МР 1.2.0382-25. 1.2. Гигиена, токсикология, санитария. Оценка поведенческих, когнитивных, эмоциональных, сенсорных функций и социального поведения у животных в токсикологических исследованиях. Методические рекомендации

(утв. Роспотребнадзором 30.06.2025)

ИСТОРИЯ ИЗМЕНЕНИЙ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИХ АКТОВ

flowchart LR
  n0["Методические рекомендации по использованию... (от 14.04.1980 N 2166-80)"]:::rst
  n1["МР 1.2.0382-25"]:::doc
  click n1 "https://bukva.ai/docs/mr-1-2-0382-25" "МР 1.2.0382-25. 1.2. Гигиена, токсикология, санитария. Оценка поведенческих, когнитивных, эмоциональных, сенсорных функций и социального поведения у животных в токсикологических ис"
  n0 --> n1
classDef rst fill:#FFEBEB,stroke:#8B0000,color:#000;
classDef doc fill:#EBFFEB,stroke:#006400,color:#000;
classDef notEnt fill:#FFFFEB,stroke:#FF8C00,color:#000;

1.2 ГИГИЕНА, ТОКСИКОЛОГИЯ, САНИТАРИЯ

МР 1.2.0382-25

1. Разработаны ФБУН «ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, Т.А. Синицкая, В.В. Сафандеев, А.Л. Мишина, М.А. Порошин, Ю.С. Волкова); ФБУН «Екатеринбургский медицинский научный центр профилактики и охраны здоровья рабочих промпредприятий» Роспотребнадзора (М.П. Сутункова, И.А. Минигалиева, И.В. Бутакова, С.Н. Соловьева, В.Б. Гурвич, С.В. Клинова, Ю.В. Рябова, К.М. Никогосян).

2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой «30» июня 2025 г.

3. МР 1.2.0382-25 введены взамен методических рекомендаций по использованию поведенческих реакций животных в токсикологических исследованиях для целей гигиенического нормирования, утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 14.04.1980 № 2166-80.

I. Область применения

1.1. Настоящие методические рекомендации (далее — МР) описывают алгоритм проведения тестов для анализа изменений поведенческих, когнитивных, эмоциональных, сенсорных функций и социального поведения у лабораторных животных в экспериментальных исследованиях при оценке влияния различных факторов.

1.2. МР предназначены для специалистов Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы специалистами научных и иных организаций, занимающихся проведением токсиколого-гигиенических исследований, осуществляющих анализ изменений поведенческих, когнитивных, эмоциональных, сенсорных функций и социального поведения у лабораторных животных в экспериментальных исследованиях при оценке влияния различных факторов, в том числе в целях гигиенического нормирования.

II. Общие положения

2.1. Комбинированное и сочетанное действие на организм различных факторов (например, химических, физических) может вызывать структурно-функциональные изменения центральной нервной системы.

2.2. Вышеизложенное обуславливает необходимость проведения в токсиколого-гигиенических исследованиях интегральной оценки изменений поведенческих, когнитивных, эмоциональных, сенсорных функций и социального поведения у лабораторных животных с помощью представленных в настоящих МР унифицированных методов, в том числе с использованием методов цифровой фиксации.

II. Общие рекомендации к проведению исследований

3.1. Оценку изменений поведенческих, когнитивных, эмоциональных, сенсорных функций и социального поведения рекомендуется проводить на специально подобранных лабораторных животных, вид, пол, возраст и порода (линейность) которых зависит от поставленных задач исследования [5 - 8].

