---
title: "\"МУ 3.5.1.4130-25. 3.5.1. Дезинфекция. Оценка эффективности дезинфицирующих средств в отношении микроорганизмов в составе микробных ассоциаций (биологических пленок). Методические указания\""
number: "МУ 3.5.1.4130-25"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/mu-3-5-1-4130-25"
---

## "МУ 3.5.1.4130-25. 3.5.1. Дезинфекция. Оценка эффективности дезинфицирующих средств в отношении микроорганизмов в составе микробных ассоциаций (биологических пленок). Методические указания"

# "МУ 3.5.1.4130-25. 3.5.1. Дезинфекция. Оценка эффективности дезинфицирующих средств в отношении микроорганизмов в составе микробных ассоциаций (биологических пленок). Методические указания"

(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 11.04.2025)

> [!IMPORTANT]
> Начало действия документа - [11.09.2025](#p100003).


<a id="p100001"></a>**ГОСУДАРСТВЕННОЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ НОРМИРОВАНИЕ**
**РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ**

<a id="p100002"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
11 апреля 2025 г.

<a id="p100003"></a>Дата введения 11 сентября 2025 г.


##### <a id="p100004"></a>3.5.1 ДЕЗИНФЕКЦИЯ


<a id="p100005"></a>**ОЦЕНКА**
**ЭФФЕКТИВНОСТИ ДЕЗИНФИЦИРУЮЩИХ СРЕДСТВ В ОТНОШЕНИИ**
**МИКРООРГАНИЗМОВ В СОСТАВЕ МИКРОБНЫХ АССОЦИАЦИЙ**
**(БИОЛОГИЧЕСКИХ ПЛЕНОК)**

<a id="p100006"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
МУ 3.5.1.4130-25

1. <a id="p100007"></a>Разработаны Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Е.П. Игонина); ФБУН НИИ СБМ Роспотребнадзора (Л.С. Федорова, А.С. Ивкина, Е.Н. Ильина); Институтом дезинфектологии ФБУН "ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана" Роспотребнадзора (Ю.В. Демина, Н.И. Еремеева, А.В. Ильякова); ФБУН ЦНИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора (В.Г. Акимкин, А.В. Тутельян).
2. <a id="p100008"></a>Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 11 апреля 2025 г.
3. <a id="p100009"></a>Введены впервые


### <a id="p100010"></a>I. Область применения


<a id="p100011"></a>1.1. Настоящие методические указания (далее - МУ) описывают методы оценки эффективности дезинфицирующих средств (далее - ДС) и их активных действующих веществ в отношении микроорганизмов в составе микробных ассоциаций (биологических пленок, далее - БП), с целью разработки режимов применения ДС в практических условиях для профилактики инфекционных заболеваний, в том числе, связанных с оказанием медицинской помощи (далее - ИСМП) <1>.

<a id="p100012"></a>

---

<a id="p100013"></a><1> Федеральный [закон](https://bukva.ai/docs/zakon-52-fz-1999/statya-29#p330) от 03.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения"; Федеральный [закон](https://bukva.ai/docs/federalnyy-zakon-323-fz/statya-16#p100213) от 21.11.2011 N 323-ФЗ "Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации".

<a id="p100014"></a>1.2. МУ предназначены для специалистов, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический контроль (надзор), а также могут быть использованы специалистами испытательных лабораторий, аккредитованных в установленном порядке <2>, осуществляющих исследования и испытания ДС и их субстанций в процессе разработки, производства, применения, при проведении испытаний, исследований и экспертиз с целью государственной регистрации и сертификации, органов исполнительной власти субъектов Российской Федерации в сфере охраны здоровья, медицинских, научно-исследовательских и образовательных организаций.

<a id="p100015"></a>

---

<a id="p100016"></a><2> Федеральный [закон](https://bukva.ai/docs/zakon-412-fz-2013/statya-1) от 28.12.2013 N 412-ФЗ "Об аккредитации в национальной системе аккредитации".


### <a id="p100017"></a>II. Общие положения


<a id="p100018"></a>2.1. Микроорганизмы на абиотических поверхностях (например, поверхностях в помещениях, оборудовании, мебели, медицинских изделиях, включая эндоскопы) могут находиться в свободной планктонной форме и в форме микробных ассоциаций - БП. В целях неспецифической профилактики инфекционных болезней для дезинфекции объектов рекомендуется использовать ДС, активные в отношении обеих форм, в том числе в отношении микроорганизмов в составе БП <3>.

<a id="p100019"></a>

---

<a id="p100020"></a><3> [СанПиН 3.3686-21](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-4-2021#p100081) "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021, регистрационный N 62500), с изменениями, внесенными постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 11.02.2022 N 5 (зарегистрировано Минюстом России 01.03.2022, регистрационный N 67587); от 25.05.2022 N 16 (зарегистрировано Минюстом России 21.06.2022, регистрационный N 68934) (далее - СанПиН 3.3686-21).

<a id="p100021"></a>БП представляют собой микробные сообщества, прикрепленные к поверхности, находящиеся в их собственном внеклеточном экзополимерном матриксе, состоящем из нескольких типов биополимеров, вклющем внеклеточные полисахариды, белки, липиды и ДНК [[13]](#p100241).
<a id="p100022"></a>2.2. Нахождение микроорганизмов в составе БП способствует их устойчивости к ДС, которая обусловлена: затруднением или неспособностью действующих веществ ДС проникать внутрь матрикса; связыванием и инактивацией их полимерами матрикса; замедленной скоростью деления бактерий в БП; наличием в БП метаболически неактивных бактериальных клеток, малочувствительных к ДС [[7](#p100235), [8](#p100236), [10](#p100238), [15](#p100243)].
<a id="p100023"></a>2.3. Исследования эффективности ДС с целью разработки режимов дезинфекции объектов внешней среды проводят в соответствии с методическими документами <4>, на основании которых оценку эффективности и разработку режима применения ДС рекомендуется проводить с использованием микроорганизмов в свободной планктонной форме. Так как в составе БП микроорганизмы более устойчивы к воздействию ДС, чем в планктонной форме, для достижения эффективности обеззараживания объектов, загрязненных БП, целесообразно разрабатывать и применять ДС в режимах, эффективных в отношении микроорганизмов в БП.

