---
title: "\"МУК 4.1.1456-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Кломазона в воде, почве, зерне, соломе риса, семенах и масле сои хроматографическими методами\""
number: "МУК 4.1.1456-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1456-03"
---

## "МУК 4.1.1456-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Кломазона в воде, почве, зерне, соломе риса, семенах и масле сои хроматографическими методами"

# "МУК 4.1.1456-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств Кломазона в воде, почве, зерне, соломе риса, семенах и масле сои хроматографическими методами"

(утв. Минздравом России 24.06.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 30 июня 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
Министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

24 июня 2003 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ**
**КЛОМАЗОНА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ, СОЛОМЕ РИСА, СЕМЕНАХ**
**И МАСЛЕ СОИ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ**

<a id="p100005"></a>**МУК 4.1.1456-03**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

<div align="center">

30 июня 2003 года

</div>


1. <a id="p100006"></a>Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина), Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич) при участии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (А.П. Веселов).
2. <a id="p100007"></a>Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека.
3. <a id="p100008"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.

<div align="center">

4. <a id="p100009"></a>Введены впервые.

</div>



## 1. <a id="p100010"></a>Вводная часть


<a id="p100011"></a>Фирма-производитель: "ФМСи" (США).
<a id="p100012"></a>Торговое название: Комманд.
<a id="p100013"></a>Название действующего вещества по ИСО: Кломазон.
<a id="p100014"></a>Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-(2-хлорбензил)-4,4-диметил-1,2-оксазолидин-3-он или 2-(2-хлорбензил)-4,4-диметилзоксазолидин-3-он.
<a id="p100015"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100016"></a>    Эмпирическая формула: C  H  ClNO .
                           12 14    2
<a id="p100017"></a>Молекулярная масса: 239,7.
<a id="p100018"></a>Химически чистый Кломазон представляет собой вязкую светло-коричневую жидкость с удельной массой 1,192 г/куб. см (при 20 °С) и температурой кипения 275,4 °С.
<a id="p100019"></a>Давление паров: 19,2 мПа (при 25 °С).
<a id="p100020"></a>Растворимость в воде при 25 °С: 1,1 г/л; в органических растворителях - хорошо смешивается: с хлороформом, ацетоном, циклогексаноном, н-гексаном, метанолом, ацетонитрилом, хлористым метиленом, толуолом, гептаном.
<a id="p100021"></a>    Коэффициент  распределения  в  системе октанол/вода при 25 °С:
К   log Р = 2,5.
 ow
<a id="p100022"></a>Устойчив при хранении; при комнатной температуре может храниться без потерь в течение года, при 50 °С - в течение 3 мес.
<a id="p100023"></a>Период полуразложения на свету в водном растворе более 30 сут., в почве - 30 - 135 сут. (в зависимости от почвенно-климатических условий).
<a id="p100024"></a>    Краткая  гигиеническая  характеристика:  Кломазон  относится к
веществам  малоопасным по острой пероральной (ЛД   для крыс - 1369
                                                50
- 2077 мг/кг), дермальной (ЛД   для кроликов - более 2000 мг/кг) и
                             50
умеренно опасным по ингаляционной (ЛД   крысы, 4 часа, - 4,8 мг/л)
                                     50
токсичности.  Препарат слабо раздражает кожу и конъюнктиву, опасен
при   вдыхании  паров.  В  опытах  по  изучению  тератогенности  и
мутагенности  отрицательного  действия  на  подопытных животных не
наблюдается.
<a id="p100025"></a>В России установлены следующие гигиенические нормативы для Кломазона:
<a id="p100026"></a>ДСД - 0,04 мг/кг массы тела человека.
<a id="p100027"></a>ОБУВ в воздухе атмосферы при применении - 1,0 мг/куб. м.
<a id="p100028"></a>ОБУВ в воздухе рабочей зоны при применении - 1,0 мг/куб. м.
<a id="p100029"></a>ПДК в воде водоема - 0,02 мг/л.
<a id="p100030"></a>ПДК для воды рыбохозяйственных водоемов - 0,01 мг/л.
<a id="p100031"></a>ПДК/ОДК в почве - не нормирован.
<a id="p100032"></a>ВМДУ (мг/кг): рис - 0,2; рис (солома) - 0,1; соя (семена и масло) - 0,01.
<a id="p100033"></a>Область применения препарата. Кломазон - гербицид избирательного, системного действия, блокирующий биосинтез фотосинтетических пигментов. Он хорошо проникает в растения через корни и листья и подавляет рост и развитие двудольных и злаковых сорняков в посевах сои, кукурузы, рапса, гороха и риса при довсходовом, послевсходовом или предпосевном внесении. Норма расхода гербицида - 0,35 - 0,5 кг/га по действующему веществу. В смесях с другими гербицидами (в дозах 50 - 150 г/га по д.в.) используется для борьбы с сорняками в посевах рапса, картофеля, хлопчатника и ряда бобовых культур.
<a id="p100034"></a>Кломазон зарегистрирован в России под торговым названием Комманд, 480 г/л, к.э. и 360 г/л, МКС, в качестве гербицида для подавления однолетних двудольных и злаковых сорняков в посевах сои 0,7 - 1,0 л/га и риса 1,0 - 1,2 л/га соответственно.


