--- title: "\"МУК 4.1.1455-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств клефоксидима в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии\"" number: "МУК 4.1.1455-03" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1455-03" --- ## "МУК 4.1.1455-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств клефоксидима в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" # "МУК 4.1.1455-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств клефоксидима в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии" (утв. Минздравом России 24.06.2003) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299). > Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32). > Документ [введен](#p100002) в действие с 30 июня 2003 года.
Утверждаю
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации,
Первый заместитель
Министра здравоохранения
Российской Федерации
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**
24 июня 2003 года
#### 4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ** **КЛЕФОКСИДИМА В ВОДЕ, ПОЧВЕ, ЗЕРНЕ И СОЛОМЕ РИСА** **МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ** **МУК 4.1.1455-03**
Дата введения
30 июня 2003 года
1. Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина), Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева (проф. В.А. Калинин, к.х.н. А.В. Довгилевич) при участии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (А.П. Веселов). 2. Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека. 3. Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.
4. Введены впервые.
## 1. Вводная часть Фирма-производитель: БАСФ АГ, Германия. Торговое название: АУРА. Действующее вещество: клефоксидим (BAS 625 Н). 2-[1-(2-(4-хлорфенокси)пропоксиимино)-бутил]-3-оксо-5-тиан-3-илциклогекс-1-енол (ИЮПАК). Структурная формула (не приводится). Эмпирическая формула: C H ClNO S. 24 32 4 Молекулярная масса: 466,04. Бесцветная вязкая жидкость. Температура плавления: 185 °С (с разложением). Давление паров при 25 °С: <...> Коэффициент распределения н-октанол/вода: log P = <...> Растворимость (г/л) при 20 град. С: ацетон и этилацетат - более 700, 2-пропанол - 330, этанол - 67, вода - 5,3 мг/л. Стабильность к гидролизу при 25 град. С (в темноте): DT = менее 1 часа (рН 5), 140 дней (рН 7) и более 300 дней (рН 9). Вещество стабильно при нормальных условиях хранения. Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс - более 5000 50 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD ) для крыс - более 4000 50 мг/кг; острая ингаляционная токсичность (LC ) для крыс - более 50 5,2 мг/куб. дм воздуха. Вещество не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика. LC для рыб - 50 12,8 мг/куб. дм (96 час.). Клефоксидим не токсичен для пчел, птиц и диких животных. Гигиенические регламенты применения вещества в России не установлены. Область применения препарата: Клефоксидим - гербицид системного действия из группы ингибиторов биосинтеза жирных кислот. Он быстро проникает в листья и корни вегетирующих растений и передвигается в точки роста. Предназначен для уничтожения однолетних и многолетних злаковых сорных растений в посевах риса, независимо от способа его выращивания. Применяется для обработки в период от фазы 2 - 3 листьев до конца кущения у злаковых сорняков (рис при этом должен иметь не менее 3 листьев). Проходит регистрационные испытания в России и странах СНГ под торговым названием Аура (BAS 525 Н) (концентрат эмульсии, содержащий 75 г клефоксидима в 1 л препарата) на рисе в качестве избирательного гербицида при норме расхода препарата до 2,7 л/га. ## 2. Методика определения остаточных количеств клефоксидима в воде, почве, зерне и соломе риса методом высокоэффективной жидкостной хроматографии ### 2.1. Основные положения ##### 2.1.1 Принцип метода Методика основана на определении клефоксидима методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после извлечения вещества из воды хлористым метиленом, из почвы и растительного материала - ацетоном, очистки экстрактов перерастворением в хлористом метилене и на концентрирующих патронах-колонках Диапак-диол и Диадак-амин. Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки. ##### 2.1.2 Избирательность метода В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в интенсивной технологии выращивания риса. ##### 2.1.3 Метрологическая характеристика метода Таблица 1
**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ МЕТОДА**
Анализируемый объектМетрологические параметры, Р = 0,95, n = 20