<a id="p100024"></a>

---

<a id="p100025"></a><4> Глава III Р 4.2.3676-20 "Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности", утвержденного руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 18.12.2020, с изменениями, внесенными Р 4.2.4020-24 "Изменения N 1 в Р 4.2.3676-20 "Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности", утвержденным руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 31.05.2024 (далее - Р 4.2.3676-20).


#### <a id="p100026"></a>2.4 На объектах БП могут существовать во влажном и в сухом виде.

<a id="p100027"></a>Влажные биопленки образуются в местах, где имеется постоянный приток питательных веществ в среду, например, в медицинских мочевых катетерах, дренажных трубках, трубках для подачи кислорода [[17]](#p100245). С потоком жидкости БП эффективнее развиваются и быстрее распространяются в среде. БП, растущие на поверхностях при непрерывном потоке среды, называют динамическими [[11](#p100239), [14](#p100242)], и для их создания в лабораторных условиях используются динамические методы культивирования.
<a id="p100028"></a>Сухие БП встречаются на поверхностях помещений, оборудования, приборов, и для их моделирования используют статические методы культивирования [[9](#p100237), [16](#p100244)].
<a id="p100029"></a>2.5. Исследования эффективности ДС в отношении микроорганизмов в составе БП проводят с соблюдением требований биологической безопасности при работе с тест-микроорганизмами" <5> и при работе с химическими ДС <6>.

<a id="p100030"></a>

---

<a id="p100031"></a><5> [Глава IV](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-4-2021#p100475) СанПиН 3.3686-21.
<a id="p100032"></a><6> Пункт 3.1.5 Р 4.2.3676-20.


### <a id="p100033"></a>III. Методы исследований эффективности дезинфицирующих средств в отношении микроорганизмов в составе биологических пленок на абиотических объектах


<a id="p100034"></a>3.1. Исследования эффективности ДС в отношении микроорганизмов в составе БП проводят, в зависимости от задач, при культивировании БП на различных объектах (например, полистироловых планшетах с разным количеством лунок (6, 12, 24 или 96), тест-поверхностях из различных материалов [[12]](#p100240)) в 2 этапа:
- <a id="p100035"></a>1 этап - определение спектра антимикробной активности и отбор ДС, эффективных в отношении микроорганизмов в составе БП, с использованием метода статического культивирования БП на планшетах;
- <a id="p100036"></a>2 этап - изучение дезинфицирующей активности и разработка режимов дезинфекции. Проводится при получении положительного результата на этапе 1. Исследование выполняют с использованием статического метода культивирования БП для разработки режимов дезинфекции поверхностей в помещениях и медицинских изделий, и динамического метода - для разработки режимов дезинфекции медицинских изделий, постоянно контактирующих с биологическими жидкостями.
<a id="p100037"></a>3.1.1. Статический метод культивирования БП на планшетах является стандартной модельной системой для изучения микробных сообществ in vitro. Данный метод является достаточно простым и имеет высокую пропускную способность.
<a id="p100038"></a>3.1.2. Динамический метод основан на принципе культивирования БП в процессе постоянного движения питательной среды и микроорганизма, при котором создаются условия для роста БП, более похожие на естественные [[17]](#p100245).
<a id="p100039"></a>3.2. Для количественной оценки биопленкообразования используют метод измерения оптической плотности, который основан на сорбции молекул красителя на структурах БП, с последующей их отмывкой (десорбцией) в органических растворителях [[12](#p100240), [16](#p100244)].
<a id="p100040"></a>3.3. Для определения количества жизнеспособных клеток зрелую БП суспендируют и гомогенизируют в жидкой среде с помощью соскабливания, вихревой обработки или обработки ультразвуком с последующим асептическим удалением аликвот суспендированной БП и посевом из последовательных разведений на питательный агар.
<a id="p100041"></a>3.4. При испытаниях ДС и их субстанций в отношении микроорганизмов в составе БП в качестве тест-микроорганизмов используют штаммы Pseudomonas aeruginosa АТСС 15442 и Staphylococcus aureus АТСС 6538-Р - для оценки эффективности в отношении бактерий в составе БП, и Candida albicans АТСС 10231 - для оценки эффективности в отношении грибов в составе БП <7>.

<a id="p100042"></a>

---

<a id="p100043"></a><7> Примечание: возможно использование других штаммов тест-микроорганизмов, соответствующих указанным по устойчивости к эталонным ДС и с установленной способностью к биопленкообразованию.

<a id="p100044"></a>3.5. Для нейтрализации действующих веществ ДС по завершении экспозиции используют химические вещества, нейтрализующие его действие: нейтрализующий бульон по Ди-Ингли, нейтрализатор универсальный, гипосульфит натрия 1% <8>.

<a id="p100045"></a>

---

<a id="p100046"></a><8> Пункт 3.1.6 Р 4.2.3676-20.

<a id="p100047"></a>3.6. Перед работой с ДС проводят химико-аналитические исследования по подтверждению соответствия его состава рецептуре. Далее рабочие растворы ДС готовят на стерильной водопроводной воде комнатной температуры в вытяжном шкафу или в отдельном помещении, оборудованном приточно-вытяжной вентиляцией, с защитой органов дыхания респираторами, кожи рук - резиновыми перчатками, глаз - защитными очками.