3.2 Для обеспечения максимальной достоверности результатов исследований рекомендуется:

• отбирать животных, имеющих сходную поведенческую активность (например, в тесте «Открытое поле» в соответствии с приложением 1 к настоящим МР), равномерно распределив их на контрольную(ые) и подопытную(ые) группы, исключив гипер- и гипоактивных особей;
• не использовать животных, выращенных в изоляции;
• выбирать половозрелых лабораторных животных, не имеющих опыта спаривания;
• использовать установку по типу «рассвет-закат» или «день-ночь» (в случае наличия естественной инсоляции в помещениях вивария необходимо затенять окна плотными светонепроницаемыми шторами) для получения стандартного протокола изменения светового режима;
• осуществлять уход за животными в одно и то же время (например, кормление, поение лабораторных животных, смену подстила в клетках) <1>;
• привлекать к выполнению исследований ограниченный круг специалистов, проводящих манипуляции с лабораторными животными;
• минимизировать посторонние звуковые, запаховые и иные отвлекающие/стрессирующие сигналы в помещениях для проведения тестов;
• применять цифровую фиксацию за поведением лабораторных животных при наличии соответствующего оборудования и программного обеспечения (далее — ПО).

<1> ГОСТ 33215-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур», введенный приказом Росстандарта от 29.11.2015 № 1732-ст; ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами», введенный приказом Росстандарта от 09.11.2015 № 1733-ст.

3.3. При оценке когнитивных функций лабораторных животных помещают в тихое затемненное помещение за 1 час до исследования. В этот период исключаются какие-либо манипуляции с ними, в том числе кормление.

3.4. После проведения каждой манипуляции с участием животного оборудование протирают моющим средством для очистки поверхности, без ароматических отдушек для нейтрализации запахов, с учетом склонности лабораторных животных к запаховым раздражителям, в том числе в тестах, нуждающихся в этапах адаптации и обучения.

3.5. Животных из разных групп тестируют поочередно. При наличии нескольких установок одного типа исследование в контрольной(ых) и подопытной(ых) группах лабораторных животных проводятся одновременно.

3.6. Частота проведения тестов определяется в соответствии с дизайном исследования. В субхронических и хронических экспериментах рекомендуется проводить тесты не чаще одного раза в неделю.

3.7. Для оценки поведенческих, когнитивных, эмоциональных, сенсорных функций и социального поведения рекомендуется использовать не менее пяти тестов на соответствующих установках из перечисленных ниже:

• «открытое поле» с модификацией (далее — ОП) в соответствии с приложением 1 к настоящим МР;
• «темно-светлая камера» (далее — ТСК) в соответствии с приложением 2 к настоящим МР;
• «тест на социальное взаимодействие» (далее — ТСВ) в соответствии с приложением 3 к настоящим МР;
• «приподнятый крестообразный лабиринт» (далее — ПКЛ) в соответствии с приложением 4 к настоящим МР;
• «лабиринт Барнса» (далее — ЛБ) в соответствии с приложением 5 к настоящим МР;
• «условно-рефлекторное предпочтение места» (далее — УРПМ) в соответствии с приложением 6 к настоящим МР;
• «Т-образный лабиринт» с модификацией (далее — ТОЛ) в соответствии с приложением 7 к настоящим МР.

IV. Выбор тестов для проведения исследований у лабораторных животных

4.1. Проводится не менее одного теста из перечисленных или аналогичные для характеристики каждой из приведенных ниже функций:

• поведенческих функций: ОП, ПКЛ, ТСК, ТСВ;
• когнитивных функций: ЛБ, УРПМ;
• эмоциональных функций: ОП, ПКЛ, ТСК, ТСВ;
• сенсорных функций: ТОЛ;
• социального поведения: ТСВ.

V. Основные рекомендации по использованию методов цифровой фиксации

5.1. При применении методов цифровой фиксации используется ПО для регистрации траектории движения лабораторных животных и численных показателей (например, скорость, время замирания, груминг), которые визуально определить крайне затруднительно или не представляется возможным. Метод цифровой фиксации, например, в «ОП», предусматривает следующий алгоритм действий:

• животное помещается на исследуемую площадку (установку) преимущественно в центр;
• объективом видеокамеры осуществляется захват изображения объекта (животного) и его перемещений;
• с помощью электронно-вычислительной машины (далее — ЭВМ) проводится оцифровка видеокадров и их постобработка программными компонентами, входящими в состав ПО. При этом положение животного относительно площадки сохраняется в памяти ЭВМ и применяется ПО для дальнейших вычислений численных показателей.

