МУК 4.1.1458-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств метазахлора в семенах и масле горчицы и рапса газохроматографическим методом

(утв. Минздравом России 24.06.2003)

4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ МЕТАЗАХЛОРА В СЕМЕНАХ И МАСЛЕ ГОРЧИЦЫ И РАПСА ГАЗОХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМ МЕТОДОМ

МУК 4.1.1458-03

1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина), Российским государственным аграрным университетом — МСХА им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич) при участии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (А.П. Веселов). Разработчики методов указаны в каждом из них.

2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.

3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

1. Вводная часть

Фирма производитель: БАСФ (Германия).

Торговое название: БУТИЗАН.

Действующее вещество: метазахлор.

2-хлор-N-(пиразол-1-илметил)ацет-2',6'-ксилидид (ИЮПАК).

2-хлор-N-(2,6-диметилфенил)-N-(1Н-пиразол-1-илметил)ацетамид (С.А.).

Структурная формула (не приводится).

    Эмпирическая формула: C  H  ClN O.
                           14 16   3

Молекулярная масса: 277,8.

Желтоватое кристаллическое вещество без запаха.

Температура плавления: 85 °С.

Давление паров при 20 °С: 0,093 mPa.

Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 2,13. ow

Растворимость (г/л) при 20 °С: ацетон и хлороформ — более 1000, этилацетат — 590, этанол — 200, вода — 0,43.

Стабильно в течение по крайней мере 2 лет хранения при 40 °С.

    В биологически активных почвах в  аэробных условиях метазахлор
быстро разрушается: DT   = 1 - 23 дня.

                  50

Краткая токсикологическая характеристика:

Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — 2150 мг/кг, 50 острая дермальная токсичность (LD ) для крыс — более 6810 мг/кг, 50 острая ингаляционная токсичность (LC ) для крыс — более 34,5 мг/л 50 воздуха. LC для рыб 4 — 15 мг/л (96 час.). 50

Метазахлор не токсичен для пчел, птиц и диких животных.

Гигиенические регламенты применения метазахлора: ОДК в почве — 0,1 мг/кг; ПДК в воде водоемов — 0,002 мг/куб. дм; ПДК в воздухе рабочей зоны — 1,0 мг/куб. м; МДУ в капусте — 0,02 мг/кг.

Область применения препарата:

Метазахлор — системный гербицид, поглощается корнями и гипокотилями растений и подавляет прорастание семян. Применяется для борьбы с однолетними злаковыми и широколистными сорняками, в т.ч. подмаренником цепким, в посевах сои, рапса, картофеля, табака, подсолнечника, капустных культур, лука, чеснока, горчицы, табака при норме расхода 1,0 — 1,5 кг д.в./га путем довсходового внесения.

Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Бутизан 400 КС (400 г метазахлора в 1 л препарата) в качестве средства борьбы с сорняками на посевах горчицы и рапса с нормой расхода препарата не более 2,5 л/га (по д.в. не более 1,0 кг/га) и однократной довсходовой обработкой за сезон.

2. Методика определения метазахлора в семенах и масле горчицы и рапса газохроматографическим методом

2.1. Основные положения

2.1.1 Принцип методики

Методика основана на газохроматографическом определении метазахлора с ДПР на неподвижной фазе SE-52 после экстракции его из семян горчицы и рапса водным ацетоном, из масла ацетонитрилом, очистки экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с силикагелем.

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2 Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания горчицы и рапса.

2.1.3 Метрологическая характеристика метода

Таблица 1

Анализируемый	Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
объект	Предел обнаружения, мг/кг	Диапазон определяемых концентраций, мг/кг	Среднее значение определения, %	Стандартное отклонение S, %	Относит. стандарт. отклон. DS, %	Доверительный интервал среднего, % +/-
Семена Масло	0,02 0,04	0,02 — 0,20 0,04 — 0,40	84,0 83,2	4,2 3,9	1,9 1,7	84,0 +/- 4,0 83,2 +/- 3,6

Таблица 2

Матрица	Внесено метазахлора, мг/кг	Открыто метазахлора, %	Доверительный интервал среднего результата, %
Семена	0,02 0,04 0,10 0,20	80,6 84,0 85,1 86,1	+/- 2,3 +/- 3,3 +/- 3,9 +/- 1,9
Масло	0,04 0,08 0,20 0,40	81,6 84,4 81,9 85,1	+/- 5,2 +/- 5,7 +/- 2,5 +/- 1,6

2.2. Реактивы, растворы, материалы

Метазахлор с содержанием д.в. 99,5% (БАСФ, Германия).

