МУК 4.1.1467-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Бромуконазола в воде, почве, зерне и зеленой массе зерновых колосовых культур, ягодах черной смородины и винограда методом газожидкостной хроматографии

(утв. Минздравом России 24.06.2003)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ БРОМУКОНАЗОЛА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ ЗЕРНОВЫХ КОЛОСОВЫХ КУЛЬТУР, ЯГОДАХ ЧЕРНОЙ СМОРОДИНЫ И ВИНОГРАДА МЕТОДОМ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ

МУК 4.1.1467-03

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина), Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич) при участии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (А.П. Веселов).

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

4. Введены впервые.

1. Вводная часть

Фирма-производитель: Рон-Пуленк.

Торговое название: Вектра, Гранит.

Название действующего вещества по номенклатуре ИСО: Бромуконазол.

Название действующего вещества по номенклатуре ИЮПАК: 1-[(2RS,4RS:2RS,4SR-4-бромо-2-(2,4-дихлорфенил) тетрагидрофуранил] 1Н-1,2,4-триазол.

Структурная формула (не приводится).

    Эмпирическая формула: C  H  BrCl N O.
                           13 12    2 3

Молекулярная масса: 377,1.

    Бромуконазол    является    смесью    двух   диастереоизомеров
(соотношение  изомеров  54/46)  и представляет собой белый порошок

без запаха.

Температура плавления: Бромуконазол — 84 °С, изомер № 1 (LS 850646) — 91 °С, изомер № 2 (LS 850647) — 101 °С. -5

    Давление насыщенного пара - 0,04 х 10   мПа при 25 °С.
    Коэффициент  перераспределения  октанол/вода: К   log Р = 3,24

                                               ow

(20 °С).

Растворимость при 20 °С в мг/л:

                  Изомер N 1        Изомер N 2        Бромуконазол
                  (LS 850646)       (LS 850647)
вода                   72               24                 50
циклогексан            8                9                  16
толуол                 680              210                180
ксилол                 460              190                380
этанол                 217              89                 178
циклогексанон          1460             660                1320
ацетофенон             1270             440                880

Вещество стабильно при хранении в течение года при температуре

15  -  25  °С,  устойчиво в водной среде при любом рН в отсутствие
света.  Солнечная  радиация стимулирует разрушение Бромуконазола в
воде в кислой среде с ДТ   = 18 дней.

                    50

    В  почве  он  хорошо  передвигается по профилю и среднестоек с
периодом полураспада (ДТ  ) 4 - 12 недель.

                    50

    Краткая    токсикологическая    характеристика:   Бромуконазол
относится  к  веществам  опасным по острой пероральной (ЛД   крысы

                                                      50

• 365 мг/кг), малоопасным по дермальной (ЛД кролики — более 2000 50 мг/кг) и умеренно опасным по ингаляционной токсичности (ЛД крысы 50
• 4 часа — более 5000 мг/л). Побочные отрицательные эффекты не обнаружены.

В России установлены следующие гигиенические нормативы:

ДСД — 0,01 мг/кг массы человека;

ОДК в почве — 0,1 мг/кг;

ПДК в воде водоемов — 0,002 мг/куб. дм;

ОБУВ в воздухе рабочей зоны при применении — 0,1 мг/куб. м;

ОБУВ в воздухе атмосферы при применении — 0,005 мг/куб. м;

МДУ в продукции (мг/кг): зерно хлебных злаков, яблоки, груши, виноград — 0,04; черная смородина — 0,08 (ВМДУ).

Область применения препарата: Бромуконазол — системный фунгицид защитного и лечебного действия из группы триазолов, ингибирующих синтез стеринов. Он эффективно подавляет развитие целого ряда патогенных грибов, включая аскомицеты, базидиомицеты и несовершенные грибы.

Зарегистрирован в России в качестве фунгицида под фирменными названиями:

Вектра, СК, 100 г/л — против парши и мучнистой росы яблони, оидиума винограда, септориоза, антракноза, американской мучнистой росы смородины с нормой расхода 0,2 — 0,3 л/га, до 4-х обработок за сезон;

Гранит, к.с., 200 г/л — против мучнистой росы, ржавчины, септориоза, фузариоза колоса зерновых культурах (пшеница яровая, озимая, ячмень яровой, рожь) с нормой расхода 1 л/га. До 2-х обработок за сезон.

2. Методика определения Бромуконазола в воде, почве, зерне и зеленой массе зерновых колосовых культур, ягодах черной смородины и винограда методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип метода

Методика основана на определении Бромуконазола с помощью газожидкостной хроматографии (капиллярные и набивные колонки) с детектором электронного захвата после экстракции органическим растворителем и очистки экстракта перераспределением в хлороформ. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2 Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при интенсивной технологии выращивания сахарной свеклы. Избирательность метода в значительной степени увеличивается при использовании капиллярной колонки с программированием температуры термостата колонок.

2.1.3 Метрологическая характеристика метода

Метрологические характеристики метода приведены в таблицах 1 — 2.

