---
title: "\"МУК 4.1.1422-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств этофумезата в корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии\""
number: "МУК 4.1.1422-03"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-1422-03"
---

## "МУК 4.1.1422-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств этофумезата в корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

# "МУК 4.1.1422-03. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методические указания по определению остаточных количеств этофумезата в корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

(утв. Минздравом России 24.06.2003)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 30 июня 2003 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации,<br>
Первый заместитель<br>
министра здравоохранения<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

<div align="center">

24 июня 2003 года

</div>



#### <a id="p100189"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ОСТАТОЧНЫХ КОЛИЧЕСТВ ЭТОФУМЕЗАТА**
**В КОРНЕПЛОДАХ И БОТВЕ САХАРНОЙ, СТОЛОВОЙ И КОРМОВОЙ СВЕКЛЫ**
**МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100004"></a>**МУК 4.1.1422-03**

<div align="right">

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

<div align="center">

30 июня 2003 года

</div>


1. <a id="p100005"></a>Методические указания подготовлены Федеральным научным центром гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (академик РАМН, проф. В.Н. Ракитский, проф. Т.В. Юдина) при участии Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России (А.П. Веселов).
2. <a id="p100006"></a>Методические указания рекомендованы к утверждению Комиссией по госсанэпиднормированию при Минздраве России.
3. <a id="p100007"></a>Утверждены Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации, Первым заместителем Министра здравоохранения Российской Федерации, академиком РАМН Г.Г. Онищенко 24 июня 2003 г.
4. <a id="p100008"></a>Введены с 30 июня 2003 г.
5. <a id="p100009"></a>Введены впервые.

<a id="p100010"></a>Настоящие методические указания устанавливают метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения в корнеплодах и ботве сахарной, столовой и кормовой свеклы массовой концентрации этофумезата в диапазоне 0,05 - 0,5 мг/кг.
<a id="p100011"></a>Этофумезат - действующее вещество препарата БЕТАНЕС, КЭ (70 г/л десмедифама + 90 г/л фенмедифама + 110 г/л этофумезата), фирма-производитель "Август", Россия.
<a id="p100012"></a>(+/-)-2-этокси-2,3-дигидро-3,3-диметилбензофуран-5-ил метансульфонат (IUPAC).
<a id="p100013"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100014"></a>     C  H  O S
      13 18 5
<a id="p100015"></a>Мол. масса 286,3.
<a id="p100016"></a>Бесцветное кристаллическое вещество без запаха. Температура плавления - 70 - 72 °С. Давление паров при 25 °С: 0,12 - 0,65 мПа. Растворимость в органических растворителях при 25 °С (г/куб. дм): дихлорметан, ацетон, этилацетат - более 600; толуол - 300 - 600; метанол - 120 - 150; этанол - 60 - 75; гексан - 4,7. Растворимость в воде при 25 °С - 50 мг/куб. дм.
<a id="p100017"></a>    Этофумезат  стабилен  в  водной среде при рН 7 - 9. При кислой
среде  разлагается;  DT    (рН  5,0)  -  940  дней, с образованием
                       50
гидроксианалога.

<a id="p100018"></a>    Краткая токсикологическая характеристика:
<a id="p100019"></a>    Острая  пероральная токсичность (LD  ) для крыс >  5000 мг/кг;
                                       50
острая  дермальная  токсичность (LD  ) для  кроликов > 2000 мг/кг;
                                   50
острая ингаляционная токсичность (LK  ) для крыс > 3970 мг/куб. м.
                                    50
<a id="p100020"></a>Область применения препарата:
<a id="p100021"></a>Этофумезат рекомендуется к применению в качестве контактного селективного гербицида против однолетних двудольных и злаковых сорняков на посевах свеклы сахарной, столовой, кормовой.
<a id="p100022"></a>Гигиенические нормативы:
<a id="p100023"></a>ДСД - 0,1 мг/кг массы тела.
<a id="p100024"></a>ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 0,1 мг/куб. м.
<a id="p100025"></a>ПДК в воде водоемов - 0,5 мг/куб. дм.
<a id="p100026"></a>ОДК в почве - 0,2 мг/кг.
<a id="p100027"></a>МДУ в свекле сахарной, столовой и кормовой - 0,1 мг/кг.


## 1. <a id="p100028"></a>Метрологические характеристики метода


<a id="p100029"></a>Метрологические характеристики метода представлены в таблицах 1 и [2](#p100038).

