--- title: "\"МУК 4.1.1837-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств циперметрина в семенах и масле рапса, подсолнечника и сои методом газожидкостной хроматографии\"" number: "МУК 4.1.1837-04" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1837-04" --- ## "МУК 4.1.1837-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств циперметрина в семенах и масле рапса, подсолнечника и сои методом газожидкостной хроматографии" # "МУК 4.1.1837-04. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств циперметрина в семенах и масле рапса, подсолнечника и сои методом газожидкостной хроматографии" (утв. Минздравом России 13.02.2004) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 1 мая 2004 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
13 февраля 2004 года #### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЦИПЕРМЕТРИНА** **В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ РАПСА, ПОДСОЛНЕЧНИКА И СОИ** **МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**
**МУК 4.1.1837-04**
Дата введения
с 1 мая 2004 года 1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана при участии специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко.
4. Введены впервые.
## 1. Вводная часть Торговое наименование: Шарней. Фирма-производитель: ЗАО "Фирма "Август". Действующее вещество: циперметрин (смесь двух цис- и двух трансизомеров). Структурная формула (не приводится). RS-альфа-циано-3-феноксибензил (IRS, 3RS, 1SR, 3RS)-3-(2,2-дихлорвинил)-2,2-метилциклопропанкарбосилат. Эмпирическая формула: C H Cl N O . 22 19 2 1 3 Молекулярная масса: 416,3. Физическое состояние: вязкая желтая жидкость. Растворимость в воде: 0,004 мг/л. Растворимость в органических растворителях (г/л, 20 °С): ацетон, хлороформ, циклогексанон, ксилол > 450, этанол - 337, гексан - 103. Стабильность: термически стабилен до 220 °С. Острая пероральная токсичность для крыс LD 250 - 4150 мг/кг; острая 50 дермальная токсичность для крыс LD > 4920 мг/кг; острая ингаляционная 50 токсичность для крыс LD 2,5 мг/л воздуха. 50 Гигиенические нормативы: рапс, подсолнечник - 0,1 мг/кг, соя - 0,01 мг/кг; масло рапса, сои - 0,1 мг/кг.
Область применения: контактно-кишечный инсектицид широкого спектра действия из группы синтетических пиретроидов.
## 2. Методика определения циперметрина в семенах и масле рапса, подсолнечника и сои методом газожидкостной хроматографии ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принципы метода Методика основана на определении циперметрина с помощью жидкостной хроматографии при использовании электронно-захватного детектора после экстракции циперметрина органическим растворителем, очистки экстракта перераспределением действующего вещества между несмешивающимися фазами, а также на колонке с флорисилом. ##### 2.1.2 Избирательность метода В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии других пестицидов, применяемых при возделывании зерновых и масличных культур. ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода
Метрологическая характеристика метода представлена в табл. 1 и [2](#p100042).
Таблица 1
**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ И СТАТИСТИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ** (ро = 0,95, n = 20) | Анализируемый объект | Предел обнаружения, мг/кг | Диапазон определяемых концентраций, мг/кг | Среднее значение определения, % | Стандартное отклонение | Доверительный интервал среднего результата, +/- % | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Семена рапса | 0,05 | 0,05 - 1,00 | 85,9 | 11,08 | 4,86 | | Семена подсолнечника | 0,05 | 0,05 - 1,00 | 81,2 | 6,88 | 3,02 | | Семена сои | 0,005 | 0,005 - 0,100 | 85,3 | 9,04 | 3,96 | | Масло рапса | 0,05 | 0,05 - 1,00 | 84,0 | 12,21 | 5,35 | | Масло подсолнечника | 0,05 | 0,05 - 1,00 | 87,6 | 9,60 | 4,21 | | Масло сои | 0,05 | 0,05 - 1,00 | 93,9 | 11,46 | 5,02 |
Таблица 2
