МР 1.2.0379-25. 1.2. Гигиена, токсикология, санитария. Алгоритм оценки эквивалентности технических продуктов пестицидов оригинальным действующим веществам по критерию «мутагенность». Методические рекомендации
(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 23.05.2025)
Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации
А. Ю. Попова
23 мая 2025 г.
1.2 ГИГИЕНА, ТОКСИКОЛОГИЯ, САНИТАРИЯ
АЛГОРИТМ
ОЦЕНКИ ЭКВИВАЛЕНТНОСТИ ТЕХНИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ ПЕСТИЦИДОВ
ОРИГИНАЛЬНЫМ ДЕЙСТВУЮЩИМ ВЕЩЕСТВАМ
ПО КРИТЕРИЮ «МУТАГЕННОСТЬ»
I. Область применения
1.1. Настоящие методические рекомендации (далее — МР) описывают алгоритм оценки эквивалентности технических продуктов воспроизведенных действующих веществ пестицидов оригинальным действующим веществам (далее — оригинальные продукты) по критерию «мутагенность».
1.2. МР предназначены для специалистов, осуществляющих федеральный государственный санитарно-эпидемиологический контроль (надзор), а также могут быть использованы специалистами научно-исследовательских организаций, лабораторий и кафедр гигиенического профиля, занимающихся оценкой опасности пестицидов на всех этапах их обращения и их гигиеническим нормированием в объектах окружающей среды.
II. Общие положения
2.1. Для технических продуктов воспроизведенных действующих веществ пестицидов применяется процедура подтверждения их эквивалентности оригинальным продуктам, в том числе с позиции генетической безопасности.
2.2. Настоящие МР содержат описание алгоритма оценки эквивалентности технических продуктов воспроизведенных действующих веществ пестицидов оригинальным продуктам по критерию «мутагенность», который разработан на основании результатов исследований с учетом научных и литературных данных.
2.3. Предложенный алгоритм оценки эквивалентности пестицидов учитывает законодательство Российской Федерации в части обращения с пестицидами и агрохимикатами <1> и предполагает на первом этапе анализ результатов оценки мутагенности, полученных с применением не менее двух методов, использование дополнительных тестов при неоднозначности регистрируемых эффектов, а также определение класса опасности по критерию «мутагенность» на основании тестирования в условиях in vivo при недостаточности первичных данных об оригинальном продукте. Применение данного алгоритма позволит не допустить поступление на рынок технических продуктов пестицидов, содержащих генетически опасные вещества.
<1> Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
III. Описание алгоритма
3.1. Алгоритм оценки эквивалентности технических продуктов воспроизведенных действующих веществ пестицидов состоит из нескольких этапов и представлен в приложении 1 к настоящим МР.
3.2. На первом этапе проводится анализ содержания примесей в техническом продукте воспроизведенного действующего вещества пестицида. На основании данных химического анализа технического продукта воспроизведенного действующего вещества пестицида (для оценки используют не менее пяти партий технического продукта) выявляют новые примеси, отсутствующие в оригинальном продукте, или значимые примеси, уровень которых превышен по сравнению с заявленным оригинатором (с учетом допустимых пределов).
При этом технический продукт относят к одной из следующих групп:
а) содержание новых примесей < 0,1%;
б) содержание новых примесей или превышение величин значимых примесей оригинатора > 0,1%, но менее 1%;
в) содержание новых примесей или превышение величин значимых примесей оригинатора > 1%.
3.3. Для всех групп технических продуктов воспроизведенных действующих веществ пестицидов проводят исследования in silico на основе (Q)SAR-анализа с целью прогнозирования потенциальной токсикологической опасности примесей (если такой прогноз возможен), в том числе мутагенности.
3.4. На следующем этапе проводят оценку мутагенности технических продуктов воспроизведенных действующих веществ пестицидов, относящихся к группам «б» и «в», или их примесей. При содержании примесей на уровне менее 0,1% (группа 1) такую оценку не проводят.
