---
title: "\"МУК 4.1.1854-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств флутриафола в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии\""
number: "МУК 4.1.1854-04"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1854-04"
---

## "МУК 4.1.1854-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств флутриафола в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии"

# "МУК 4.1.1854-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств флутриафола в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии"

(утв. Минздравом России 05.03.2004)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2004 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**<br>
5 марта 2004 года

</div>



#### <a id="p100132"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ФЛУТРИАФОЛА**
**В ЗЕРНЕ ГОРОХА, СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА МЕТОДОМ**
**ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МУК 4.1.1854-04**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения<br>
с 1 июля 2004 года

</div>


1. <a id="p100005"></a>Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100009"></a>Вводная часть


<a id="p100010"></a>Фирма-регистрант: Кеминова А/С.
<a id="p100011"></a>Торговое наименование: Импакт, Винцит.
<a id="p100012"></a>Действующее вещество: флутриафол.
<a id="p100013"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100014"></a>CA: (+/-)-альфа-(2-фторфенил)-альфа-(4-фторфенил)-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол.
<a id="p100015"></a>    Брутто формула: C  H  F N O.
                     16 13 2 3
<a id="p100016"></a>Мол. масса: 301,3.
<a id="p100017"></a>Химически чистый препарат - твердое белое кристаллическое вещество.
                                                                    -6
<a id="p100018"></a>    Температура плавления: 130 °С. Давление паров при 20 °С 7,1 х 10   mPa.
<a id="p100019"></a>    Коэффициент распределения н-октанол/вода: K   log P = 2,3 (20 °С).
                                               ow
<a id="p100020"></a>Растворимость (20 °С): в воде - 130 мг/л, в ацетоне - 190 г/л, дихлорметане - 150 г/л, метаноле - 69 г/л, гексане - 0,3 г/л.
<a id="p100021"></a>    В почве период полураспада DT   65 - 125 дней.
                                 50
<a id="p100022"></a>    Оральная токсичность (LD  ) для крыс 1480 мг/кг.
                            50
<a id="p100023"></a>Гигиенические нормативы, МДУ (мг/кг): зерно хлебных злаков, свекла сахарная - 0,1, виноград - н.д., яблоки - 0,1 <*>. Для зерна гороха, семян и масла подсолнечника гигиенические нормативы не установлены.
<a id="p100024"></a>Область применения: фунгицид широкого спектра действия для борьбы с болезнями листа и колоса зерновых культур, также применяется для защиты плодовых, зернобобовых и других культур. Используется для борьбы с почвенными, семенными и аэрогенными инфекциями.


## 2. <a id="p100025"></a>Методика определения флутриафола в зерне гороха, семенах и масле подсолнечника методом газожидкостной хроматографии



### <a id="p100026"></a>2.1. Основные положения


##### <a id="p100027"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100028"></a>Метод определения флутриафола в растительных субъектах основан на экстракции пестицида органическими растворителями и очистке перераспределением между двумя несмешивающимися жидкими фазами, а также при необходимости на колонке с силикагелем. Количественное определение проводят методом газожидкостной хроматографии с использованием термоионного детектора (ТИД).

##### <a id="p100029"></a>2.1.2 Избирательность метода

<a id="p100030"></a>Избирательность метода обеспечивается очисткой экстрактов анализируемых проб и сочетанием условий хроматографирования. Присутствие других пестицидов, близких по химическому строению и области применения, определению не мешает.

##### <a id="p100031"></a>2.1.3 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100032"></a>Метрологическая характеристика метода представлена в таблицах 1 и [2](#p100040).

