МУК 4.1.1812-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств толилфлуанида в воде, почве, землянике, огурцах, томатах, яблоках и винограде газохроматографическим методом

(утв. Минздравом России 18.12.2003)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ТОЛИЛФЛУАНИДА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕМЛЯНИКЕ, ОГУРЦАХ, ТОМАТАХ, ЯБЛОКАХ И ВИНОГРАДЕ ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

1. Подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (проф. Т.В. Юдина), Московской сельскохозяйственной академией им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин) при участии Департамента госсанэпиднадзора Минздрава России (гл. специалист А.П. Веселов), под редакцией член-корр. РАМН В.В. Ракитского.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Минздраве России (прот. № 20 от 2 декабря 2003 г.).

3. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации — Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 18 декабря 2003 г.

4. Введены впервые.

1. Вводная часть

Фирма-производитель: Байер АГ (Германия).

Торговое название: ЭУПАРЕН МУЛЬТИ.

Название действующего вещества по номенклатуре ИСО: толилфлуанид.

Название действующего вещества по номенклатуре ИЮПАК: N,N-диметил-N-дихлорфторметилтио-N-п-толилсульфамид.

Структурная формула (не приводится).

    Эмпирическая формула: C  H  Cl FN O S .
                           10 13  2  2 2 2

Молекулярная масса: 347,2.

Бесцветное кристаллическое вещество.

Температура плавления: 95 — 97 °С. -7

    Давление паров при 45 °С: 1,3 х 10   Па.
    Растворимость  (г/л) при 25 °С: вода - 4, метанол - 46, бензол

• 570, ксилол — 230.

Стабильность к гидролизу (22 °С): DT = 12 дней (рН 4), 29 50 часов (рН 7), менее 10 минут (рН 9).

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 5000 мг/кг, 50 для мышей — 1000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD ) для 50 крыс — 5000 мг/кг. СК для рыб 0,1 — 1,0 мг/л (96 час). 50

Толилфлуанид нетоксичен для пчел, птиц и диких животных.

Гигиенические нормативы: ОДК в почве — 0,25 мг/кг; ПДК в воде водоемов — 0,0005 мг/куб. дм; ВМДУ в огурцах, томатах, яблоках и землянике — 1,0 мг/кг, в винограде — 0,1 мг/кг.

Область применения препарата

Толилфлуанид — фунгицид защитного действия, используемый для борьбы с паршой яблони, а также против заболеваний, вызываемых Botrytis на землянике, смородине, овощных и декоративных культурах. Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Эупарен Мульти, ВДГ (500 г толилфлуанида в 1 кг препарата) в качестве средства борьбы с возбудителями парши и мучнистой росы на яблоне, серой гнили и белой пятнистости на землянике и винограде, а также огурцах и томатах защищенного грунта с нормой расхода препарата 1,5 — 3 кг/га при одно-, четырехкратной обработке за сезон.

2. Методика определения остаточных количеств толилфлуанида в воде, почве, землянике, огурцах, томатах, яблоках и винограде газохроматографическим методом

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Метод основан на газохроматографическом определении толилфлуанида с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов (или с электронозахватным детектором) на неподвижной фазе OV-17 после экстракции его из воды хлористым метиленом, из почвы водным ацетоном, из растительного материала ацетоном, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2 Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании земляники, огурцов и томатов.

2.1.3 Метрологическая характеристика метода

Анализируемый	Метрологические параметры; Р = 0,95, n = 20
объект	Предел обнаружения, мг/куб. дм, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение, S, %	Относительное отклонение, %	Доверительный интервал среднего, %
Вода	0,0005	0,0005 — 0,005	94,6	3,4	1,5	+/- 3,2
Почва	0,02	0,02 — 0,2	86,5	3,3	1,5	+/- 3,0
Земляника	0,05	0,05 — 0,5	90,3	2,5	1,1	+/- 2,3
Огурцы	0,05	0,05 — 0,5	88,2	6,5	2,9	+/- 6,1
Томаты	0,05	0,05 — 0,5	88,0	5,8	2,6	+/- 5,4
Виноград	0,05	0,05 — 0,5	85,4	4,3	1,9	+/- 4,0
Яблоки	0,05	0,05 — 0,5	83,2	4,1	1,8	+/- 3,8

2.2. Реактивы, растворы и материалы

Толилфлуанид с содержанием д.в. 99,0% (Байер АГ, Германия).

