---
title: "\"МУК 4.1.1848-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств мефенпир-диэтила и мефенпира в зерне и соломе зерновых колосовых культур методами газожидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии\""
number: "МУК 4.1.1848-04"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1848-04"
---

## "МУК 4.1.1848-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств мефенпир-диэтила и мефенпира в зерне и соломе зерновых колосовых культур методами газожидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии"

# "МУК 4.1.1848-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств мефенпир-диэтила и мефенпира в зерне и соломе зерновых колосовых культур методами газожидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии"

(утв. Минздравом России 05.03.2004)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 июля 2004 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

5 марта 2004 года


#### <a id="p100231"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ МЕФЕНПИР-ДИЭТИЛА**
**И МЕФЕНПИРА В ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР**
**МЕТОДАМИ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ И ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<div align="right">

<a id="p100004"></a>**МУК 4.1.1848-04**

</div>


<a id="p100002"></a>Дата введения
с 1 июля 2004 года

1. <a id="p100005"></a>Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
2. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.

<div align="center">

4. <a id="p100008"></a>Введены впервые.

</div>



## 1. <a id="p100009"></a>Вводная часть


<a id="p100010"></a>Фирма-производитель: ЗАО Фирма "Август" (Россия).
<a id="p100011"></a>Действующее вещество (антидот): мефенпир-диэтил.
<a id="p100012"></a>Диэтиловый эфир (RS)-1-(2,4-дихлорфенил)-5-метил-2-пиразолин-3,5-дикарбоновой кислоты (IUPAC).
<a id="p100013"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100014"></a>    Эмпирическая формула: C  H  Cl N O .
                           16 18  2 2 4
<a id="p100015"></a>    Молекулярная масса: 333,7.
<a id="p100016"></a>    Бесцветное кристаллическое вещество со слабым неспецифическим запахом.
<a id="p100017"></a>    Температура плавления: 50 - 52 °С.
<a id="p100018"></a>    Плотность при 20 °С: 1,31 кг/куб. дм.
                                      -3
<a id="p100019"></a>    Давление паров при 20 °С: 1,4 х 10   Па.
<a id="p100020"></a>    Растворимость  (в  г/л  растворителя)  при 20 °С: гексан - 35; толуол -
400; дихлорметан - 500; метанол - 400; ацетон - 500; этилацетат - 400; вода
- 0,02.
<a id="p100021"></a>    Коэффициент  распределения   в системе н-октанол/вода:  К   = 6783  при
                                                             ow
pH 6,3.
<a id="p100022"></a>    В  сухом  виде  вещество  стабильно при нормальных условиях; в кислых и
щелочных растворах гидролизуется.
<a id="p100023"></a>    Краткая токсикологическая характеристика:
<a id="p100024"></a>    Острая  пероральная  токсичность  (LD  )  для  крыс - более 5000 мг/кг;
                                         50
острая  дермальная  токсичность  (LD  ) для крыс - более 4000 мг/кг; острая
                                    50
ингаляционная  токсичность  (LC  )  для  крыс  -  более  1320 мг/л воздуха.
                               50
Мефенпир-диэтил  не  оказывает  раздражающего  действия на кожу и слизистую
оболочку глаз кролика.
<a id="p100025"></a>Гигиенические нормативы (ГН 1.2.1323-03) для мефенпир-диэтила в России: ПДК в воде водоемов - 0,0004 мг/куб. дм, ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 1,3 мг/куб. м, МДУ в зерне хлебных злаков составляет 0,05 мг/кг.
<a id="p100026"></a>Основной метаболит мефенпир-диэтила - мефенпир.
<a id="p100027"></a>1-(2,4-дихлорфенил)-5-метил-2-пиразолин-3,5-дикарбоновая кислота (IUPAC).
<a id="p100028"></a>Структурная формула (не приводится)
<a id="p100029"></a>    Эмпирическая формула: C  H  Cl N O .
                           12 10  2 2 4
<a id="p100030"></a>Молекулярная масса: 277,7.
<a id="p100031"></a>Бесцветное кристаллическое вещество без запаха.
<a id="p100032"></a>Температура плавления: 156,5 - 158 °С (с разл.).
<a id="p100033"></a>Другие физико-химические и токсикологические характеристики мефенпира отсутствуют.
<a id="p100034"></a>Гигиенические нормативы для мефенпира в России не установлены.
<a id="p100035"></a>Область применения препарата:
<a id="p100036"></a>Феноксапроп-Р-этил - послевсходовый гербицид системного действия из группы ингибиторов синтеза жирных кислот. В комбинации с антидотом - мефенпир-диэтилом используется для уничтожения однолетних злаков в посевах зерновых колосовых культур, в том числе ячменя, чувствительного к действию одного феноксапроп-Р-этила. В настоящее время препарат, содержащий в качестве действующего вещества феноксапроп-Р-этил (69 г/л), а в качестве антидота - мефенпир-диэтил (75 г/л), под торговым названием Ластик проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ на озимой и яровой пшенице и яровом ячмене в качестве послевсходового гербицида при норме расхода 0,6 - 1,2 л/га и однократной обработке за сезон.