## 2. <a id="p100035"></a>Методика определения остаточных количеств Кломазона в почве, воде, зерне и соломе риса, семенах и масле сои хроматографическими методами



### <a id="p100036"></a>2.1. Основные положения



##### <a id="p100037"></a>2.1.1 Принцип метода

<a id="p100038"></a>Метод основан на определении Кломазона с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с УФ-детектором после его экстракции из воды и растительного материала н-гексаном, из почвы смесью ацетонитрила с водным раствором хлорида кальция, из масла сои подкисленным водным ацетонитрилом с последующей переэкстракцией в н-гексан, очистки экстракта на колонке с оксидом алюминия. Для семян сои предлагаются альтернативные методики с использованием газожидкостной или тонкослойной хроматографии.
<a id="p100039"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки для ВЭЖХ и ГЖХ, а для метода ТСХ - визуального сравнения хроматографических пятен аналитического стандарта и пробы.

##### <a id="p100040"></a>2.1.2 Метрологическая характеристика метода

<a id="p100041"></a>Метрологическая характеристика метода приведена в таблицах 1 - 2.

<a id="p100042"></a>Таблица 1

<a id="p100043"></a>МЕТРОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МЕТОДА (Р = 0,95, n = 24)


<table>
<colgroup><col width="8%"><col width="17%"><col width="12%"><col width="23%"><col width="15%"><col width="14%"><col width="11%"></colgroup>
<tr><td colspan="2">Анализируемый объект</td><td>Предел обнаружения, мг/кг (мг/л)</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг (мг/л)</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, %</td><td>Стандартное отклонение S, %</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>Питьевая открытый водоем (пруд)</td><td>0,005 0,005</td><td>0,005 - 0,020 0,005 - 0,020</td><td>93,4 92,2</td><td>+/- 1,9 +/- 1,5</td><td>9,5 7,8</td></tr>
<tr><td>Почва</td><td>дерновоподзолистая чернозем выщелоченный</td><td>0,01 0,01</td><td>0,01 - 1,00 0,01 - 1,00</td><td>85,2 87,7</td><td>+/- 3,2 +/- 3,1</td><td>15,9 15,1</td></tr>
<tr><td rowspan="3">Растения</td><td>зерно риса солома риса</td><td>0,05 0,05</td><td>0,05 - 0,40 0,05 - 0,40</td><td>86,1 89,2</td><td>+/- 1,30 +/- 1,04</td><td>6,3 5,0</td></tr>
<tr><td>масло сои</td><td>0,005</td><td>0,005 - 0,10</td><td>85,1</td><td>+/- 3,5</td><td>7,0</td></tr>
<tr><td>семена сои ГЖХ ТСХ</td><td>0,005 0,05</td><td>0,005 - 1,0 0,05 - 5,0</td><td>82,1 81,0</td><td>+/- 20,3 +/- 18,2</td><td>16,3 14,6</td></tr>
</table>


<div align="center">

<a id="p100055"></a>Таблица 2

<a id="p100056"></a>**ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛОМАЗОНА**<br>
**В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ, ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ РИСА И МАСЛЕ СОИ**<br>
**(6 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**

</div>



<table>
<colgroup><col width="8%"><col width="20%"><col width="20%"><col width="32%"><col width="20%"></colgroup>
<tr><td colspan="2">Анализируемый объект</td><td>Внесено вещества, мг/кг (мг/л)</td><td>Определено вещества, мг/кг (мг/л)</td><td>Полнота определения, %</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>питьевая</td><td>0,002 0,005 0,01 0,02</td><td>0,0019 +/- 0,00009 0,0044 +/- 0,00015 0,0094 +/- 0,00044 0,0179 +/- 0,00074</td><td>90,2 90,9 95,2 98,9</td></tr>
<tr><td>Вода</td><td>открытый водоем (пруд)</td><td>0,002 0,005 0,01 0,02</td><td>0,0019 +/- 0,00006 0,0044 +/- 0,00013 0,0093 +/- 0,00037 0,0182 +/- 0,00072</td><td>89,5 91,6 92,2 94,2</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Почва</td><td>дерновоподзолистая</td><td>0,01 0,02 0,04 0,08</td><td>0,0073 +/- 0,0008 0,0180 +/- 0,0015 0,0346 +/- 0,0027 0,0780 +/- 0,0024</td><td>73,3 85,0 86,6 95,8</td></tr>
<tr><td>чернозем выщелоченный</td><td>0,01 0,02 0,04 0,08</td><td>0,0090 +/- 0,0020 0,0175 +/- 0,0012 0,0370 +/- 0,0012 0,0766 +/- 0,0055</td><td>83,3 85,8 90,0 92,0</td></tr>
<tr><td rowspan="3">Растения</td><td>зерно риса</td><td>0,05 0,10 0,20 0,40</td><td>0,0435 +/- 0,00120 0,0866 +/- 0,0022 0,1701 +/- 0,0060 0,3370 +/- 0,0126</td><td>84,3 85,3 86,6 88,0</td></tr>
<tr><td>солома риса</td><td>0,05 0,10 0,20 0,40</td><td>0,0416 +/- 0,0018 0,0906 +/- 0,0013 0,1828 +/- 0,0022 0,3670 +/- 0,0052</td><td>83,3 85,3 90,6 91,7</td></tr>
<tr><td>масло сои</td><td>0,005 0,01 0,02 0,10</td><td>0,0046 +/- 0,0012 0,0089 +/- 0,0015 0,0162 +/- 0,0027 0,0788 +/- 0,0044</td><td>92,6 89,5 80,0 78,3</td></tr>
</table>



##### <a id="p100086"></a>2.1.3 Избирательность метода

<a id="p100087"></a>В предлагаемых условиях метод специфичен и может применяться для анализа Кломазона в почве, растительном материале риса и масле сои, обрабатываемых другими пестицидами.


