МУК 4.1.1795А-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Определение аверсектина С (по авермектину В1А) в атмосферном воздухе населенных мест методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания

(утв. Минздравом России 11.12.2003)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АВЕРСЕКТИНА С (ПО АВЕРМЕКТИНУ В1а) В АТМОСФЕРНОМ ВОЗДУХЕ НАСЕЛЕННЫХ МЕСТ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

1. Подготовлены Российским государственным медицинским университетом (Е.Б. Гугля).

2. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации — Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации Г.Г. Онищенко 11 декабря 2003 г. и введены в действие с 1 марта 2004 г.

3. Введены впервые.

    Настоящие   методические   указания   устанавливают   методику
количественного  химического анализа воздуха для определения в нем
авермектина  В   (10Е,14Т,16Е,2Z)-(1R,4S,S',6S,6'R,8R,12S,20R,21R,

          1а

24S)-6'-[(S)]-sec-бутил]-21,24-гидрокси-S',11,13,22-тетраметил-2- оксо-3,7,19-триоксатетрацикло=[16,61]-4,8О,22,24-пентакоза-0,14, 16,22-тетраен-6-спиро-2'(5',6'-дигидро-2Н-пиран)-12-ил-2,6- дидеокси-4-2-(2,60-дидеокси-3-0-метил-альфа-1-арабино=

гексапиранозил)-3=0-метил-альфа-арабиногекса-пиранозида)         в
диапазоне   концентраций    0,001   -   0,02  мг/куб. м    методом

высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Структурная формула (не приводится).

Авермектин В — один из восьми компонентов аверсектина С, 1а противопаразитарного препарата, представляющего собой смесь близких в химическом отношении авермектинов — природных 16-членных

макроциклических  лактонов,  продуктов  жизнедеятельности культуры
Streptomycis  avermitilis  (табл.  1).  Компоненты  А   и В  имеют
                                                     1     1

двойную связь в положении 22 — 23 (см. рисунок — не приводится), у

компонентов А  и В  эта связь восстановлена. Содержание компонента
             2    2
В   в смеси составляет не менее 40%.

1а

Таблица 1

СТРОЕНИЕ АВЕРМЕКТИНОВ

Регистрационный номер по САS 73989-17-0.

Аверсектин С — порошок белого или желтовато-белого цвета, легко растворим в хлорированных углеводородах, ацетоне, бензоле, растворим в низших спиртах, практически не растворим в воде, петролейном эфире. Температуры плавления авермектинов (с разложением) составляют около 150 °С.

Агрегатное состояние в воздухе — аэрозоль.

    Аверсектин   С   обладает   общетоксическим  действием.  Класс
опасности    -   первый.   Предельно   допустимая   среднесуточная
концентрация  аверсектина  С  (по  авермектину  В  ) в атмосферном

                                             1а

воздухе — 0,002 мг/куб. м.

1. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений с погрешностью, не превышающей +/- 25%, при доверительной вероятности 0,95.

2. Метод измерений

Измерение массовой концентрации авермектина В основано на 1а

улавливании  препарата аверсектина С из воздуха и концентрировании
на  фильтре,  экстракции  с  фильтра  этиловым спиртом, упаривании
досуха,  получении  флуоресцирующих производных авермектинов путем
их  дериватизации 1-метилимидазолом и трифторуксусным ангидридом в
ацетонитриле,    с    последующим    количественным   определением
производного  авермектина В   методом обращенно-фазовой ВЭЖХ путем

                       1а

элюирования  водно-органическим  элюентом  с аналитической колонки
Диасорб  С-16Т  и  детектирования  флуоресцентным  детектором  при

длинах волн возбуждения и испускания 365 и 470 нм соответственно.

Нижний предел измерения авермектина В в объеме элюируемой

                                        1а<br>

3. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, материалы и реактивы.

3.1 Средства измерений

Хроматограф жидкостный с флуоресцентным детектором (Du Pont 8800, США)

Компьютерная программа Мультихром 1.5х

Весы аналитические                                 ГОСТ 24104-88Е
Меры массы                                         ГОСТ 7328-82Е
Автоматические пипетки ГН                          ТУ 64-1-3329-81

Пипетки вместимостью 1, 5 и 10 куб. см ГОСТ 20292-74

Колбы мерные вместимостью 25 и 100 куб. см ГОСТ 1770-74Е.

3.2 Вспомогательные устройства

Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм и внутренним диаметром 4 мм,

Фильтродержатель ТУ 95.72.05-77

Воронка фильтровальная ВФ-20/16 ГОСТ 25336-82

Набор для фильтрации жидкостей (НПФ Биохром, Россия)

Пробирки с пришлифованными пробками ГОСТ 10515-72

Бюксы 50/30 ГОСТ 25336-82Е

Центрифуга низкоскоростная

Центрифужные пробирки стеклянные вместимостью 5 куб. см с полиэтиленовыми пробками

Ультразвуковой диспергатор УЗДН-1М

Морозильная камера или холодильник

Вакуумный испаритель ротационный ИР-1М ТУ 25-11-917-76.

