---
title: "\"МУК 4.1.0.416-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций витамина B1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в воздухе рабочей зоны. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.0.416-96"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/muk-4-1-0-416-96"
---

## "МУК 4.1.0.416-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций витамина B1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в воздухе рабочей зоны. Методические указания"

# "МУК 4.1.0.416-96. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Измерение концентраций витамина B1 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в воздухе рабочей зоны. Методические указания"

(утв. Госкомсанэпиднадзором России 08.06.1996)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень основных действующих нормативно-методических документов по методам лабораторного и инструментального контроля в системе государственного санитарно-эпидемиологического нормирования (Письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 8 июня 1996 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Председатель<br>
Госкомсанэпиднадзора России,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Е.Н.БЕЛЯЕВ**

</div>

<div align="center">

8 июня 1996 года

</div>



#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**ИЗМЕРЕНИЕ КОНЦЕНТРАЦИЙ ВИТАМИНА B1 МЕТОДОМ**
**ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**
**(ВЭЖХ) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
*МУК 4.1.0.416-96*

<a id="p100002"></a>*Дата введения:*
*с момента утверждения*

<a id="p100006"></a>*1. Разработаны с целью обеспечения контроля соответствия фактических концентраций вредных веществ их предельно допустимым концентрациям (ПДК) и ориентировочно безопасным уровням воздействия (ОБУВ) - санитарно-гигиеническим нормативам и являются обязательными при осуществлении санитарного контроля.*
<a id="p100007"></a>*2. Утверждены Председателем Госкомсанэпиднадзора России (Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 8 июня 1996 г.).*
<a id="p100008"></a>*3. Разработаны и подготовлены в соответствии с требованиями ГОСТа 12.1.005-88. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Общие санитарно-гигиенические требования", ГОСТа 12.1.016-79. ССБТ "Воздух рабочей зоны. Требования к методикам контроля измерения концентраций вредных веществ", ГОСТ Р 1.5-92, п. 7.3, ГОСТ 8.010-90 "Государственная система обеспечения единства измерений. Методики выполнения измерений".*
<a id="p100009"></a>*4. Одобрены комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию Госкомсанэпиднадзора России и Проблемной комиссией "Научные основы гигиены труда и профпатологии".*
<a id="p100010"></a>*5. Предназначены для центров госсанэпиднадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также заинтересованных министерств и ведомств.*
<a id="p100011"></a>*6. Введены впервые.*
<a id="p100012"></a>*Ответственный исполнитель: Г.А. Дьякова.*
<a id="p100013"></a>*Исполнители: Г.А. Дьякова, Л.Г. Макеева, Е.М. Малинина, С.М. Попова, Е.Н. Грицун, Т.В. Рязанцева, Г.Ф. Громова.*

<a id="p100014"></a>*Структурная формула (не приводится).*
<a id="p100015"></a>*М. м. 426,17.*
<a id="p100016"></a>    *Витамин В   (тиамина  бромид)  -   (4-метил-5-бета-оксиэтил-N-*
             *1*
*(2-метил-4-амино-5-метилпиримидил)-тиазолий  бромид гидробромид) -*
*кристаллическое  вещество  белого  цвета  со  слабым специфическим*
*запахом. Хорошо  растворим  в  воде, метиловом и этиловом спиртах.*
*Трудно  растворим  в  ацетоне.  Не  растворим  в  эфире,  бензоле,*
*хлороформе. Т    - 210 - 215 °С.*
             *пл.*
<a id="p100017"></a>*В воздухе находится в виде аэрозоля.*
<a id="p100018"></a>*Обладает специфическим аллергенным действием.*
<a id="p100019"></a>*ПДК в воздухе 0,1 мг/куб. м.*


### <a id="p100020"></a>Характеристика метода


<a id="p100021"></a>*Метод основан на использовании высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением УФ-детектора.*
<a id="p100022"></a>*Отбор проб производится с концентрированием на фильтр.*
<a id="p100023"></a>    *Нижний  предел  измерения  витамина  В   в  хроматографируемом*
                                          1