### <a id="p100048"></a>IV. Исследование активности дезинфицирующих средств и их субстанций в отношении микроорганизмов в составе биологических пленок in vitro


<a id="p100049"></a>4.1. Данный метод рекомендован для исследования и оценки антимикробной активности и спектра антимикробного действия ДС в отношении микроорганизмов в составе БП на этапе первичного отбора с целью определения дальнейших перспектив его изучения для борьбы с микробными БП.
<a id="p100050"></a>4.2. Для формирования БП бактерий используют рабочую культуру микроорганизма, культивированную на твердой питательной среде (ГРМ-агар, триптон-соевый агар (англ. Trypticase Soy Agar, далее - ТСА), мясо-пептонный агар (далее - МПА) в течение 18 - 24 ч при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C; для грибов - рабочую культуру микроорганизма, культивированную на агаре Сабуро в течение 48 ч при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C.
<a id="p100051"></a>4.3. Для приготовления суспензии тест-микроорганизма культуру смывают с агара стерильным физиологическим раствором. Полученную взвесь разводят стерильным физиологическим раствором до концентрации ~ 1 x 109 клеток в 1 см3, соответствующей по мутности 3,3 - 3,5 единицам по стандарту Мак-Фарланда (для грибов рода Candida - 4,4 - 4,6 единицам по стандарту Мак-Фарланда), определяемым с помощью денситометра. Далее приготовленную микробную взвесь разводят стерильным питательным бульоном (для бактерий - ГРМ-бульон, триптон-соевый бульон (далее - ТСБ), мясо-пептонный бульон (далее - МПБ), лизогенный бульон (англ. lysogeny broth, далее - LB-бульон), для грибов - бульон Сабуро) до концентрации ~ 1 x 106 клеток в 1 см3.
<a id="p100052"></a>4.4. В лунки стерильного 96-ти луночного плоскодонного полистиролового планшета вносят по 200 мкл микробной взвеси в концентрации ~ 1 x 106 клеток в 1 см3 с использованием стерильных наконечников и дозатора. Один штамм на одну концентрацию рекомендуется использовать в 8 повторах (использовать 8 лунок), что дает возможность получить статистически достоверные данные. В качестве отрицательного контроля используют лунки с 200 мкл питательного бульона (ГРМ-бульон, ТСБ, МПБ, LB-бульон, бульон Сабуро) без добавления бактериальной суспензии. Затем планшеты закрывают и инкубируют при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 24 ч - для формирования БП бактерий, при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч - для формирования БП грибов.
<a id="p100053"></a>4.5. После окончания инкубации удаляют планктонную культуру из лунок вручную с использованием дозаторов или с помощью автоматических планшетных промывателей, затем трехкратно промывают, используя 200 мкл стерильной дистиллированной воды на одну лунку. После последнего цикла промывки воду полностью удаляют и высушивают планшет в течение 45 - 60 мин.
<a id="p100054"></a>4.6. Затем в опытную часть лунок вносят по 200 мкл рабочего раствора ДС или действующего вещества в различных концентрациях, приготовленных на стерильной водопроводной воде. В контрольных лунках вместо растворов испытываемых средств используют стерильную водопроводную воду. Через заданное время экспозиции из лунок удаляют раствор ДС с помощью дозаторов, затем добавляют по 200 мкл нейтрализатора, который через 10 мин удаляют.
<a id="p100055"></a>4.7. Биомассу БП оценивают по уровню экстракции 96% этанолом или 30% уксусной кислоты красителя, который измеряют на микропланшетном ридере при длине волны 580 - 600 нм в единицах оптической плотности (ед, ОП 580 - 600). Для этого в лунки вносят по 200 мкл 0,1% водного раствора кристаллического фиолетового и выдерживают 30 мин при комнатной температуре, после чего удаляют краситель из лунок. Краситель, не связавшийся с БП, удаляют трехкратным промыванием стерильной дистиллированной водой с помощью многоканального дозатора. Затем планшеты высушивают на фильтровальной бумаге, после чего в лунки добавляют по 200 мкл 96% этанола или 30% уксусной кислоты и выдерживают 20 мин при комнатной температуре, далее проводят измерение оптической плотности элюатов с помощью спектрофотометра при длине волны 580 - 600 нм.
<a id="p100056"></a>4.8. Жизнеспособность клеток оценивают качественным и (или) количественным методом: по наличию или отсутствию роста в жидкой питательной среде, или по числу колониеобразующих единиц (далее - КОЕ) после высева из последовательных децимальных разведений на твердые питательные среды.
<a id="p100057"></a>Для качественного определения в лунки 96-ти луночного плоскодонного полистиролового планшета вносят 200 мкл питательного бульона (ГРМ-бульон, ТСБ, МПБ, LB-бульон, бульон Сабуро), закрывают крышкой. Посевы помещают в термостат и культивируют при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч для роста бактерий и при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 2 - 10 суток для роста грибов.
<a id="p100058"></a>Для количественного определения в лунки 96-ти луночного плоскодонного полистиролового планшета вносят по 200 мкл стерильного физиологического раствора и обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин при 37 кГц, поместив планшет в ультразвуковую ванну. Затем физиологический раствор засевают по 0,1 см3 на плотную питательную среду (для бактерий - ГРМ-агар, ТСА, МПА; для грибов - агар Сабуро) и растирают стерильным шпателем. Для подсчета КОЕ/см3 делают десятикратные разведения. Посевы помещают в термостат и культивируют при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч для роста бактерий или при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 2 - 10 суток для роста грибов.
<a id="p100059"></a>4.9. ДС считают эффективным в отношении тест-микроорганизмов в БП и перспективным для дальнейшего исследования с целью разработки режимов применения при отсутствии роста микроорганизмов в лунках (при качественном методе) или при снижении количества жизнеспособных клеток в составе БП после воздействия ДВ не менее, чем на 4 порядка, и снижении показателя оптической плотности не менее, чем на 70% по сравнению с контролем.