### <a id="p100088"></a>2.2. Реактивы, растворы, материалы и оборудование



##### <a id="p100089"></a>2.2.1 Реактивы, материалы и растворы

<a id="p100090"></a>Кломазон аналитический стандарт (FMC 57020) с содержанием 99,7% д.в.;
<a id="p100091"></a>Азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74;
<a id="p100092"></a>    Алюминия оксид (Al О         , L40/250, М = 101,96), Chemopol;
                      2 3(нейтр.)
<a id="p100093"></a>Аммиак водный, 25%, ч.д.а.;
<a id="p100094"></a>Аммиак водный, ГОСТ 3760-79;
<a id="p100095"></a>Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79;
<a id="p100096"></a>Ацетонитрил, х.ч., ТУ 6-09-06-1092-83;
<a id="p100097"></a>Бумага универсальная индикаторная, Merck;
<a id="p100098"></a>Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72;
<a id="p100099"></a>н-Гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78;
<a id="p100100"></a>Кальций хлористый, pure, Art. 2388, Merck;
<a id="p100101"></a>Кислота уксусная ледяная, ч.д.а., ГОСТ 61-75;
<a id="p100102"></a>Кислота уксусная, х.ч., ГОСТ 61-75;
<a id="p100103"></a>Кислота хлороводородная, 6 М раствор;
<a id="p100104"></a>Кислота хлороводородная, х.ч., ГОСТ 3118-77;
<a id="p100105"></a>Метанол, х.ч., ТУ 6-09-11-1643-82;
<a id="p100106"></a>Натр едкий, ч.д.а., ГОСТ 4328-77, 20%-ный раствор;
<a id="p100107"></a>Натрия сульфат безводный, х.ч., [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76);
<a id="p100108"></a>Неподвижные фазы для ГЖХ:
- <a id="p100109"></a>SE-30, 5%, на Хроматоне N-AW-DMCS, зернение - 0,125 - 0,16 мм;
- <a id="p100110"></a>OV-17, 1,5% и QF-1, 1,95%, на Хроматоне N-AW-DMCS, зернение - 0,125 - 0,16 мм, Хеманол, Чехия;
<a id="p100111"></a>Серебра нитрат, х.ч., ГОСТ 1277-75;
<a id="p100112"></a>Стекловата для хроматографии, Serva;
<a id="p100113"></a>Фильтры бумажные "синяя лента" диаметром 11,0 см, обеззоленные, ТУ 6-09-1678-86.

##### <a id="p100114"></a>2.2.2 Посуда и оборудование

<a id="p100115"></a>Хроматограф жидкостный "Beckman System Gold" с ультрафиолетовым детектором "Spectroflow 757" или другой аналогичного типа;
<a id="p100116"></a>Колонка для ВЭЖХ стальная Ultrasphere ODS (4,6 х 250 мм), 5 мкм;
<a id="p100117"></a>Хроматограф газовый "Цвет 106" с ДПР или аналогичный;
<a id="p100118"></a>Колонки стеклянные для ГЖХ, длина 1 и 2 м, диаметр 3 мм;
<a id="p100119"></a>Хроматограф газовый "Кристалл-2000" с ДЭЗ и аналого-вычислительным комплексом и испарителем для капиллярной колонки или аналогичный;
<a id="p100120"></a>Колонка капиллярная с OV-1, длина 25 м, внутренний диаметр - 0,2 мм;
<a id="p100121"></a>Аппарат для встряхивания проб АВУ-1, ТУ 64-1-1081-7, или другой аналогичного типа;
<a id="p100122"></a>Баня водяная СН-9230 FLAWIL/SG, Buchi, или другая аналогичного типа;
<a id="p100123"></a>Весы аналитические FX-40 A&D Company, АД-20, ВЛА-200, ГОСТ 34104-80Е, или другие аналогичного типа;
<a id="p100124"></a>Весы лабораторные технические ВЛТК-500 или другие аналогичного типа;
<a id="p100125"></a>Воронки Бюхнера, ГОСТ 9147-80;
<a id="p100126"></a>Воронки делительные на 250 мл, ГОСТ 10054-75;
<a id="p100127"></a>Воронки химические конические, ГОСТ 25336-82Е;
<a id="p100128"></a>Иономер модель И-135, ТЗАП или другой аналогичного типа;
<a id="p100129"></a>Испаритель ротационный Rotavapor R110 Buchi или ИР-1М, ТУ 25-11-917-74, с водяной баней или другой аналогичного типа;
<a id="p100130"></a>Источник УФ-света ртутно-кварцевый, ТУ 16-535-280-74, или аналогичный;
<a id="p100131"></a>Камера хроматографическая;
<a id="p100132"></a>Колбы Бунзена, ГОСТ 6514-74;
<a id="p100133"></a>Колбы грушевидные (концентраторы), ГОСТ 10394-72;
<a id="p100134"></a>Колбы конические плоскодонные вместимостью 100, 250 и 500 мл, КШП-100, КШП-250, ГОСТ 10394-72;
<a id="p100135"></a>Колбы мерные вместимостью 50 и 100 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74);
<a id="p100136"></a>Колонка хроматографическая стеклянная или пластиковая диаметром 15 мм и длиной 15 см;
<a id="p100137"></a>Концентраторы грушевидные (конические) НШ29 КГУ-100-14/19, ТС, ГОСТ 10394-72;
<a id="p100138"></a>Мельница (для размола зерна и соломы) электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79, или аналогичная;
<a id="p100139"></a>Микропипетки (для нанесения растворов) вместимостью 0,1 - 0,2 мл, [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74);
<a id="p100140"></a>Микрошприцы Hamilton company на 50 и 100 мкл или другие аналогичного типа;
<a id="p100141"></a>Микрошприц МШ-1И на 10 мкл или аналогичный, [ГОСТ 20292-74Е](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74);
<a id="p100142"></a>Палочки стеклянные, ГОСТ 25336-82Е;
<a id="p100143"></a>Пипетка цифровая автоматическая с максимальной емкостью 5 мл, Aldrich Chemical Company, Wheaton, или другая аналогичного типа;
<a id="p100144"></a>    Пластинки  хроматографические  типа  Силуфол  УФ   ,  Хемапол,
                                                    254
Чехия, или аналогичные;
<a id="p100145"></a>Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 25336-82Е;
<a id="p100146"></a>Самописец модель ВД40 Kipp & Zonen или другой аналогичного типа;
<a id="p100147"></a>Скальпель или нож;
<a id="p100148"></a>Стаканы химические стеклянные на 100 мл, ГОСТ 6236-72;