<div align="right">

<a id="p100033"></a>Таблица 1

</div>


<div align="center">

<a id="p100034"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА**

</div>



| Объект анализа | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % (для каждого объекта n = 24) | Относительное стандартное отклонение, S, % | Доверительный интервал среднего, n = 24, P = 0,95 |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| горох, зерно | 0,05 | 0,05 - 0,5 | 83,1 | 5,20 | 4,95 |
| подсолнечник, семена | 0,05 | 0,05 - 0,5 | 80,4 | 5,45 | 4,15 |
| подсолнечник, масло | 0,05 | 0,05 - 0,5 | 79,0 | 5,65 | 4,15 |


<div align="right">

<a id="p100039"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100040"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛУТРИАФОЛА В ЗЕРНЕ ГОРОХА,**<br>
**СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА**

</div>



<table>
<colgroup><col width="23%"><col width="15%"><col width="14%"><col width="25%"><col width="23%"></colgroup>
<tr><td>Среда</td><td>Внесено, мг/кг</td><td>Найдено, мг/кг</td><td>Стандартное отклонение, +/-</td><td>Полнота определения, %</td></tr>
<tr><td rowspan="4">горох, зерно</td><td>0,05</td><td>0,0402</td><td>0,0031</td><td>80,4</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0816</td><td>0,0064</td><td>81,6</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1640</td><td>0,0100</td><td>82,0</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>0,4275</td><td>0,0220</td><td>88,5</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>83,1</td></tr>
<tr><td rowspan="4">подсолнечник, семена</td><td>0,05</td><td>0,0380</td><td>0,0021</td><td>76,0</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0792</td><td>0,0072</td><td>79,2</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1648</td><td>0,0120</td><td>82,4</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>0,3200</td><td>0,0200</td><td>83,8</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>80,4</td></tr>
<tr><td rowspan="4">подсолнечник, масло</td><td>0,05</td><td>0,0376</td><td>0,0024</td><td>75,1</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>0,0792</td><td>0,0072</td><td>79,2</td></tr>
<tr><td>0,2</td><td>0,1592</td><td>0,0110</td><td>79,6</td></tr>
<tr><td>0,5</td><td>0,441</td><td>0,0210</td><td>82,2</td></tr>
<tr><td>Среднее</td><td></td><td></td><td></td><td>79,0</td></tr>
</table>



### <a id="p100057"></a>2.2. Реактивы, материалы

<a id="p100058"></a>Флутриафол, аналитический стандарт (фирма "Кеминова А/С").
<a id="p100059"></a>Ацетон, о.с.ч. 9 - 5, ТУ 2633-039-4493179-00, или ч.д.а., ГОСТ 2603-79.
<a id="p100060"></a>Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-76.
<a id="p100061"></a>н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.
<a id="p100062"></a>Натрий сернокислый безводный, ч.д.а., [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76).
<a id="p100063"></a>Натрия хлорид, х.ч., ГОСТ 4233-77.
<a id="p100064"></a>Стекловата.
<a id="p100065"></a>Силикагель L 100/400 для хроматографии (0,040 - 0,063 мм) (Хемапол, Венгрия).
<a id="p100066"></a>Серная кислота ОСЧ 11-5, [ГОСТ 14262-78](https://bukva.ai/docs/standart-gost-14262-78).
<a id="p100067"></a>Хлористый метилен, ч.д.а., ТУ-2631-020-11291058-96.


