МУК 4.1.0.513-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций рубомицина и доксорубицина методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны. Методические указания
(утв. Госкомсанэпиднадзором России 08.06.1996)
Примечание
Документ введен в действие с 8 июня 1996 года.
И.о. Председателя
Госкомсанэпиднадзора России,
заместитель Главного
государственного
санитарного врача
Российской Федерации
Е. Н. Беляев
8 июня 1996 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ РУБОМИЦИНА И ДОКСОРУБИЦИНА МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.0.513-96
Рубомицин (двуномицин) — {8-ацетил-10[(3-амино-2,3,6-тридеокси-L-ликсо-гексапиранозил)окси-7,8,9,10-тетрагидро-6,8,11-тригидрокси-1-метокси-5,12-нафтицендион]} — кристаллическое вещество красного цвета. Хорошо растворим в воде, водных растворах минеральных кислот. Растворим в метиловом и этиловом спиртах. Ограниченно растворим в ацетонитриле. Не растворим в хлороформе. Температура плавления — 184 — 186 °C.
Доксорубицин (адриамицин, 14-гидроксирубомицин) — {10-/3-амино-2,3,6-тридеокси-L-ликсогексопиранозил)окси/-7,8,9,10-тетрагидро-6,9,11-тригидрокси-8-(гидроксиацетил)-1-метокси-5,12-нафтицендион} — кристаллическое вещество красного цвета. Хорошо растворим в воде, водных растворах минеральных кислот. Растворим в метиловом и этиловом спиртах. Ограниченно растворим в ацетонитриле. Нерастворим в хлороформе. Температура плавления — 185 — 186 °C.
В воздухе находятся в виде аэрозолей.
В связи с широкой общетоксической, аллергенной, канцерогенной, мутагенной и тератогенной опасностью ПДК на рубомицин и доксорубицин не устанавливается. Рекомендуется исключить все виды контактов.
Характеристика метода
Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.
Отбор проб производится с концентрированием на фильтр.
Нижний предел измерения рубомицина и доксорубицина в хроматографируемом объеме пробы — 0,0125 мкг.
Нижний предел измерения концентрации рубомицина и доксорубицина в воздухе — 0,0001 мг/м3 (при отборе 500 л воздуха).
Диапазон измеряемых концентраций в воздухе — от 0,0001 до 0,001 мг/м3.
Определению не мешает присутствие дибиомицина, доксициклина тозилата, мешает присутствие хлорметапиклина тозилата.
Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 25%.
Время выполнения анализа, включая отбор пробы, — около 80 мин.
Приборы, аппаратура, посуда
| Микроколоночный жидкостной хроматограф «Милихром» или другие модели с УФ-детектором | |
| Хроматографическая колонка длиной 120 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом «Силасорб GN» с размером зерен 7,0 мкм (Чехия) | |
| Электроаспиратор ЭА-1 | ОСТ 95.10052-84 |
| Фильтродержатель | ТУ 95.7205-77 |
| Роторный испаритель | ТУ 25-11-917-74 |
| Колбы грушевидные для вакуумной разгонки, вместимостью 10 — 15 мл ГОСТ 9737-70 | |
| Микроскоп отсчетный типа МПБ-2 | ТУ 3-3-824-78 |
| Стеклянная ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5 (или другая такого же типа) | |
| Колбы мерные, вместимостью 25, 100 мл и 1 л | ГОСТ 1770-74 |
| Пипетки вместимостью 10 мл | ГОСТ 20292-74 |
| Пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 мл | ГОСТ 10515-75 |
| Фильтры АФА-ВП-10 | ТУ 85-743-80 |
| Реактивы, растворы и материалы | |
Стандартный раствор N 1 с концентрацией рубомицина и доксорубицина по 500 мкг/мл готовят растворением смеси 0,05 г рубомицина и 0,05 г доксорубицина растворителем в мерной колбе, вместимостью 100 мл.
Стандартный раствор N 2 с концентрацией рубомицина и доксорубицина по 10 мкг/мл каждого готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 растворителем.
Растворы устойчивы при хранении в холодильнике в течение суток.
Отбор пробы воздуха
Воздух с объемным расходом 20 л/мин аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для определения 0,0001 мг/м3 рубомицина или доксорубицина достаточно отобрать 500 л воздуха.
Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.
Подготовка к измерению
Хроматографические колонки промышленного изготовления.
Количественный анализ проводят методом абсолютной калибровки с использованием градуировочных растворов, которые готовят с равными концентрациями рубомицина и доксорубицина от 0,0005 до 0,005 мкг/мкл, путем соответствующего разбавления стандартного раствора N 2 растворителем.
Растворы устойчивы в течение суток при хранении в холодильнике в закрытых сосудах.
Градуировочные растворы в количестве 25 мкл инжектируют в хроматограф, вводя равные количества рубомицина и доксорубицина.
Скорость подачи элюента (0,067 М фосфатный буфер
pH 7,2-ацетонитрил, 4,5:1) 100 мкл/мин Длина волны УФ-детектора 234 нм Скорость движения диаграммной ленты, 1,5 мм/мин Диапазон чувствительности детектора 0,4 - 0,8 Диапазон измерения самопишущего потенциометра 50 мВ Объем вводимой пробы 25 мкл Время удерживания рубомицина 25 мин доксорубицина 16 мин 30 с
Эффективность колонки по рубомицина 525 тт доксорубицина 470 тт
На полученной хроматограмме измеряют площади пиков и строят градуировочные графики, выражающие зависимость площади пиков (мм2) от содержания рубомицина или доксорубицина в хроматографируемом объеме (мкг).
Построение градуировочных графиков необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочных графиков следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.
Проведение измерения
Фильтр с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл воды и оставляют на 15 мин при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра и рубомицина и доксорубицина — 98,5%.
Полученный раствор переносят в предварительно взвешенную грушевидную колбу и упаривают на роторном испарителе под вакуумом при температуре 40 — 45 °C досуха. Сухой остаток растворяют в 0,1 мл растворителя.
25 мкл сконцентрированного раствора инжектируют в колонку хроматографа.
Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях по отношению к тем же элюентам, что и при построении градуировочных графиков.
Количественное определение содержания рубомицина и доксорубицина в хроматографируемом объеме проводят по предварительно построенным градуировочным графикам.
Расчет концентрации
Концентрацию рубомицина или доксорубицина C в воздухе (в мг/м3) вычисляют по формуле:
\text{С } = \frac{\text{а} \cdot \text{в}}{\text{б} \cdot V} , где
а — содержание рубомицина или доксорубицина в хроматографируемом объеме пробы, найденное по соответствующему градуировочному графику, мкг;
б — объем пробы, взятой на хроматографирование, мл;
в — общий объем анализируемого раствора, мл;
V — объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к стандартным условиям, л (см. Приложение 1 (не приводится)).