<div align="center">

<a id="p100149"></a>Цилиндры мерные на 25 и 100 м, [ГОСТ 1770-74Е](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74).

</div>



### <a id="p100150"></a>2.3. Отбор и хранение проб


<a id="p100151"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" N 2051-79 от 21.08.79.
<a id="p100152"></a>Пробы воды в стеклянной или инертной полиэтиленовой таре хранят при температуре 0 - 4 °С в течение не более 7 суток, для длительного хранения пробы замораживаются и хранятся при -18 °С. Отобранные пробы соломы и зерна риса подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре при температуре 0 - 4 °С. Для длительного хранения пробы почвы подсушивают при комнатной температуре в отсутствии прямого солнечного света. Сухие почвенные образцы могут храниться в течение года.
<a id="p100153"></a>Перед анализом сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм, солому и зерно риса измельчают на лабораторной мельнице. Пробы масла сои в стеклянной или инертной полиэтиленовой таре хранят при температуре 0 - 4 °С в течение не более 7 сут., для длительного хранения пробы хранятся при -18 °С.


### <a id="p100154"></a>2.4. Подготовка к определению



##### <a id="p100155"></a>2.4.1 Подготовка подвижной фазы для ВЭЖХ

<a id="p100156"></a>В колбу на 1000 мл вносят 600 мл метанола, добавляют 390 мл бидистиллированной воды и 10 мл уксусной кислоты. Полученный раствор метанол:вода:уксусная кислота (60:39:1 по объему) фильтруют и дегазируют.

##### <a id="p100157"></a>2.4.2 Кондиционирование колонки

<a id="p100158"></a>Промывают колонку для ВЭЖХ системой метанол:вода:уксусная кислота (60:39:1 по объему) в течение 30 мин. при скорости подачи подвижной фазы 1,5 мл/мин. Включают детектор и ожидают стабилизацию базовой линии (10 - 20 мин.).

##### <a id="p100159"></a>2.4.3 Подготовка хроматографической колонки, заполненной оксидом алюминия, для очистки экстракта масла сои

<a id="p100160"></a>На дно стеклянной или пластиковой хроматографической колонки помещают пробочку из стекловаты или специальный фильтр. В колонку вносят, осторожно присыпая сверху, 6 г оксида алюминия и затем осторожно вносят на поверхность адсорбента 2 г безводного сернокислого натрия. При заполнении колонки по ее стенкам слегка постукивают картонной трубкой для равномерного уплотнения (распределения) фазы.
<a id="p100161"></a>Активацию готовой колонки проводят, пропуская 5 мл н-гексана. Смывы отбрасывают. Хроматографическую колонку плотно закрывают пробкой и хранят до использования.

##### <a id="p100162"></a>2.4.4 Проверка хроматографического поведения Кломазона на колонке

<a id="p100163"></a>При отработке методики или поступлении новой партии оксида алюминия проводят изучение поведения Кломазона на колонке.
<a id="p100164"></a>В концентратор объемом 50 мл вносят 1 мл стандартного раствора Кломазона в гексане с концентрацией 1 мкг/мл и упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре не выше 25 - 30 °С. Сухой остаток растворяют в 1 мл гексана и полученную смесь наносят на подготовленную ([пункт 2.4.3](#p100159)) колонку. Затем промывают колонку 5 мл гексана и элюат отбрасывают. Кломазон элюируют с колонки последовательно 5-ю порциями объемом 5 мл каждая смеси гексана с ацетоном в соотношении 4:1, каждую порцию собирают отдельно в концентраторы и упаривают досуха при температуре не выше 25 - 30 °С.
<a id="p100165"></a>Сухой остаток каждой фракции растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и 100 мкл пробы вводят в хроматограф.
<a id="p100166"></a>Рассчитывают содержание вещества в элюате, определяют полноту смывания с колонки и определяют необходимый объем элюата для полного смыва Кломазона с колонки.

