МУК 4.1.1855-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств цимоксанила в томатах методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом России 05.03.2004)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЦИМОКСАНИЛА В ТОМАТАХ МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МУК 4.1.1855-04

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

4. Введены впервые.

1. Вводная часть

Фирма-производитель: ЗАО Фирма «Август».

Торговое наименование: Ордан.

Действующее вещество: цимоксанил (ISO).

Структурная формула:

                                       CN
                                       |

CH CH NHC(O)NHC(O)C=NOCH 3 2 3

1-(2-циано-2метоксииминоацетил)-3-этилмочевина (IUPAC).

Брутто формула: C H № O . 7 10 4 3

Мол. масса: 198,2.

Химически чистый препарат — бесцветное кристаллическое вещество.

Температура плавления: 160 °С. -2

    Давление паров при 20 °С - 15 х 10   mPa.
    Коэффициент  распределения  н-октанол/вода:  K    log  P = 0,59 (рН 5);

                                              ow

0,67(рН 7).

                              -5                 -5
    Константа Генри - 3,8 х 10   (рН 7), 3,3 х 10   (рН 5).

Растворимость в воде при 20 °С — 890 мг/л (рН 5); в ацетоне — 62,4 г/л; в ацетонитриле — 57 г/л; в этилацетате — 28 г/л; н-октаноле — 1,43 г/л; метаноле — 22,9 г/л.

Вещество стабильно в интервале рН 2 — 7,3, в щелочных растворах быстро разлагается.

DT = 1,8 дня; рКа = 9,7. 50

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая оральная токсичность (LD ) для крыс = 960 мг/кг. 50

Острая дермальная токсичность (LD ) > 2000 мг/кг. 50

Острая ингаляционная токсичность (LC ) > 5060 мг/куб. м. 50

Не раздражает слизистую глаз и легко раздражает кожу кроликов.

LC (96 часов) для рыб — 61 мг/л (радужная форель); 91 мг/л (карп). 50

LC (48 часов) для дафний — 27 мг/л. 50

Не токсичен для пчел: LD (48 часов контактно) > 25 мкг/пчелу 50

LD (48 часов орально) > 1000 мкг/пчелу 50

Черви: LC (14 дней) > 2208 мг/кг почвы. 50

Класс токсичности по ВОЗ — III (д.в.), ЕПА — III (преп. форма).

В России установлены следующие гигиенические нормативы для цимоксанила: ДСД — 0,02 мг/кг, ОДК в почве — 0,04 мг/кг; ПДК в воде — 0,3 мг/л (орг.); ОБУВ в воздухе рабочей зоны — 1,0 мг/куб. м; в атмосферном воздухе — 0,003 мг/куб. м.

МДУ (мг/кг) в картофеле, огурцах — 0,05; ВМДУ (мг/кг) в томатах и винограде — 0,1.

Область применения:

Контактный фунгицид с местным системным эффектом, обладающий защитным и лечащим действием. Высокоактивен против грибов, вызывающих фитофтороз и пероноспороз, не действует на возбудителей настоящей мучнистой росы. Длительность защитного действия составляет 4 — 6 дней, поэтому рекомендуется его использование в смеси с другими фунгицидами защитного контактного действия.

2. Методика определения цимоксанила в томатах методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Методика основана на определении цимоксанила с помощью газожидкостной хроматографии при использовании термоионного детектора на неподвижной фазе ХЕ-60 после экстракции органическим растворителем, очистки экстракта путем перевода действующего вещества в водную фазу и повторной экстракции органическим растворителем. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2 Избирательность метода

В условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при выращивании томатов (дитиокарбаматы, пиретроиды и др.).

2.1.3 Метрологическая характеристика метода

Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 и 2.

Таблица 1

МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА

Объект анализа	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, % (для каждого объекта n = 24)	Относительное стандартное отклонение S, %	Доверительный интервал среднего, n = 24, P = 0,95
томаты	0,025	0,025 — 0,250	82,0	6,5	6,0

Таблица 2

(N = 5 ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)

Среда	Внесено, мг/кг	Найдено, мг/кг	Стандартное отклонение S, мг/кг	Доверительный интервал (P = 0,95, n = 6), %	Полнота определения, %
томаты	0,025	0,023	0,002	7,9	80,2
	0,050	0,047	0,002	5,8	81,4
	0,100	0,094	0,005	5,7	82,6
	0,250	0,238	0,010	4,6	84,0

2.2. Реактивы и материалы

Аналитический стандарт цимоксанила 99,4%.

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Этиловый эфир уксусной кислоты, ч.д.а., ГОСТ 22300-76.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76, свежепрокаленный.

Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72.

Соляная кислота, ГОСТ 857-88, 0,1 н раствор.

Хлороформ, ГОСТ 20015-74.

Насадка для колонки: 5% ХЕ-60 на хроматоне N-Super, размер частиц 0,125 — 0,160 мм, Хемопол (Чехия).

Азот газообразный особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Водород технический, ГОСТ 3022-70.

Воздух, ГОСТ 11882-73.

2.3. Приборы и посуда

Газовый хроматограф Цвет-500 или аналогичный.

Установка ультразвуковая «Серьга» УЗМ002 или аналогичная.

Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный.

Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.

Баня водяная, ТУ 46-22-603-75.