5.2. При использовании методов цифровой фиксации рекомендуется устанавливать ЭВМ со значительным объемом памяти с учетом существенного объема получаемых данных, а также с высокопроизводительной графической картой и процессором для обработки поступающей графической информации. Рекомендуемые параметры ЭВМ <2>:

• процессор не менее 3,60 ГГц;
• оперативная память не менее 8 ГБ;
• память встроенного носителя не менее 1 ТБ;
• тип системы — 64-разрядная операционная система.

<2> Примечание: при использовании методов цифровой фиксации допускается использование ЭВМ с аналогичными или лучшими характеристиками.

В зависимости от вида ПО может меняться пользовательский интерфейс, количество показателей, алгоритм сбора данных.

5.3. Минимальный набор функций системы видеонаблюдения, позволяющий проводить, например, поведенческие тесты, предусматривает: возможность видеофиксации, трекинга животного, распознавания замираний, перемещений, определение скорости перемещения животного, времени, проведенного в различных зонах, времени, проведенного животным без движения, общего времени теста, подготовку итоговых протоколов по результатам теста, составление карты-схемы перемещений животного.

VI. Статистическая обработка данных

6.1. Все данные, полученные в процессе тестирования лабораторных животных, рассматривают как статистическую выборку, а каждую группу животных — как набор статистических выборок, для которых комплексное среднее значение и его стандартная ошибка вычислены с использованием общепринятых подходов к проведению статистического анализа.

6.2. Сравнение данных контрольной(ых) и подопытной(ых) групп проводятся с помощью критериев для независимых выборок: например, t-критерий Стьюдента (при нормальном распределении) и U-критерия Манна-Уитни (при отсутствии нормального распределения). Различие между средними величинами считается статистически значимым, если вероятность его случайного происхождения не превышает 0,05 (p < 0,05).

VII. Оценка изменения поведенческих, когнитивных, эмоциональных, сенсорных функций и социального поведения у лабораторных животных после воздействия исследуемого

фактора по результатам проведенных тестов

7.1. На изменение поведенческих, когнитивных, эмоциональных, сенсорных функций и социального поведения у животных подопытной группы после воздействия исследуемого фактора указывает наличие статистически значимых отличий по оцениваемым показателям относительно аналогичных параметров у животных контрольной группы.

7.2. Степень воздействия исследуемого(ых) фактора(ов) на лабораторных животных устанавливают по результатам не менее чем 5 тестов, в баллах, в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1

7.3. Заключение о степени воздействия исследуемого(ых) фактора(ов) на поведение лабораторных животных осуществляют по сумме полученных баллов в соответствии с таблицей 2.

Интегральная оценка изменения поведения лабораторных

Модифицированный тест «Открытое поле» нацелен на изучение врожденного исследовательского поведения, двигательного компонента и эмоциональной реактивности лабораторных животных в новых условиях [12].

и условия проведения теста

1. Платформа для проведения теста «Открытое поле». Рекомендуемые параметры платформы для крыс: высота от пола не менее 20 см, размер не менее 60 x 60 см и не более 110 x 110 см. Платформа расчерчивается на 16 равных квадратов (4 x 4). По центру каждого квадрата расположены отверстия диаметром 2 — 5 см. При использовании других видов лабораторных животных размеры платформы пропорционально уменьшают либо увеличивают.

2. Секундомер, поверенный в соответствии с документами по стандартизации <3>.

<3> ГОСТ 8.423-81 «Секундомеры механические. Методы и средства поверки», введенный в действие постановлением Госстандарта СССР от 14.05.1981 № 2371 (далее - ГОСТ 8.423-81).

3. Моющее средство для очистки поверхностей, ветошь.

4. Персональный компьютер с системой компьютерной регистрации и анализа поведения лабораторных животных с параллельной записью видеоизображения на жесткий диск (при использовании методов цифровой фиксации).

1. Предварительное обучение лабораторных животных не требуется.