##### <a id="p100167"></a>2.4.5 Приготовление рабочих растворов


###### <a id="p100168"></a>2.4.5.1 Приготовление 0,05 н раствора хлористого кальция (гидрофилита)

<a id="p100169"></a>2,75 г хлористого кальция переносят в мерную колбу на 1 л, добавляют 600 - 700 мл бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения вещества и доводят водой до метки.

###### <a id="p100170"></a>2.4.5.2 Приготовление 0,024 н раствора соляной кислоты

<a id="p100171"></a>2 мл концентрированной соляной кислоты переносят в мерную колбу на 1 л, добавляют 600 - 700 мл бидистиллированной воды, перемешивают до полного растворения вещества и доводят водой до метки.

###### <a id="p100172"></a>2.4.5.3 Приготовление раствора "А"

<a id="p100173"></a>50 мл метанола вносят в мерную колбу вместимостью 1 л, добавляют 600 - 700 мл 0,024 н раствора соляной кислоты, перемешивают до полного растворения вещества и доводят 0,024 н раствором соляной кислоты до метки.

##### <a id="p100174"></a>2.4.6 Приготовление стандартных растворов

<a id="p100175"></a>ВЭЖХ - 10 мг Кломазона (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют навеску в метаноле и доводят объем до метки метанолом (стандартный раствор N 1, концентрация 100 мкг/мл). Раствор хранится в холодильнике до 120 сут.
<a id="p100176"></a>Методом последовательного разбавления исходного раствора N 1 раствором "А", готовят рабочие растворы Кломазона с концентрацией 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/мл, которые могут храниться в холодильнике не более 30 сут.
<a id="p100177"></a>ГЖХ и ТСХ. 10 мг Кломазона (аналитического стандарта) вносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют навеску в н-гексане и доводят объем до метки гексаном (стандартный раствор N 2, концентрация 100 мкг/мл). Раствор хранится в холодильнике до 120 сут.
<a id="p100178"></a>ГЖХ. Методом последовательного разбавления исходного раствора N 2 гексаном готовят рабочие растворы Кломазона с концентрацией 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/мл, которые могут храниться в холодильнике не более 30 суток.
<a id="p100179"></a>ТСХ. Методом последовательного разбавления исходного раствора N 2 гексаном готовят рабочие растворы Кломазона с концентрацией 5; 20 и 50 мкг/мл.

##### <a id="p100180"></a>2.4.7 Построение градуировочного графика

<a id="p100181"></a>Для построения градуировочного графика в жидкостный хроматограф вводят по 100 мкл (газожидкостный - 5 мкл) раствора Кломазона с концентрацией 0,05; 0,1; 0,2; 0,5; 1,0 мкг/мл. Проводят не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации.
<a id="p100182"></a>По полученным данным строят градуировочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации Кломазона в растворе в мкг/мл (рис. 1 - не приводится).

##### <a id="p100183"></a>2.4.8 Приготовление проявляющего реагента

<a id="p100184"></a>Взвешивают 0,5 г нитрата серебра, переносят навеску в мерную колбу объемом 100 мл и растворяют нитрат серебра в 5 мл дистиллированной воды. После полного растворения кристаллов в колбу прибавляют 7 - 10 мл аммиака, перемешивают раствор и доводят объем до метки ацетоном. Для обработки одной пластинки берут 10 мл реагента. После обработки проявляющим реагентом хроматограмму облучают УФ-светом в течение 30 - 40 мин.


### <a id="p100185"></a>2.5. Проведение определения



##### <a id="p100186"></a>2.5.1 Вода

<a id="p100187"></a>Образец воды объемом 100 мл фильтруют через двойной складчатый фильтр (синяя лента) в делительную воронку на 250 мл, подкисляют 1 н соляной кислотой до рН 2,0 и к нему добавляют 15 мл н-гексана. Воронку встряхивают в течение 2-х минут, и после разделения слоев водную фракцию сливают в коническую колбу. Гексановую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия в концентратор объемом 250 мл. Водную фракцию возвращают в делительную воронку. Экстракцию Кломазона из воды повторяют еще два раза, используя каждый раз по 15 мл н-гексана и встряхивая воронку две минуты. Экстракты объединяют в концентраторе и выпаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С досуха. Сухой остаток растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и аликвоту 100 мкл вводят в жидкостный хроматограф.