<div align="right">

объеме пробы (30 мкл) - 0,3 мкг.<br>
<a id="p100024"></a>    Нижний предел измерения витамина В  в воздухе - 0,05 мг/куб. м

</div>

<div align="center">

                                      1

</div>

(при отборе 600 л воздуха).
<a id="p100025"></a>    Диапазон  измеряемых  концентраций  витамина В  в воздухе - от
                                                  1
0,05 до 1 мг/куб. м.
<a id="p100026"></a>Суммарная погрешность измерения не превышает +/- 20%.
<a id="p100027"></a>Время выполнения измерения, включая отбор проб, - около 40 мин.


### <a id="p100028"></a>Приборы, аппаратура, посуда


<a id="p100029"></a>Микроколоночный жидкостной
хроматограф "Милихром-2" или
другие модели с УФ-детектором
<a id="p100030"></a>Хроматографическая колонка длиной 120 мм,
внутренним диаметром 2 мм, заполненная
сорбентом "Силасорб SPH C  " с размером
                         18
зерен 9 мкм, (ЧСФР)
<a id="p100031"></a>Электроаспиратор ЭА-1                            ОСТ 95.10052-84
<a id="p100032"></a>Микроскоп отсчетный типа ПМБ-2                   ТУ 3-3.824-78
<a id="p100033"></a>Фильтродержатель, снабженный
металлической сеткой
<a id="p100034"></a>Стеклянная ректификационная колонна              ТУ 25-1173.131-85

<div align="center">

длиной 550 мм и внутренним диаметром

</div>

20 мм, флегмовое число 5 (или другая
такого же типа). Насадка - спиральки Левина
из нержавеющей стали (2 х 2 х 0,2 мм)
<a id="p100035"></a>Колбы мерные вместимостью 100 мл [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100036"></a>Пипетки вместимостью 1 и 10 мл [ГОСТ 20292-74](https://bukva.ai/docs/standart-gost-20292-74)
<a id="p100037"></a>Пробирки с пришлифованными пробками              ГОСТ 10515-75
вместимостью 10 мл


### <a id="p100038"></a>Реактивы, растворы, материалы


<a id="p100039"></a>Витамин В  фармакопейный, 99% чистоты
         1
<a id="p100040"></a>Калий марганцовокислый (калий перманганат) ТУ 20490-75
<a id="p100041"></a>Ацетонитрил очищенный                              ТУ 6-09-3534-82
<a id="p100042"></a>Ацетонитрил очищенный получают из ацетонитрила, ч., путем ректификации с предварительной химической обработкой, которая заключается в кипячении растворителя с обратным холодильником в присутствии перманганата калия из расчета 1 г перманганата калия на 1 л растворителя. Кипячение проводится до полного перехода перманганата калия в двуокись марганца. Перед ректификацией осадок двуокиси марганца отделяют путем фильтрации через фильтр Шотта N 4.

<div align="center">

<a id="p100043"></a>Ректификационная  колонна длиной 550 мм

</div>

и внутренним диаметром 20 мм, флегмовое
число 5. Насадка - спиральки Левина из
нержавеющей стали (2 х 2 х 0,2 мм)
<a id="p100044"></a>Основную фракцию отбирают при температуре 81,6 °С
(атмосферное давление) в пределах колебаний
+/- 0,1 °С
Элюент: ацетонитрил - вода (4:1)
<a id="p100045"></a>    Основной  стандартный  раствор с концентрацией витамина В  200
                                                             1
мкг/мл готовят растворением 0,02 г вещества в воде в мерной  колбе
вместимостью 100 мл.
<a id="p100046"></a>    Раствор устойчив при хранении в холодильнике в течение недели.
Фильтры АФА-ВП-10                                  ТУ 85-743-80


### <a id="p100047"></a>Отбор пробы воздуха


<a id="p100048"></a>Воздух с объемным расходом 30 л/мин. аспирируют через фильтр АФА-ВП-10. Для определения 1/2 ОБУВ достаточно отобрать 600 л воздуха.
<a id="p100049"></a>Пробы можно хранить в закрытых сосудах в холодильнике в течение месяца.