3.3 Материалы

Фильтры АФА-ВП-20 ТУ 95-743-80.

3.4 Реактивы

Авермектин В , содержание авермектина РСО 9340-201-00-494189-99 1

В не менее 40%

1-Метилимидазол импортный (Меrk, Германия)

Трифторуксусный ангидрид импортный (Меrk, Германия)

Ацетонитрил «для жидкостной ТУ 6-09-14-2167-84 хроматографии»

Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72.

Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данных методических указаний.

4. Требования безопасности

При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1005-88.

При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

5. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускают лиц с высшим и средним специальным образованием, имеющих навыки работы на жидкостном хроматографе.

Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 10) °С, атмосферном давлении 84 — 106 кПа и влажности воздуха не более 80%.

7. Подготовка к выполнению измерений

Перед выполнением измерений проводят приготовление растворов, подготовку прибора, установление градуировочной характеристики, отбор проб.

7.1 Приготовление растворов

Стандартный раствор № 1 авермектина В для градуировки. 1

                   1

путем  растворения  точной  навески  5,0  мг рабочего стандартного
образца  в  этиловом  спирте  в  мерной  колбе объемом 50 куб. см.

Стандартный раствор № 2 авермектина В с концентрацией 1

авермектина В   0,889 мкг/куб. см (авермектина В  1,0 мкг/куб. см)
             1а                                 1
готовят  путем  разведения  1  куб.  см  стандартного раствора N 1
этиловым  спиртом  в  мерной  колбе  объемом  100 куб. см. Раствор

хранят не более 2 недель в холодильнике.

Реакционную смесь готовят из трифторуксусного ангидрида и ацетонитрила в соотношении 1:2. Смесь готовят в день работы, помещают в холодильник при 0 °С и не хранят.

Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 98 куб. см метилового спирта и 2 куб. см воды. Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью устройства для фильтрации и фильтров «Дюрапор» и дегазируют под вакуумом.

Градуировочные растворы готовят разбавлением стандартного раствора № 2 этиловым спиртом в мерных колбах объемом 25 куб. см согласно табл. 2. Вносят пипеткой рабочий раствор в мерные колбы вместимостью 25 куб. см в соответствии с табл. 2, доводят уровень этиловым спиртом до метки и перемешивают. Градуировочные растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике.

Таблица 2

ГРАДУИРОВОЧНЫЕ РАСТВОРЫ ДЛЯ УСТАНОВЛЕНИЯ ГРАДУИРОВОЧНОЙ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ КОНЦЕНТРАЦИИ АВЕРМЕКТИНА В В ВОЗДУХЕ 1а

7.2 Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

7.3 Установление градуировочной характеристики

    Градуировочную  характеристику, выражающую зависимость площади
пика  авермектина  В    (в  условных единицах) от количества массы

                1а

(мкг) авермектина В в хроматографируемом объеме пробы, 1а устанавливают по методу абсолютной градуировки с использованием

                                  1

Для построения градуировочной характеристики отбирают по 2,0 куб. см каждого градуировочного раствора, помещают в центрифужные пробирки и упаривают досуха на вакуумном испарителе. В каждую пробирку с сухим остатком вносят по 0,5 куб. см ацетонитрила, пробирку энергично встряхивают и обрабатывают ультразвуком в течение 30 с. Затем пробирку повторно встряхивают и повторно обрабатывают ультразвуком. В каждую пробирку вносят по 0,05 куб. см 1-метилимидазола. Пробирку закрывают, тщательно перемешивают содержимое в течение 5 — 10 с, обрабатывают ультразвуком, центрифугируют и помещают в холодильник при 0 °С на 10 мин. После охлаждения в пробирку с образцом вносят 0,15 куб. см охлажденной реакционной смеси. Пробирку закрывают и выдерживают в холодильнике в течение 1 часа. Общий объем раствора пробы после проведения реакции — 0,7 куб. см.

Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа. Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента: метиловый спирт — вода, 98:2

    скорость потока элюента                2,0 куб. см/мин.
    объем вводимой пробы                   20 куб. мм
    длины волн флуоресцентного детектора   365/470 нм

время удерживания авермектина:

В , 9,7 мин. 1в

В 12,2 мин. 1а

На полученных хроматограммах измеряют площадь пика авермектина В с помощью компьютерной программы (в условных единицах). 1а

Анализируют  6  растворов  разных концентраций, проводя не менее 5
параллельных   определений   для   каждого   раствора,   и  строят

градуировочную характеристику.

Проверку градуировочной характеристики проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в неделю.

7.4 Отбор проб

Отбор проб воздуха проводят согласно ГОСТ 17.2.3.01-86. Воздух с объемным расходом 20 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА ВП-20. Для измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 350 куб. дм. Пробы можно хранить не более десяти суток в защищенном от света месте.