<div align="center">

<a id="p100037"></a>Мефенпир-диэтил - лабильное вещество и в растениях быстро метаболизируется до достаточно стабильного соединения - мефенпира.

</div>



## 2. <a id="p100038"></a>Методика определения мефенпир-диэтила и мефенпира в зерне и соломе зерновых колосовых культур методами газожидкостной и высокоэффективной жидкостной хроматографии



### <a id="p100039"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100040"></a>2.1.1 Принцип методики

<a id="p100041"></a>Методика основана на определении мефенпир-диэтила методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) с детектором электронного захвата (ДЭЗ), мефенпира - методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в обращенно-фазовом режиме со спектрофотометрическим детектором после предварительного извлечения перечисленных компонентов водным ацетонитрилом с последующим концентрированием и очисткой экстракта в системах несмешивающихся растворителей и на колонках с сорбентами.
<a id="p100042"></a>Количественная обработка результатов анализа проводится методом абсолютной калибровки.

##### <a id="p100043"></a>2.1.2 Избирательность методики

<a id="p100044"></a>В предлагаемых условиях методика специфична в присутствии других пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания зерновых колосовых культур.

##### <a id="p100045"></a>2.1.3 Метрологическая характеристика метода


<div align="center">

<a id="p100046"></a>Таблица 1

</div>


<a id="p100047"></a>МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА (Р = 0,95, n = 20)


<table>
<colgroup><col width="14%"><col width="14%"><col width="22%"><col width="18%"><col width="19%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый объект</td><td>Предел обнаружения, мг/кг <a href="#p100056">&lt;*&gt;</a></td><td>Диапазон определяемой концентрации, мг/кг</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Отн. станд. отклонение, (сигма /х), % n</td><td>Доверит. интервал среднего, %</td></tr>
<tr><td colspan="6">Мефенпир-диэтил</td></tr>
<tr><td>Зерно</td><td>0,005</td><td>0,005 - 0,04</td><td>85,3</td><td>2,5</td><td>+/- 5,0</td></tr>
<tr><td>Солома</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,08</td><td>82,0</td><td>2,6</td><td>+/- 5,2</td></tr>
<tr><td colspan="6">Мефенпир</td></tr>
<tr><td>Зерно</td><td>0,005</td><td>0,005 - 0,05</td><td>80,3</td><td>2,1</td><td>+/- 4,1</td></tr>
<tr><td>Солома</td><td>0,01</td><td>0,01 - 0,1</td><td>78,7</td><td>2,8</td><td>+/- 5,9</td></tr>
</table>


<a id="p100055"></a>

---

<div align="right">

<a id="p100056"></a><*> При соотношении сигнал/шум, равном 5.

</div>


<div align="center">

<a id="p100057"></a>Таблица 2

</div>


<a id="p100058"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ МЕФЕНПИР-ДИЭТИЛА (МД)**
И МЕФЕНПИРА (М) В МОДЕЛЬНЫХ МАТРИЦАХ (n = 5)


<table>
<colgroup><col width="15%"><col width="28%"><col width="29%"><col width="28%"></colgroup>
<tr><td>Матрица</td><td>Внесено МД или М, мг/кг</td><td>Открыто МД или М, мг/кг</td><td>Доверительный интервал среднего, %</td></tr>
<tr><td colspan="4">Мефенпир-диэтил</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зерно</td><td>0,005</td><td>80,1</td><td>+/- 3,1</td></tr>
<tr><td>0,01</td><td>82,2</td><td>+/- 2,9</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>88,7</td><td>+/- 2,7</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>90,1</td><td>+/- 2,5</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Солома</td><td>0,01</td><td>78,3</td><td>+/- 4,0</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>80,2</td><td>+/- 3,9</td></tr>
<tr><td>0,04</td><td>83,8</td><td>+/- 3,7</td></tr>
<tr><td>0,08</td><td>85,7</td><td>+/- 3,4</td></tr>
<tr><td colspan="4">Мефенпир</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Зерно</td><td>0,005</td><td>78,0</td><td>+/- 4,9</td></tr>
<tr><td>0,01</td><td>79,1</td><td>+/- 4,0</td></tr>
<tr><td>0,025</td><td>79,7</td><td>+/- 3,8</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>84,2</td><td>+/- 3,2</td></tr>
<tr><td rowspan="4">Солома</td><td>0,01</td><td>74,0</td><td>+/- 5,4</td></tr>
<tr><td>0,02</td><td>76,7</td><td>+/- 5,0</td></tr>
<tr><td>0,05</td><td>81,6</td><td>+/- 4,4</td></tr>
<tr><td>0,1</td><td>82,4</td><td>+/- 4,1</td></tr>
</table>



