---
title: "\"МУК 4.1.0.499-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций мексамина хлоргидрата и мексамина основания методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.0.499-96"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-0-499-96"
---

## "МУК 4.1.0.499-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций мексамина хлоргидрата и мексамина основания методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны. Методические указания"

# "МУК 4.1.0.499-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций мексамина хлоргидрата и мексамина основания методом высокоэффективной жидкостной хроматографии в воздухе рабочей зоны. Методические указания"

(утв. Госкомсанэпиднадзором России 08.06.1996)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 8 июня 1996 года.


<a id="p100001"></a>Утверждено
И.о. Председателя
Госкомсанэпиднадзора России,

<div align="right">

заместитель Главного<br>
государственного санитарного<br>
врача Российской Федерации<br>
**Е.Н.БЕЛЯЕВ**<br>
8 июня 1996 года

<a id="p100002"></a>Дата введения -<br>
с момента утверждения

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ МЕКСАМИНА ХЛОРГИДРАТА И МЕКСАМИНА**
**ОСНОВАНИЯ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**
**В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ**

<div align="right">

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**<br>
**МУК 4.1.0.499-96**

<a id="p100006"></a> ![рис. 1](https://i.bukva.ai/JnopdE10/img_0.png) М. м. 190,24

</div>


<a id="p100007"></a>Мексамин основание (5-метокситриптамин) - кристаллическое вещество светло-коричневого цвета. Хорошо растворим в метиловом и этиловом спиртах, в органических растворителях, в т.ч. хлороформе и ацетонитриле, а также в водных растворах кислот. Слабо растворим в воде. Температура плавления - 120 - 121 °C.

<a id="p100008"></a> ![рис. 2](https://i.bukva.ai/JnopdE10/img_1.png) М. м. 226,50

<a id="p100009"></a>Мексамин хлоргидрат (5-метокситриптамин хлоргидрат) - кристаллическое вещество белого или светло-коричневого цвета. Растворим в метиловом и этиловом спиртах, в органических растворителях, в т.ч. хлороформе и ацетонитриле. Хорошо растворим в воде. Температура плавления - 242 - 244 °C.
<a id="p100010"></a>В воздухе находятся в виде аэрозолей.
<a id="p100011"></a>Обладают общетоксическим действием.
<a id="p100012"></a>ОБУВ в воздухе - 0,1 мг/м3.


## <a id="p100013"></a>Характеристика метода


<a id="p100014"></a>Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.
<a id="p100015"></a>Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.
<a id="p100016"></a>Нижний предел измерения мексамина основания в хроматографируемом объеме пробы (10 мкл) - 0,1 мкг, суммы мексамина хлоргидрата и мексамина основания в хроматографируемом объеме пробы (50 мкл) - 0,005.
<a id="p100017"></a>Нижний предел измерения мексамина основания и мексамина хлоргидрата в воздухе - 0,05 мг/м3 (при отборе 100 л воздуха).
<a id="p100018"></a>Диапазон измеряемых концентраций мексамина основания и мексамина хлоргидрата в воздухе - от 0,05 до 1 мг/м3.
<a id="p100019"></a>Измерению не мешает наличие 5-метокситриптамин-2-карбоновой кислоты.
<a id="p100020"></a>Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20%.
<a id="p100021"></a>Время выполнения анализа, включая отбор пробы, - около 40 мин.