<div align="right">

<a id="p100030"></a>Таблица 1

</div>


<a id="p100031"></a>**МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ**


<table>
<colgroup><col width="22%"><col width="12%"><col width="20%"><col width="14%"><col width="17%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Анализируемый объект</td><td colspan="5">Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 24</td></tr>
<tr><td>Предел обнаружения, мг/кг</td><td>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td>Среднее значение определения, %</td><td>Стандартное отклонение, S, %</td><td>Доверительный интервал среднего результата, %</td></tr>
<tr><td>Корнеплоды сахарной свеклы</td><td>0,05</td><td>0,05 - 0,5</td><td>84,93</td><td>2,19</td><td>3,2</td></tr>
<tr><td>Корнеплоды столовой свеклы</td><td>0,05</td><td>0,05 - 0,5</td><td>82,69</td><td>2,26</td><td>3,3</td></tr>
<tr><td>Корнеплоды кормовой свеклы</td><td>0,05</td><td>0,05 - 0,5</td><td>84,33</td><td>2,33</td><td>3,4</td></tr>
<tr><td>Ботва столовой свеклы</td><td>0,05</td><td>0,05 - 0,5</td><td>87,04</td><td>2,51</td><td>3,7</td></tr>
</table>


<div align="right">

<a id="p100037"></a>Таблица 2

</div>


<div align="center">

<a id="p100038"></a>**ПОЛНОТА ИЗВЛЕЧЕНИЯ ЭТОФУМЕЗАТА ИЗ КОРНЕПЛОДОВ САХАРНОЙ,**<br>
**СТОЛОВОЙ И КОРМОВОЙ СВЕКЛЫ, БОТВЫ СТОЛОВОЙ СВЕКЛЫ**

</div>

**(6 ПОВТОРНОСТЕЙ ДЛЯ КАЖДОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ)**


| Среда | Внесено этофумезата, мг/кг | Обнаружено этофумезата, мг/кг | Полнота извлечения, % |
| --- | --- | --- | --- |
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| Корнеплоды сахарной свеклы | 0,05 0,1 0,25 0,5 | 0,04184 +/- 0,00134 0,08527 +/- 0,00264 0,2081 +/- 0,0060 0,4376 +/- 0,0149 | 83,69 85,27 83,24 87,52 |
| Корнеплоды столовой свеклы | 0,05 0,1 0,25 0,5 | 0,04011 +/- 0,00136 0,08346 +/- 0,00250 0,2104 +/- 0,0069 0,4147 +/- 0,0145 | 80,22 83,46 84,16 82,94 |
| Корнеплоды кормовой свеклы | 0,05 0,1 0,25 0,5 | 0,04069 +/- 0,00163 0,08416 +/- 0,00278 0,2461 +/- 0,0067 0,4261 +/- 0,0136 | 81,38 84,16 86,57 85,23 |
| Ботва столовой свеклы | 0,05 0,1 0,25 0,5 | 0,04256 +/- 0,00179 0,08639 +/- 0,00700 0,2226 +/- 0,0078 0,4382 +/- 0,0140 | 85,12 86,39 89,03 87,64 |



## 2. <a id="p100045"></a>Метод измерений


<a id="p100046"></a>Методика основана на определении вещества с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым детектором после экстракции из анализируемой пробы растительного материала смесью ацетон - вода, очистки экстракта перераспределением между двумя несмешивающимися фазами и на колонке с силикагелем.
<a id="p100047"></a>Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.
<a id="p100048"></a>Нижний предел измерения в хроматографируемом объеме пробы - 4 нг.
<a id="p100049"></a>В предлагаемых условиях определения метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых в технологии выращивания свеклы кормовой, столовой, сахарной, в том числе десмедифама и фенмедифама.


## 3. <a id="p100050"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



### <a id="p100051"></a>3.1. Средства измерений


<a id="p100052"></a>Жидкостной  хроматограф  с               Номер Госреестра 15945-97
ультрафиолетовым детектором с
переменной длиной волны
(фирмы Perkin-Elmer, США)
<a id="p100053"></a>Весы аналитические ВЛА-200 ГОСТ 24104
<a id="p100054"></a>Весы лабораторные общего назначения, с ГОСТ 7328
наибольшим пределом взвешивания до
500 г и пределом допустимой погрешности
+/- 0,038 г
<a id="p100055"></a>Колбы мерные вместимостью 50, 100 и      ГОСТ 1770
1000 куб. см
<a id="p100056"></a>Пипетки градуированные 2-го класса       ГОСТ 29227
точности вместимостью 1,0, 2,0, 5,0,
10 куб. см
<a id="p100057"></a>Пипетки с одной меткой 2-го класса       ГОСТ 29169
точности вместимостью 20 куб. см
<a id="p100058"></a>Пробирки градуированные вместимостью 5   ГОСТ 1770
или 10 куб. см
<a id="p100059"></a>Цилиндры мерные 2-го класса точности     ГОСТ 1770.
вместимостью 10, 25, 50, 100, 200,
500 и 1000 куб. см.
<a id="p100060"></a>Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.