### <a id="p100078"></a>2.2. Приборы, лабораторная посуда


<a id="p100079"></a>Газовый хроматограф "Shimadzu" (Япония) или любой аналогичный по техническим характеристикам, оборудованный детектором электронного захвата.
<a id="p100080"></a>Кварцевая капиллярная колонка длиной 30 м и внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой НР-5 (сополимер 5% фенилметил- и 95% диметилсилоксана), нанесенной на внутреннюю поверхность колонки. Толщина неподвижной фазы 0,25 мкм.
<a id="p100081"></a>Микрошприц для ГЖХ фирмы "Agilent Technologies" или любой аналогичный вместимостью 10 мм.
<a id="p100082"></a>Жидкостный хроматограф высокой эффективности фирмы "Agilent Technologies", модель 1100 (США) или любой аналогичный по техническим характеристикам, оборудованный вакуумным дегазатором, термостатом колонок, спектрофотометрическим детектором с измеряемой длиной волны и любой системой подачи подвижной фазы.
<a id="p100083"></a>Колонка аналитическая Zorbax SB C18 (США) (средний размер частиц 5 мкм) длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм или аналогичная, испытанная фирмой-изготовителем.
<a id="p100084"></a>Петлевой инжектор с дозировочной петлей вместимостью 20 куб. мм.
<a id="p100085"></a>Микрошприц для ВЭЖХ фирмы "Agilent Technologies" или любой аналогичный вместимостью 50 куб. мм.
<a id="p100086"></a>Прибор для получения особо чистой (деионизированной) воды "Водолей" или любой аналогичный по техническим характеристикам.
<a id="p100087"></a>Весы лабораторные GR-200 фирмы A&D, Япония, 2-го класса точности (зарегистрированы в Российском Государственном реестре средств измерений под N 18902-99) или любые аналогичные по метрологическим характеристикам.
<a id="p100088"></a>Ванна ультразвуковая FINNSONIC OY (Финляндия) или любая аналогичная по техническим характеристикам.
<a id="p100089"></a>Колбы мерные с притертыми или полиэтиленовыми пробками по [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) вместимостью 50, 100 и 1000 куб. см.
<a id="p100090"></a>Пипетки измерительные с расширенной градуировкой и полным сливом по [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) вместимостью 1, 2, 5 и 10 куб. см.
<a id="p100091"></a>Цилиндры мерные по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) вместимостью 50 и 500 куб. см.
<a id="p100092"></a>Колбы остродонные с пришлифованными пробками вместимостью 100 и 250 куб. см по ГОСТ 25336-82.
<a id="p100093"></a>Переход с боковым отводом по ГОСТ 8682-70.
<a id="p100094"></a>Воронки с фильтром Шотта N 3 по ГОСТ 8682-70.
<a id="p100095"></a>Воронки стеклянные по ГОСТ 8613-64.
<a id="p100096"></a>Стеклянная колонка для препаративной хроматографии длиной около 300 мм и внутренним диаметром около 12 мм.
<a id="p100097"></a>Стакан лабораторный типа ВН-50 вместимостью 50 куб. см.
<a id="p100098"></a>Колбы конические с пришлифованными пробками вместимостью 200 куб. см по ГОСТ 25336-82.
<a id="p100099"></a>Воронки делительные вместимостью 100 и 500 куб. см по ГОСТ 25336-82.
<a id="p100100"></a>Шкаф сушильный ШС-1/80 СПУ ПГИЖ 6819454.006 (ТУ 3443-010-00141798-01) или любой аналогичный, пригодный для поддержания температуры не менее 150 °С.
<a id="p100101"></a>Роторно-пленочный испаритель LABOROTA 4000 фирмы "Heidolph" (Германия) или аналогичный.
<a id="p100102"></a>Насос вакуумный водоструйный по ГОСТ 10696-75.
<a id="p100103"></a>Мельница электрическая лабораторная по ТУ 46-22-236-79 или аналогичная по техническим характеристикам.
<a id="p100104"></a>Прибор для перегонки жидкостей при атмосферном давлении.
<a id="p100105"></a>Источник чистого сжатого воздуха (баллон или безмасляный компрессор) или любого чистого инертного газа.
<a id="p100106"></a>Набор для фильтрации элюентов для ВЭЖХ фирмы "MILLIPOR" или аналогичный с гидрофильными фторопластовыми мембранами типа МФФКГ пористостью 0,45 мкм по ТУ 6-55-221-1323-93.
<a id="p100107"></a>Набор для фильтрации проб для ВЭЖХ фирмы "MILLIPOR" или аналогичный с капроновыми мембранами пористостью 0,2 мкм.
<a id="p100108"></a>РН-метр-иономер ЭКСПЕРТ-001 фирмы "ЭКОНИКС-ЭКСПЕРТ" (ТУ 4215-001-52722949) или любой аналогичный по техническим характеристикам.
<a id="p100109"></a>Электрод стеклянный комбинированный типа ЭСК-1060117 (ТУ 4215-004-35918409).