### <a id="p100060"></a>V. Исследование эффективности дезинфицирующих средств в отношении микроорганизмов в биологической пленке, сформированной на тест-поверхностях


<a id="p100061"></a>5.1. Данный метод рекомендуется для оценки эффективности ДС в отношении микроорганизмов в составе БП при дезинфекции, например, поверхностей в помещениях, мебели, оборудования, приборов, медицинских изделий.
<a id="p100062"></a>5.2. В качестве тест-поверхностей используют: предварительно простерилизованные поверхности размером 5 x 5 см (например, из плитки, линолеума, кафеля, пластика), предназначенные для разработки режима дезинфекции поверхностей в помещениях и (или) предварительно простерилизованные поверхности размером 1 x 1 см из металла, стекла, пластмасс и резин, предназначенные для разработки режимов дезинфекции изделий медицинского назначения.
<a id="p100063"></a>5.3. Стерильные тест-поверхности размером 5 x 5 см помещают по одной на дно стерильной чашки Петри и располагают на рабочем столе бокса микробиологической безопасности II класса. Затем пипеткой на тест-поверхности наносят по 10 см3 микробной взвеси в концентрации 1 x 106 клеток в 1 см3, приготовленной в соответствии с [п. 4.3](#p100051). Поверхности размером 1 x 1 см помещают в чашку Петри одним слоем и заливают суспензией микроорганизмов так, чтобы они были полностью покрыты.
<a id="p100064"></a>Контаминированные тест-поверхности инкубируют в термостате при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 24 ч для роста бактерий или при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч для роста грибов.
<a id="p100065"></a>5.4. Затем тест-поверхности, покрытые БП, извлекают из чашки Петри и трижды промывают стерильной дистиллированной водой с целью удаления планктонных клеток. После промывки тест-поверхности помещают на дно стерильной чашки Петри и подсушивают, приоткрыв чашку Петри (до полного высыхания) при температуре плюс 18 - 22 °C и относительной влажности 40 - 60%, после чего обрабатывают раствором ДС.
<a id="p100066"></a>5.5. Обработку тест-поверхностей размером 5 x 5 см раствором ДС проводят способом протирания или орошения. При обработке способом протирания перед нанесением раствора ДС на тест-поверхности помещают стерильную марлевую салфетку размером 5 x 5 см для предотвращения стекания раствора ДС, затем наносят раствор ДС с помощью пипетки, протирают тест-объект этой салфеткой и выдерживают время экспозиции. При обработке способом орошения раствор ДС наносят с помощью распылителя с дозатором. Количество наносимого раствора ДС зависит от рекомендуемой нормы расхода, указанной в инструкции по применению средства: например, если норма расхода составляет 100 см3 на 1 м2, то на объект размером 5 x 5 см наносят 0,25 см3 средства.
<a id="p100067"></a>Тест-поверхности размером 1 x 1 см обрабатывают способом погружения в раствор ДС.
<a id="p100068"></a>5.6. Контрольные тест-поверхности обрабатывают так же, как и опытные, используя вместо раствора ДС стерильную водопроводную воду.
<a id="p100069"></a>5.7. После окончания экспозиции чашки с тест-поверхностями заливают 10 см3 раствора нейтрализатора, через 10 мин тест-поверхности извлекают и промывают стерильной дистиллированной водой, затем переносят в стерильные чашки Петри.
<a id="p100070"></a>5.8. Эффективность воздействия ДС при обеззараживании поверхностей 5 x 5 см определяют количественным методом, для чего в чашки Петри с тест-поверхностями вносят по 10 см3 стерильного физиологического раствора и обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин при 37 кГц в ультразвуковой ванне. Затем физиологический раствор засевают по 0,1 см3 на плотную питательную среду (для бактерий - ГРМ-агар, ТСА, МПА; для грибов - агар Сабуро). Для подсчета КОЕ/см3 делают десятикратные разведения.
<a id="p100071"></a>5.9. Тест-объект размером 1 x 1 см после дезинфекции извлекают стерильным пинцетом из раствора ДС и последовательно переносят в пробирку с 5 см3 стерильного раствора нейтрализатора и дистиллированной воды на 10 мин в каждую. Для качественного определения жизнеспособности микроорганизмов тест-поверхности переносят в пробирки с 10 см3 питательного бульона (ГРМ-бульон, ТСБ, МПБ, LB-бульон, бульон Сабуро), обеспечивая полное погружение в среду, и инкубируют при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч для роста бактерий и при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 2 - 10 суток для роста грибов. Для количественного учета результатов тест-поверхности погружают в пробирки, содержащие 5 см3 стерильного физиологического раствора, ставят в ультразвуковую ванну и обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин при 37 кГц. По завершении обработки физиологический раствор засевают по 0,1 см3 на плотную питательную среду (для бактерий - ГРМ-агар, ТСА, МПА; для грибов - агар Сабуро).
<a id="p100072"></a>Посевы помещают в термостат и культивируют при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч для роста бактерий и при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 2 - 10 суток для роста грибов.
<a id="p100073"></a>5.10. Учет результатов обеззараживания тест-поверхностей размером 5 x 5 см проводят количественным методом; тест-поверхностей размером 1 x 1 см - качественным и количественным методом.
<a id="p100074"></a>При качественном методе оценки контролируют наличие или отсутствие роста в жидкой питательной среде. При количественном методе оценки определяют остаточную обсемененность тест-поверхностей после обработки раствором ДС в выбранном режиме. Подсчитывают количество выросших колоний и рассчитывают процент обеззараживания, принимая количество колоний, снятых с контрольных поверхностей, за 100%. Для получения достоверных результатов исследования проводят в трех повторах. Данные обрабатывают с использованием пакета статистических компьютерных программ. При значении p < 0,05 результат считают статистически значимым.
<a id="p100075"></a>5.11. Критерий эффективности ДС при обеззараживании тест-поверхностей, имитирующих поверхности в помещениях, контаминированных тест-микроорганизмом в составе биологической пленки, - не менее 99,99%; критерий эффективности ДС при обеззараживании тест-поверхностей, имитирующих изделия медицинского назначения, - не менее 100,0%.