##### <a id="p100188"></a>2.5.2 Почва

<a id="p100189"></a>Навеску почвы 20 г (в пересчете на воздушно-сухую почву) помещают в коническую колбу на 100 мл, приливают 40 мл смеси ацетонитрила с 0,05 н водным раствором хлористого кальция (1:1). Встряхивают колбу в течение 1 часа. После этого экстракт фильтруют через двойной складчатый фильтр (синяя лента) методом декантации в колбу на 100 мл. Экстракцию повторяют еще раз, используя 20 мл растворителя и встряхивая в течение 20 минут. Экстракты объединяют и из объединенного экстракта отбирают аликвоту объемом 30 мл в концентратор. При температуре 55 °С, используя ротационный вакуумный испаритель, выпаривают ацетонитрил до водного остатка.
<a id="p100190"></a>К водному остатку добавляют 1 н соляной кислоты для достижения рН 1 - 2, переносят его в делительную воронку на 100 мл и экстрагируют Кломазон н-гексаном (трижды по 20 мл), как указано выше. Объединенный гексановый экстракт собирают в концентраторе и упаривают при температуре 40 °С на вакуумном ротационном испарителе досуха. Сухой остаток растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и аликвоту 100 мкл вводят в жидкостный хроматограф.

##### <a id="p100191"></a>2.5.3 Зерно и солома риса

<a id="p100192"></a>Растительную пробу, измельченную в порошок на электрической мельнице (зерно - 10 г, солома - 5 г), помещают в коническую колбу на 250 мл. Приливают 50 мл н-гексана и экстрагируют при встряхивании 1 час. Экстракт фильтруют в колбу на 250 мл через безводный сульфат натрия, помещенный на двойной складчатый фильтр (синяя лента). Экстракцию повторяют с 50 мл н-гексана в течение 30 минут. Фильтр с осадком промывают дважды 5 мл н-гексана. Объединенный фильтрат переносят в концентратор и при температуре 40 °С выпаривают н-гексан досуха, используя вакуумный ротационный испаритель. Сухой остаток растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и аликвоту 100 мкл вводят в жидкостный хроматограф.

##### <a id="p100193"></a>2.5.4 Семена сои

<a id="p100194"></a>Пробу семян сои, измельченную на мельнице массой 10 г, помещают в коническую колбу на 250 мл. Приливают 25 мл н-гексана и экстрагируют при встряхивании в течение 30 мин. Экстракт фильтруют в колбу на 250 мл через безводный сульфат натрия, помещенный на двойной складчатый фильтр (синяя лента). Экстракцию повторяют с 25 мл н-гексана в течение 30 минут. Фильтр с осадком промывают дважды 5 мл н-гексана. Объединенный фильтрат переносят в концентратор и при температуре 40 °С выпаривают н-гексан досуха, используя вакуумный ротационный испаритель.
<a id="p100195"></a>Методы хроматографирования:
<a id="p100196"></a>ВЭЖХ - Сухой остаток растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и аликвоту 100 мкл вводят в жидкостный хроматограф.
<a id="p100197"></a>ГЖХ - Сухой остаток растворяют в 0,1 мл н-гексана и аликвоту 5 мкл вводят в газовый хроматограф.
<a id="p100198"></a>ТСХ - Сухой остаток растворяют в 0,1 мл н-гексана и весь объем наносят на пластинку.

##### <a id="p100199"></a>2.5.5 Масло сои


###### <a id="p100200"></a>2.5.5.1 Экстракция Кломазона

<a id="p100201"></a>Навеску масла сои (10 г) помещают в колбу вместимостью 250 мл, приливают 30 мл смеси ацетонитрил: 0,024 н соляная кислота (1:1) и в течение 5 мин. на аппарате для встряхивания содержимое колбы перемешивают. После расслаивания прозрачный верхний слой отфильтровывают через бумажный фильтр "синяя лента" в концентратор вместимостью 100 мл. Операцию повторяют еще два раза, используя 30 мл подкисленного водного раствора ацетонитрила (1:1) каждый раз и объединяя водно-ацетонитрильную фазу в концентраторе. Из объединенных экстрактов при 55 °С, используя ротационный вакуумный испаритель, выпаривают ацетонитрил.
<a id="p100202"></a>Водный остаток переносят в делительную воронку, добавляют 10 мл дистиллированной воды и реэкстрагируют Кломазон трижды н-гексаном, добавляя каждый раз 15 мл растворителя и встряхивая 1 мин. Водную фазу отбрасываю. Гексановые экстракты объединяют в концентраторе, пропуская через безводный сернокислый натрий, и упаривают досуха при 40 °С.

###### <a id="p100203"></a>2.5.5.2 Очистка экстракта на колонке с окисью алюминия

<a id="p100204"></a>Сухой остаток в концентраторе тщательно растворяют в 1,0 мл гексана и переносят на колонку. После впитывания раствора на колонку наносят 5 мл н-гексана, предварительно ополоснув им концентратор, и после прохождения через колонку фракцию отбрасывают. Промывают колонку 5 мл смеси гексан:ацетон (4:1), которые отбрасывают. Кломазон смывают с колонки последующими 10 мл смеси гексан:ацетон (4:1). Собранный элюат помещают в концентратор и упаривают досуха при температуре 45 °С.
<a id="p100205"></a>Сухой остаток после очистки растворяют в 1 - 5 мл раствора "А" и аликвоту 100 мкл вводят в жидкостный хроматограф.
<a id="p100206"></a>Примечание: При необходимости подобную очистку можно применять при анализе зерна риса и семян сои.