<div align="center">

<a id="p100110"></a>Стекловата, отмытая гексаном и высушенная при температуре 150 °С.

</div>



### <a id="p100111"></a>2.3. Реактивы и растворители


<a id="p100112"></a>Мефенпир-диэтил с содержанием основного вещества 99,7 мас. % - стандартный образец.
<a id="p100113"></a>Мефенпир с содержанием основного вещества 98,6 мас. % - стандартный образец.
<a id="p100114"></a>Ацетонитрил марки "осч" (ТУ 6-09-14-2167).
<a id="p100115"></a>Вода дистиллированная по ГОСТ 6709, деионизированная (удельная проводимость не более 0,12 мкS/см).
<a id="p100116"></a>Гексан марки "хч" по ТУ 6-09-3375-78.
<a id="p100117"></a>Гексан, сорт 1, "осч", производства НПК "Криохром".
<a id="p100118"></a>Железо (II) сернокислое марки "хч" по [ГОСТ 4148-78](https://bukva.ai/docs/gost-4148-78).
<a id="p100119"></a>Калия перманганат марки "хч" по ГОСТ 20490-75.
<a id="p100120"></a>Кальция хлорид марки "хч" по ГОСТ 4161-77.
<a id="p100121"></a>Кислота ортофосфорная марки "хч" по ГОСТ 6552-80.
<a id="p100122"></a>Кислота серная марки "хч" по ГОСТ 4204-77.
<a id="p100123"></a>Кислота хлористоводородная марки "хч" по ГОСТ 3118-77.
<a id="p100124"></a>Гидроксид натрия марки "хч" по ГОСТ 4328-77.
<a id="p100125"></a>Сульфат натрия безводный марки "хч" по [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76).
<a id="p100126"></a>Карбонат натрия марки "хч" по ГОСТ 83-63.
<a id="p100127"></a>Метанол марки "хч" по [ГОСТ 6995](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77).
<a id="p100128"></a>Этилацетат марки "хч" по [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76).
<a id="p100129"></a>Эфир диэтиловый медицинский по ГОСТ 6265-74.
<a id="p100130"></a>Азот сжатый баллонный марки "осч" по ГОСТ 9293-74.
<a id="p100131"></a>Оксид алюминия для хроматографии нейтральный со средним размером частиц 70 мкм.
<a id="p100132"></a>Силикагель для хроматографии фирмы Merck (grade 60, 70 - 230 mesh, 60 А).
<a id="p100133"></a>Элюент I для препаративной колоночной хроматографии: смесь этилацетата и гексана (3:97 по объему).
<a id="p100134"></a>Элюент II для препаративной колоночной хроматографии: смесь этилацетата и гексана (1:4 по объему).
<a id="p100135"></a>Элюент III для препаративной колоночной хроматографии: смесь этилацетата и метанола (7:3 по объему).

<div align="center">

<a id="p100136"></a>Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила, воды и ортофосфорной кислоты в объемном соотношении 49,5:50:0,5.

</div>



### <a id="p100137"></a>2.4. Отбор проб


<a id="p100138"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).

<div align="center">

<a id="p100139"></a>Пробы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при температуре не выше 4 °С не более 3 месяцев; перед анализом образцы размалывают на мельнице.