Отбор проб сопровождается составлением акта отбора с указанием, при какой температуре и давлении он проводился.

8. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку и приливают

выдерживают  в  течение 10 мин. Экстракт фильтруют через воронку с
пористой  пластинкой  N 1 или N 2 и сливают в пробирку с притертой
пробкой.  Степень  экстракции  с  фильтра  93%. Отбирают 2 куб. см
экстракта,  помещают  в  центрифужную пробирку и упаривают досуха.

анализ, аналогично тому, как описано в п. 7.3 для градуировочных

растворов.  Количественное  определение  содержания анализируемого
компонента  В    в растворе проводят по предварительно построенной

         1а

градуировочной характеристике.

9. Вычисление результатов измерений

Концентрацию авермектина В «С» (мг/куб. м) в воздухе 1а вычисляют по формуле:

                          а х в х г

                          б х V х д

где:
а  -  содержание  авермектина  В   в хроматографируемом объеме
                                1а

пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг; б — объем пробы, взятый для хроматографирования, куб. см; в — общий объем раствора пробы после проведения химической реакции, куб. см; г — объем жидкой пробы после экстракции с фильтра, куб. см; д — объем жидкой пробы, взятой для упаривания, куб. см; V — объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, куб. дм (см. прилож. 2 — не приводится).

Концентрацию аверсектина С «С » (мг/куб. м) в воздухе 1 вычисляют по формуле:

                              С

                             С  = -,
                              1   К

где:
С - концентрация авермектина В  , мг/куб. м;
                              1а
К  - массовая доля авермектина В   в аверсектине С согласно ТУ
                                1а

9383-009-17266133-97.

10. Оформление результатов измерений

Результаты измерений оформляют протоколом по форме:

Протокол N ____ количественного химического анализа аверсектина в воздухе

2. Место отбора пробы ____________________________________________

3. Название лаборатории __________________________________________

4. Юридический адрес лаборатории _________________________________

Ответственный исполнитель:

Научный руководитель:

11. Контроль погрешности измерений

11.1 Метрологическая аттестация методики

Метрологическую аттестацию проводят в соответствии с ГОСТ Р 8.563-96, МИ 2336-95 и МИ 2335-95 (см. прилож. 2). Значения характеристики погрешности, норматива оперативного контроля погрешности и норматива оперативного контроля воспроизводимости приведены в табл. 3 в виде зависимости от значения массовой концентрации анализируемого компонента в пробе С. Концентрацию определяют как среднеарифметическое результатов параллельных определений.

Таблица 3

           КОЛИЧЕСТВЕННОГО ХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

                     АВЕРМЕКТИНА В

                                  1а

11.2 Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха из одного

традиционного  места  отбора  двумя пробоотборниками одновременно.
Анализируют   в   соответствии   с   прописью   методики   разными
аналитиками,  максимально  варьируя  условия  проведения  анализа:
партии  реактивов,  наборы  мерной  посуды  и т.д., и получают два
результата   С   и  С   анализов.  Результаты  анализа  не  должны
              1      2
отличаться  друг  от  друга  на  величину  большую,  чем  норматив

оперативного контроля воспроизводимости D:

                        1    2

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их.

Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже чем 1 раз в месяц.

11.3 Оперативный контроль точности

    Оперативный  контроль  точности  выполняют  в  одной  серии  с
анализом  рабочих  проб. Отбирают реальные пробы воздуха из одного
традиционного  места  отбора  двумя пробоотборниками одновременно.
Затем   к  одной  пробе,  отобранной  на  фильтр,  делают  добавку
анализируемого  компонента  дельта  С  из  раствора, нанося его на
фильтр. Результаты анализа С  без добавки и С  с добавкой получают
                            1                2
по  возможности  в  одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной
партией  реактивов, с одним набором посуды и т.д. Величина добавки

дельта С должна соответствовать 50 — 150% от содержания компонента в пробе, а величина С не должна выходить за верхнюю границу 2 диапазона измерения.

Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

                   2    1

Внутренний оперативный контроль точности проводят не реже чем 1 раз в месяц.

Методические указания разработаны: ООО НБЦ «Фармбиомед» (В.Т. Тер-Симонян, Е.Б. Кругляк), Российский государственный медицинский университет (Е.Б. Гугля).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Diserens Н., Henzelin М. //Journal of Chromatography А., 1999. V. 833. № 1. Р. 13 — 18.

2. Руководство по контролю загрязнения атмосферы. РД 52.04.186-96. М., 1991, 693 с.

3. Agency for Toxic Substances and Disease Registry. Atlanta, 1989 and 1990, 184 с.

4. Дмитриев М.Т., Казнина Н.И., Пинигина И.А. Санитарно-химический анализ загрязняющих веществ в окружающей среде. Справ. изд. М.: Химия, 1989, 368 с.