### <a id="p100068"></a>2.3. Приборы и посуда

<a id="p100069"></a>Газовый хроматограф Цвет-550 М или аналогичный с ТИД и стеклянной насадочной колонкой длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм.
<a id="p100070"></a>Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или аналогичные.
<a id="p100071"></a>Весы технические ВЛКТ-500, ГОСТ 24104-80.
<a id="p100072"></a>Мельница лабораторная зерновая ЛМЗ, ТУ 1-01-0593-79.
<a id="p100073"></a>Установка ультразвуковая "Серьга", ТУ 3.836.008.
<a id="p100074"></a>Ротационный испаритель вакуумный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, или аналогичный.
<a id="p100075"></a>Микрошприц МШ-10, МШ-10М, ТУ 2-833-106.
<a id="p100076"></a>Насос водоструйный, МРТУ 42 861-64.
<a id="p100077"></a>Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС, ГОСТ 10384-72.
<a id="p100078"></a>Колбы круглодонные на шлифах КШ50 29-32 ТС, ГОСТ 10384-72.
<a id="p100079"></a>Воронки лабораторные В-75-110, ГОСТ 25336-82,
<a id="p100080"></a>Воронки делительные на 500, 1000 мл ВД-3-500, ГОСТ 8613-75.
<a id="p100081"></a>Цилиндры мерные на 100 куб. см, 500 куб. см, ГОСТ 1774-74.
<a id="p100082"></a>Колбы мерные на 100 куб. см, ГОСТ 1770-74.
<a id="p100083"></a>Пипетки на 1, 2, 5, 10 куб. см, ГОСТ 22292-74.
<a id="p100084"></a>Стаканы химические, ГОСТ 25336-82Е.
<a id="p100085"></a>Колонка стеклянная хроматографическая длиной 30 см, диаметром 10 мм.


### <a id="p100086"></a>2.4. Отбор проб

<a id="p100087"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79). Для длительного хранения зерно и семена подсушивают при комнатной температуре в отсутствие света. Сухие образцы могут храниться в течение года. Перед анализом пробы зерна и семян измельчают. Масло хранят в холодильнике.


### <a id="p100088"></a>2.5. Подготовка к определению


##### <a id="p100089"></a>2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей

<a id="p100090"></a>Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с общепринятыми методиками. Гексан и дихлорметан встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания свежей порции, затем промывают водой, после чего сушат над щелочью и перегоняют.

##### <a id="p100091"></a>2.5.2 Кондиционирование колонки

<a id="p100092"></a>Перед началом анализа колонку, заполненную хроматоном N-Super (0,125 - 0,160 мм) с 5% SE-30, не присоединяя к детектору, кондиционируют в токе инертного газа (азот) при температуре 250 °С в течение 8 - 10 часов.

##### <a id="p100093"></a>2.5.3 Приготовление стандартного и градуировочных растворов

<a id="p100094"></a>Основной раствор флутриафола готовят, количественно перенося 10 мг аналитического стандарта флутриафола в мерную колбу на 100 мл, растворяют навеску в ацетоне. Из полученного раствора флутриафола с концентрацией 100 мкг/мл готовят рабочие растворы с концентрациями 1 мкг/мл, 2 мкг/мл, 4 мкг/мл, 10 мкг/мл последовательным разведением в ацетоне.
<a id="p100095"></a>Для внесения в образец при определении полноты извлечения используют соответствующий стандартный раствор флутриафола в ацетоне.

##### <a id="p100096"></a>2.5.4 Построение градуировочного графика

<a id="p100097"></a>Для построения градуировочного графика зависимости высоты (площади) пика от концентрации флутриафола в растворе в хроматограф вводят по 1 мкл градуировочных растворов (не менее 3-х параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4-х точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют высоты (площади) пиков и строят график зависимости среднего значения высоты, мм (площади, мв/сек) пика от концентрации флутриафола в градуировочном растворе (мкг/мл).

##### <a id="p100098"></a>2.5.5 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

<a id="p100099"></a>Силикагель прогревают в термостате при 120 °С в течение 3-х часов и охлаждают до комнатной температуры. На дно стеклянной колонки помещают стекловату, слой 0,5 см безводного сульфата натрия и заполняют через воронку суспензией 5 г силикагеля в 25 мл гексана при открытом кране колонки, сверху наносят слой 1 см безводного сульфата натрия. Затем колонку промывают 10 мл смеси гексан:ацетон в соотношении 3:2 и закрывают кран, когда уровень растворителя достигнет верхнего края сорбента. Колонка готова к работе.