Ацетон, чда, ГОСТ 2603-79.

Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-82.

Вода бидистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Натрий сернокислый, безводный, хч., ГОСТ 4166-76.

Натрий хлористый, хч., ГОСТ 4233-77.

Этилацетат, ГОСТ 22300-76.

Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан — этилацетат, 90:10, по объему.

Элюент № 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан — этилацетат, 80:20, по объему.

Силикагель для адсорбционной хроматографии (Вельм, Германия) I степени активности или силикагель КСК (60 — 100 меш).

Стекловата.

Фильтры бумажные синяя лента, ТУ 6-09-1678.

Целит 535 (2 — 15 мкм) /Серва, Германия/ или аналогичный.

2.3. Приборы, аппаратура, посуда

Хроматограф газовый «Цвет-560» с детектором постоянной скорости рекомбинации или другой аналогичного типа.

Колонка хроматографическая стеклянная, 1800 х 2 мм, неподвижная фаза — 3% SE-52 на Supelcoport (80 — 100 меш).

Колонка хроматографическая стеклянная, 1800 х 2 мм, неподвижная фаза — 5% SE-30 на Инертоне N-AW-DMCS (0,125 — 0,16 мм).

Шприц для ввода образцов в газовый хроматограф.

Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74.

Водоструйный насос, ГОСТ 10696-75.

Встряхиватель механический, ТУ 64-1-1081-73.

Гомогенизатор, МРТУ 42-1505-63.

Прибор для перегонки при атмосферном давлении.

Ротационный испаритель, тип ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Баня водяная, ТУ 46-22-603-75.

Воронка Бюхнера, ГОСТ 0147-73.

Воронки делительные вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Воронки для фильтрования стеклянные, ГОСТ 8613-75.

Колба Бунзена, ГОСТ 5614-75.

Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 9737-70.

Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные вместимостью 25, 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Колбы грушевидные вместимостью 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 25336-82.

Пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл, ГОСТ 20292-74Е.

Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 мл, ГОСТ 10515-75.

Цилиндры мерные вместимостью 50, 100, 250 и 500 мл, ГОСТ 1770-74.

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79). Семена и масло горчицы и рапса хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодной комнате при температуре 4 °С. Перед анализом семена измельчают на лабораторной мельнице.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы сушат над хлористым кальцием и перегоняют в соответствии с типовыми методиками.

2.5.2 Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3% SE-52 на Supelcoport или 5% SE-30 на Инертоне N-AW-DMCS) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостате хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 250 °С в течение 8 — 10 часов.

2.5.3 Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор метазахлора с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,5% д.в., в гексане в мерной колбе на 100 мл. Рабочие стандартные растворы с концентрациями 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора метазахлора соответствующим последовательным разбавлением гексаном. Все растворы хранят в холодильнике не более одного месяца.

2.5.4 Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора метазахлора с концентрацией 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации метазахлора в растворе, мкг/мл.

2.5.5 Подготовка колонки с силикагелем

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,8 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и приливают около 10 мл гексана. Затем в колонку вносят суспензию 5 г силикагеля в 20 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 30 мл смеси гексан — этилацетат (90:10, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.6. Описание определения

2.6.1 Экстракция метазахлора

2.6.1.1. Семена. К навеске (10 г) размолотых семян горчицы или рапса приливают 100 мл 50%-ного водного ацетона и суспензию перемешивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу на 250 мл. Растительный остаток повторно экстрагируют 50 мл 50%-ного ацетона при встряхивании в течение 20 минут и суспензию фильтруют. Из объединенного водно-ацетонового экстракта отбирают аликвоту раствора, эквивалентную 5 г растительного материала, и упаривают ее до водной фазы (до объема 25 — 30 мл) на роторном испарителе при температуре 40 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.