2. Лабораторное животное помещается в центр открытой площадки, наблюдение ведется в течение 5 — 6 минут с поминутной регистрацией данных. Рекомендуется регистрировать 3 протокола (рекомендуемый образец приведен в таблице 3):

• 1-я минута (адаптационное время),
• 2 — 3-я минуты (оценка эмоционального фона),
• 4 — 6 минуты (оценка исследовательского поведения).

(рекомендуемый образец)

3. В каждом протоколе фиксируют следующие показатели:

• количество пересеченных квадратов четырьмя лапами (горизонтальная активность);
• количество обнюхиваний «норок»;
• количество заглядываний в «норки» — уровень глаз лабораторных животных;
• количество отрывов передних лап от поверхности (вертикальная активность);
• количество склонений (при отсутствии стенок) за пределы площадки (вертикальная активность);
• количество груминга (кратковременный — до 3 секунд (при оценке эмоционального фона)/долговременный — более 3 секунд);
• количество болюсов/актов дефекации;
• количество актов уринации;
• количество падений с платформы (при отсутствии стенок).

4. При наличии видеофиксации можно дополнительно зафиксировать:

• пройденное расстояние (в см или м);
• среднюю скорость передвижения (в м/с);
• количество и длительность замираний;
• продолжительности пребывания животного в центре или на периферии (в минутах или секундах).

Рекомендуемый образец протокола при использовании цифровой видеофиксации не приводится, поскольку формируется автоматически, и его содержание зависит от вида используемого ПО.

Тест нацелен на изучение уровня тревожности грызунов для оценки поведенческой и эмоциональной функций [11].

и условия проведения теста

1. Короб для проведения исследования, который представляет собой камеру, разделенную на два равных по размеру отсека, светлый и темный. Рекомендуемые параметры короба для крыс: ширина составляет от 30 до 50 см, длина — от 60 до 100 см. Высота стенок составляет от 30 до 50 см. Светлая и темная камеры соединены друг с другом перегородкой-отверстием шириной и высотой не более 7 см. При использовании других видов лабораторных животных размеры платформы пропорционально уменьшают либо увеличивают.

2. Секундомер, поверенный в соответствии с ГОСТ 8.423-81.

3. Моющее средство для очистки поверхностей, ветошь.

4. Персональный компьютер с системой компьютерной регистрации и анализа поведения лабораторных животных с параллельной записью видеоизображения на жесткий диск (при использовании методов цифровой фиксации).

1. Предварительное обучение лабораторных животных не требуется.

2. Лабораторное животное помещается в светлый отсек. Длительность тестирования составляет 5 — 6 минут.

3. В каждом протоколе (рекомендуемый образец приведен в таблице 4) фиксируют следующие показатели:

• латентный период первого захода животного в темный отсек установки;
• количество переходов между отсеками. Под заходом в отсек понимается пересечение порога всеми лапами;
• время нахождения в темном отсеке;
• время нахождения в светлом отсеке;
• количество стоек в светлом отсеке;
• груминг в светлом отсеке;
• количество выглядываний из темного отсека в светлый. Под выглядыванием понимается пересечение порога в перегородке между отсеками всей мордочкой животного;
• сумму двигательных актов;
• количество болюсов/актов дефекаций;
• количество замираний.

(рекомендуемый образец)

4. При использовании методов цифровой фиксации дополнительно можно зафиксировать длительность каждого двигательного акта в отдельности.

Рекомендуемый образец протокола при использовании цифровой видеофиксации не приводится, поскольку формируется автоматически, и его содержание зависит от вида используемого ПО.

Тест используется для оценки социального поведения лабораторных животных, определения их поведения по отношению к особи своего вида и пола, которое ранее не было в контакте с исследуемым животным (нативное животное — «незнакомец», далее — социальный партнер) [10, 13]. При взаимодействии с социальным партнером различия в массе тела между ними необходимо свести к минимуму для снижения увечий в случае проявления агрессии.

Оборудование и инвентарь

1. Клетка для содержания животных.

2. Секундомер, поверенный в соответствии с ГОСТ 8.423-81.