</div>



### <a id="p100140"></a>2.5. Подготовка к анализу



##### <a id="p100141"></a>2.5.1 Подготовка и очистка растворителей и реактивов

<a id="p100142"></a>Органические растворители перед началом работы очищают в соответствии с типовыми методиками. Гексан марки "хч" встряхивают в делительной воронке с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до прекращения визуально наблюдаемого окрашивания свежей порции кислоты. Затем гексан последовательно промывают водой, 2%-ным водным раствором гидроксида натрия, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.
<a id="p100143"></a>Гексан, сорт 1, "осч", используют без дополнительной очистки.
<a id="p100144"></a>Этилацетат встряхивают в делительной воронке с равным объемом 5%-ного раствора карбоната натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют над свежепрокаленным при 150 °С оксидом алюминия.
<a id="p100145"></a>Диэтиловый эфир (1 куб. дм) последовательно встряхивают в делительной воронке с 20 куб. см свежеприготовленного подкисленного раствора железного купороса (30 г сульфата железа и 1,54 г концентрированной серной кислоты в 55 куб. см воды), затем с 50 куб. см 0,5%-ного раствора перманганата калия, затем с 50 куб. см 5%-ного раствора гидроксида натрия и, наконец, с 50 куб. см воды, после чего сушат над хлористым кальцием и перегоняют над свежепрокаленным при 150 °С оксидом алюминия.
<a id="p100146"></a>Оксид алюминия для хроматографии очищают многократной промывкой водой, отжимают на фильтре Шотта, трижды промывают метанолом и высушивают при 140 °С в течение 15 часов. Силикагель для хроматографии трижды промывают метанолом на фильтре Шотта и высушивают при 140 °С в течение 15 часов.

##### <a id="p100147"></a>2.5.2 Приготовление подвижной фазы для ВЭЖХ (для определения мефенпира)

<a id="p100148"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 0,5 куб. см ортофосфорной кислоты, прибавляют 500 куб. см отфильтрованной дистиллированной деионизированной воды и доводят объем до метки ацетонитрилом. Содержимое колбы тщательно перемешивают.

##### <a id="p100149"></a>2.5.3 Кондиционирование хроматографической колонки для ВЭЖХ

<a id="p100150"></a>Колонку промывают 25 куб. см ацетонитрила, затем подвижной фазой в течение 25 минут при скорости подачи элюента 1 куб. см/мин. Включают детектор и продолжают прокачивать элюент до стабилизации нулевой линии.

##### <a id="p100151"></a>2.5.4 Кондиционирование хроматографической колонки для ГЖХ

<a id="p100152"></a>Новую хроматографическую колонку кондиционируют при температуре 250 °С и скорости газа-носителя 2,5 мл/мин. в течение 10 часов.

##### <a id="p100153"></a>2.5.5 Приготовление стандартных растворов

<a id="p100154"></a>Основной стандартный раствор мефенпир-диэтила с концентрацией 100 - 150 мкг/куб. см готовят растворением 10 - 15 мг стандартного образца мефенпир-диэтила с содержанием основного вещества 99,7 мас. % в гексане сорта 1, "осч", в мерной колбе вместимостью 100 куб. см. Раствор хранят в холодильнике при температуре не выше -12 °С не более месяца.
<a id="p100155"></a>Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,2 и 0,4 мкг/куб. см готовят из основного стандартного раствора мефенпир-диэтила соответствующим последовательным разбавлением гексаном. Растворы хранят в холодильнике не более 15 суток.
<a id="p100156"></a>Основной стандартный раствор мефенпира с концентрацией 100 - 150 мкг/куб. см готовят растворением 10 - 15 мг стандартного образца мефенпира с содержанием основного вещества 98,6 мас. % в ацетонитриле в мерной колбе вместимостью 100 куб. см. Раствор хранят в холодильнике при температуре не выше -12 °С не более месяца.
<a id="p100157"></a>Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/куб. см готовят из основного стандартного раствора мефенпира соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ [(п. 2.5.2)](#p100147). Растворы хранят в холодильнике не более 3 суток.

##### <a id="p100158"></a>2.5.6 Построение калибровочных графиков

<a id="p100159"></a>Для построения калибровочного графика зависимости площади хроматографического пика мефенпир-диэтила от его концентрации в растворе в инжектор хроматографа вводят по 1 мкл рабочего стандартного раствора мефенпир-диэтила с концентрацией 0,05; 0,1; 0,2 и 0,4 мкг/куб. см. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации вещества. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в относительных единицах от концентрации вещества в растворе в мкг/куб. см.
<a id="p100160"></a>Для построения калибровочного графика зависимости площади хроматографического пика мефенпира от его концентрации в растворе в инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного раствора мефенпира с концентрацией 0,05; 0,1; 0,25 и 0,5 мкг/куб. см. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений для каждой концентрации вещества. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в относительных единицах от концентрации вещества в растворе в мкг/куб. см.