2.6.1.2. Масло. Навеску (5 г) масла помещают в коническую колбу емкостью 100 мл, приливают 50 мл ацетонитрила и эмульсию энергично перемешивают в течение 1 часа на аппарате для встряхивания. Эмульсию центрифугируют 15 минут при 12000g и отделяют ацетонитрильную фазу. Масло еще дважды экстрагируют ацетонитрилом (50 + 25 мл), отделяя каждый раз ацетонитрильную фазу после центрифугирования эмульсии. Из объединенного ацетонитрильного экстракта отбирают аликвоту раствора, эквивалентную 2,5 г масла, и упаривают ее досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по пп. 2.6.2 и 2.6.3.

2.6.2 Очистка экстракта

Водный остаток экстракта семян (из п. 2.6.1.1) переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 5 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 20 мл гексана. Смесь встряхивают в течение 1 минуты и после ее разделения отделяют органическую фазу. Водную фазу экстрагируют повторно 20 мл гексана. Объединенную органическую фазу высушивают над безводным сульфатом натрия и упаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30 °С.

Остаток экстракта масла (из п. 2.6.1.2) переносят 10 мл смеси ацетонитрил — вода (1:1, по объему) в делительную воронку емкостью 100 мл и метазахлор трижды экстрагируют гексаном порциями по 50 мл при встряхивании. Объединенный гексановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С.

2.6.3 Очистка на колонке с силикагелем

Сухой остаток семян или масла (из п. 2.6.2) количественно переносят тремя 1-мл порциями элюента № 1 (смесь гексан — этилацетат, 90:10, по объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 50 мл элюента № 1, которые отбрасывают. Метазахлор элюируют 30 мл элюента № 2 (смесь гексан — этилацетат, 80:20, по объему), отбрасывая первые 8 мл и собирая последующие 22 мл в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстракта семян или масла растворяют в 1 мл гексана и анализируют на содержание метазахлора по п. 2.7.

Примечание: При использовании новой партии сорбента или растворителей проводится проверка хроматографического поведения метазахлора на колонке с силикагелем.

2.7. Условия хроматографирования

Газовый хроматограф «Цвет-560» с детектором постоянной скорости рекомбинации с пределом детектирования по Линдану не выше -14 1,6 х 10 г/куб. см. 9

Показания электрометра — 2 х 10 .

Скорость движения ленты самописца — 20 см/час.

Колонка стеклянная спиральная, 1800 х 2 мм; неподвижная фаза -3% SE-52 на Supelcoport (80 — 100 меш).

Температура испарителя — 260 °С, термостата колонки — 200 °С, детектора — 300 °С.

Скорость потока газа-носителя (азот) — 30 мл/мин.

Объем вводимой пробы — 2 мкл.

Время удерживания метазахлора — 2 мин. 30 сек.

Предел детектирования — 0,2 нг.

Линейный диапазон детектирования — 0,2 — 2 нг.

Альтернативная фаза: 5% SE-30 на Инертоне N-AW-DMCS (0,125 — 0,16 мм);

колонка стеклянная, 1800 х 2 мм; температура термостата колонки — 210 °С.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1 мкг/мл, разбавляют гексаном.

2.8 Обработка результатов анализа

Содержание метазахлора рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                         Н  х А х V
                          1

                        Х =  ----------,
                               Н  х m

                            0

где:
Х - содержание метазахлора в пробе, мг/кг;
Н  - высота пика образца, мм;
 1
Н  - высота пика стандарта, мм;
 0
А - концентрация стандартного раствора метазахлора, мкг/мл;
V  - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,

мл; m — масса анализируемой части образца (г) /для семян — 5 г, для масла — 2,5 г/.

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.

4. Разработчики

Дубовая Л.В., науч. сотр.; Назарова Т.А., науч. сотр.;

Микитюк О.Д., ст. науч. сотр.; Макеев А.М., зав. лаб.

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-86.

---