## <a id="p100022"></a>Приборы, аппаратура, посуда



<table>
<colgroup><col width="70%"><col width="30%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100023"></a>Микроклоночный жидкостной хроматограф "Милихром" или другие модели с УФ-детектором</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100024"></a>Хроматографическая колонка N 1 длиной 120 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом "Силасорб SPH $C_{18}$ " с размером зерен 6,0 мкм (Чехия)</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100025"></a>Хроматографическая колонка N 2 длиной 120 мм, внутренним диаметром 2 мм, заполненная сорбентом "Силасорб CN" с размером зерен 7,0 мкм (Чехия)</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100026"></a>Электроаспиратор ЭА-1</td><td><a id="p100027"></a>ОСТ 95.10052-84</td></tr>
<tr><td><a id="p100028"></a>Фильтродержатель</td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100029"></a>Колбы мерные, вместимостью 100 мл</td><td><a id="p100030"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-1770-74">ГОСТ 1770-74</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100031"></a>Пипетки вместимостью 1 и 10 мл</td><td><a id="p100032"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74">ГОСТ 20292-74</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100033"></a>Пробирки с пришлифованными пробками, вместимостью 10 мл</td><td><a id="p100034"></a>ГОСТ 10515-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100035"></a>Роторный испаритель</td><td><a id="p100036"></a>ТУ 25-11-97-74</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100037"></a><a id="p100038"></a>Колбы грушевидные для вакуумной перегонки, вместимостью 25 - 30 мл<br>ГОСТ 9737-70</td></tr>
<tr><td></td><td><a id="p100039"></a>Реактивы, растворы и материалы</td></tr>
</table>



| <a id="p100040"></a>Мексамин хлоргидрат, фармакопейный |  |
| --- | --- |
| <a id="p100041"></a>Мексамин основание, фармакопейный |  |
| <a id="p100042"></a>Кислота ортофосфорная, х.ч., 2%-ный раствор | <a id="p100043"></a>ГОСТ 6552-58 |
| <a id="p100044"></a>Кислота уксусная ледяная, х.ч., 1%-ный раствор | <a id="p100045"></a>ГОСТ 61-75 |
| <a id="p100046"></a>Калий фосфорно-кислый однозамещенный | <a id="p100047"></a>ТУ 4198-75 |
| <a id="p100048"></a>Ацетонитрил очищенный, ч. | <a id="p100049"></a>ТУ 6-09-3534-82 |
| <a id="p100050"></a>Ацетонитрил очищенный получают из технического ацетонитрила чистого путем ректификации с предварительной химической обработкой, которая заключается в кипячении растворителя с обратным холодильником в присутствии перманганата калия из расчета 1 г перманганата калия на 1 л растворителя. Кипячение проводится до полного перехода перманганата калия в двуокись марганца. Перед ректификацией осадок двуокиси марганца отделяют путем фильтрации через фильтр Шотта N 4. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2 x 2 x 0,2 мм) Основную фракцию отбирают при температуре 81,6 °C (атмосферное давление) в пределах колебаний +/- 0,1 °C |  |
| <a id="p100051"></a>Гексан очищенный |  |
| <a id="p100052"></a>Гексан очищенный получают из гексана, х.ч. путем ректификации. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2 х 2 х 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 69 °C (атмосферное давление) в пределах колебаний +/- 0,1 °C | <a id="p100053"></a>ТУ 6-09-3375-78 |
| <a id="p100054"></a>Этанол (спирт этиловый) очищенный |  |
| <a id="p100055"></a>Этанол очищенный получают из спирта этилового ректификованного путем ректификации. Ректификационная колонна длиной 550 мм и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое число 5. Насадка - спиральки Левина из нержавеющей стали (2 x 2 x 0,2 мм). Основную фракцию отбирают при температуре 78,3 °C (атмосферное давление) в пределах колебаний +/- 0,1 °C<br>0,1 М фосфатный буфер (pH 2,5) готовят в мерной колбе, вместимостью 100 мл. 1,36 г калия фосфорно-кислого однозамещенного помещают в колбу, добавляют 10 - 20 мл дистиллированной воды, затем 0,1 мл 2% ортофосфорной кислоты, доводят раствор до метки дистиллированной водой и тщательно перемешивают | <a id="p100056"></a>ТУ 18300-72 |
| <a id="p100057"></a>Элюент 1: ацетонитрил - 0,1 М фосфатный буфер (pH 2,5), (1:9) |  |
| <a id="p100058"></a>Элюент 2: гексан-этанол, 2:1 |  |
| <a id="p100059"></a>Растворитель 1:1% раствор уксусной кислоты |  |
| <a id="p100060"></a>Растворитель 2: этанол |  |