### <a id="p100061"></a>3.2. Реактивы


<a id="p100062"></a>Этофумезат с содержанием действующего
вещества 99,6% (ВНИИХСЗР, Россия)
<a id="p100063"></a>Ацетон, чда ГОСТ 2603
<a id="p100064"></a>Ацетонитрил для хроматографии, хч                  ТУ-6-09-4326-76
<a id="p100065"></a>Вода бидистиллированная, деионизованная ГОСТ 6709
или перегнанная над KMnO
                        4
<a id="p100066"></a>н-Гексан, хч                                       ТУ-6-09-3375
<a id="p100067"></a>Изопропиловый спирт (пропанол-2), хч               ТУ 6-09-402-75
<a id="p100068"></a>Кислота ортофосфорная, хч, 85% ГОСТ 6552
<a id="p100069"></a>Метилен хлористый (дихлорметан), хч [ГОСТ 12794](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80)
<a id="p100070"></a>Метиловый спирт (метанол), хч                      ГОСТ 6995
<a id="p100071"></a>Натрий сернокислый, безводный, хч [ГОСТ 4166](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100072"></a>Натрий хлористый, хч ГОСТ 4233
<a id="p100073"></a>Силикагель для колоночной хроматографии
L 100 - 160 меш (фирмы "Лахема", Чехия)
<a id="p100074"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты, ч [ГОСТ 22300](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76).
<a id="p100075"></a>Допускается использование реактивов иных производителей с аналогичной или более высокой квалификацией.


### <a id="p100076"></a>3.3. Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100077"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с               ТУ 64-1-2851-78
<a id="p100078"></a>Бумажные фильтры "красная лента",                  ТУ 6-09-2678-77
обеззоленные
<a id="p100079"></a>Воронка Бюхнера ГОСТ 25336
<a id="p100080"></a>Воронки делительные вместимостью 250 куб. см ГОСТ 25336
<a id="p100081"></a>Воронки конусные диаметром 30 - 37 и 60 мм ГОСТ 25336
<a id="p100082"></a>Гомогенизатор
<a id="p100083"></a>Груша резиновая
<a id="p100084"></a>Колба Бунзена ГОСТ 25336
<a id="p100085"></a>Колбы плоскодонные вместимостью 200 - 250 куб. см [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
<a id="p100086"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью [ГОСТ 9737](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
10, 100 и 250 куб. см
<a id="p100087"></a>Мембранные фильтры капроновые диаметром 47 мм
<a id="p100088"></a>Насос водоструйный                                 ГОСТ 10696
<a id="p100089"></a>Ректификационная колонна с числом
теоретических тарелок не менее 50
<a id="p100090"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М             ТУ 25-11-917-74
или ротационный вакуумный испаритель В-169
фирмы Buchi, Швейцария
<a id="p100091"></a>Стаканы химические, вместимостью 400 куб. см ГОСТ 25336
<a id="p100092"></a>Стекловата
<a id="p100093"></a>Стеклянная колонка длиной 25 см,
внутренним диаметром 8 - 10 мм
<a id="p100094"></a>Стеклянные палочки
<a id="p100095"></a>Установка для перегонки растворителей
<a id="p100096"></a>Набор для фильтрации растворителей через мембрану
<a id="p100097"></a>Хроматографическая колонка стальная, длиной 25 см,
внутренним диаметром 2,1 мм, содержащая
Spherisorb S5 ODS 2 зернением 5 мкм
<a id="p100098"></a>Хроматографическая колонка стальная длиной 25 см,
внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая
Zorbax ODS зернением 5 мкм
<a id="p100099"></a>Шкаф сушильный                                     ТУ 64-1-1411-76
<a id="p100100"></a>Шприц для ввода образцов для жидкостного
хроматографа вместимостью 50 - 100 куб. мм.
<a id="p100101"></a>Допускается применение хроматографических колонок и другого оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.