##### <a id="p100161"></a>2.5.7 Подготовка препаративной колонки с оксидом алюминия для очистки сконцентрированного экстракта мефенпир-диэтила

<a id="p100162"></a>В нижнюю часть колонки помещают небольшой тампон из стекловаты, закрывают кран и приливают 10 куб. см гексана. Затем в колонку быстро заливают при помощи стеклянной воронки суспензию 5 г оксида алюминия в 20 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, после чего пропускают через колонку раствор 170 мг воды в 30 куб. см этилацетата со скоростью 1 - 2 капли в секунду, затем 10 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него 2 г безводного сульфата натрия. Колонку промывают 10 куб. см гексана, после чего она готова к работе.

##### <a id="p100163"></a>2.5.8 Проверка хроматографического поведения мефенпир-диэтила на колонке с оксидом алюминия

<a id="p100164"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см отбирают 0,05 куб. см стандартного раствора мефенпир-диэтила с концентрацией 100 - 150 мкг/куб. см, удаляют растворитель слабым потоком чистого сжатого воздуха или инертного газа, остаток количественно переносят тремя порциями по 1 куб. см гексана на подготовленную колонку. Промывают колонку 20 куб. см смеси этилацетат - гексан (3:97 по объему), затем 60 куб. см смеси этилацетат - гексан (1:4 по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 5 см каждая, упаривают досуха, растворяют в 2 куб. см гексана (сорт 1, "осч") и анализируют на содержание мефенпир-диэтила по [п. 2.7](#p100182).
<a id="p100165"></a>Рассчитывают содержание вещества в каждой фракции элюата, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
<a id="p100166"></a>Примечание: Хроматографический профиль мефенпир-диэтила может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.


##### <a id="p100167"></a>2.5.9 Подготовка препаративной колонки с силикагелем для очистки сконцентрированного экстракта мефенпира

<a id="p100168"></a>В нижнюю часть колонки помещают небольшой тампон из стекловаты, закрывают кран и приливают 10 куб. см этилацетата. Затем в колонку быстро заливают при помощи стеклянной воронки суспензию 5 г силикагеля в 20 куб. см этилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента, после чего пропускают через колонку 30 куб. см смеси этилацетат - метанол (1:1 по объему), затем 10 см этилацетата. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него 2 г безводного сульфата натрия. Колонку промывают 20 куб. см этилацетата, после чего она готова к работе.

##### <a id="p100169"></a>2.5.10 Проверка хроматографического поведения мефенпира на колонке с силикагелем

<a id="p100170"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см отбирают 0,05 куб. см стандартного раствора мефенпира с концентрацией 100 - 150 мкг/куб. см, удаляют растворитель слабым потоком чистого сжатого воздуха или инертного газа, остаток количественно переносят тремя порциями по 1 куб. см этилацетата на подготовленную колонку. Промывают колонку 20 куб. см этилацетата, затем 90 куб. см смеси этилацетат - метанол (7:3 по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 5 куб. см каждая, упаривают досуха, растворяют в 1 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ [(п. 2.6.2)](#p100175) и анализируют на содержание мефенпира по [п. 2.7](#p100182). Рассчитывают содержание вещества в каждой фракции элюата, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.

<div align="center">

<a id="p100171"></a>Примечание: Хроматографический профиль мефенпира может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

</div>



### <a id="p100172"></a>2.6. Описание определения



##### <a id="p100173"></a>2.6.1 Экстракция мефенпир-диэтила и мефенпира

<a id="p100174"></a>Навеску размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) помещают в коническую колбу, прибавляют 100 куб. см 80%-ного водного раствора ацетонитрила и помещают в ультразвуковую ванну на 3 минуты. Полученный экстракт переносят (декантируют) на фильтр Шотта, присоединенный через переходник к грушевидной колбе, и фильтруют при помощи водоструйного насоса. Остаток растительного материала в конической колбе повторно экстрагируют в ультразвуковой ванне в течение 3 минут, полученный экстракт фильтруют в ту же грушевидную колбу. Фильтрат выпаривают на роторно-пленочном испарителе при температуре не выше 45 °С до водной фазы объемом около 15 см.

##### <a id="p100175"></a>2.6.2 Выделение фракций, содержащих мефенпир-диэтил и мефенпир

<a id="p100176"></a>Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см, прибавляют 15 куб. см деионизированной воды и мефенпир-диэтил экстрагируют гексаном тремя порциями по 20 куб. см. Отдельно собирают водный и объединенный органический слой, причем органический слой (гексановая вытяжка) собирают в остродонную колбу, последовательно пропуская каждую его порцию через слой (около 3 г) безводного сульфата натрия.
<a id="p100177"></a>Водный слой подкисляют соляной кислотой до рН около 2, переносят в ту же делительную воронку, прибавляют 30 куб. см гексана и смесь интенсивно встряхивают в течение одной минуты. Органический слой отбрасывают. Содержащийся в водном слое мефенпир экстрагируют диэтиловым эфиром тремя порциями по 20 куб. см. Объединенный органический слой (эфирная вытяжка) собирают в отдельную остродонную колбу, последовательно пропуская каждую его порцию через слой (около 3 г) безводного сульфата натрия.