##### <a id="p100100"></a>2.5.6 Проверка хроматографического поведения флутриафола на колонке с силикагелем

<a id="p100101"></a>В подготовленную колонку пипеткой вносят 1 мл стандартного раствора флутриафола и дают впитаться. После этого в колонку вносят 10 мл смеси гексан:ацетон (1:3), элюат отбрасывают. Флутриафол элюируют 40 мл смеси гексан:ацетон (1:5), отбирая фракции по 5 мл, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют фракции, содержащие флутриафол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. Рассчитывают содержание флутриафола в элюате, определяя его полноту извлечения из колонки и необходимый для этого объем элюента.
<a id="p100102"></a>Примечание: профиль вымывания флутриафола может изменяться при использовании силикагеля новой партии или другой марки.


##### <a id="p100103"></a>2.5.7 Подготовка приборов и средств измерения

<a id="p100104"></a>Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями стандартов и технической документации.


### <a id="p100105"></a>2.6. Проведение определения


##### <a id="p100106"></a>2.6.1 Экстракция и очистка экстрактов

<a id="p100107"></a>2.6.1.1. Зерно гороха. Навеску размолотого в лабораторной мельнице гороха (20 г) помещают в коническую колбу объемом 250 мл и экстрагируют флутриафол 50 мл ацетона на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Надосадочную жидкость фильтруют через складчатый фильтр "красная лента" в делительную воронку объемом 500 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями по 50 мл ацетона. После третьей экстракции осадок переносят на фильтр, колбу ополаскивают 20 мл ацетона и 50 мл дистиллированной воды и фильтруют смывы через фильтр с осадком. К объединенному экстракту добавляют 50 мл дистиллированной воды и промывают 10 мл гексана, встряхивая делительную воронку в течение 2-х минут. После полного разделения слоев верхний гексановый слой отбрасывают и промывку повторяют дважды порциями по 10 мл гексана. Промытый гексаном водно-ацетоновый экстракт концентрируют на роторном испарителе до объема 130 - 150 мл и переносят в делительную воронку, ополаскивая концентратор. Переэкстрагируют флутриафол в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая воронку в течение 2-х минут. Нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия, промывают осушитель 10 мл хлористого метилена. Объединенный дихлорметановый экстракт упаривают досуха и растворяют в 1 - 2 мл ацетона. При необходимости проводят очистку на колонке с силикагелем, по [п. 2.6.2](#p100110).
<a id="p100108"></a>2.6.1.2 Семена подсолнечника. Навеску очищенных от лузги и размолотых на лабораторной мельнице семян (20 г) помещают в коническую колбу объемом 500 мл и экстрагируют флутриафол 150 мл охлажденной смеси гексан:ацетон в соотношении 2:1 на ультразвуковой установке в течение 15 мин. (ванна установки заполнена водой со льдом). Экстракт фильтруют через складчатый фильтр "белая лента" в делительную воронку объемом 1000 мл. Экстракцию повторяют дважды порциями экстрагента по 150 мл, после чего остаток переносят на фильтр, колбу и осадок промывают 20 - 30 мл экстрагирующей смеси. К объединенному экстракту в делительную воронку добавляют 100 мл дистиллированной воды и встряхивают в течение 2-х минут. После полного разделения фаз нижний водно-ацетоновый объем собирают, при этом эмульсию пограничного слоя разбивают непосредственно перед тем, как предстоит отбор эмульсионного слоя, внесением в него очень малого количества хлористого натрия. Оставшийся в делительной воронке гексановый слой промывают дважды 50 мл водного ацетона (50:50), который собирают. Объединенный водно-ацетоновый экстракт упаривают на роторном испарителе до объема 150 - 180 мл и переносят в делительную воронку. Флутриафол переэкстрагируют в хлористый метилен трижды порциями по 50 мл, встряхивая делительную воронку в течение 2-х минут. Нижний органический слой собирают, фильтруя через слой безводного сульфата натрия, и выпаривают досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1 - 2 мл ацетона и дальнейшую очистку проводят на колонке с силикагелем [(п. 2.6.2)](#p100110).
<a id="p100109"></a>2.6.1.3. Масло подсолнечника. 20 г масла помещают в делительную воронку объемом 500 мл, добавляют 100 мл охлажденной смеси гексан:ацетон в соотношении 2:1 и осторожно круговыми движениями перемешивают в течение 2 - 3 минут. Затем добавляют 50 мл дистиллированной воды и встряхивают воронку в течение двух минут, происходит разделение слоев и перераспределение флутриафола в водно-ацетоновый слой, который собирают. К гексановому слою в делительной воронке добавляют 50 мл водного ацетона (50:50), интенсивно встряхивают и после полного разделения фаз собирают водно-ацетоновый слой. Промывку гексанового слоя повторяют. Собранный объединенный экстракт переносят в чистую делительную воронку и переэкстрагируют флутриафол хлористым метиленом трижды порциями по 50 мл. Органический слой фильтруют через безводный сульфат натрия и выпаривают досуха на роторном испарителе. Сухой остаток растворяют в 1 - 2 мл ацетона и дальнейшую очистку проводят на колонке с силикагелем [(п. 2.6.2)](#p100110).