## 4. <a id="p100102"></a>Требования безопасности


<a id="p100103"></a>4.1. При работе с реактивами соблюдать требования безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1005.
<a id="p100104"></a>4.2. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.


## 5. <a id="p100105"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100106"></a>К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя, с опытом работы на жидкостном хроматографе.


## 6. <a id="p100107"></a>Условия измерений


<a id="p100108"></a>При выполнении измерений соблюдают следующие условия:
- <a id="p100109"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха (20 +/- 5) °С и относительной влажности не более 80%;
- <a id="p100110"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## 7. <a id="p100111"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100112"></a>Выполнению измерений предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, подвижных фаз для ВЭЖХ, кондиционирование хроматографических колонок, установление градуировочной характеристики, подготовка колонки с силикагелем для очистки экстрактов, проверка хроматографического поведения вещества на колонке с силикагелем.


### <a id="p100113"></a>7.1. Подготовка органических растворителей



##### <a id="p100114"></a>7.1.1 Очистка ацетонитрила

<a id="p100115"></a>Ацетонитрил кипятят с обратным холодильником над пентоксидом фосфора не менее 1 часа, после чего перегоняют, непосредственно перед употреблением ацетонитрил повторно перегоняют над прокаленным карбонатом калия.

##### <a id="p100116"></a>7.1.2 Очистка этилацетата и хлористого метилена

<a id="p100117"></a>Этилацетат (хлористый метилен) промывают последовательно 5%-ным водным раствором карбоната натрия, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют или подвергают ректификационной перегонке на колонне с числом теоретических тарелок не менее 50.

##### <a id="p100118"></a>7.1.3 Очистка н-гексана

<a id="p100119"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока она не перестанет окрашиваться в желтый цвет, водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.


### <a id="p100120"></a>7.2. Приготовление смеси растворителей для экстракции


<a id="p100121"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 800 куб. см и 200 куб. см дистиллированной воды, тщательно перемешивают.


### <a id="p100122"></a>7.3. Подготовка подвижной фазы N 1 для ВЭЖХ


<a id="p100123"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 480 куб. см метанола, 50 куб. см изопропанола, добавляют 470 куб. см бидистиллированной воды и вносят 0,1 куб. см ортофосфорной кислоты, перемешивают, фильтруют и дегазируют.


### <a id="p100124"></a>7.4. Подготовка подвижной фазы N 2 для ВЭЖХ


<a id="p100125"></a>В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см помещают 700 куб. см ацетонитрила и 300 куб. см бидистиллированной воды, перемешивают, фильтруют и дегазируют.


### <a id="p100126"></a>7.5. Кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100127"></a>Промывают колонку подвижной фазой (приготовленной по [п. 7.3](#p100122) или [п. 7.4](#p100124)) в течение 30 минут при скорости подачи растворителя 0,3 куб. см/мин. или 1 куб. см/мин. до установления стабильной базовой линии.


### <a id="p100128"></a>7.6. Приготовление градуировочных растворов



##### <a id="p100129"></a>7.6.1 Исходный раствор этофумезата для градуировки (концентрация 1 мг/куб. см)

<a id="p100130"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 0,1 г этофумезата, растворяют в 50 - 70 куб. см метанола, доводят метанолом до метки, тщательно перемешивают. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
<a id="p100131"></a>Растворы N 1 - 5 готовят объемным методом путем последовательного разбавления исходного стандартного раствора.

##### <a id="p100132"></a>7.6.2 Раствор N 1 этофумезата для градуировки (концентрация 10 мкг/куб. см)

<a id="p100133"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 1 куб. см исходного стандартного раствора этофумезата с концентрацией 1 мг/куб. см ([п. 7.6.1](#p100129)), разбавляют метанолом до метки. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
<a id="p100134"></a>Этот стандартный раствор используют для приготовления проб с внесением при оценке полноты извлечения этофумезата из исследуемых образцов.
<a id="p100135"></a>7.6.3. Рабочие растворы N 2 - 5 этофумезата для градуировки (концентрация 0,2 - 2,0 мкг/куб. см)
<a id="p100136"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают по 2, 4, 10 и 20 куб. см стандартного раствора N 1 с концентрацией 10 мкг/куб. см ([п. 7.6.2](#p100132)), доводят до метки подвижной фазой для ВЭЖХ N 1 или N 2 (приготовленных по [п. 7.3](#p100122) или [7.4](#p100124)), тщательно перемешивают, получают рабочие растворы N 2 - 5 с концентрацией этофумезата 0,2, 0,4, 1,0 и 2,0 мкг/куб. см соответственно.
<a id="p100137"></a>Растворы хранятся в холодильнике не более 5-ти дней.