### <a id="p100207"></a>2.6. Условия хроматографирования и обработка результатов



##### <a id="p100208"></a>2.6.1 Условия хроматографирования


###### <a id="p100209"></a>2.6.1.1 ВЭЖХ

<a id="p100210"></a>Высокоэффективный жидкостный хроматограф "Beckman System Gold" с УФ-детектором "Spectroflow 757".
<a id="p100211"></a>Колонка стальная для ВЭЖХ Ultrasphere ODS с внутренним диаметром 4,6 мм и длиной 250 мм, зернением сорбента 5 мкм.
<a id="p100212"></a>Абсолютное время удержания Кломазона - 9 мин.
<a id="p100213"></a>Чувствительность: 0,01 ед. оптической плотности на шкалу.
<a id="p100214"></a>Линейный диапазон детектирования сохраняется в пределах 2 - 20 нг.
<a id="p100215"></a>Минимально детектируемое количество Кломазона в анализируемом объеме - 2 нг.
<a id="p100216"></a>Объем вводимой пробы - 100 мкл.
<a id="p100217"></a>Подвижная фаза - метанол + вода + 1%-ный водный раствор уксусной кислоты (60:39:1 по объему).
<a id="p100218"></a>Рабочая длина волны - 240 нм.
<a id="p100219"></a>Скорость потока - 1,5 мл/мин.
<a id="p100220"></a>Скорость движения ленты самописца - 1 мм/мин.
<a id="p100221"></a>Температура колонки - комнатная.
<a id="p100222"></a>Альтернативные условия.
<a id="p100223"></a>Хроматограф жидкостный микроколоночный "Милихром".
<a id="p100224"></a>Детектор спектрофотометрический.
<a id="p100225"></a>Длина волны: 240 нм.
<a id="p100226"></a>Микроколонка "Силасорб 600, 5 мкм, Хемапол, Чехия.
<a id="p100227"></a>Подвижная фаза гептан или смесь гексана с ацетоном в соотношении 6:1.
<a id="p100228"></a>Скорость потока: 200 мкл/мин.
<a id="p100229"></a>Поддиапазон чувствительности: 3,2 А, время измерения: 0,6 с.
<a id="p100230"></a>Скорость движения ленты самописца - 12 мм/мин.
<a id="p100231"></a>Объем удерживания Кломазона 295 мкл.

###### <a id="p100232"></a>2.6.1.2 ГЖХ с набивными колонками

<a id="p100233"></a>    Хроматограф  "Цвет-106"  с  детектором постоянной рекомбинации
                                                               -14
ионов  с  пределом  детектирования  по  Линдану  не выше 4 х 10
г/куб. см или аналогичный.
<a id="p100234"></a>Колонка стеклянная спиральная, длина 1 м, внутренний диаметр 3 мм.
<a id="p100235"></a>Носитель Хроматон-N-AW-DMCS, размер частиц 0,125 - 0,16 мм, неподвижная фаза 5% SE-30.
<a id="p100236"></a>    Температура: термостата колонки - 190 °С;
<a id="p100237"></a>                 термостата испарителя - 220 °С;
<a id="p100238"></a>                 детектора - 230 °С.
<a id="p100239"></a>Скорость газа-носителя - азота (через колонку) - 60 мл/мин.
<a id="p100240"></a>Поддув в детектор - 160 мл/мин.
<a id="p100241"></a>Объем, вводимый в испаритель, - 5 мкл.
<a id="p100242"></a>Линейность детектирования - 0,25 - 5 нг.
<a id="p100243"></a>Время удерживания относительно альдрина - 0,68.
                                       -10
<a id="p100244"></a>    Рабочая шкала электрометра - 5 х 10   .
<a id="p100245"></a>Скорость движения ленты самописца - 5 мм/мин.
<a id="p100246"></a>Альтернативные условия
<a id="p100247"></a>Колонка стеклянная спиральная, длина 2 м, внутренний диаметр 3 мм.
<a id="p100248"></a>Носитель Хроматон-N-AW-DMCS, размер частиц 0,125 - 0,16 мм, неподвижная фаза 1,5 % OV-17 + 1,95% QF-1.
<a id="p100249"></a>    Температура: термостата колонки - 190 °С;
<a id="p100250"></a>                 термостата испарителя - 220 °С;
<a id="p100251"></a>                 детектора - 230 °С.

###### <a id="p100252"></a>2.6.1.3 Метод капиллярной ГЖХ

<a id="p100253"></a>Хроматограф "Кристалл 2000" с детектором по захвату электронов и ДВК-3.
<a id="p100254"></a>Колонка капиллярная кварцевая, длина 25 м, внутренний диаметр 0,2 мм, жидкая фаза OV-1.
<a id="p100255"></a>Режим работы хроматографа - нормальный.
<a id="p100256"></a>Температура термостата колонки - 175 °С.
<a id="p100257"></a>Температура испарителя - 250 °С, детектора - 250 °С.
<a id="p100258"></a>    Газовый  режим:  газ-носитель,   азот  (Г  и Г ), общий расход
                                             1    2
азота  -  30  мл/мин.,  расход  на  колонке - 0,5 мл/мин.; газ для
поддува в детектор (Г ) - азот, расход - 20 мл/мин.
                     3
<a id="p100259"></a>Относительное время удерживания Кломазона по отношению к альдрину 0,81.
<a id="p100260"></a>Объем вводимой пробы - 1 мкл.
<a id="p100261"></a>Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь пика.
<a id="p100262"></a>Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,5 мкг/мл, разбавляют.