Азот газообразный, о.с.ч., ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Калия перманганат, ГОСТ 20490-75.

Калий углекислый, х.ч., ГОСТ 4221-76.

Кальция хлорид, ч., ГОСТ 4161-77.

Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77.

Метилен хлористый, ГОСТ 12794-80.

Натрия гидроксид, х.ч., ГОСТ 4328-77.

Натрий двууглекислый, х.ч., ГОСТ 83-79.

Насадки для колонки Инертон-супер с 3% OV-17 (0,16 — 0,20 мм), Хемапол, Чехия.

Насадки для колонки Хроматон N-AW с 5% SE-30 (0,16 — 0,20 мм), Хемапол, Чехия.

Натрия сульфат безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76.

Этилацетат, ГОСТ 22300-76.

Элюент для колоночной хроматографии: смесь гексан — этилацетат, 90:10, по объему.

Вата хлопковая.

Силикагель для адсорбционной хроматографии (Вельм, Германия) I степени активности или силикагель КСК (60 — 100 меш).

Стекловата.

Целит 535 (2 — 15 мкм) (Серва, Германия) или аналогичный.

Фильтры бумажные, синяя лента, ТУ 6-09-1678.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Баня водяная, ТУ 46-22-603-75.

Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74.

Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.

Воронка Бюхнера, ГОСТ 0147-73.

Воронки делительные вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73.

Газовый хроматограф с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов «Цвет-560» или аналогичный.

Гомогенизатор, МРТУ 42-1505-63, или аналогичный.

Колонка хроматографическая стеклянная, длина 2 м, внутренний диаметр 2 — 3 см.

Колба Бунзена, ГОСТ 5614-75.

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 9737-70.

Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные вместимостью 25, 50 и 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы грушевидные вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф по ТУ 64-1-2850.

Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74Е.

Прибор для перегонки при атмосферном давлении.

Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75.

Ротационный испаритель тип ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Сито с диаметром отверстий 1 мм.

Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 1770-74.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы почвы и растительного материала хранят в стеклянной таре в холодильнике не более суток. Для длительного хранения пробы почвы доводят до воздушно-сухого состояния и хранят в холодильнике; пробы земляники, огурцов, томатов, яблок и винограда хранят до анализа в морозильной камере при температуре -18 °С. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 °С в течение 3 дней, при температуре -18 °С в течение месяца.

Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, а растительный материал измельчают.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем гексан и хлористый метилен последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего первый сушат над гидроксидом натрия и второй над поташом и перегоняют.

Этилацетат промывают равным объемом 5%-ного раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

    Ацетон  перегоняют  над  перманганатом калия и поташом (на 1 л
ацетона 10 г KMnO  и 2 г К СО ).
                 4        2  3

2.5.2 Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3% OV-17 на Инертоне — супер) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 °С в течение 8 — 10 часов.

2.5.3 Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор толилфлуанида с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,0% д.в., в этилацетате в мерной колбе на 100 мл. Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора толилфлуанида разбавлением соответствующих аликвот раствора гексаном. Все растворы хранят в холодильнике не более трех месяцев.

При изучении полноты открывания толилфлуанида в модельных матрицах используются ацетоновые растворы вещества.

2.5.4 Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора толилфлуанида с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации толилфлуанида в растворе в мкг/мл.

2.5.5 Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 0,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и приливают около 10 мл гексана. Затем в колонку вносят 2 г силикагеля в виде суспензии в гексане. После того, как силикагель осядет, открывают кран и растворитель медленно спускают до поверхности сорбента. Колонку промывают 20 мл гексана, после чего она готова к работе.