3.4.1. При содержании примесей на уровне > 0,1%, но менее 1% (группа 2) используют минимум два метода in vitro (или один тест in vitro и один тест in vivo) на разных тест-объектах, позволяющих оценить различные виды повреждений генетического материала в клетках. Методы тестирования могут быть выбраны из набора стандартных тестов (примеры используемых для оценки эквивалентности тестов представлены в приложении 2 к настоящим МР). В исследовании используется наибольшая возможная концентрация (доза), чтобы оценить мутагенный потенциал примесей, присутствующих в техническом продукте на низком уровне. Выбор метода рекомендуется осуществлять с учетом цитотоксичности пестицидов в условиях in vitro, а также их общей токсичности и токсичности по отношению к органу мишени in vivo.
Например, максимальные концентрации (дозы) составляют:
- в тесте Эймса — 5 мг/чашка или 5 мкл/чашка;
- в тесте оценки мутаций в генах тимидинкиназы (tk), генах гипоксантин-гуанинфосфорибозилтрансферазы (hprt) и ксантингуанинфосфорибозилтрансферазы (xprt) в клетках млекопитающих in vitro — 10 мМ, 2 мг/мл или 2 мкл/мл;
- в микроядерном тесте на эритроцитах млекопитающих — 2000 мг/кг массы тела.
3.4.1.1. Для преодоления токсичности доступно тестирование с использованием модифицированных протоколов (например, исследование пестицидов из классов сульфонилмочевин и триазолпиримидинов в тесте Эймса можно проводить в условиях обогащения среды изолейцином, чтобы обеспечить возможность оценки максимальных рекомендованных концентраций пестицидов данных классов).
3.4.1.2. При получении разнонаправленных или сомнительных результатов проводят оценку генотоксичности дополнительным методом тестирования.
3.4.2. При содержании примесей на уровне > 1% проводят исследования генотоксичности минимум тремя методами in vitro на разных объектах. В случаях, когда не все тесты in vitro дают отрицательный результат, безопасность технического продукта следует подтвердить в экспериментах с использованием метода in vivo. В качестве альтернативы рекомендуется использовать один тест in vitro и один тест in vivo. Так же, как в случае наличия примесей на уровне < 1%, в исследовании используется наибольшая возможная концентрация (доза), чтобы оценить мутагенный потенциал примесей, присутствующих в техническом продукте на низком уровне. Выбор метода рекомендуется осуществлять с учетом цитотоксичности пестицидов в условиях in vitro, а также их общей токсичности и токсичности по отношению к органу мишени in vivo.
3.4.2.1. В случае получения противоположных или неоднозначных результатов целесообразно добавление еще одного теста in vivo.
3.4.2.2. При отсутствии первичных данных о мутагенности оригинального продукта рекомендуется тестирование в условиях in vivo.
3.5. В ходе экспертной оценки эквивалентности технических продуктов воспроизведенных действующих веществ пестицидов результаты, полученные в эксперименте, сравнивают с показателями для оригинального продукта и (или) определяют их класс опасности по критерию «мутагенность».
3.5.1. Технический продукт воспроизведенного действующего вещества пестицида считается эквивалентным по критерию «мутагенность», если не выявлено превышения по определяемым показателям, характеризующим первичные повреждения дезоксирибонуклеиновой кислоты (далее — ДНК), частоту генных, хромосомных и (или) геномных мутаций.
3.5.2. В тех случаях, когда отсутствует доступ к необходимой для проведения сравнения первичной информации о результатах оценки генотоксичности оригинального продукта в конкретном тесте, для вынесения заключения об эквивалентности необходимым условием является оценка результатов, полученных в условиях in vivo, с тем, чтобы определить класс опасности по критерию «мутагенность», так как в соответствии с методическими документами <2> одним из показателей, позволяющих классифицировать опасность пестицида по данному критерию, является доза, вводимая лабораторным животным, при которой наблюдают генотоксическое действие (ниже максимальной переносимой дозы (далее — МПД) или на уровне и выше МПД). Эквивалентным технический продукт воспроизведенного действующего вещества пестицида следует считать в том случае, когда определяемый для него класс опасности по критерию «мутагенность» не отличается от класса опасности оригинального продукта.
<2> МР 1.2.0235-21 «Гигиеническая классификация пестицидов и агрохимикатов по степени опасности», утвержденные руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 15.02.2021 (далее — МР 1.2.0235-21).