3. Моющее средство для очистки поверхностей, ветошь.

4. Персональный компьютер с системой компьютерной регистрации и анализа поведения лабораторных животных с параллельной записью видеоизображения на жесткий диск (при использовании методов цифровой фиксации).

1. Требуется предварительная подготовка: животных контрольной(ых) и подопытной(ых) групп изолируют на сутки за 24 часа до тестирования.

2. Параллельно с животными контрольной(ых) и подопытной(ых) групп формируют еще одну группу животных того же пола и возраста, которая служит социальным партнером.

3. Социальных партнеров, как и животных контрольной(ых) и подопытной(ых) групп, изолируют на сутки за 24 часа до тестирования.

4. Тест рекомендуется проводить в течение светового периода циркадного цикла (с 09:00 до 13:00).

5. Перед началом тестирования на дно тестовой клетки необходимо насыпать свежий подстил, либо вовсе убрать его. При использовании подстила после каждого животного необходима его замена.

6. Каждое животное проходит только один тест на социальное взаимодействие.

7. Длительность проведения теста составляет 10 минут.

8. В каждом протоколе (рекомендуемый образец приведен в таблице 5) фиксируют следующие показатели:

• количество актов отстранения от партнера, убегания, отталкивания партнера (признаки игнорирования, либо агрессии);
• количество обнюхиваний любой части тела партнера (социальное исследование);
• социальный груминг (социальный контакт);
• индивидуальный груминг;
• количество игровых драк;
• количество серьезных драк;
• вертикальная двигательная активность (вертикальные стойки с опорой на стенки клетки и без нее);
• общая тенденция взаимодействия с партнером: интерес/игнорирование/избегание/агрессия.

(рекомендуемый образец)

Приложение 4 к МР 1.2.0382-25

В тесте оценивают: двигательную активность, скорость ориентировочных реакций, степень выраженности эмоциональной реакции страха и тревоги у лабораторных животных [9].

Оборудование и инвентарь

1. Платформа для теста «Приподнятый крестообразный лабиринт» (состоит из центральной площадки и четырех рукавов, два из которых снабжены боковыми стенками). Рекомендуемые параметры платформы для крыс: высота платформы от пола не менее 60 см. Длина рукава от 40 до 60 см, ширина рукава от 10 до 20 см. Высота закрытой стенки от 30 до 50 см. При использовании других видов лабораторных животных размеры платформы пропорционально уменьшают либо увеличивают.

2. Секундомер, поверенный в соответствии с ГОСТ 8.423-81.

3. Моющее средство для очистки поверхностей, ветошь.

4. Персональный компьютер с системой компьютерной регистрации и анализа поведения лабораторных животных с параллельной записью видеоизображения на жесткий диск (при использовании методов цифровой фиксации).

1. Предварительное обучение животных не требуется.

2. Животное во время теста помещают в центр установки «Приподнятый крестообразный лабиринт» головой к открытому рукаву. Длительность тестирования животных составляет 5 — 6 минут, что позволяет дать животному время для адаптации, а также выбора стратегии исследования или нахождения в безопасной зоне.

3. В каждом протоколе (рекомендуемый образец приведен в таблице 6) фиксируют следующие показатели:

• вертикальная активность — отрыв передних лап от поверхности;
• груминг (кратковременный (до 3 секунд)/долговременный (более 3 секунд);
• длительность пребывания в рукавах;
• количество пересечений центральной площадки;
• количество посещений открытых рукавов;
• количество посещений закрытых рукавов;
• количество болюсов/количество актов дефекации;
• количество падений с установки;
• количество свешиваний за края открытых рукавов;
• количество выглядываний из закрытых рукавов.

(рекомендуемый образец)

4. При использовании методов цифровой фиксации можно дополнительно зафиксировать:

• количество и длительность замираний;
• длительность свешиваний за края открытых рукавов;
• длительность выглядываний из закрытых рукавов;
• пройденное расстояние (в м или см);
• среднюю скорость передвижения (м/с).