##### <a id="p100178"></a>2.6.3 Очистка сконцентрированной гексановой вытяжки на колонке с оксидом алюминия

<a id="p100179"></a>Объединенную гексановую вытяжку, содержащую мефенпир-диэтил, из [п. 2.6.2](#p100175), выпаривают практически досуха на роторно-пленочном испарителе при температуре не выше 45 °С. Остаток продувают досуха слабой струей сжатого воздуха или инертного газа. Сухой остаток растворяют при помощи ультразвуковой ванны в гексане и количественно переносят тремя порциями по 1 куб. см на подготовленную по [п. 2.5.7](#p100161) колонку с оксидом алюминия. Дают раствору стечь до верхнего края сорбента, колонку промывают 20 куб. см смеси этилацетат - гексан (3:97 по объему) и элюат отбрасывают. Мефенпир-диэтил элюируют 40 куб. см смеси этилацетат - гексан (1:4 по объему), элюат собирают в чистую остродонную колбу и выпаривают практически досуха на роторно-пленочном испарителе при температуре не выше 40 °С. Остаток продувают досуха слабой струей сжатого воздуха или инертного газа. Сухой остаток растворяют при помощи ультразвуковой ванны в 2 куб. см гексана (сорт 1, "осч") и анализируют на содержание мефенпир-диэтила по [п. 2.7.1](#p100183).

##### <a id="p100180"></a>2.6.4 Очистка сконцентрированной эфирной вытяжки на колонке с силикагелем

<div align="center">

<a id="p100181"></a>Объединенную эфирную вытяжку, содержащую мефенпир, из [п. 2.6.2](#p100175), выпаривают практически досуха на роторно-пленочном испарителе при температуре не выше 40 °С. Остаток продувают досуха слабой струей сжатого воздуха или инертного газа. Сухой остаток растворяют при помощи ультразвуковой ванны в этилацетате и количественно переносят тремя порциями по 1 куб. см на подготовленную по [п. 2.5.9](#p100167) колонку с силикагелем. Дают раствору стечь до верхнего края сорбента, колонку промывают 20 куб. см этилацетата и элюат отбрасывают, затем 60 куб. см смеси этилацетат - метанол (7:3 по объему), которые также отбрасывают. Мефенпир элюируют 70 куб. см метанола, элюат собирают в чистую остродонную колбу и выпаривают практически досуха на роторно-пленочном испарителе при температуре не выше 40 °С. Остаток продувают досуха слабой струей сжатого воздуха или инертного газа. Сухой остаток растворяют при помощи ультразвуковой ванны в 1 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ, приготовленной по [пункту 2.5.2](#p100147), и анализируют на содержание мефенпира по [п. 2.7.2](#p100205).

</div>



### <a id="p100182"></a>2.7. Условия хроматографирования



##### <a id="p100183"></a>2.7.1 Мефенпир-диэтил

<a id="p100184"></a>Газовый хроматограф "Shimadzu" (Япония), оборудованный детектором электронного захвата.
<a id="p100185"></a>Кварцевая капиллярная колонка длиной 30 м и внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой НР-5 (сополимер 5% фенилметил- и 95% диметилсилоксана), нанесенной на внутреннюю поверхность колонки. Толщина неподвижной фазы 0,25 мкм.
<a id="p100186"></a>Температура термостата колонки 235 °С, инжектора - 250 °С, детектора - 320 °С.
<a id="p100187"></a>Скорость потока газа-носителя (азота), куб. см/мин.:
<a id="p100188"></a>через колонку                                                           2,5
<a id="p100189"></a>на сброс (split = 50)                                                   125
<a id="p100190"></a>на поддув в детектор                                                    30.
<a id="p100191"></a>Объем вводимой пробы - 2 куб. мм.
<a id="p100192"></a>Время удерживания мефенпир-диэтила - 6,7 мин.
<a id="p100193"></a>Время записи одной хроматограммы - 30 мин.
<a id="p100194"></a>Чувствительность детектора: 5 пА на шкалу.
<a id="p100195"></a>Линейный диапазон детектирования: 0,1 - 0,8 нг.
<a id="p100196"></a>Альтернативная колонка: кварцевая капиллярная колонка длиной 10 м и внутренним диаметром 0,32 мм с неподвижной фазой SE-30 (полидиметилсилоксан), нанесенной на внутреннюю поверхность колонки. Толщина неподвижной фазы 0,6 мкм.
<a id="p100197"></a>Температура термостата колонки 220 °С, инжектора - 250 °С, детектора - 300 °С.
<a id="p100198"></a>Скорость потока газа-носителя (азота), куб. см/мин.:
<a id="p100199"></a>через колонку                                                           1,8
<a id="p100200"></a>на сброс (split = 50)                                                    90
<a id="p100201"></a>на поддув в детектор                                                    30.
<a id="p100202"></a>Объем вводимой пробы - 2 куб. мм.
<a id="p100203"></a>Время удерживания мефенпир-диэтила - 18,1 мин.
<a id="p100204"></a>Образцы, в которых площадь пика мефенпир-диэтила больше, чем в стандартном растворе с концентрацией 0,4 мкг/куб. см, разбавляют гексаном.