3.5.3. Если показатели генотоксических эффектов выше, чем в случае референтного вещества, и (или) технический продукт воспроизведенного действующего вещества пестицида переходит в более высокий класс опасности, технический продукт воспроизведенного действующего вещества пестицида считается неэквивалентным оригинальному продукту. Примеры экспертной оценки эквивалентности технических продуктов воспроизведенных действующих веществ пестицидов по критерию «мутагенность» представлены в приложении 2 к настоящим МР.
РЕКОМЕНДУЕМЫЙ АЛГОРИТМ
ОЦЕНКИ ЭКВИВАЛЕНТНОСТИ ТЕХНИЧЕСКИХ ПРОДУКТОВ
ВОСПРОИЗВЕДЕННЫХ ДЕЙСТВУЮЩИХ ВЕЩЕСТВ ПЕСТИЦИДОВ
ПО КРИТЕРИЮ «МУТАГЕННОСТЬ»
Приложение 2
к МР 1.2.0379-25
Примеры экспертной оценки эквивалентности технических
продуктов воспроизведенных действующих веществ пестицидов
оригинальным продуктам по критерию «мутагенность»
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| Тестируемый технический продукт обладает способностью вызывать повреждения ДНК | |||
| (Внеплановый синтез ДНК (ОЭСР № 486) | - | Исследование проведено на крысах. Анализируемая ткань: гепатоциты. Отсутствие статистически значимого повышения уровня включения меченого тимидина в ДНК. Оригинальный продукт не обладает способностью вызывать повреждения ДНК. Спецификация ФАО/ВОЗ | |
| Заключение: в двух тестах in vivo выявлены генотоксические эффекты. Согласно гигиенической классификации пестицидов и агрохимикатов по степени опасности <3> продукт оригинатора по критерию «мутагенность» относится к 4-му классу опасности, тогда как тестируемый технический продукт следует отнести к 3-му классу опасности по этому критерию. Технический продукт воспроизведенного действующего вещества пестицида неэквивалентен продукту оригинатора | |||
| Технический продукт I пестицида из класса дитиокарбаматов (содержание примесей на уровне > 0,1%, но менее 1%) | |||
| Метод оценки обратных генных мутаций на бактериях (ОЭСР № 471) | Исследование проведено на 5 штаммах S. typhimurium, TA97, TA98, TA100, TA102 и TA1535 с использованием 6 концентраций объекта испытаний (0,005 — 0,5 мг/чашка, максимальная нецитоксичная концентрация 0,125 мг/чашка). Обнаружено воспроизводимое статистически значимое повышение количества ревертантов по сравнению с отрицательным контролем при действии технического продукта в концентрациях 0,0125 — 0,125 мг/чашка для всех штаммов, за исключением TA1535, в присутствии и отсутствие метаболической активации. Выявлена значимая монотонная зависимость повышения числа ревертантов указанных штаммов от концентрации объекта испытания. Кратность превышения числа ревертантов по сравнению с отрицательным контролем > двух в случае штаммов TA97, TA100, TA98 и TA102. Тестируемый технический продукт обладает способностью индуцировать обратные генные мутации | Исследование проведено на 5 штаммах S. typhimurium TA98, TA100, TA1535, TA1537 и TA1538; 1 — 1000 мкг/чашка (+ S9), 1 — 100 (-S9) мкг/чашка. Обнаружен позитивный мутагенный эффект на штаммах TA100 и TA1535 ( \pm S9). Оригинальный продукт обладает способностью индуцировать обратные генные мутации. Европейское агентство по химическим веществам (англ. European Chemicals Agency's, далее — ECHA) | +/+ |
| 1 | 2 | 3 | 4 |
| Хромосомные/геномные мутации (Микроядерный тест на эритроцитах млекопитающих (ОЭСР № 474) | Исследование проведено на мышах CD-1. Дозы: 500, 1000, 2000 мг/кг м.т. Анализируемая ткань: костный мозг. Статистически значимое повышение частоты ПХЭ с микроядрами отмечено при дозе 2000 мг/кг. Статистически значимая зависимость эффекта от дозы. Значение средней частоты полихроматофильных эритроцитов с микроядрами при высокой дозе (2000 мг/кг м.т.) выходило за рамки исторического отрицательного контроля в лаборатории. Тестируемый технический продукт обладает способностью индуцировать образование микроядер | Исследование проведено на мышах CD-1. Дозы 38 — 377 мг/кг м.т. Не выявлено статистически значимого повышения частоты ПХЭ с микроядрами. Оригинальный продукт не обладает способностью индуцировать образование микроядер. ECHA | +/- |