### <a id="p100050"></a>Подготовка к измерению


<a id="p100051"></a>Хроматографическая колонка промышленного изготовления. Градуировочные растворы готовят согласно таблице.

<a id="p100052"></a>Таблица


| N стандарта | Основной стандартный р-р, мл | Вода дистиллированная, мл | Концентрация вещества в градуировочном растворе, мкг/мл |
| --- | --- | --- | --- |
| 1 | 0,5 | 9,5 | 10 |
| 2 | 1,0 | 9,0 | 20 |
| 3 | 2,0 | 8,0 | 40 |
| 4 | 5,0 | 5,0 | 100 |
| 5 | 8,0 | 2,0 | 160 |
| 6 | 10,0 | 0 | 200 |


<a id="p100060"></a>    Инжектируют  в хроматограф по 30 мкл каждого из градуировочных
растворов (от 0,3 до 6 мкг витамина В ).
                                     1
<a id="p100061"></a>Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:
<a id="p100062"></a>    скорость подачи элюента                          300 мкл/мин.;
    (ацетонитрил - вода, 5:1)
<a id="p100063"></a>    длина волны УФ-детектора                         242 нм;
<a id="p100064"></a>    скорость движения диаграммной ленты              3 мм/мин.;

<div align="center">

<a id="p100065"></a>    диапазон чувствительности детектора              0,2;

</div>

<a id="p100066"></a>    диапазон измерения самопишущего потенциометра    100 мВ;
<a id="p100067"></a>    объем вводимой пробы                             30 мкл;
<a id="p100068"></a>    время удерживания витамина В                     9 мин.;
                                1

<div align="center">

<a id="p100069"></a>    элюирующий объем                                 2700 мкл;

</div>

<a id="p100070"></a>    эффективность колонки по витамину В              900 тт.
                                       1
<a id="p100071"></a>    На  полученной  хроматограмме  измеряют площади пиков и строят

<div align="right">

градуировочный  график,  выражающий зависимость площади пиков (кв.<br>
мм)  от  содержания  витамина В  в хроматографируемом объеме пробы

</div>

                               1
(мкг).
<a id="p100072"></a>Построение градуировочного графика необходимо проводить не менее чем по 6 точкам, выполняя по 5 параллельных измерений для каждого инжектируемого объема. Проверку градуировочного графика следует проводить при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в месяц.


### <a id="p100073"></a>Проведение измерения


<a id="p100074"></a>Оба фильтра с отобранными пробами помещают в общую пробирку с пришлифованной пробкой, добавляют 3 мл воды и оставляют на 15 мин. при комнатной температуре и периодическом перемешивании. Степень десорбции с фильтра - 96,5%.
<a id="p100075"></a>Инжектируют в хроматограф 30 мкл полученного раствора.
<a id="p100076"></a>Хроматографирование анализируемого раствора проводят в тех же условиях и по отношению к тому же элюенту, что и при построении градуировочного графика.
<a id="p100077"></a>    Количественное    определение   содержания   витамина   В    в
                                                             1
хроматографируемом  объеме проводят по предварительно построенному
градуировочному графику.


### <a id="p100078"></a>Расчет концентрации


<a id="p100079"></a>    Концетрацию витамина В  (С) в воздухе (мг/куб. м) вычисляют по
                          1
формуле:

                                а х в
<a id="p100080"></a>                            С = -----,
                                б х V

    где:
    а  - содержание витамина В  в хроматографируемом объеме пробы,
                              1
найденное по градуировочному графику, мкг;
    б - объем пробы, взятой на хроматографирование, мл;
    в - общий объем анализируемого раствора, мл;
    V  -  объем  воздуха, отобранного для анализа и приведенного к
стандартным условиям, л (см. [Приложение 1](#p100082)).

