтернативная неподвижная фаза: 3% OV-61 на Хромосорбе W/HP (0,16 — 0,20 мм); колонка стеклянная 1000 х 3 мм; температура колонки — 210 °С, испарителя — 260 °С, детектора — 330 °С.
Время удерживания триадименола: 2 мин.
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика триадименола.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют толуолом.
2.7.2 Метод ГЖХ с капиллярными колонками
Хроматограф газовый «Кристалл 2000М» с термоионным детектором.
Колонка капиллярная кварцевая ZB 1, 30 м х 0,32 мм х 0,5 мкм (SE-30).
Температура термостата колонки программированная: начальная температура — 180 °С, выдержка 1 минута; нагрев колонки по 20°/мин. до 210 °С; выдержка 0 минут; нагрев колонки по 4°/мин. до температуры 230 °С, выдержка 4 минуты; нагрев колонки по 25°/мин. до температуры 255 °С, выдержка 5 минут. Температура термостата испарителя — 260 °С, детектора — 330 °С.
Газовый режим: газ-носитель — азот, общий расход — 22,8 мл/мин.; газ для поддува в детектор — азот, расход — 20 мл/мин. Расход водорода — 11,5 мл/мин., воздуха — 200 мл/мин.
Абсолютное время удерживания триадименола: 8 мин. 34 сек.
Линейный диапазон детектирования: 0,05 — 1,0 нг.
Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика триадименола.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,25 мкг/мл, разбавляют толуолом.
2.8. Обработка результатов анализа
Содержание триадименола рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:
H х A х V
1
где:
X - содержание триадименола в пробе, мг/кг;
H - площадь пика образца, мВ х с;
1
H - площадь пика стандарта, мВ х с;
0
A - концентрация стандартного раствора триадименола, мкг/мл;
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
m - масса анализируемой части образца, г (для зерна - 5 г, для соломы -
2,5 г, для ягод — 10 г, для сока — 10 мл).
3. ТРЕБОВАНИЯ ТЕХНИКИ БЕЗОПАСНОСТИ
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
4. КОНТРОЛЬ ПОГРЕШНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.