### <a id="p100076"></a>VI. Исследование эффективности ДС с использованием динамического метода культивирования биологических пленок


<a id="p100077"></a>6.1. С использованием динамического метода культивирования БП разрабатывают режимы дезинфекции изделий медицинского назначения, медицинских инструментов, в том числе эндоскопов, подверженных постоянному контакту с биологическими жидкостями. В качестве тест-объектов используют поверхности из металлов, стекла, резин, пластмасс размером 1 x 1 см.
<a id="p100078"></a>6.2. Для динамического культивирования БП применяют систему, включающую бокс (герметичный резервуар с крышкой, по сторонам имеющий вход и выход для прикрепления трубок, по которым с помощью перистальтического насоса в него поступает питательная среда с культурой микроорганизма; внутри бокса находятся тест-поверхности, на которых формируется БП); а также емкость с питательным бульоном и перистальтический насос (прибор, обеспечивающий пульсирующее движение жидкости в системе), соединенные между собой силиконовыми трубками длиной 40 - 50 см и диаметром 4 - 8 мм. Все съемные элементы системы (трубки, бокс, тест-поверхности, колба с питательной средой) должны быть предварительно простерилизованы.
<a id="p100079"></a>Культивирование осуществляется в замкнутой системе, где питательные вещества и продукты жизнедеятельности микроорганизмов непрерывно циркулируют в среде (рис. 1).

<a id="p100080"></a> ![VI. Исследование эффективности ДС с использованием динамического метода культиви](https://i.bukva.ai/9V0dpHGF9/img_0.png) 

<a id="p100081"></a>Рис. 1. Схема динамического культивирования БП

<a id="p100082"></a>6.3. БП на поверхностях при динамическом методе культивирования создают в два этапа.
<a id="p100083"></a>6.3.1. На первом этапе для адгезии микробных клеток стерильные тест-поверхности помещают в чашки Петри, заливают микробной суспензией, приготовленной в соответствии с [п. 4.3](#p100051), и инкубируют в термостате в течение 4 - 5 ч при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C - для бактерий и при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C - для грибов.
<a id="p100084"></a>6.3.2. Второй этап - окончательное формирование БП. Для этого тестируемую поверхность после инкубации размещают в подготовленном боксе. Два свободных конца трубок опускают в колбу с питательной средой объемом 200 см3. С целью фиксации трубок при работе перистальтического насоса на него устанавливают кассету (держатель) и закрепляют в ней одну из трубок ограничительными зажимами (стопперами), установленными по обе стороны от кассеты [(рис. 1)](#p100081). Всю систему (бокс с тест-объектами, подключенные трубки, насос и емкость с питательной средой) помещают в термостат и запускают насос, выставив скорость потока от 4 до 6 об/мин. Длительность инкубации при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C составляет 24 ч для бактерий и при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C - 48 ч для грибов при непрерывно работающем насосе.
<a id="p100085"></a>6.4. После завершения инкубационного периода останавливают работу насоса и извлекают трубки из колбы с питательной средой, сливая из них остатки питательной среды с культурой микроорганизма. Затем из бокса извлекают тест-поверхность и трижды отмывают ее стерильной дистиллированной водой от планктонных клеток. Подготовленный тест-объект погружают в пробирку с раствором изучаемого ДС, объемом 5 см3 и выдерживают выбранное время экспозиции. Контрольные тест-объекты погружают в пробирки со стерильной водопроводной водой такого же объема.
<a id="p100086"></a>6.5. После дезинфекции тест-объект извлекают стерильным пинцетом из раствора ДС и последовательно переносят в пробирки с 5 см3 стерильного раствора нейтрализатора, а затем стерильной дистиллированной воды - на 10 мин в каждую. Жизнеспособность клеток оценивают качественным (или) количественным методом: по наличию или отсутствию роста в жидкой питательной среде или по числу КОЕ после высева из последовательных децимальных разведений на твердые питательные среды. Для качественного определения жизнеспособности микроорганизмов тест-поверхности переносят в пробирки с 5 см3 питательного бульона (ГРМ-бульон, ТСБ, МПБ, LB-бульон, бульон Сабуро), обеспечивая полное погружение в среду, и инкубируют при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч для роста бактерий и при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 2 - 10 суток для роста грибов. Для количественного учета тест-поверхности погружают в пробирки, содержащие 5 см3 стерильного физиологического раствора, и ставят в ультразвуковую ванну, где обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин при 37 кГц. По завершении обработки физиологический раствор засевают по 0,1 см3 на плотную питательную среду (для бактерий - ГРМ-агар, ТСА, МПА; для грибов - агар Сабуро). Посевы помещают в термостат и культивируют при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч для роста бактерий и при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 2 - 10 суток для роста грибов.
<a id="p100087"></a>6.6. Учет результатов при качественном методе оценки проводят путем контроля наличия или отсутствия роста в жидкой питательной среде. При количественном методе оценки определяют остаточную обсемененность тест-поверхностей после обработки раствором ДС в выбранном режиме. Подсчитывают количество выросших колоний и рассчитывают процент обеззараживания, принимая количество колоний, снятых с контрольных поверхностей, за 100%. Для получения достоверных результатов исследования проводят в трех повторах. Данные обрабатывают с использованием пакета статистических компьютерных программ. При значении p < 0,05 результат считают статистически значимым.
<a id="p100088"></a>6.7. Критерий эффективности ДС при обеззараживании тест-объектов, имитирующих изделия медицинского назначения, - не менее 100,0%.