Колбы круглодонные на 100 и 250 мл, КПШ-100, КПШ-250, ГОСТ 10394-72.

Воронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 10054-75.

Концентраторы конические НШ29 КГУ 100-14/19, ТС, ГОСТ 10394-72.

Пипетки мерные на 0,1; 1,0; 5,0; 10 и 25 мл, ГОСТ 20292-74.

Стаканы стеклянные на 100 мл, ГОСТ 6236-72.

Колбы мерные на 25, 50, 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.

Фильтры бумажные «Красная лента», ТУ 6-09-1678-86.

2.4. Отбор и хранение проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы хранят в морозильной камере при -18 °С в течение 10 месяцев.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Растворители, используемые для анализа, специальной подготовки не требуют.

Рекомендуется проверить чистоту применяемых растворителей. Для этого 100 мл растворителя испаряют с помощью вакуумного ротационного испарителя при температуре 40 °С до объема 1 мл и хроматографируют. При обнаружении примесей, которые могут мешать определению, растворители очищают общепринятыми методами.

2.5.2 Кондиционирование колонки

Готовую насадку (5% ХЕ-60 на хроматоне N-AW) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и выдерживают при температуре 220 °С в течение 8 часов в токе азота.

2.5.3 Приготовление стандартного и градуировочных растворов

Основной раствор цимоксанила готовят, количественно перенося 10 мг аналитического стандарта в мерную колбу на 100 мл, растворяют навеску в ацетоне. Из полученного раствора с концентрацией 100 мкг/мл готовят рабочие растворы с концентрациями 2,0 мкг/мл, 4,0 мкг/мл, 8,0 мкг/мл, 20 мкг/мл последовательным разведением в ацетоне.

Для внесения цимоксанила в образец при определении полноты извлечения используют соответствующий стандартный раствор в ацетоне.

2.5.4 Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика от концентрации цимоксанила в растворе в хроматограф вводят по 2 мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты (площади) пиков и строят график зависимости среднего значения высоты, мм (площади, мв/сек.), пика от концентрации цимоксанила в градуировочном растворе (мкг/мл).

2.5.5 Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.

2.6. Проведение определения

2.6.1 Экстракция и очистка экстракта

Навеску (40 г) измельченных томатов помещают в коническую колбу на 250 мл, заливают 50 мл этилацетата и экстрагируют цимоксанил на ультразвуковой бане в течение 15 мин. Затем раствор методом декантации переносят в делительную воронку через фильтр «красная лента». После разделения слоев нижнюю водную фракцию помещают в колбу для повторной экстракции, верхний слой этилацетата собирают в концентратор.

Повторно экстрагируют цимоксанил 50 мл этилацетата. Органический экстракт объединяют, добавляют в концентратор 20 мл дистиллированной воды и отгоняют этилацетат на роторном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °С.

2.6.2 Очистка экстракта

Водный экстракт помещают в делительную воронку, ополаскивая концентратор 30 мл воды. Добавляют в воронку 20 мл хлороформа и интенсивно встряхивают 2 минуты. После разделения фаз нижний хлороформный слой собирают в стакан объемом 100 мл. Экстракцию повторяют дважды, используя по 20 мл хлороформа. Объединенный хлороформный экстракт помещают в делительную воронку, добавляют туда 10 мл 0,1 н соляной кислоты и интенсивно встряхивают 2 минуты. После разделения фаз нижний хлороформный слой собирают в конический концентратор, пропуская его через слой безводного сернокислого натрия. Осушитель ополаскивают 10 мл хлороформа. Экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 50 °С. Последние капли растворителя удаляют током азота. Сухой остаток растворяют в 15 мл ацетона и 2 мкл раствора вводят в хроматограф.

2.6.3 Условия хроматографирования

Газовый хроматограф «Цвет-500М» с ТИД (азотным) или аналогичный с -13 пределом детектирования не выше 5 х 10 г/куб. см по азоту в азобензоле. 9

Шкала электрометра 16 х 10 .

Колонка стеклянная, длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм. Носитель — Хроматон N-Super, размер частиц 0,125 — 0,160 мм, неподвижная фаза 5% ХЕ-60.

Температура термостата колонки 170 °С, детектора 390 °С, испарителя 340 °С.

Расход водорода — 16, азота — 38, воздуха — 200 мл/мин.

Объем пробы, вводимой в испаритель, — 2 мкл.

Абсолютное время удерживания цимоксанила — 1 мин. 40 сек.

2.6.4 Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание цимоксанила в образце томатов (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                              H  х C х V
                               2

X = ----------, H х P 1

где:
H  - высота (площадь) пика цимоксанила в стандартном растворе, мм;
 1
H  - высота (площадь) пика цимоксанила в анализируемой пробе, мм;
 2
V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
P - навеска анализируемого образца, г;
C - концентрация цимоксанила в стандартном растворе, мкг/мл.

Содержание остаточных количеств цимоксанила в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 20 мкг/мл, разбавляют.

3. Требования техники безопасности

При проведении работы необходимо соблюдать требования инструкции «Основные правила безопасной работы в химической лаборатории», общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, а также инструкции по эксплуатации газового хроматографа и электрооборудования до 400 В.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

5. Разработчики

Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений (Санкт-Петербург).

---