**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИПЕРМЕТРИНА В СЕМЕНАХ** **И МАСЛЕ РАПСА, ПОДСОЛНЕЧНИКА И СОИ** | Объект | Добавлено, мг/кг | Обнаружено, мг/кг | Доверительный интервал, +/- (ро = 0,95, n = 5) | Полнота определения, % | | --- | --- | --- | --- | --- | | Семена рапса | 0,050 0,100 0,200 1,000 | 0,040 0,099 0,158 0,853 | 0,0028 0,0107 0,0071 0,1613 | 80,4 99,0 78,8 85,3 | | Семена подсолнечника | 0,050 0,100 0,200 1,000 | 0,044 0,080 0,153 0,800 | 0,0037 0,0049 0,0118 0,0839 | 88,0 80,2 76,6 80,0 | | Семена сои | 0,005 0,010 0,020 0,100 | 0,004 0,009 0,016 0,088 | 0,0005 0,0004 0,0028 0,0121 | 86,4 90,0 80,0 87,6 | | Масло рапса | 0,050 0,100 0,200 1,000 | 0,041 0,100 0,151 0,793 | 0,0032 0,0138 0,0164 0,0733 | 82,0 100,0 75,5 79,3 | | Масло подсолнечника | 0,050 0,100 0,200 1,000 | 0,047 0,080 0,188 0,833 | 0,0032 0,0055 0,0087 0,1531 | 94,0 80,0 94,0 83,3 | | Масло сои | 0,050 0,100 0,200 1,000 | 0,049 0,095 0,207 0,799 | 0,0013 0,0113 0,0291 0,0293 | 98,0 95,2 102,0 79,9 | ### 2.2. Реактивы, материалы и оборудование ##### 2.2.1 Реактивы и материалы Циперметрин аналитический (94,2 мас. %). Ацетонитрил, осч, "Криохром", Санкт-Петербург. Ацетон, осч. Криохром", Санкт-Петербург. Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72. н-Гексан, хч, ТУ 6-09-4521-77. Натрия сульфат, хч, свежепрокаленный, [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76). Натрия хлорид, хч, ГОСТ 4233-77. Флорисил, "Sigma", 60 - 100 меш. Этилацетат, [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76). Азот газообразный особой чистоты, ТУ-6-16-40-14-88. Гелий газообразный особой чистоты. Бумага фильтровальная, ТУ 6091678-86. Вата силанизированная, стеклянная, осч, Serva. ##### 2.2.2 Приборы, аппаратура и посуда Газовые хроматографы "НР 5890 series 2 plus" и "Кристалл 2000М" или аналогичный с электронно-захватным детектором. Колонка капиллярная НР-1 30 м х 0,53 мм х 0,88 мкм или ZB-1 30 м х 0,32 мм х 0,50 мкм. Микрошприц МШ-10, ТУ-833-106, или аналогичный. Алонж прямой с отводом для вакуума, шлиф 14/23 - 14/23, кат. N 29300, фирма "БиоХимМак СТ". Вакуумный растворный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-76, или аналогичный. Весы аналитические ВЛР-200 или аналогичные, ГОСТ 19401-74. Весы технические ВЛКТ-500 или аналогичные, ГОСТ 2404-80. Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75. Воронки для фильтрования со стеклянным пористым фильтром, ГОСТ 25336-82. Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 25336-82Е. Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73. Колбы конические, плоскодонные на 250 мл, ГОСТ 9737-70. Колбы мерные на 50 и 100 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Концентраторы грушевидные и круглодонные объемом 100, 250, 500 мл, КТУ-100-14119. Пипетки мерные на 1,0; 2,0; 5 мл, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74). Пробирки мерные с притертыми пробками, КШ 14/23, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Цилиндры мерные на 50, 100, 250 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). ### 2.3. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (N 2051-79 от 21.08.79 г.). Отобранные пробы семян подсушивают до стандартной влажности. Семена и масло хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в темноте при комнатной температуре. ### 2.4. Подготовка к определению ##### 2.4.1 Подготовка растворителей Очистку растворителей осуществляют общепринятыми методами. ##### 2.4.2 Приготовление стандартных растворов Берут точную навеску циперметрина и растворяют в ацетоне таким образом, чтобы получить стандартный раствор с концентрацией 1 мг/мл. Стандартный раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 6 месяцев. Из стандартного раствора методом последовательного разбавления по объему готовят рабочие стандартные растворы 