### <a id="p100138"></a>7.7. Установление градуировочной характеристики


<a id="p100139"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (отн. единицы) от концентрации этофумезата в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной калибровки по 4-м растворам для градуировки N 2 - 5.
<a id="p100140"></a>В инжектор хроматографа вводят по 20 куб. мм каждого градуировочного раствора и анализируют в условиях хроматографирования по [п. 9.4.1](#p100163) или [9.4.2](#p100171). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений.


### <a id="p100141"></a>7.8. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстрактов


<a id="p100142"></a>Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см, внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г силикагеля в 20 - 25 куб. см гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 0,5 см. Колонку промывают 25 куб. см смеси этилацетат - гексан (1:1 по объему), затем 25 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в сек. После этого колонка готова к работе.


### <a id="p100143"></a>7.9. Проверка хроматографического поведения этофумезата на колонке с силикагелем


<a id="p100144"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают по 0,5 куб. см стандартного раствора N 1 ([п. 7.6.2](#p100132)). Упаривают растворитель досуха, остаток растворяют в 3-х куб. см гексана и наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.8](#p100141). Промывают колонку 25 куб. см смеси гексан - этилацетата (9:1 по объему), элюат отбрасывают.
<a id="p100145"></a>Затем колонку промывают 50 куб. см смеси гексан - этилацетат (7:3 по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек. Фракционно (по 10 куб. см) отбирают элюат, упаривают, остатки растворяют в 2-х куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (приготовленной по [п. 7.2](#p100120) или [7.3](#p100122)), анализируют на содержание этофумезата, по [пп. 9.4.1](#p100163) или [9.4.2](#p100171).
<a id="p100146"></a>Фракции, содержащие этофумезат, объединяют вместе и вновь анализируют по [пп. 9.4.1](#p100163) или [9.4.2](#p100171).
<a id="p100147"></a>Рассчитывают содержание вещества в элюатах, определяют полноту смывания с колонки и необходимый для очистки объем элюента.
<a id="p100148"></a>*Примечание.* Проверку хроматографического поведения этофумезата следует проводить обязательно, поскольку профиль вымывания может изменяться при использовании новой партии сорбентов и растворителей.


## 8. <a id="p100149"></a>Отбор проб


<a id="p100150"></a>Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79).
<a id="p100151"></a>Отобранные пробы ботвы и корнеплодов свеклы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более суток. Для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре -18 °С.
<a id="p100152"></a>Перед анализом образцы измельчают.


## 9. <a id="p100153"></a>Выполнение определения



### <a id="p100154"></a>9.1. Экстракция


<a id="p100155"></a>Образец измельченных корнеплодов свеклы или ботвы массой 20 г помещают в коническую колбу (или химический стакан) вместимостью 400 куб. см, вносят 40 куб. см смеси ацетон - вода (80:20 по объему), гомогенизируют в течение 1 мин., затем добавляют 60 куб. см смеси ацетон - вода (80:20 по объему) и помещают на встряхиватель на 30 мин.
<a id="p100156"></a>Раствор фильтруют на воронке Бюхнера через двойной бумажный фильтр "красная лента" под вакуумом. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон - вода (80:20 по объему). Экстракт и промывку переносят в мерный цилиндр вместимостью 250 куб. см с пришлифованной пробкой, перемешивают, измеряют объем раствора, 1/2 его часть (эквивалентную 10 г образца) переносят в круглодонную колбу. Далее проводят очистку экстракта по [п. 9.2](#p100157).


### <a id="p100157"></a>9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей


<a id="p100158"></a>Экстракт, полученный по [п. 9.1](#p100154) и помещенный в круглодонную колбу, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (~ 20 куб. см) при температуре не выше 35 °С, внимательно следя за процессом и не допуская переброса жидкости при вспенивании. Водный остаток переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 20 куб. см насыщенного раствора хлорида натрия, 50 куб. см смеси гексан - хлористый метилен (65:35 по объему), интенсивно встряхивают делительную воронку в течение 2-х мин. После полного разделения фаз верхний органический слой отделяют, фильтруют через слой безводного сульфата натрия, помещенный на бумажном фильтре в конусной воронке, в круглодонную колбу вместимостью 250 куб. см. Водную фазу вновь переносят в делительную воронку. Операцию экстракции повторяют еще дважды, используя по 20 куб. см смеси гексан - хлористый метилен (65:35 по объему). Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха и подвергают дополнительной очистке на колонке по [п. 9.3](#p100159).