Рекомендуемый образец протокола при использовании цифровой видеофиксации не приводится, поскольку формируется автоматически, и его содержание зависит от вида используемого ПО.

Тест нацелен на изучение памяти (краткосрочной и (или) долгосрочной) у лабораторных животных.

и условия проведения теста

1. Установка для проведения теста «Лабиринт Барнса». Рекомендуемые параметры установки для крыс: площадка, в виде круглой платформы желательно из магнитного материала (90 — 130 см в диаметре), находящаяся на расстоянии 60 — 90 см от пола, имеющая пронумерованные отверстия в количестве 18 — 20 штук (диаметром 5 — 10 см), равномерно расположенных по периметру. Рекомендуемый цвет поверхности платформы — серый, неотражающий. При использовании других видов лабораторных животных размеры платформы пропорционально уменьшают либо увеличивают.

2. «Спасательный ящик» (имитирующий «норку») с непрозрачными стенками, который крепится снизу платформы на магнитах (либо другим образом при использовании немагнитного материала для платформы) у одного из отверстий.

3. «Стартовый» ящик (либо колпак) темного цвета.

4. Устройство для воспроизведения белого шума (около 90 дБ) или яркое освещение (>= 600 лк) — для создания стресса и стимуляции побега.

5. Секундомер, поверенный в соответствии с ГОСТ 8.423-81.

6. Моющее средство для очистки поверхностей, ветошь.

7. Персональный компьютер с системой компьютерной регистрации и анализа поведения лабораторных животных с параллельной записью видеоизображения на жесткий диск (при использовании методов цифровой фиксации).

1. Для проведения теста требуется предварительная подготовка в 2 этапа: адаптация и обучение. В течение всех дней адаптации и обучения во время проведения теста исследователь должен находиться преимущественно на одном и том же месте, поскольку он становится пространственным ориентиром для животного.

2. В период адаптации животному предлагается исследовать площадку в течение 5 — 6 минут, а затем его помещают в ящик, имитирующий «норку», на 1 — 2 минуты.

3. Период обучения проводится в течение 2 — 5 дней и начинается не менее, чем через 1 ч после окончания периода адаптации. «Спасательный ящик» необходимо прикрепить к другому отверстию площадки и на момент обучения больше не перемещать.

Обучение включает проведение 2 тренировок в день по 3 — 5 минут каждая, интервал между тренировками — 1 час.

В начале каждой тренировки животное помещают в «стартовый» темный ящик (или накрывают темным колпаком), расположенный в центре площадки, через 10 — 15 секунд ящик поднимают и животному позволяют исследовать площадку, одновременно включая белый шум/яркий свет для стимуляции поиска «спасательного ящика». Тренировка завершается, если животное нашло его; если же по истечении 3 минут не нашло — исследователь сам помещает в ящик животное на 30 — 60 секунд.

4. В ходе непосредственного тестирования животное помещают в «стартовый» темный ящик (или накрывают темным колпаком), расположенный в центре площадки, через 10 — 15 секунд ящик поднимают и животному позволяют исследовать площадку, одновременно включая белый шум/яркий свет для стимуляции поиска «убежища».

Тестирование выполняется не более 3 минут. Исследование проводится через 24 часа после обучения для оценки краткосрочной памяти и через 7 — 10 дней — для оценки долгосрочной (эталонной) памяти.

5. В каждом протоколе (рекомендуемый образец приведен в таблице 7) фиксируют описательную часть стратегии поиска «убежища» и количественные показатели для статистической обработки данных.

(рекомендуемый образец)

Описательная часть стратегии поиска «убежища»:

• прямая — прямой переход в клетку побега с 3 или менее ошибками;
• последовательная — прохождение по периметру лабиринта, пока не будет найден ящик, имитирующий «норку»;
• случайная — многократное пересечение центра лабиринта для проверки различных отверстий.

Количественные показатели для статистической обработки данных:

• время нахождения ящика, имитирующего «норку» (с);
• количество ошибок (количество неправильных отверстий, проверенных до обнаружения).