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1; 2; 10 мкг/мл в ацетоне для внесения в образцы семян и масла, и 0,25; 0,5; 1; 5 мкг/мл в гексане для оценки полноты извлечения циперметрина. Для построения калибровочного графика готовят растворы циперметрина в гексане концентрацией 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 мкг/мл. Эти стандартные растворы можно использовать в течение 7 дней при хранении в холодильнике. ##### 2.4.3 Кондиционирование колонки хроматографа Капиллярную колонку НР-1 или аналогичную ей устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и кондиционируют в токе гелия (20 мл/мин.) при температуре 280 °С в течение 6 часов. ##### 2.4.4 Построение калибровочного графика Для построения калибровочного графика снимают хроматограммы стандартных растворов, вводя в инжектор хроматографа последовательно 5 раз по 2 мкл растворов циперметрина в гексане концентрацией 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5 мкг/мл. С помощью интегратора хроматографа вычисляют площади пиков всех изомеров циперметрина, рассчитывают среднее значение площади для каждой концентрации и строят график зависимости площади пиков от концентрации циперметрина. ##### 2.4.5 Кондиционирование хроматографических колонок для очистки экстрактов образцов Стеклянную колонку последовательно заполняют силанизированной стеклянной ватой, 10 г флорисила и 1,0 г сульфата натрия. Колонку устанавливают на алонж с отводом для вакуума, промывают 20 мл смеси гексанэтилацетат (9:1) и 40 мл гексана. Промывку проводят под вакуумом непосредственно перед очисткой экстрактов образцов со скоростью 1 мл/мин., не допуская высыхания поверхности адсорбента. Элюат отбрасывают. ##### 2.4.6 Проверка хроматографического поведения циперметрина на колонке с флорисилом На кондиционированную колонку наносят 0,5 мкг циперметрина в 1 мл гексана. Колонку промывают 10 мл гексана, затем 15 мл смеси гексанэтилацетат (9:1) и элюат отбрасывают. Затем циперметрин элюируют последовательно десятью 2 мл порциями смеси гексанэтилацетат (9:1). Каждую фракцию упаривают отдельно, после чего сухой остаток растворяют в 1 мл гексана и аликвоту 2 мкл вводят в хроматограф. Рассчитывают содержание циперметрина в каждой фракции и определяют объем элюента, необходимый для наиболее полного элюирования вещества с колонки. Для данной методики он равен 12 мл смеси гексанэтилацетат (9:1). ### 2.5. Описание методики ##### 2.5.1 Семена рапса, подсолнечника и сои Измельченную пробу семян массой 10 г помещают в коническую колбу (объемом 250 мл), добавляют 100 мл 80%-ного водного раствора ацетонитрила и встряхивают в течение 30 минут (для сои - 45 минут). Фильтруют через стеклянный пористый фильтр в концентратор (объемом 500 мл). К остатку в конической колбе приливают 50 мл 80%-ного водного ацетонитрила и вновь встряхивают 30 минут. Фильтруют через тот же фильтр, перенеся все количество растительного материала на фильтр. Коническую колбу и осадок на фильтре споласкивают два раза по 20 мл 80%-ного водного ацетонитрила. Объединенный экстракт упаривают на роторном вакуумном испарителе при 40 °С до водного остатка. Водный остаток переносят в делительную воронку (объемом 250 мл). Концентратор обмывают два раза 15 мл 10%-ного водного раствора хлорида натрия. Экстракцию циперметрина из водного раствора проводят гексаном последовательно двумя порциями по 30 мл и одной - 20 мл. После полного разделения фаз водный (нижний) слой сливают в тот же концентратор, а верхний собирают в концентратор (объемом 100 мл) через безводный сульфат натрия (5 г помещают в воронку со стеклянным пористым фильтром), который промывают 5 мл гексана. Объединенный гексановый экстракт упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Сухой остаток растворяют в 4 мл гексана. Аликвоту объемом 2 мл наносят на одну кондиционированную колонку с флорисилом. Колонку