<a id="p100081"></a>Методические указания разработаны НИО "Экотокс", г. Москва.






## <a id="p100082"></a>Приложение 1


<a id="p100083"></a>Приведение объема воздуха к стандартным условиям (температура 20 °С и давление 760 мм рт. ст.) проводят по формуле:

                          V  + (273 + 20) х Р
<a id="p100084"></a>                    V   = -------------------,

<div align="center">

                     20   (273 + t) х 101,33

</div>


    где:
    V  - объем воздуха, отобранный для анализа, л;
     t
    Р  -   барометрическое   давление,   кПа  (101,33  кПа  =  760
мм рт. ст.);
    t - температура воздуха в месте отбора пробы, °С.
<a id="p100085"></a>    Для   удобства  расчета   V    следует  пользоваться  таблицей
                               20
коэффициентов ([Приложение 2](#p100087)). Для приведения воздуха к стандартным
условиям надо умножить V  на соответствующий коэффициент.
                        t





<a id="p100086"></a>Приложение 2

<a id="p100087"></a>**КОЭФФИЦИЕНТЫ ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА ВОЗДУХА**

<div align="right">

**К СТАНДАРТНЫМ УСЛОВИЯМ**

</div>



<table>
<colgroup><col width="5%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="10%"><col width="10%"></colgroup>
<tr><td colspan="11">Давление Р, кПа/мм рт. ст.</td></tr>
<tr><td>°С</td><td>97,33/ 730</td><td>97,86/ 734</td><td>98,4/ 738</td><td>98,93/ 742</td><td>99,46/ 746</td><td>100/ 750</td><td>100,53/ 754</td><td>101,06/ 758</td><td>101,33/ 760</td><td>101,86/ 764</td></tr>
<tr><td>-30</td><td>1,1582</td><td>1,1646</td><td>1,1709</td><td>1,1772</td><td>1,1836</td><td>1,1899</td><td>1,1963</td><td>1,2026</td><td>1,2058</td><td>1,2122</td></tr>
<tr><td>-26</td><td>1,1393</td><td>1,1456</td><td>1,1519</td><td>1,1581</td><td>1,1644</td><td>1,1705</td><td>1,1768</td><td>1,1831</td><td>1,1862</td><td>1,1925</td></tr>
<tr><td>-22</td><td>1,1212</td><td>1,1274</td><td>1,1336</td><td>1,1396</td><td>1,1458</td><td>1,1519</td><td>1,1581</td><td>1,1643</td><td>1,1673</td><td>1,1735</td></tr>
<tr><td>-18</td><td>1,1036</td><td>1,1097</td><td>1,1158</td><td>1,1218</td><td>1,1278</td><td>1,1338</td><td>1,1399</td><td>1,1460</td><td>1,1490</td><td>1,1551</td></tr>
<tr><td>-14</td><td>1,0866</td><td>1,0926</td><td>1,0986</td><td>1,1045</td><td>1,1105</td><td>1,1164</td><td>1,1224</td><td>1,1284</td><td>1,1313</td><td>1,1373</td></tr>
<tr><td>-10</td><td>1,0701</td><td>1,0760</td><td>1,0819</td><td>1,0877</td><td>1,0986</td><td>1,0994</td><td>1,1053</td><td>1,1112</td><td>1,1141</td><td>1,1200</td></tr>
<tr><td>-6</td><td>1,0540</td><td>1,0599</td><td>1,0657</td><td>1,0714</td><td>1,0772</td><td>1,0829</td><td>1,0887</td><td>1,0945</td><td>1,0974</td><td>1,1032</td></tr>