#### <a id="p100089"></a>Исследование эффективности ДС в отношении микроорганизмов в БП на трубках (резиновых, пластиковых)


<a id="p100090"></a>6.8. Данную методику используют при необходимости разработки режимов дезинфекции медицинских изделий, имеющих каналы (например, эндоскопы).
<a id="p100091"></a>6.9. Рабочую суспензию микроорганизмов готовят в соответствии с [п. 4.3](#p100051) и вносят в стерильную пробирку в количестве 10 - 15 мл.
<a id="p100092"></a>6.10. Стерильные пластиковые или резиновые трубки размером 40 - 50 см опускают одним концом в пробирку с микробной суспензией, а другим - в чистый питательный ГРМ-бульон (для грибов - бульон Сабуро) объемом 200 см3 [(рис. 2 (а))](#p100097).
<a id="p100093"></a>Пробирку с микробной суспензией устанавливают в штативе, и всю систему вместе с трубкой и питательной средой размещают в термостате. Затем устанавливают в термостате насос и прикрепляют к нему кассету (держатель) для трубок. На панели насоса выставляют скорость потока от 4 до 6 об/мин для закачивания суспензии из пробирки в трубку. Необходимо закачать суспензию из пробирки в трубку до момента соприкосновения с питательным бульоном. После заполнения трубки останавливают насос и оставляют всю систему в термостате на 4 - 5 ч при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C для бактерий и плюс (27 $\pm$ 1) °C - для грибов с целью инициации первичной адгезии микроорганизмов.
<a id="p100094"></a>6.11. Спустя инкубационное время конец трубки, опущенной в пробирку, вынимают и переносят в питательный бульон для замыкания цикла [(рис. 2 (б))](#p100097). На панели насоса выставляют скорость потока от 4 до 6 об/мин и включают его.
<a id="p100095"></a>Инкубацию проводят при непрерывно работающем насосе при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 24 ч - для бактерий и плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч - для грибов.

<a id="p100096"></a> ![Исследование эффективности ДС в отношении микроорганизмов в БП на трубках (резин](https://i.bukva.ai/9V0dpHGF9/img_1.png) 

<a id="p100097"></a>Рис. 2. Культивирование БП в динамических условиях
в трубках: (а) - схема подготовки к стадии инициации адгезии
клеток микроорганизмов на внутренней поверхности трубки;
(б) - схема проведения динамического культивирования БП
в замкнутой системе

<a id="p100098"></a>6.12. По завершении инкубации останавливают работу насоса, затем снимают с трубки зажимы и кассету для трубок. Трубку с выращенной БП переносят в Бокс микробиологической безопасности II класса. Стерильными ножницами трубку нарезают на равные части по 5 см. Нарезанные трубки (тест-объекты) промывают дистиллированной водой 2 - 3 раза. Вносят нарезанные трубки в стерильные чашки Петри и оставляют сушиться на 40 - 60 мин с приоткрытой крышкой при включенном ламинарном потоке.
<a id="p100099"></a>Далее в чашки добавляют 15 - 20 см3 раствора изучаемого ДС так, чтобы на протяжении всего времени экспозиции трубки были полностью погружены в раствор, избегая образования в них пузырьков воздуха. В качестве контроля трубку с выращенной БП погружают в чашку Петри со стерильной водопроводной водой.
<a id="p100100"></a>После экспозиции обработанные трубки аккуратно вынимают из раствора ДС, встряхивают с помощью пинцета для слива лишнего ДС и переносят последовательно в чашки Петри, содержащие 15 - 20 см3 стерильного раствора нейтрализатора, выдерживают в течение 10 мин, а затем переносят в чашку со стерильной водопроводной водой на такой же срок.
<a id="p100101"></a>6.13. Жизнеспособность клеток оценивают качественным и (или) количественным методом. Для качественного определения тест-объекты переносят в пробирки с 10 см3 питательного бульона (ГРМ-бульон, ТСБ, МПБ, LB-бульон, бульон Сабуро), обеспечивая полное погружение в среду с заполнением каналов без образования пузырьков воздуха, и инкубируют при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч для роста бактерий и при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 2 - 10 суток для роста грибов. Для количественного определения тест-объекты погружают в пробирки, содержащие 10 см3 стерильного физиологического раствора, и ставят в ультразвуковую ванну, где обрабатывают ультразвуком в течение 1 мин при 37 кГц. По завершении обработки физиологический раствор засевают по 0,1 см3 на плотную питательную среду (для бактерий - ГРМ-агар, ТСА, МПА; для грибов - агар Сабуро). Для подсчета КОЕ/см3 в контрольной пробирке делают десятикратные разведения. Посевы помещают в термостат и культивируют при температуре плюс (37 $\pm$ 1) °C в течение 48 ч - для бактерий или при температуре плюс (27 $\pm$ 1) °C в течение 2 - 10 суток - для грибов.
<a id="p100102"></a>6.14. Учет результатов проводят путем контроля наличия или отсутствия роста в жидкой питательной среде или оценки остаточной обсемененности тест-объектов после обработки раствором ДС в выбранном режиме. После подсчета выросших колоний рассчитывают процент обеззараживания, принимая количество колоний, снятых с контрольных объектов, за 100%. Для получения достоверного результата исследования проводят в трех повторах и рассчитывают среднее число КОЕ на тест-объекте. Данные обрабатывают с использованием пакета статистических компьютерных программ. При значении p < 0,05 результат считают статистически значимым.
<a id="p100103"></a>6.15. Критерий эффективности ДС при обеззараживании тест-объектов, имитирующих изделия медицинского назначения, - не менее 100,0%.





<a id="p100104"></a>Приложение
к МУ 3.5.1.-25

<a id="p100105"></a>**ОБОРУДОВАНИЕ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И РЕАКТИВЫ**

1. <a id="p100106"></a>При проведении исследования эффективности ДС в отношении БП применяют средства измерений, испытательное и вспомогательное оборудование, реактивы, питательные среды, расходные и вспомогательные материалы, приведенные в таблицах 1 - [5](#p100184).