6. При использовании методов цифровой фиксации можно дополнительно зафиксировать:

Приложение 6 к МР 1.2.0382-25

Тест направлен на оценку психоэмоционального состояния лабораторных животных путем формирования у них зависимости или избегания места [14].

Оборудование и инвентарь

1. Установка для проведения теста, которая представлена двумя камерами одинакового размера, соединенными дверцей для доступа животных к обеим камерам установки. Каждая камера определяется отдельными характеристиками, такими как различная структура пола, цвета и (или) текстуры рисунка стен.

Рекомендуемые параметры для крыс: наружные размеры установки 50 — 65 x 30 — 35 x 30 — 35 см, дверцы между камерами 7 — 8 x 7 — 10 см. При использовании других видов животных размеры платформы пропорционально уменьшают либо увеличивают.

2. Секундомер, 3 шт. (поверенные в соответствии с ГОСТ 8.423-81) для подсчета общего времени и времени пребывания в каждой из камер по отдельности.

3. Моющее средство для очистки поверхностей, ветошь.

4. Персональный компьютер с системой компьютерной регистрации и анализа поведения лабораторных животных с параллельной записью видеоизображения на жесткий диск (при использовании методов цифровой фиксации).

1. Для проведения теста требуется предварительная подготовка животных в 3 периода: адаптация, пре-тест, обучение.

2. Период адаптации предназначен для снижения выраженности ориентировочной реакции животных в ходе последующего эксперимента. С этой целью в первый день экспериментального периода каждое животное помещают в одну из камер установки с открытой дверцей, позволяя свободно перемещаться по ней в течение 15 минут.

3. Предварительное тестирование (пре-тест) проводят на второй день экспериментального периода, без влияния исследуемого фактора. В течение 15 минут регистрируют перемещения животных между 2 отсеками камеры и фиксируют число заходов в каждый отсек камеры, а также время пребывания животных в каждом из отсеков. Для создания однородной выборки из эксперимента исключаются животные, находившиеся в одном из отсеков камеры (левом или правом) <= 25% общего времени по соотношению t с = лев/прав x 100%.

4. Обучение проводят на 3 — 12 сутки экспериментального периода. В это время воздействие исследуемого фактора в подопытной(ых) группе(ах) животных (или без него для контрольной группы) сочетается с последующей подсадкой животных в определенный отсек камеры. При выполнении обучения после воздействия исследуемого фактора животных помещают в определенный отсек камеры (всегда один и тот же для данного воздействия) на 30 минут при закрытой дверце-заслонке. В субхроническом или хроническом эксперименте по оценке исследуемого фактора процедура обучения проводится начиная с 3 дня и до конца экспериментального периода.

5. Непосредственно тестирование животных проводится через 24 часа после окончания обучения, либо экспериментального периода. В этот день исследуемым фактором не воздействуют. Регистрируют время пребывания животных в первом и втором отсеках камеры в течение 15 минут при открытой дверце-заслонке, позволяя животным свободно перемещаться между камерами.

6. В каждом протоколе (рекомендуемый образец приведен в таблице 8) фиксируют следующие показатели:

• время пребывания в первом отсеке (с);
• время пребывания во втором отсеке (с).

(рекомендуемый образец)

Тест предназначен для оценки сенсорной функции лабораторных животных (способности воспринимать запахи).

и условия проведения теста

1. Установка «Т-образный лабиринт». Рекомендуемые параметры установки для крыс: стартовый рукав — 50 x 16 см, боковые рукава — 50 x 10 см, высота 32 см, цвет — на выбор. При использовании в исследовании других видов лабораторных животных размеры платформы установки пропорционально уменьшают либо увеличивают.

2. Кормушки для пищевого подкрепления (приманки).

3. Пищевая приманка (любое из перечисленных, например, сыр, корм, сухарик, хлеб, молоко, сливки).

4. Секундомер, поверенный в соответствии с ГОСТ 8.423-81.

5. Моющее средство для очистки поверхностей, ветошь.