<tr><td>-2</td><td>1,0385</td><td>1,0442</td><td>1,0499</td><td>1,0556</td><td>1,0613</td><td>1,0669</td><td>1,0726</td><td>1,0784</td><td>1,0812</td><td>1,0869</td></tr>
<tr><td>0</td><td>1,0309</td><td>1,0366</td><td>1,0423</td><td>1,0477</td><td>1,0535</td><td>1,0591</td><td>1,0648</td><td>1,0705</td><td>1,0733</td><td>1,0789</td></tr>
<tr><td>+2</td><td>1,0234</td><td>1,0291</td><td>1,0347</td><td>1,0402</td><td>1,0459</td><td>1,0514</td><td>1,0571</td><td>1,0627</td><td>1,0655</td><td>1,0712</td></tr>
<tr><td>+6</td><td>1,0087</td><td>1,0143</td><td>0,0198</td><td>1,0253</td><td>1,0309</td><td>1,0363</td><td>1,0419</td><td>1,0475</td><td>1,0502</td><td>1,0557</td></tr>
<tr><td>+10</td><td>0,9944</td><td>0,9999</td><td>0,0054</td><td>1,0108</td><td>1,0162</td><td>1,0216</td><td>1,0272</td><td>1,0326</td><td>1,0353</td><td>1,0407</td></tr>
<tr><td>+14</td><td>0,9806</td><td>0,9860</td><td>0,9914</td><td>0,9967</td><td>1,0027</td><td>1,0074</td><td>1,0128</td><td>1,0183</td><td>1,0209</td><td>1,0263</td></tr>
<tr><td>+18</td><td>0,9671</td><td>0,9725</td><td>0,9778</td><td>0,9830</td><td>0,9884</td><td>0,9936</td><td>1,9989</td><td>1,0043</td><td>1,0069</td><td>1,0122</td></tr>
<tr><td>+20</td><td>0,9605</td><td>0,9658</td><td>0,9711</td><td>0,9783</td><td>0,9816</td><td>0,9868</td><td>0,9921</td><td>0,9974</td><td>1,0000</td><td>1,0053</td></tr>
<tr><td>+22</td><td>0,9539</td><td>0,9592</td><td>0,9645</td><td>0,9696</td><td>0,9749</td><td>0,9800</td><td>0,9853</td><td>0,9906</td><td>0,9932</td><td>1,9985</td></tr>
<tr><td>+24</td><td>0,9475</td><td>0,9527</td><td>0,9579</td><td>0,9631</td><td>0,9683</td><td>0,9735</td><td>0,9787</td><td>0,9839</td><td>0,9865</td><td>1,9917</td></tr>
<tr><td>+26</td><td>0,9412</td><td>0,9464</td><td>0,9516</td><td>0,9566</td><td>0,9618</td><td>0,9669</td><td>0,9721</td><td>0,9773</td><td>0,9799</td><td>1,9851</td></tr>
<tr><td>+28</td><td>0,9349</td><td>0,9401</td><td>0,9453</td><td>0,9503</td><td>0,9555</td><td>0,9605</td><td>0,9657</td><td>0,9708</td><td>0,9734</td><td>1,9785</td></tr>
<tr><td>+30</td><td>0,9288</td><td>0,9339</td><td>0,9391</td><td>0,9440</td><td>0,9432</td><td>0,9542</td><td>0,9594</td><td>0,9645</td><td>0,9670</td><td>0,9723</td></tr>
<tr><td>+34</td><td>0,9167</td><td>0,9218</td><td>0,9268</td><td>0,9318</td><td>0,9368</td><td>0,9418</td><td>0,9468</td><td>0,9519</td><td>0,9544</td><td>0,9595</td></tr>
<tr><td>+38</td><td>0,9049</td><td>0,9099</td><td>0,9149</td><td>0,9199</td><td>0,9248</td><td>0,9297</td><td>0,9347</td><td>0,9397</td><td>0,9421</td><td>0,9471</td></tr>
</table>







## <a id="p100112"></a>Приложение 3


<a id="p100113"></a>Рис. 1. Ловушка-концентратор. Общий вид.