промывают 10 мл гексана, затем 15 мл смеси гексанэтилацетат (9:1) и элюаты отбрасывают. Затем циперметрин элюируют 12 мл смеси гексанэтилацетат (9:1) со скоростью 1 мл/мин. Элюат упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 40 °С, растворяют в 2 мл гексана (или, в зависимости от содержания циперметрина, в другом объеме гексана) и 2 мкл вводят в хроматограф. Для образцов семян сои с низким содержанием циперметрина (< МДУ), проводят очистку каждой половины экстракта, объединяют их перед упариванием и затем растворяют в 1 мл гексана. ##### 2.5.2 Масло рапса, подсолнечника и сои Навеску масла массой 5 г помещают в делительную воронку объемом 250 мл и растворяют в 50 мл гексана. Затем приливают 50 мл ацетонитрила. Встряхивают в течение 2 мин. Ацетонитрильный экстракт (нижний слой) собирают через безводный сульфат натрия в концентратор (объемом 250 мл). Экстракцию ацетонитрилом повторяют дважды тем же количеством растворителя. Объединенный экстракт упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 40 °С. Упаренную пробу растворяют в 4 мл гексана, разделяют ее после растворения пополам и наносят на подготовленную колонку с флорисилом. Промывают ее 10 мл гексана, затем 15 мл смеси гексан - этилацетат (9:1). Элюат отбрасывают. Циперметрин элюируют 12 мл смеси гексан - этилацетат (9:1) со скоростью 1 мл/мин. Элюат упаривают досуха на роторном вакуумном испарителе при 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 мл гексана (или, в зависимости от содержания циперметрина, в другом объеме гексана) и аликвоту 1 мкл хроматографируют. ### 2.6. Условия хроматографирования Хроматограф "HP 5890 series 2 Plus" с электронно-захватным детектором (ЭЗД). Капиллярная колонка - НР-1 30 м х 0,53 мм х 0,88 мкм. Расход газов: азот - 57,8 мл/мин.; газ-носитель гелий - 2,5 мл/мин. (30 psi). Режим без деления потока. Температурный режим: детектор - 320 °С, инжектора - 270 °С, термостат колонки - 260 °С 16 мин., далее 60 °С/мин. до 280 °С, выдержка 19,67 мин. Объем вводимой пробы 1 - 2 мкл. Время удерживания трех пиков изомеров циперметрина: 13,25; 13,59; 13,95 мин. (Cis-I, Trans-III, Cis-II + Trans-IV соответственно). Линейный диапазон детектирования 0,025 - 0,5 нг. Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь суммы трех пиков. Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь суммы трех пиков. ##### 2.6.1 Возможность использования другого газового хроматографа и колонки Удовлетворительные результаты также дает использование газового хроматографа "Кристалл 2000М" с электронно-захватным детектором (ЭЗД) и хроматографической капиллярной колонки ZB-1 30 м х 0,32 мм х 0,50 мкм при следующих условиях хроматографирования: Температурный режим: детектор - 320 °С, инжектора - 270 °С, термостат колонки - 260 °С 16 мин., далее 60 °С/мин. до 280 °С, выдержка 19 мин.; расход газа-носителя 1 - 2,96 мл/мин. (скорость - 40 см/с), сброс газа 2 - 20 мл/мин. Объем вводимой пробы 2 мкл. Время удерживания трех пиков изомеров циперметрина: 13,50; 14,20; 14,47 мин. (Cis-I, Trans-III, Cis-II + Trans-IV соответственно). Линейный диапазон детектирования 0,05 - 0,5 нг. ### 2.7. Обработка результатов анализа Содержание циперметрина рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: S х С х V 1 ст С = ------------- х Р, S х m х 100 ст С - содержание циперметрина в анализируемом объеме (мг/кг); S - сумма площадей пиков 4-х изомеров циперметрина анализируемого 1 образца (отн. ед.); S - сумма площадей пиков 4-х изомеров циперметрина стандарта (отн. ст ед.); С - концентрация стандартного раствора циперметрина (мкг/мл); ст V - объем экстракта (мл); m - масса анализируемого образца (г);
Р - содержание циперметрина в аналитическом стандарте (%).
## 3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.
## 4. Разработчики Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии. ---