Предел обнаружения, мг/куб. дм, мг/кгДиапазон определяемых концентраций, мг/куб. дм, мг/кгСреднее значение определения, %Стандартное отклонение S, %Относит. стандартное отклонение DS, %Доверительный интервал среднего, %, +/-
Вода Почва Зерно Солома0,002 0,02 0,05 0,100,002 - 0,02 0,02 - 0,2 0,05 - 0,5 0,10 - 1,081,2 80,4 79,2 87,44,7 5,0 4,8 5,42,1 2,2 2,2 2,4+/- 4,4 +/- 4,6 +/- 4,5 +/- 5,0
Таблица 2 **ПОЛНОТА ОПРЕДЕЛЕНИЯ КЛЕФОКСИДИМА В МОДЕЛЬНЫХ МАТРИЦАХ**
(n = 5)
| Матрица | Внесено мг/куб. дм, мг/кг | Открыто % | Доверительный интервал среднего результата, % | | --- | --- | --- | --- | | Вода | 0,002 0,004 0,010 0,020 | 78,4 80,6 81,8 84,0 | +/- 4,7 +/- 5,0 +/- 5,5 +/- 3,2 | | Почва | 0,02 0,04 0,10 0,20 | 76,5 80,6 81,4 83,9 | +/- 5,5 +/- 4,3 +/- 4,1 +/- 2,7 | | Зерно | 0,05 0,10 0,20 0,50 | 77,1 80,0 78,3 81,4 | +/- 6,9 +/- 4,7 +/- 5,0 +/- 3,5 | | Солома | 0,10 0,20 0,50 1,0 | 82,8 87,1 89,1 90,7 | +/- 6,9 +/- 4,5 +/- 3,9 +/- 2,2 | ### 2.2. Реактивы, растворы и материалы Клефоксидим с содержанием д.в. 98,8% (БАСФ, Германия). Ацетон, ч.д.а., ГОСТ 2603-79. Ацетонитрил, ч., ТУ 6-09-3534-82. Вода дистиллированная или деионизованная, ГОСТ 7602-72. н-Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78. Калия перманганат, ГОСТ 20490-75. Калий углекислый, х.ч., [ГОСТ 4221-76](https://bukva.ai/docs/standart-gost-4221-76). Кислота серная, х.ч., ГОСТ 4204-77. Концентрирующие патроны Диапак-диол, АО БиоХимМак (117899, Москва, Воробьевы горы, МГУ), ТУ 4215-002-05451931-94. Концентрирующие патроны Диапак-амин, АО БиоХимМак (117899, Москва, Воробьевы горы, МГУ), ТУ 4215-002-05451931-94. Метилен хлористый, [ГОСТ 12794-80](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80). Натрия сульфат безводный, х.ч., ГОСТ 4156-76. Спирт метиловый, х.ч., [ГОСТ 6995-77](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77). Фосфора пентоксид, ч., МРТУ 6-09-5759-69. Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрил - вода (85:15, по объему). Элюент для Диапак-диола: смесь гексан:хлористый метилен (1:1, по объему). Фильтры бумажные синяя лента, ТУ 6-09-1678. ### 2.3. Приборы, аппаратура, посуда Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Altex (США) или аналогичный. Самописец регистрирующий фирмы Kipp. a. Zonen BD 41 или аналогичный. Колонка хроматографическая длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, заполненная Диасорбом 130-С15 Т или Диасорбом 130-С8 Т зернением 7 мкм (АО БиоХимМак; Москва, Воробьевы горы, МГУ). Шприц для ввода образцов в жидкостной хроматограф емкостью 100 мкл. Медицинский шприц с разъемом типа Люер для ввода образцов в концентрирующий патрон Диапак. Аппарат для встряхивания АВУ, ТУ 64-1-1081-83. Весы аналитические типа ВЛР-200, ГОСТ 19401-74. Водоструйный насос, ГОСТ 10695-75. Мельница электрическая лабораторная, ТУ 45-22-236-79, или аналогичная. Прибор для перегонки при атмосферном давлении. Ротационный испаритель, тип ИР-1М, ТУ 25-11-917-76. Воронка Бунзена, ГОСТ 0147-73. Воронки для фильтрования, стеклянные, ГОСТ 8613-75. Колба Бунзена, ГОСТ 5614-75. Колбы конические с притертыми пробками вместимостью 250 мл, ГОСТ 25336-82. Колбы мерные вместимостью 50 и 100 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). Колбы грушевидные вместимостью 50, 100, 250 мл, ГОСТ 25336-82. Пипетки мерные вместимостью 1, 2 и 5 мл, [ГОСТ 20292-74Е](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74). Пробирки градуированные с притертыми пробками вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 10515-75. Цилиндры мерные вместимостью 50, 100 и 250 мл, [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74). ### 2.4. Отбор проб Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов (N 2051-79 от 21.08.79). Отобранные пробы зерна и соломы подсушивают до стандартной влажности и хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 град. С не более 3 месяцев. Пробы почвы высушивают при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния и хранят в стеклянной емкости в холодильнике не более 3 месяцев. Пробы воды хранят при температуре не выше 4 град. С в течение 2 дней, при температуре -18 град. С в течение месяца. Перед анализом зерно и солому размалывают на мельнице, сухую почву просеивают через сито с отверстиями диаметром 1 мм. ### 2.5. Подготовка к определению ##### 2.5.1 Подготовка и очистка реактивов и растворителей Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2%-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют. Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO и 2 г и 2 г K CO ). 4 2 3 Ацетонитрил сушат над пентаксидом фосфора и перегоняют; отогнанный растворитель повторно перегоняют над углекислым калием. ##### 2.5.2 Подготовка подвижной фазы ВЭЖХ Отмеряют 850 мл ацетонитрила, переносят в мерную колбу на 1000 мл, добавляют 150 мл бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют. ##### 2.5.3 Кондиционирование колонки и концентрирующих патронов Промыть колонку для ВЭЖХ смесью ацетонитрил - вода (85:15, по объему) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 1 мл/мин. Включить детектор и подождать стабилизации базовой линии (5 - 15 минут). Концентрирующий патрон Диапак-диол промывают последовательно с помощью медицинского шприца 10 мл хлористого метилена и 6 мл смеси гексан - хлористый метилен (1:1, по объему), а патрон Диапак-амин - 10 мл ацетона и 6 мл смеси гексан - ацетон (8:2, по объему) со скоростью 5 мл/мин. ##### 2.5.4 Приготовление стандартных растворов Основной стандартный раствор клефоксидима с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 98,8% д.в., в метаноле в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца. Рабочие стандартные раствора с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора клефоксидима соответствующим последовательным разбавлением подвижной фазой для ВЭЖХ ([п. 2.5.2](#p100112)). Рабочие растворы готовятся и используются в день анализа. ##### 2.5.5 Построение калибровочного графика Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 50 мкл рабочего стандартного раствора клефоксидима с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации клефоксидима в растворе в мкг/мл. ##### 2.5.6 Проверка хроматографического поведения клефоксидима на концентрирующих патронах-колонках Диапак ###### 2.5.6.1 Диапак-диол В грушевидную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора клефоксидима с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл смеси гексан - хлористый метилен (1:1, по объему) и наносят на кондиционированный патрон. Промывают патрон 5 мл этой же смеси со скоростью 1 мл/мин. Отбирают фракции по 1 мл каждая, упаривают растворитель, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ ([п. 2.5.2](#p100112)) и анализируют на содержание клефоксидима по [п. 2.7](#p100138). Фракции, содержащие клефоксидим, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по [п. 2.7](#p100138). Рассчитывают содержание клефоксидима в элюате, определяют полноту вымывания вещества из патрона. ###### 2.5.6.2 Диапак-амин В грушевидную колбу емкостью 10 мл отбирают 0,1 мл стандартного раствора клефоксидима с концентрацией 10 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 2 мл смеси гексан - ацетон (8:2, по объему) и наносят на кондиционированный патрон. Промывают патрон 4 мл смеси гексан - ацетон (8:2) и затем 12 мл ацетона со скоростью 1 мл/мин. Отбирают фракции по 1 мл каждая, упаривают растворитель, остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ ([п. 2.5.2](#p100112)) и анализируют на содержание клефоксидима по [п. 2.7](#p100138). Фракции, содержащие клефоксидим, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 5 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют по [п. 2.7](#p100138). Рассчитывают содержание клефоксидима в элюате, определяют полноту вымывания вещества из патрона. Примечание: Профиль вымывания клефоксидима может меняться при использовании новой партии патронов-колонок Диапак и растворителей. ### 2.6. Описание определения ##### 2.6.1 Экстракция клефоксидима 2.6.1.1. Вода. 100 мл предварительно отфильтрованной воды помещают в делительную воронку емкостью 250 мл и трижды экстрагируют хлористым метиленом порциями по 30 мл при энергичном встряхивании в течение 1 минуты. Объединенную органическую фазу пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 град. С. Сухой остаток растворяют в 2 мл подвижной фазы для ВЭЖХ и анализируют на содержание клефоксидима по [п. 2.7](#p100138). 