<a id="p100114"></a>Рисунок не приводится.

<a id="p100115"></a>Рис. 2. Ловушка-концентратор.

<a id="p100116"></a>Рисунок не приводится.





<div align="center">

<a id="p100117"></a>Приложение 4

<a id="p100118"></a>**ВЕЩЕСТВА, ОПРЕДЕЛЯЕМЫЕ ПО РАНЕЕ УТВЕРЖДЕННЫМ**<br>
**МЕТОДИЧЕСКИМ УКАЗАНИЯМ**

</div>


<a id="p100119"></a>     Название вещества               Методические указания

1. <a id="p100120"></a>Аммоний винно-кислый Методические [указания](https://bukva.ai/docs/1637-77) на
кислый                        фотометрическое определение аммиака:
                              Сб. МУ, в. 1 - 5. М., 1981. 58 с.
                              К = 9,82
<a id="p100121"></a>Аммоний винно-кислый Методические [указания](https://bukva.ai/docs/1637-77) на
                              фотометрическое определение
                              аммиака: Сб. МУ, в. 1 - 5. М., 1981.
                              58 с.  К = 5,41
2. <a id="p100122"></a>Калий винно-кислый         Методические указания по измерению
<a id="p100123"></a>Калий винно-кислый кислый     концентраций сульфата калия,
                              калийной магнезии и хлорида калия в
                              воздухе рабочей зоны: Сб. МУ, в. 22.
                              М., 1988. 182 с. К = 2,9 и 4,82
3. <a id="p100124"></a>Калий сурьмоксид           Методические указания по
винно-кислый                  полярографическому измерению
                              концентраций сурьмы в воздухе
                              рабочей зоны: Сб. МУ, в. 8. М.,
                              1983. 90 с. К = 2,66
4. <a id="p100125"></a>Натрий винно-кислый        Методические указания по измерению
кислый                        концентраций натрия сульфата в
                              воздухе рабочей зоны методом
                              атомно-абсорбционной
                              спектрофотометрии: Сб. МУ, в. 21.
                              М., 1986. 135 с. К = 7,48
<a id="p100126"></a>Натрий винно-кислый           Методические указания по измерению
                              концентраций натрия сульфата в
                              воздухе рабочей зоны методом
                              атомно-абсорбционной
                              спектрофотометрии: Сб. МУ, в. 21.
                              М., 1986. 135 с. К = 4.22
<a id="p100127"></a>Калий-натрий винно-кислый     Методические указания по измерению
                              концентраций натрия сульфата в
                              воздухе рабочей зоны методом
                              атомно-абсорбционной
                              спектрофотометрии: Сб. МУ, в. 21.
                              М., 1986. 135 с. К = 3,39
5. <a id="p100128"></a>Полиметилмочевина Методические [указания](https://bukva.ai/docs/1719-77) по
                              гравиметрическому определению пыли
                              в воздухе рабочей зоны и в системах
                              вентиляционных установок: Сб. МУ,
                              в. 1 - 5. М., 1981. 235 с.
6. <a id="p100129"></a>Трифторметансульфофторид Методические [указания](https://bukva.ai/docs/1699-77) на
(фторангидрид трифторметан    фотометрическое определение
сульфокислоты)                фторорганических соединений: Сб. МУ,
                              в. 1 - 5. М. 1981. 187 с. К = 2
7. <a id="p100130"></a>Хлоргидрат Методические [указания](https://bukva.ai/docs/1667-77) на
изонипекотиновой кислоты      фотометрическое определение
                              диэтиламина в воздухе: Сб. МУ, в.
                              1 - 5. М., 1981. 123 с. Отбор проб
                              на фильтр со скоростью 2 л/мин.



<a id="p100131"></a>

---