### <a id="p100159"></a>9.3. Очистка экстракта на колонке с силикагелем


<a id="p100160"></a>Остаток в круглодонной колбе, полученный по [п. 9.2](#p100157), растворяют в 3-х куб. см гексана и наносят на колонку, подготовленную по [п. 7.8](#p100141). Колбу обмывают трижды порциями гексана по 3 куб. см, которые также наносят на колонку. Промывают колонку 25 куб. см смеси гексан - этилацетата (9:1 по объему), элюат отбрасывают. Этофумезат элюируют с колонки 30 куб. см смеси гексан - этилацетат (7:3 по объему) со скоростью 1 - 2 капли в сек., собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу. Раствор упаривают досуха при температуре не выше 35 °С. Остаток в колбе растворяют 2,5 куб. см подвижной фазы для ВЭЖХ (подготовленной по [п. 7.2](#p100120) или [7.3](#p100122)) и анализируют на содержание этофумезата по [п. 9.4.1](#p100163) или [9.4.2](#p100171).


### <a id="p100161"></a>9.4. Условия хроматографирования


<a id="p100162"></a>Жидкостной хроматограф с ультрафиолетовым детектором Perkin-Elmer (США).
<a id="p100163"></a>9.4.1. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 2,1 мм, содержащая Spherisorb S5 ODS 2, зернением 5 мкм.
<a id="p100164"></a>Температура колонки: комнатная
<a id="p100165"></a>Подвижная фаза: метанол - изопропанол - вода - ортофосфорная кислота (48:5:47:0,1 по объему)
<a id="p100166"></a>Скорость потока элюента: 0,3 куб. см/мин.
<a id="p100167"></a>Рабочая длина волны: 280 нм
<a id="p100168"></a>Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу
<a id="p100169"></a>Объем вводимой пробы: 20 куб. мм
<a id="p100170"></a>Ориентировочное время выхода этофумезата: 14,7 - 15,0 мин.
<a id="p100171"></a>9.4.2. Колонка стальная длиной 25 см, внутренним диаметром 4,0 мм, содержащая Zorbax ODS, зернением 5 мкм.
<a id="p100172"></a>Температура колонки: комнатная
<a id="p100173"></a>Подвижная фаза: ацетонитрил - вода (60:40 по объему)
<a id="p100174"></a>Скорость потока элюента: 1,0 куб. см/мин.
<a id="p100175"></a>Рабочая длина волны: 280 нм
<a id="p100176"></a>Чувствительность: 0,005 ед. абсорбции на шкалу
<a id="p100177"></a>Объем вводимой пробы: 20 куб. мм
<a id="p100178"></a>Ориентировочное время выхода этофумезата: 4,7 - 4,9 мин.
<a id="p100179"></a>Диапазон определяемых концентраций: 4 - 40 нг.
<a id="p100180"></a>Образцы, дающие пики, большие чем стандартный раствор этофумезата с концентрацией 2,0 мкг/куб. см, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ (приготовленной по [п. 7.2](#p100120) или [7.3](#p100122)).


## 10. <a id="p100181"></a>Обработка результатов анализа


<a id="p100182"></a>    Содержание этофумезата в пробе рассчитывают по формуле:

                              (А х К) V
<a id="p100183"></a>                          Х = ---------,
                                  m

    где:
    Х - содержание этофумезата в пробе, мг/кг;
    А  -  концентрация  этофумезата,  найденная по градуировочному
графику, мкг/куб. см;
    V  - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования,
куб. см;
    m - масса анализируемого образца, г;

<div align="center">

    К  - коэффициент пересчета, учитывающий объем экстрактов проб,<br>
используемый для анализа, равный 2.

</div>



## 11. <a id="p100184"></a>Разработчики


<a id="p100185"></a>Юдина Т.В., Федорова Н.Е., Волкова В.Н., Гарбузова А.А., Федеральный научный центр гигиены им. Ф.Ф. Эрисмана (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана).
<a id="p100186"></a>141000, г. Мытищи Московской обл., ул. Семашко, д. 2, лаборатория аналитических методов контроля.

<div align="center">

<a id="p100187"></a>Телефон: (095) 586-1276.

</div>




<a id="p100188"></a>

---