##### <a id="p100110"></a>2.6.2 Очистка экстрактов на колонке с силикагелем

<a id="p100111"></a>Растворенный в 1 - 2 мл ацетона сухой остаток пипеткой количественно переносят в хроматографическую колонку, колбочку ополаскивают еще 1 - 2 мл ацетона и вносят в колонку, после чего открывают кран и дают раствору впитаться в сорбент. Затем в колонку вносят 10 мл смеси гексан:ацетон в соотношении 2:3, элюат отбрасывают. Флутриафол элюируют 15 мл смеси гексан:ацетон в соотношении 1:5, элюат собирают и упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют.

##### <a id="p100112"></a>2.6.3 Условия хроматографирования

<a id="p100113"></a>Газовый хроматограф "Цвет-550М" с ТИД или аналогичный. Колонка стеклянная 1 м х 3 мм, заполненная хроматоном N-Super (0,125 - 0,160 мм) с 5% SE-30.
<a id="p100114"></a>Температура колонки 230 °С, испарителя 240 °С, детектора 380 °С.
<a id="p100115"></a>Скорость газа-носителя (азот) через колонку 30 куб. см/мин.
<a id="p100116"></a>Расход водорода 16 куб. см/мин.
<a id="p100117"></a>Расход воздуха 200 куб. см/мин.
                              10
<a id="p100118"></a>    Шкала электрометра 16 х 10  .
<a id="p100119"></a>Объем вводимой пробы 1 мкл. Время удерживания флутриафола 2,28 мин.

##### <a id="p100120"></a>2.6.4 Обработка результатов анализа

<a id="p100121"></a>    Количественное  определение  проводят  методом  абсолютной  калибровки,
содержание флутриафола в пробе (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

                                  H  х C х V
                                   2
<a id="p100122"></a>                              X = ----------,
                                    H  х P
                                     1

    где:
    H  - высота (площадь) пика флутриафола в стандартном растворе, мм;
     1
    H  - высота (площадь) пика флутриафола в анализируемой пробе, мм;
     2
    V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;
    P - навеска анализируемого образца, г;
    C - концентрация флутриафола в стандартном растворе, мкг/мл.
<a id="p100123"></a>Содержание остаточных количеств флутриафола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2-х параллельных определений.
<a id="p100124"></a>Образцы, дающие пики большие чем стандартный раствор флутриафола 100 мкг/мл, разбавляют.


## 3. <a id="p100125"></a>Требования техники безопасности


<a id="p100126"></a>При проведении работы необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе в химических лабораториях, а также инструкции по эксплуатации жидкостного хроматографа и других используемых приборов.


## 4. <a id="p100127"></a>Контроль погрешности измерений


<a id="p100128"></a>Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости результатов измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями [МИ 2335-95](https://bukva.ai/docs/mi-2335-95). ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.


## 5. <a id="p100129"></a>Разработчики


<a id="p100130"></a>ВНИИ защиты растений.



<a id="p100131"></a>

---