2.2. Реактивы, материалы, приборы, оборудование

2.2.1 Реактивы и материалы

Азот газообразный особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-87.

Бромуконазол, стандартный раствор в ацетоне с содержанием д.в. 100 мкг/мл (раствор № 1) и 10 мкг/мл (раствор № 2).

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Кислота хлороводородная (соляная), концентрированная, х.ч., ГОСТ 3118-77.

Кислота соляная, 0,1н р-р.

Насадка для хроматографической колонки: Хроматон-N-супер с 5% OV-17 (0,16 — 0,20), Хемапол ЧССР и Хроматон-N-супер с 3% ХЕ-60 (0,125 — 0,160), Хемапол ЧССР.

Натрия гидроокись, х.ч., ГОСТ 4328-77.

Натрия гидроокись, 4 н р-р.

Сульфат натрия безводный, ГОСТ 4166-76.

Хлороформ, х.ч., ТУ-6-09-4263-76.

2.2.2 Приборы, аппаратура, посуда

Аппарат для встряхивания АВУ-1, ТУ-64-1-1091-73.

Весы аналитические по ТУ 64-1-1065.

Воронки делительные на 250, 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, ГОСТ 25336-82.

Колбы грушевидные на 50 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы круглодонные на 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные на 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы плоскодонные конические на 100, 250, 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Мельница для размола образцов, ТУ-46-22-23-79.

Микрошприц МШ-10А по ТУ 64-1-2850.

Пипетки мерные на 0,1; 1,0 мл, ГОСТ 20292-74.

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ-25-11-917-74.

Сито металлическое с диаметром отверстий 1 — 2 мм.

Универсальная индикаторная бумага.

Фильтры бумажные «синяя лента», ТУ-6-09-1678-77.

Хроматограф «ЦВЕТ-106» с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов или «Цвет 550».

Хроматографическая колонка стеклянная спиральная, 1500 х 3 мм, содержащая 5% OV-17 на Хроматоне-N-супер (0,16 — 0,20), или 3% ХЕ-60 на Хроматоне-N-супер (0,125 — 0,160).

Хроматограф «Кристалл 2000м» с детектором по захвату электронов.

Хроматографическая колонка капиллярная кварцевая НР — 5 (Crosslinked 5% РН МЕ Siloxane), длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79).

Отобранные пробы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше +4 °С.

Пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Растительные образцы для длительного хранения замораживаются и хранятся в холодильнике при -18 °С, предварительно определяется содержание влаги. Образцы ягод замораживают и хранят в холодильнике при -18 °С не более 1 месяца.

Перед анализом ягоды черной смородины и винограда гомогенизируют (растирают в ступке). Образцы воды фильтруют.

2.5. Проведение определения

2.5.1. Вода. 500 мл воды помещают в делительную воронку объемом 500 мл и экстрагируют Бромуконазол хлороформом трижды по 150 мл. Объединенный экстракт осушают, пропуская через слой натрия сернокислого безводного, и упаривают на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и вводят в хроматограф 1 мкл.

2.5.2. Почва. Навеску почвы 50 г, предварительно просеянной через сито, помещают в колбу объемом 250 мл, увлажняют 10 — 15 мл воды, заливают 100 мл водно-ацетоновой смеси (1:7) и встряхивают в течение 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют еще дважды. Экстракты объединяют, упаривают на испарителе при t = 40 °С до водной фазы. Водную фазу количественно переносят в делительную воронку, пропуская через бумажный фильтр, и Бромуконазол экстрагируют трижды по 30 мл хлороформом, встряхивая делительную воронку в течение 1 минуты. Водную фазу отбрасывают. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют, пропуская через безводный сернокислый натрий, упаривают экстракт на ротационном испарителе досуха при t = 40 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетона и хроматографируют. При необходимости экстракт очищают как указано для зерна и растений в разделе 2.5.3.

2.5.3. Зерно, растения. Навеску зерна 25 г, измельченную на электромельнице, а также навеску растений 25 г, измельченную ножницами, помещают в коническую колбу на 500 мл, заливают 100 мл ацетона и встряхивают на встряхивателе в течение 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют еще дважды. Экстракты объединяют, объединенный экстракт упаривают досуха при t = 40 °С. Остаток в колбе смывают 3 раза по 20 мл 0,1 н раствором соляной кислоты и количественно переносят в делительную воронку, пропуская раствор через бумажный фильтр. Подщелачивают раствор 4 н раствором гидроокиси натрия до рН среды 8 — 9. по индикаторной бумаге. Из щелочной среды Бромуконазол экстрагируют 3 раза хлороформом по 30 мл, встряхивая делительную воронку в течение 1 минуты. Водную фазу отбрасывают. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют, пропуская через безводный сернокислый натрий, упаривают экстракт на ротационном испарителе досуха при t = 40 °С.