###### <a id="p100263"></a>2.6.1.4 Метод ТСХ

<a id="p100264"></a>Пробу 0,1 мл количественно наносят при помощи капиллярной пипетки на хроматографическую пластинку так, чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Центр пятна должен быть на расстоянии 2 см от края пластинки. Колбу с экстрактом обмывают порциями ацетона, который также наносят в центр пятна. Справа и слева наносят серию стандартных растворов Кломазона, содержащих 0,5, 2 и 5 мкг вещества.
<a id="p100265"></a>Пластинку помещают в хроматографическую камеру, содержащую подвижную фазу: н-гексан:ацетон в соотношении 4:1 (время насыщения камеры 30 мин.). После подъема фронт подвижной фазы на 15 - 17 см пластинку извлекают из камеры, подсушивают и обрабатывают проявляющим раствором.
<a id="p100266"></a>Пластинки для тонкослойной хроматографии:
<a id="p100267"></a>    "Силуфол", размер 200 х 200 мм, R   - 0,35;
                                     f.
<a id="p100268"></a>    "Пластинки для ВЭТСХ", Россия, R   - 0,85;
                                    f.
<a id="p100269"></a>    "Алюграм", Германия, R   - 0,37;
                          f.
<a id="p100270"></a>    "Полиграм", Германия, R   - 0,38;
                           f.
<a id="p100271"></a>    "Кизельгель 69F - 254", R   - 0,43.
                             f.
<a id="p100272"></a>Подвижная фаза: хлороформ:ацетон в соотношении 9:1.
<a id="p100273"></a>Проявляющий раствор - раствор азотнокислого серебра.
<a id="p100274"></a>Облучение УФ-светом.
<a id="p100275"></a>Нижний предел обнаружения - 0,5 мкг.

##### <a id="p100276"></a>2.6.2 Обработка результатов анализов


###### <a id="p100277"></a>2.6.2.1 Методы ГЖХ и ВЭЖХ

<a id="p100278"></a>Содержание Кломазона в пробах воды, почвы, зерна, соломы риса, семенах и масле сои при анализе методом ГЖХ и ВЭЖХ рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

                          Н  х А х V х D
                           1
<a id="p100279"></a>                      Х = -------------- х Р,
                           Н  х m х 100
                            0

    где:
    Х - содержание Кломазона в пробе, мг/кг;
    Н  - высота пика образца, мм;
     1
    Н  - высота пика стандарта, мм;
     0
    А - концентрация стандартного раствора, мкг/мл;
    V  -  объем экстракта, подготовленного для хроматографирования
(мл);
    m - масса или объем анализируемого образца, г или мл;
    Р - содержание Кломазона в аналитическом стандарте;
    D   -  коэффициент  пересчета,  учитывающий  отбор  половинной
аликвоты  из  фильтрата  после  первичной  экстракции, равен 2 для
почвы.
<a id="p100280"></a>Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю высоту пика. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией Кломазона 1,0 мкг/мл, разбавляют.

###### <a id="p100281"></a>2.6.2.2 Метод ТСХ

<a id="p100282"></a>Содержание Кломазона в пробах при анализе методом ТСХ рассчитывают по формуле:

                                  А

<div align="center">

<a id="p100283"></a>                              Х = -,

</div>

                                  Р

<a id="p100284"></a>где:
<a id="p100285"></a>А - количество Кломазона, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;
<a id="p100286"></a>Р - навеска пробы, г.


## 3. <a id="p100287"></a>Требования к технике безопасности


<a id="p100288"></a>Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами и электронагревательными приборами.


## 4. <a id="p100289"></a>Разработчики


<a id="p100290"></a>Клисенко М.А., докт. биол. наук, профессор; Демченко В.Ф., м. н. сотр., Давидюк Е.И., инж., ВНИИГИНТОКС, лаборатория аналитической химии, г. Киев, Республика Украина.
<a id="p100291"></a>Семена сои - ВЭЖХ, ГЖХ, ТСХ.
<a id="p100292"></a>Спиридонов Ю.Я., зав. отделом гербологии ВНИИФ, чл. - корр. РАСХН, докт. биол. наук профессор; Ларина Г.Е., ст. науч. сотр., канд. биол. наук.

<div align="center">

<a id="p100293"></a>Всероссийский научно-исследовательский институт фитопатологии, отдел гербологии. Вода, почва, зерно, зеленая масса риса и масло сои (ВЭЖХ), 2000 г.<br>
<a id="p100294"></a>Телефон: (8)233-41107 (из Москвы) или (096)-33-41107.<br>
<a id="p100295"></a>Факс: (096)33-40902.<br>
<a id="p100296"></a>E-mail: spiridonov@)vniif.rosmail.com.<br>
<a id="p100297"></a>Galina_larina@vniif.rosmail.com.<br>
<a id="p100298"></a>Методические указания отредактированы и подготовлены к переизданию в соответствии с новыми требованиями проф. Калининым В.А. в 2001 г.

</div>




<a id="p100299"></a>

---