##### <a id="p100205"></a>2.7.2 Мефенпир

<a id="p100206"></a>Жидкостный хроматограф высокой эффективности фирмы "Agilent Technologies", модель 1100 (США).
<a id="p100207"></a>Колонка аналитическая Zorbax SB C18 (США) (средний размер частиц 5 мкм) длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,6 мм.
<a id="p100208"></a>Температура термостата колонки: 25 °С.
<a id="p100209"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - ортофосфорная кислота в объемном соотношении 49,5:50:0,5.
<a id="p100210"></a>Объемный расход элюента: 1 куб. см/мин.
<a id="p100211"></a>Рабочая длина волны детектора: 305 нм.
<a id="p100212"></a>Объем вводимой пробы: 50 куб. мм.
<a id="p100213"></a>Чувствительность: 0,002 ед. абсорбции на шкалу.
<a id="p100214"></a>Время удерживания мефенпира: 4,1 минуты.
<a id="p100215"></a>Линейный диапазон детектирования: 1 - 10 нг.
<a id="p100216"></a>Время записи одной хроматограммы: 30 мин.
<a id="p100217"></a>Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С16 Т (колонка длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм и зернением 7 мкм).

<div align="center">

<a id="p100218"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - вода - ортофосфорная кислота (60:39,9:0,1 по объему). Образцы, в которых площадь пика мефенпира больше, чем в стандартном растворе с концентрацией 0,5 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

</div>



### <a id="p100219"></a>2.8. Обработка результатов анализа


<a id="p100220"></a>    Содержание  мефенпир-диэтила  в  анализируемом  образце  (Х    , мг/кг)
                                                               мефэ
вычисляют методом абсолютной калибровки по формуле:

                                      S х С х V
                                       1
<a id="p100221"></a>                              Х     = ---------,
                               мефэ     S х М
                                         0

    где:
    С - концентрация стандартного раствора мефенпир-диэтила, мкг/куб. см.
    М - масса навески образца (для зерна - 10 г, для соломы - 5 г).
    S  - площадь пика мефенпир-диэтила  на   хроматограмме   анализируемого
     1
образца, отн. ед.;
    S - площадь   пика  мефенпир-диэтила  на   хроматограмме   стандартного
     0
раствора мефенпир-диэтила, отн. ед.
    V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см.
<a id="p100222"></a>    Содержание  мефенпира  в анализируемом образце (Х    , мг/кг) вычисляют
                                                     меф.
методом абсолютной калибровки по формуле:

                                        S  х С
                                         1
<a id="p100223"></a>                                Х     = ------,
                                 меф.   S  х М
                                         0

    где:
    С - концентрация стандартного раствора мефенпира, мкг/куб. см;
    М - масса навески образца (для зерна - 10 г, для соломы - 5 г);
    S   -  площадь  пика мефенпира на хроматограмме анализируемого образца,
     1
отн. ед.;
    S   -  площадь  пика  мефенпира  на хроматограмме стандартного раствора
     0
мефенпира, отн. ед.
<a id="p100224"></a>    При   расчете   содержания  мефенпира  в  эквиваленте  мефенпир-диэтила
полученное значение Х     умножают на 1,2.

<div align="center">

                     меф.

</div>



## 3. <a id="p100225"></a>Требования техники безопасности


<div align="center">

<a id="p100226"></a>Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.

</div>



## 4. <a id="p100227"></a>Разработчики


<a id="p100228"></a>ЗАО Фирма "Август".
<a id="p100229"></a>ВНИИ фитопатологии.



<a id="p100230"></a>

---