2.6.1.2. Почва. Навеску (20 г) воздушно-сухой почвы помещают н коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 100 мл ацетона и суспензию перемешивают в течение 40 минут на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Почву повторно экстрагируют 50 мл ацетона при встряхивании в течение 20 минут и суспензию фильтруют. Из объединенного фильтрата отбирают четвертую часть объема (около 35 мл) раствора, эквивалентную 5 г почвы, и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 град. С. Дальнейшую очистку проводят по [п. 2.6.2](#p100135). 2.6.1.3. Зерно, солома. Навеску размолотого зерна (10 г) или соломы (5 г) помещают в коническую колбу емкостью 250 мл, приливают 50 мл ацетона и суспензию перемешивают в течение 30 минут на аппарате для встряхивания. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Осадок переносят в колбу, приливают 50 мл ацетона и повторно перемешивают 30 минут на аппарате для встряхивания. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр и из объединенного фильтрата отбирают пятую часть объема (около 20 мл) раствора, эквивалентную соответственно 2 г зерна и 1 г соломы. Растворы упаривают досуха на роторном испарителе при 30 град. С и остатки очищают по п. 2.6.2. ##### 2.6.2 Очистка на патронах Диапак Сухой остаток в колбе, полученный по [п. 2.6.1.2](#p100133) или [2.6.1.3](#p100134), растворяют двумя 10 мл порциями хлористого метилена и раствор переносят в грушевидную колбу емкостью 50 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 град. С. Сухой остаток растворяют в 2 мл смеси гексан - хлористый метилен (1:1, по объему) и раствор наносят на кондиционированный патрон Диапак-диол ([п. 2.5.3](#p100114)), который затем промывают 5 мл этой же смеси со скоростью 1 мл/мин. Элюат собирают в грушевидную колбу емкостью 25 мл и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 град. С. Остаток переносят двумя 1-мл порциями смеси гексан-ацетон (8:2, по объему) в подготовленный патрон Диапак-амин ([п. 2.5.3](#p100114)) и промывают 4 мл этой же смеси, которые отбрасывают. Клефоксидим элюируют из патрона 12 мл ацетона со скоростью 1 мл/мин. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 град. С. Сухой остаток растворяют в 1 мл подвижной фазы для ВЭЖХ ([п. 2.5.2](#p100112)) и анализируют на содержание клефоксидима по [п. 2.7](#p100138). Примечание: При использовании новой партии патронов Диапак или растворителей проводится проверка хроматографического поведения клефоксидима на патронах Диапак-диол и Диапак-амин. ### 2.7. Условия хроматографирования Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором фирмы Aitex (США) или аналогичный. Самописец регистрирующий фирмы Kipp. a. Zonen BD 41 или аналогичный. Хроматографическая колонка длиной 15 см, внутренним диаметром 4 мм, содержащая Диасорб 130-С16 Т6 зернением 7 мкм. Температура колонки: комнатная. Подвижная фаза ацетонитрил - вода (85:15, по объему). Скорость потока элюента: 0,8 мл/мин. Рабочая длина волны: 280 нм. Чувствительность детектора: 0,01 ед. абсорбции на шкалу. Объем вводимой пробы: 50 мкл. Скорость протяжки ленты самописца: 10 см/час. Время выхода клефоксидима: около 6 мин. Линейный диапазон детектирования: 5 - 50 нг. Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ. Альтернативная неподвижная фаза: Диасорб 130-С8 Т. Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (85:15, по объему). Скорость потока элюента: 0,8 мл/мин. Время выхода клефоксидима: 4,8 мин. ### 2.8. Обработка результатов анализа Содержание клефоксидима рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле: Н х А х V 1 Х = ----------, Н х m 0 где: Х - содержание клефоксидима в пробе, мг/кг или мг/куб. дм; Н - высота пика образца, мм; 1 Н - высота пика стандарта, мм; 0 А - концентрация стандартного раствора клефоксидима, мкг/мл. V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл; m - масса или объем анализируемого образца, г или мл (для воды - 100 мл; для почвы - 5 г; для зерна - 2 г; для соломы - 1 г). ## 3. Требования техники безопасности Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами. ## 4. Разработчики Дубовая Л. В., научный сотр.; Макеев А.М., зав. лабораторией, канд. биол. наук. ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-86. ---