6. Персональный компьютер с системой компьютерной регистрации и анализа поведения лабораторных животных с параллельной записью видеоизображения на жесткий диск (при использовании методов цифровой фиксации).

1. Предварительное обучение лабораторных животных не требуется.

2. Испытуемое животное лишают пищи (но не воды) за 12 — 18 часов до тестирования.

3. Животное во время теста помещают в начало центрального рукава Т-образного лабиринта головой к «тупику». Тест проводят 2 раза подряд и каждый раз пищевую приманку кладут в разные стороны рукава (для избежания случайного ее нахождения). Длительность тестирования ограничивается успешным прохождением лабиринта (до пищевой приманки) животным, но не может составлять более 3 минут для каждого рукава.

4. В каждом протоколе (рекомендуемый образец приведен в таблице 9) фиксируют следующий показатель: время поиска приманки (при отказе от прохождения лабиринта).

(рекомендуемый образец)

Рекомендуемый образец протокола при использовании цифровой видеофиксации не приводится, поскольку формируется автоматически, и его содержание зависит от вида используемого ПО.

1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».

2. ГОСТ 33215-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила оборудования помещений и организации процедур».

3. ГОСТ 33216-2014 «Руководство по содержанию и уходу за лабораторными животными. Правила содержания и ухода за лабораторными грызунами и кроликами».

4. ГОСТ 8.423-81 «Секундомеры механические. Методы и средства поверки».

5. Пособие по токсикологии для лаборантов//Сост.: О.Н. Елизарова, Л.В. Жидкова, Т.А. Кочеткова. — М.: Медицина, 1974. — 77 с.

6. Принципы выбора животных для научных исследований. Сообщение 1. Выбор модельных организмов на основании филогенетических связей/Макарова М.Н., Матичин А.А., Матичина А.А., Макаров В.Г.//Лабораторные животные для научных исследований. — 2022. — № 2. — С. 58.

7. Современные методы оценки уровня тревожности грызунов в поведенческих тестах, основанных на моделях без предварительного обусловливания/Каде А.Х., Кравченко С.В., Трофименко А.И. [и др.]//Кубанский научный медицинский вестник. — 2018. — № 6 — С. 171.

8. Современные подходы к оценке острой ингаляционной токсичности химических веществ в воздушной среде на примере производного гидроксикумарина/В.В. Сафандеев, Н.С. Белоедова, М.А. Порошин, Т.А. Синицкая//Медицина труда и экология человека. — 2022. — № 2 (30). — С. 205.

9. Alicia A. Walf and Cheryl A. Frye. The use of the elevated plus maze as an assay of anxiety-related behavior in rodents//Nature Protocols — 2007 — № 2. — P. 322.

10. Amy E. A working model for the assessment of disruptions in social behavior among aged rats: The role of sex differences, social recognition, and sensorimotor processes/Amy E. Perkins, Tamara L. Doremus-Fitzwater, Robert L. Spencer, Elena I. Varlinskaya, Melissa M. Conti, Christopher Bishop, Terrence Deak//Experimental Gerontology. — 2016. — 76. — P. 46.

11. Bourin M. The mouse light/dark box test/Bourin M., Hascoet M.//European Journal of Pharmacology. — 2003. — 463(1-3). — P. 55.

12. Determination of motor activity and anxiety-related behaviour in rodents: methodological aspects and role of nitric oxide. Natalia Sestakova, Angelika Puzserova, Michal Kluknavsky and Iveta Bernatova. Interdisciplinary Toxicology Sep 2013; 6(3): 126. Open Access.

13. Eduardo Kenji Hamasato. Assessment of social behavior directed toward sick partners and its relation to central cytokine expression in rats/Eduardo Kenji Hamasato, Dennis Lovelock, João Palermo-Neto, Terrence Deak//Physiology & Behavior. — 2017. — 182. — P. 128.

14. Sun Y. A Conditioned Place Preference Protocol for Measuring Incubation of Craving in Rats/Sun Y., Chen G., Zhou K., Zhu Y.//J Vis Exp. — 2018. — 6. — P. 141.