2.6. Описание определения

2.6.1 Экстракция толилфлуанида

2.6.1.1. Вода. 250 мл предварительно отфильтрованной воды трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 30 мл. Объединенные экстракты пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают на роторном вакуумном испарителе досуха при температуре 30 °С. Остаток растворяют в 1,25 мл гексана и анализируют на содержание толилфлуанида по п. 2.7.

2.6.1.2. Земляника, огурцы, томаты, яблоки, виноград. К навеске (50 г) измельченного растительного материала добавляют 100 мл ацетона и гомогенизируют 3 минуты при 10000 об./мин. К экстракту добавляют 2 г целита и фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу на 500 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон — вода (7:3, по объему) дважды. Объединенные экстракты упаривают на роторном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до водной фазы. К водной фазе добавляют дистиллированную воду до объема 100 мл, отбирают аликвоту раствора (40 мл), эквивалентную 20 г ткани.

2.6.1.3. Почва. Навеску (50 г) подготовленной почвы помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл смеси ацетон — вода (7:3, по объему) и перемешивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Почву повторно экстрагируют 100 мл смеси ацетон — вода (7:3) при встряхивании в течение 30 минут, и суспензию фильтруют. Осадок на фильтре промывают 50 мл экстрагента. Объединенные экстракты упаривают на роторном вакуумном испарителе при температуре бани не выше 30 °С до водного остатка (объем 70 — 80 мл).

2.6.2 Очистка экстракта

Аликвоту водной фазы из 2.6.1.2 и водный остаток из 2.6.1.3 переносят в делительную воронку вместимостью 100 — 200 мл и дважды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 30 мл при энергичном встряхивании в течение 1 минуты. Объединенный дихлорметановый экстракт фильтруют через небольшой слой хлопковой ваты для удаления следов воды, переносят в грушевидную колбу и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С.

2.6.3 Очистка на колонке с силикагелем

Остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.2 экстрактов растительного материала и почвы, количественно переносят в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5) тремя 1-мл порциями гексана. Промывают колонку 30 мл гексана, которые отбрасывают. Толилфлуанид элюируют 50 мл смеси гексан — этилацетат (9:1, по объему), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Полученный раствор упаривают на роторном вакуумном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток растворяют в 10 мл гексана и анализируют по п. 2.7.

2.7. Условия хроматографирования

    Газовый   хроматограф   "Цвет-560"   с  детектором  постоянной
скорости  рекомбинации  ионов с пределом детектирования по Линдану

               -14

не выше 1,6 х 10 г/куб. см или газовый хроматограф «Tracor 63»

570" (США) с детектором по захвату электронов (Ni  ).
                                   10               -9
    Показания электрометра - 8 х 10   Ом (или 1 х 10   А).

Скорость движения ленты самописца — 25,4 см/час.

Колонка стеклянная, спиральная 2000 х 2 мм; неподвижная фаза — 3% OV-17 на Инертон-супер (0,16 — 0,20 мм).

Температура детектора 300 °С, инжектора 280 °С, термостата колонки 240 °С.

Скорость потока газа-носителя (азота) — 36 мл/мин.

Объем вводимой пробы — 2 мкл.

Время удерживания толилфлуанида — 4 мин. 30 сек.

Предел детектирования — 0,1 нг.

Линейный диапазон детектирования — 0,1 — 2,0 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют.

Альтернативная фаза: 5% SE-30 на Хроматоне N-AW (0,16 — 0,20 мм); колонка стеклянная 2000 х 2 мм; условия хроматографирования те же.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание толилфлуанида рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                          Н  х А х V
                           1

Х = ----------, Н х m 0

где:
Х - содержание толилфлуанида в пробе, мг/кг или мг/куб. дм;
Н  - высота пика образца, мм;
 1
Н  - высота пика стандарта, мм;
 0
А - концентрация стандартного раствора толилфлуанида, мкг/мл;
V  - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,

мл; m — масса или объем анализируемого образца или его части, г или мл (для растительного материала — 20 г).

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

5. Разработчики

Дубовая Л.В., науч. сотр.; Талалакина Т.Н., науч. сотр.; Макеев А.М., вед. науч. сотр., канд. биол. наук; Чкаников Д.И., профессор, доктор биол. наук.

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.

---