<a id="p100107"></a>Таблица 1

<a id="p100108"></a>Средства измерений


<table>
<colgroup><col width="50%"><col width="50%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100109"></a>Наименование средства измерения</td><td><a id="p100110"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики</td></tr>
<tr><td><a id="p100111"></a>Дозаторы медицинские лабораторные</td><td><a id="p100112"></a>ГОСТ 28311-2021</td></tr>
<tr><td><a id="p100113"></a>Пипетки градуированные</td><td><a id="p100114"></a>2-го класса точности вместимостью 1,0; 2,0; 5,0; 10 см3, ГОСТ 29227-91</td></tr>
<tr><td><a id="p100115"></a>Денситометр</td><td><a id="p100116"></a>ГОСТ Р 71347-2024</td></tr>
<tr><td><a id="p100117"></a>Микропланшетный спектрофотометр</td><td><a id="p100118"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100119"></a>Секундомер механический</td><td><a id="p100120"></a>ГОСТ 8.423-81</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100121"></a>Примечание: допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.</td></tr>
</table>


<a id="p100122"></a>Таблица 2

<a id="p100123"></a>Испытательное оборудование


<table>
<colgroup><col width="50%"><col width="50%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100124"></a>Наименование испытательного оборудования</td><td><a id="p100125"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики</td></tr>
<tr><td><a id="p100126"></a>Термостаты</td><td><a id="p100127"></a>Поддерживающие рабочую температуру плюс (27 $\pm$ 1) и плюс (37 $\pm$ 1) °C</td></tr>
<tr><td><a id="p100128"></a>Стерилизаторы паровые малые</td><td><a id="p100129"></a>ГОСТ Р ЕН 13060-11</td></tr>
<tr><td><a id="p100130"></a>Холодильники и морозильники бытовые электрические компрессионные параметрического ряда</td><td><a id="p100131"></a>ГОСТ 26678-85</td></tr>
<tr><td><a id="p100132"></a>Ультразвуковая ванна</td><td><a id="p100133"></a>-</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100134"></a>Примечание: допускается использование испытательного оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.</td></tr>
</table>


<a id="p100135"></a>Таблица 3

<a id="p100136"></a>Вспомогательное оборудование


<table>
<colgroup><col width="50%"><col width="50%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100137"></a>Наименование вспомогательного оборудования</td><td><a id="p100138"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики</td></tr>
<tr><td><a id="p100139"></a>Дистиллятор</td><td><a id="p100140"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100141"></a>Бокс микробиологической безопасности II класса</td><td><a id="p100142"></a>ГОСТ Р ЕН 12469-2010</td></tr>
<tr><td><a id="p100143"></a>Микроскоп биологический с иммерсионной системой</td><td><a id="p100144"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100145"></a>Перистальтический насос</td><td><a id="p100146"></a>ГОСТ 31839-2012</td></tr>
<tr><td><a id="p100147"></a>Облучатель бактерицидный настенный</td><td><a id="p100148"></a>-</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100149"></a>Примечание: допускается использование вспомогательного оборудования с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.</td></tr>
</table>


<a id="p100150"></a>Таблица 4

<a id="p100151"></a>Реактивы, питательные среды


<table>
<colgroup><col width="50%"><col width="50%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100152"></a>Наименование средства измерения</td><td><a id="p100153"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики</td></tr>
<tr><td><a id="p100154"></a>Спирт этиловый 96%</td><td><a id="p100155"></a>ГОСТ Р 55878</td></tr>
<tr><td><a id="p100156"></a>Кислота уксусная 30%</td><td><a id="p100157"></a>ГОСТ 61-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100158"></a>Вода дистиллированная</td><td><a id="p100159"></a>ГОСТ Р 58144</td></tr>
<tr><td><a id="p100160"></a>Физиологический раствор (натрий хлористый 0,9%)</td><td><a id="p100161"></a>ГОСТ 4233-77</td></tr>
<tr><td><a id="p100162"></a>Краситель кристаллический фиолетовый</td><td><a id="p100163"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100164"></a>Агар питательный сухой (ГРМ-агар)</td><td><a id="p100165"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100166"></a>Агар питательный для грибов (агар Сабуро)</td><td><a id="p100167"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100168"></a>Питательный бульон для грибов (бульон Сабуро)</td><td><a id="p100169"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100170"></a>Питательный бульон сухой (ГРМ-бульон)</td><td><a id="p100171"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100172"></a>Бульон Луриа-Бертани (LB-бульон)</td><td><a id="p100173"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100174"></a>ТСА</td><td><a id="p100175"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100176"></a>ТСБ</td><td><a id="p100177"></a>ISO 11290-1</td></tr>
<tr><td><a id="p100178"></a>МПА</td><td><a id="p100179"></a>ГОСТ 20730-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100180"></a>МПБ</td><td><a id="p100181"></a>ГОСТ 20730-75</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100182"></a>Примечание: допускается использование других питательных сред, диагностических препаратов и реактивов с аналогичными характеристиками.</td></tr>
</table>