<a id="p100061"></a>Стандартный раствор N 1 с концентрацией мексамина хлоргидрата 100 мкг/мл готовят растворением 0,01 г мексамина хлоргидрата в 1%-ном растворе уксусной кислоты в мерной колбе, вместимостью 100 мл.
<a id="p100062"></a>Стандартный раствор N 2 с концентрацией мексамина хлоргидрата 5 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением стандартного раствора N 1 раствором уксусной кислоты.
<a id="p100063"></a>Стандартный раствор N 3 с концентрацией мексамина основания 200 мкг/мл готовят растворением 0,02 г мексамина основания в этаноле в мерной колбе, вместимостью 100 мл.
<a id="p100064"></a>Растворы устойчивы при хранении в холодильнике в течение недели.


| <a id="p100065"></a>Фильтры АФА-ВП-10 | <a id="p100066"></a>ТУ 85-743-80 |
| --- | --- |



## <a id="p100067"></a>Отбор пробы воздуха


<a id="p100068"></a>Воздух с объемным расходом 10 л/мин аспирируют раздельно через 2 независимых фильтра типа АФА-ВП-10 (фильтр N 1 и фильтр N 2). Для определения 1/2 ОБУВ достаточно аспирировать по 100 л воздуха через каждый фильтр. Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.


## <a id="p100069"></a>Подготовка к измерению


<a id="p100070"></a>Хроматографические колонки промышленного изготовления.
<a id="p100071"></a>Инжектируют в хроматограф, в хроматографическую колонку N 1 от 0,005 до 0,1 мкг мексамина хлоргидрата из стандартного раствора N 2.
<a id="p100072"></a>Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:


| <a id="p100073"></a>Температура термостата колонки | <a id="p100074"></a>20 °C |
| --- | --- |
| <a id="p100075"></a>Скорость подачи элюента (ацетонитрил-0, М фосфатный буфер (pH 2,5) - 1:9 | <a id="p100076"></a>100 мкл/мин |
| <a id="p100077"></a>Длина волны УФ-детектора | <a id="p100078"></a>224 нм |
| <a id="p100079"></a>Скорость движения диаграммной ленты | <a id="p100080"></a>3 мм/мин |
| <a id="p100081"></a>Чувствительность детектора | <a id="p100082"></a>0,1 |
| <a id="p100083"></a>Диапазон измерения самописца | <a id="p100084"></a>100 мВ |
| <a id="p100085"></a>Максимальный объем вводимой пробы | <a id="p100086"></a>50 мкл |
| <a id="p100087"></a>Время удерживания мексамина хлоргидрата и мексамина основания в фосфатном буфере | <a id="p100088"></a>13 мин 45 с |
| <a id="p100089"></a>Элюирующий объем | <a id="p100090"></a>1375 мкл |
| <a id="p100091"></a>Эффективность колонки по мексамина хлоргидрату и мексамина основанию в фосфатном буфере | <a id="p100092"></a>2200 тт |


<a id="p100093"></a>Строят градуировочный график N 1, для чего на полученных хроматограммах измеряют площади пиков и вычерчивают градуировочную кривую, выражающую зависимость площади пиков (мм2) от совместного содержания мексамина хлоргидрата и мексамина основания в хроматографируемом объеме пробы (мкг).
<a id="p100094"></a>Инжектируют в хроматограф в хроматографическую колонку N 2 от 0,1 до 2 мкг мексамина основания из стандартного раствора N 3.
<a id="p100095"></a>Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:


| <a id="p100096"></a>Температура термостата колонки | <a id="p100097"></a>20 °C |
| --- | --- |
| <a id="p100098"></a>Скорость подачи элюента: гексан-этанол, 2:1 | <a id="p100099"></a>200 мкл/мин |
| <a id="p100100"></a>Длина волны УФ-детектора | <a id="p100101"></a>210 нм |
| <a id="p100102"></a>Скорость движения диаграммной ленты | <a id="p100103"></a>1,5 мм/мин |
| <a id="p100104"></a>Чувствительность детектора | <a id="p100105"></a>0,8 |
| <a id="p100106"></a>Диапазон измерения самописца | <a id="p100107"></a>100 мВ |
| <a id="p100108"></a>Максимальный объем вводимой пробы | <a id="p100109"></a>10 мкл |
| <a id="p100110"></a>Время удерживания мексамина основания | <a id="p100111"></a>8 мин 45 с |
| <a id="p100112"></a>Элюирующий объем | <a id="p100113"></a>1750 мкл |
| <a id="p100114"></a>Эффективность колонки по мексамина основанию | <a id="p100115"></a>420 тт |


<div align="center">

<a id="p100116"></a>Строят градуировочный график N 2, для чего на полученных хроматограммах измеряют площади пиков и вычерчивают градуировочную кривую, выражающую зависимость площади пиков (мм2) от содержания мексамина основания в хроматографируемом объеме пробы (мкг).<br>
<a id="p100117"></a>Построение градуировочных графиков необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.

</div>



## <a id="p100118"></a>Проведение измерения


<a id="p100119"></a>Фильтр N 1 с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл 1%-ного раствора уксусной кислоты и оставляют на 15 мин при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра суммарного количества мексамина основания и мексамина хлоргидрата - 98,5%.
<a id="p100120"></a>Хроматографирование полученного раствора N 1 проводят в тех же условиях по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика N 1.
<a id="p100121"></a>Количественное определение суммарного содержания мексамина основания и мексамина хлоргидрата в хроматографируемых объемах проводят по предварительно построенному градуировочному графику N 1.
<a id="p100122"></a>Фильтр N 2 с отобранной пробой помещают в пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 5 мл этанола и оставляют на 15 мин при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра суммарного количества мексамина основания - 97%.
<a id="p100123"></a>Раствор переносят количественно в грушевидную колбу для перегонки под вакуумом и упаривают на роторном испарителе под вакуумом при температуре 35 - 40 °C до постоянного веса. Сухой остаток растворяют в 0,5 мл элюента N 2.
<a id="p100124"></a>Хроматографирование полученного раствора N 2 проводят в тех же условиях по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика N 2.
<a id="p100125"></a>Количественное определение индивидуального содержания мексамина основания в хроматографируемых объемах проводят по предварительно построенному градуировочному графику N 2.


## <a id="p100126"></a>Расчет концентрации


<div align="center">

<a id="p100127"></a>Суммарную концентрацию мексамина основания и мексамина хлоргидрата C в воздухе (в мг/м3) вычисляют по формуле:

<a id="p100128"></a> $C = \frac{\text{а} \cdot \text{в}}{\text{б} \cdot V}$ , где

</div>


<a id="p100129"></a>а - суммарное содержание мексамина основания и мексамина хлоргидрата в хроматографируемом объеме пробы, найденное по соответствующему градуировочному графику, мкг;
<a id="p100130"></a>б - объем пробы, взятой на хроматографирование, мл;
<a id="p100131"></a>в - общий объем анализируемого раствора, мл;
<a id="p100132"></a>V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. Приложение 1 (не приводится)).
<a id="p100133"></a>Концентрацию мексамина основания C в воздухе (в мг/м3) вычисляют по формуле:

<a id="p100134"></a> $C = \frac{\text{а} \cdot \text{в}}{\text{б} \cdot V}$ , где

<div align="center">

<a id="p100135"></a>а - содержание мексамина основания в хроматографируемом объеме пробы, найденное по соответствующему градуировочному графику, мкг;<br>
<a id="p100136"></a>б - объем пробы, взятой на хроматографирование, мл;<br>
<a id="p100137"></a>в - общий объем анализируемого раствора, мл;<br>
<a id="p100138"></a>V - объем воздуха, отобранного для анализа и приведенного к стандартным условиям, л (см. Приложение 1 (не приводится)).

</div>




<a id="p100139"></a>

---