2.5.4 Ягоды черной смородины и винограда

Навеску ягод 25 г, измельченную в ступке, помещают в коническую колбу на 500 мл, заливают 50 мл ацетонитрила и встряхивают на встряхивателе в течение 30 минут. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу на 500 мл. Экстракцию повторяют еще трижды. Экстракты объединяют, объединенный экстракт упаривают досуха при t = 40 °С. Остаток в колбе разводят в 50 мл 0,1 н раствором соляной кислоты, подщелачивают 4 н раствором гидроокиси натрия до рН среды 8. Из щелочной среды Бромуконазол переэкстрагируют 3 раза хлороформом по 25 м, встряхивая делительную воронку в течение 1 минуты. Водную фазу отбрасывают. Объединенный хлороформный экстракт фильтруют, упаривают экстракт на ротационном испарителе досуха при t = 40 °С.

Сухой остаток растворяют в 10 мл ацетона и хроматографируют.

2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов

2.6.1 Условия хроматографирования

2.6.1.1 Почва, зерно и зеленая масса зерновых колосовых культур

Хроматограф газовый с детектором постоянной скорости 63 рекомбинации ионов Ni «Цвет-106» с пределом детектирования по -14

Линдану не выше 4 х 10    или другой аналогичного типа.
    Неподвижная  фаза  -  5%  OV-17  на  Хроматоне-N-супер (0,16 -

0,20).

Колонка стеклянная спиральная, 1500 х 3 мм.

Температура: термостата колонки — 250 °С

термостата испарителя — 280 °С

термостата детектора — 290 °С.

Скорость газа-носителя — азота — 50 мл/мин.

Объем, вводимый в испаритель, — 1 мкл.

Линейность детектирования — 1 - 10 нг.

Время удерживания — изомера № 1 (LS 850646) — 6 мин. 45 сек.;

изомера № 2 (LS 850647) — 5 мин. 15 сек. -12

Рабочая шкала электрометра — 10 А.

Скорость протяжки ленты самописца — 200 мм/час.

Хроматограф газовый с детектором постоянной скорости 63 рекомбинации ионов Ni «Цвет-550» с пределом детектирования по -14

Линдану не выше 4 х 10   .
    Неподвижная  фаза  -  3%  ХЕ-60  на Хроматоне-N-супер (0,125 -

0,160).

Колонка стеклянная спиральная, 1500 х 3 мм.

Температура: термостата колонки — 230 °С

термостата испарителя — 280 °С

термостата детектора — 290 °С.

Скорость газа-носителя — азота — 30 мл/мин.

Объем, вводимый в испаритель, — 1 мкл.

Линейность детектирования — 1 - 10 нг.

Время удерживания — изомера № 1 (LS 850646) — 6 мин. 45 сек.;

изомера № 2 (LS 850647) — 5 мин. 15 сек. -12

Рабочая шкала электрометра — 10 А.

Скорость протяжки ленты самописца — 200 мм/час.

Каждую анализируемую пробу вводят в колонку хроматографа 3 раза. Образцы, дающие пики выше стандартного пика, разбавляют.

2.6.1.2 Вода, ягоды черной смородины, винограда

Хроматограф «Кристалл 2000м» с детектором по захвату -14 электронов с пределом детектирования по Линдану не выше 4 х 10 г/куб. см.

Неподвижная фаза — Crosslinked 5% РН ME Siloxane.

Колонка капиллярная кварцевая НР — 5, длина 15 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,25 мкм.

Температура: термостата колонки — 260 °С

термостата испарителя — 280 °С

термостата детектора — 340 °С.

Газ 1: тип регулятора расхода газа РРГ 11, давление 82,58 кПа.

Газ 2 (гелий) — 50 мл/мин.: режим нормальный, расход 0,5 мл/мин., сброс 1:100.

Газ 3 (азот, поддув детектора) — 30 мл/мин.

Объем, вводимый в испаритель, — 1 мкл.

Время удерживания — изомера № 1 (LS 850646) — 8 мин. 28 сек.;

изомера № 2 (LS 850647) — 9 мин. 19 сек.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика. Образцы, дающие пики больше чем стандартный раствор с концентрацией 0,1 мкг/мл, разбавляют.

2.6.2 Обработка результатов анализа

Количественный расчет двух изомеров Бромуконазола в анализируемой пробе проводят по следующей формуле:

                             С х Н  х V
                                  2    2

Х = -----------,

                             Н  х V  х Р
                              1    1

где:
Х - содержание изомера Бромуконазола в пробе, мг/кг;
С  -  количество изомера Бромуконазола в стандартном растворе,

введенном в хроматограф, мкг; Н — высота пика стандартного раствора, введенного в 1 хроматограф, мм; Н — высота пика изомера Бромуконазола в анализируемой пробе, 2 мм; V — объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;

 1

V  - объем экстракта анализируемой пробы, мкл;
 2
Р - масса анализируемой пробы, г или мл.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4. Разработчики

Кивачицкая М.М., Скурьят А.Ф., Карченя Г.К., БелНИИЗР, п. Прилуки, Минский р-он.

Калинин В.А., профессор, канд. с.-х. наук; Калинина Т.С., ст. н. сотр., канд. с.-х. наук; Рыбакова О.И., н. сотр.