<a id="p100183"></a>Таблица 5

<a id="p100184"></a>Расходные и вспомогательные материалы


<table>
<colgroup><col width="50%"><col width="50%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100185"></a>Наименование расходных и вспомогательных материалов</td><td><a id="p100186"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики</td></tr>
<tr><td><a id="p100187"></a>Бокс для динамического культивирования биопленок</td><td><a id="p100188"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100189"></a>Вата медицинская гигроскопическая</td><td><a id="p100190"></a>ГОСТ 5556-81</td></tr>
<tr><td><a id="p100191"></a>Ватные зонд тампоны</td><td><a id="p100192"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100193"></a>Груша резиновая</td><td><a id="p100194"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100195"></a>Колбы стеклянные</td><td><a id="p100196"></a>ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100197"></a>Маркер по стеклу</td><td><a id="p100198"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100199"></a>Марлевые салфетки медицинские 5 x 5 см</td><td><a id="p100200"></a>ГОСТ 9412-2021</td></tr>
<tr><td><a id="p100201"></a>Наконечники для автоматических дозаторов с фильтрами</td><td><a id="p100202"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100203"></a>Ножницы медицинские</td><td><a id="p100204"></a>ГОСТ 21239-93 (ИСО 7741-86)</td></tr>
<tr><td><a id="p100205"></a>Перчатки медицинские</td><td><a id="p100206"></a>ГОСТ 32337-13</td></tr>
<tr><td><a id="p100207"></a>Пинцет медицинский</td><td><a id="p100208"></a>ГОСТ 21241-87</td></tr>
<tr><td><a id="p100209"></a>Планшеты 96-луночные</td><td><a id="p100210"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100211"></a>Пробирки типов П1, П2</td><td><a id="p100212"></a>ГОСТ 25336-82</td></tr>
<tr><td><a id="p100213"></a>Спиртовки лабораторные стеклянные</td><td><a id="p100214"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100215"></a>Стекла предметные</td><td><a id="p100216"></a>ГОСТ 9284-75</td></tr>
<tr><td><a id="p100217"></a>Тест-образцы поверхностей - предметное стекло, фторопласт листовой, образец линолеума, кафеля</td><td><a id="p100218"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100219"></a>Трубки силиконовые</td><td><a id="p100220"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100221"></a>Цилиндры мерные объемом 50 - 1000 мл</td><td><a id="p100222"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100223"></a>Чашки Петри стеклянные</td><td><a id="p100224"></a>ГОСТ 23932-90</td></tr>
<tr><td><a id="p100225"></a>Штативы для пробирок</td><td><a id="p100226"></a>-</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100227"></a>Примечание: допускается использование других расходных и вспомогательных материалов с аналогичными или лучшими характеристиками.</td></tr>
</table>







## <a id="p100228"></a>БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ


1. <a id="p100229"></a>Федеральный [закон](https://bukva.ai/docs/zakon-52-fz-1999/statya-29#p330) от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
2. <a id="p100230"></a>Федеральный [закон](https://bukva.ai/docs/federalnyy-zakon-323-fz/statya-79#p100787) от 21.11.2011 N 323-ФЗ "Об основах охраны здоровья граждан в Российской Федерации".
3. <a id="p100231"></a>Федеральный [закон](https://bukva.ai/docs/zakon-412-fz-2013/statya-1) от 28.12.2013 N 412-ФЗ "Об аккредитации в национальной системе аккредитации".
4. <a id="p100232"></a>[СанПиН 3.3686-21](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-4-2021#p100081) "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней".
5. <a id="p100233"></a>МР 4.2.0161-19 "Методы идентификации биологических пленок микроорганизмов на абиотических объектах".
6. <a id="p100234"></a>Р 4.2.3676-20 "Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности".
7. <a id="p100235"></a>Алешукина А.В., Голошва Е.В., Твердохлебова Т.И. Исследование влияния дезинфицирующих средств на биопленкообразующие неферментирующие бактерии//Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естественные науки. - 2020. - N 1 (205). - С. 89 - 94.
8. <a id="p100236"></a>Глушанова Н.А., Блинов А.И., Алексеева Н.Б. Бактериальные биопленки в инфекционной патологии человека//Медицина в Кузбассе. - 2015. - N. Спецвыпуск 2. - С. 30 - 35.
9. <a id="p100237"></a>Лямин А.В., Боткин Е.А., Жестков А.В. Методы выявления биопленок в медицине: возможности и перспективы//Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2012. - Т. 14. - N 1. - С. 17 - 22.
10. <a id="p100238"></a>Тутельян А.В., Романова Ю.М., Маневич Б.В., Юшина Ю.К., Федорова Л.С., Синицина О.А., Синицин А.П., Емшанов О.В. Методы борьбы с биологическими пленками на пищевых производствах//Молочная промышленность. - 2020. - N 11. - С. 48 - 53.
11. <a id="p100239"></a>Barros J., Monteiro F.J., Ferraz M.P. Bioengineering approaches to fight against orthopedic biomaterials related-infections//International journal of molecular sciences. - 2022. - Т. 23. - N 19. - С. 11658.
12. <a id="p100240"></a>Coenye T. et al. Should standardized susceptibility testing for microbial biofilms be introduced in clinical practice?//Clinical Microbiology and Infection. - 2018. - Т. 24. - N 6. - С. 570 - 572.
13. <a id="p100241"></a>Costerton J.W., Stewart P.S., Greenberg E.P. Bacterial biofilms: a common cause of persistent infections//science. - 1999. - Т. 284. - N 5418. - С. 1318 - 1322.
14. <a id="p100242"></a>Li P. et al. Bacterial biofilm formation on biomaterials and approaches to its treatment and prevention//International Journal of Molecular Sciences. - 2023. - Т. 24. - N 14. - С. 11680.
15. <a id="p100243"></a>Li Q. et al. Formation of multispecies biofilms and their resistance to disinfectants in food processing environments: a review//Journal of food protection. - 2021. - Т. 84. - N 12. - С. 2071 - 2083.
16. <a id="p100244"></a>Niboucha N. et al. Comparative study of different sampling methods of biofilm formed on stainless-steel surfaces in a CDC biofilm reactor//Frontiers in Microbiology. - 2022. - Т. 13. - С. 892181.
17. <a id="p100245"></a>Roy R. et al. Strategies for combating bacterial biofilms: A focus on anti-biofilm agents and their mechanisms of action//Virulence. - 2018. - Т. 9. - N 1. - С. 522 - 554.



<a id="p100246"></a>

---