| Повреждения ДНК (Метод ДНК-комет in vivo (ОЭСР № 489) | Исследование проведено на мышах CD-1. Дозы: 500, 1000, 2000 мг/кг м.т. Анализируемая ткань: костный мозг, печень. Статистически значимое повышение показателя «% ДНК в хвосте комет» при дозе 2000 мг/кг (p < 0,01). Тестируемый технический продукт обладает способностью вызывать повреждения ДНК в условиях in vivo | Нет данных | +/нет данных |
| Заключение: генотоксичность in vivo была выявлена при высокой дозе объекта испытаний (2000 мг/кг м.т.; на уровне МПД). При дозах \leq 1000 мг/кг генотоксического эффекта не обнаружено, что соответствует данным, полученным в микроядерном тесте для оригинального продукта (максимальная доза 377 мг/кг). На основании полученных данных технический продукт можно отнести к 3-му классу опасности по критерию «мутагенность» <4>. В настоящее время согласно действующей в Российской Федерации классификации пестицидов это действующее вещество относится к 3-му классу. Таким образом, оснований для его перевода в более высокий класс опасности по критерию «мутагенность» нет. Технический продукт воспроизведенного действующего вещества пестицида можно признать эквивалентным продукту оригинатора | |||
| Технический продукт II пестицида из класса дитиокарбаматов (содержание примесей на уровне > 1%) | |||
| Метод оценки обратных генных мутаций на бактериях (ОЭСР № 471) | Исследование проведено на 5 штаммах Salmonella typhimurium, TA97, TA98, TA100, TA102 и TA1535 с использованием 6 концентраций объекта испытаний (0,005 — 1,25 мг/чашка, 0,5 мг/чашка максимальная нецитоксичная концентрация). Обнаружено воспроизводимое статистически значимое повышение количества ревертантов по сравнению с отрицательным контролем при действии технического продукта в концентрациях 0,05 — 0,5 мг/чашка для всех штаммов, за исключением TA98 в присутствии и отсутствие | Исследование проведено на 5 штаммах S. typhimurium TA98, TA100, TA1535, TA1537 и TA1538; 1 — 1000 мкг/чашка (+ S9), 1 — 100 (-S9) мкг/чашка. Обнаружен позитивный мутагенный эффект на штаммах TA100 и TA1535 ( \pm S9) Оригинальный продукт обладает способностью индуцировать обратные генные мутации. ECHA | +/+ |
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ
1. Федеральный закон от 30.03.1999 № 52-ФЗ «О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения».
2. Федеральный закон от 19.07.1997 № 109-ФЗ «О безопасном обращении с пестицидами и агрохимикатами».
3. Единые санитарно-эпидемиологические и гигиенические требования к товарам, подлежащим санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю).
4. Р 1.2.3156-13 «Оценка токсичности и опасности химических веществ и их смесей для здоровья человека».
5. МУ 1.2.3364-16 «Оценка мутагенной активности пестицидов».
6. МР 1.2.0235-21 «Гигиеническая классификация пестицидов и агрохимикатов по степени опасности».
7. МР 1.2.0301-22 «Алгоритм и критерии экспертной оценки генотоксической активности химических веществ».
8. ГОСТ Р 57454-2017 «Руководство по применению критериев классификации опасности химической продукции по воздействию на организм. Мутагенность».
9. Guidance Document on the Assessment of the Equivalence of Technical Materials of Substances Regulated under Regulation (EC) No 1107/2009 SANCO/10597/2003 — rev. 10.1 13 July 2012, p. 4.
СПРАВОЧНАЯ ИНФОРМАЦИЯ
В настоящих МР используются следующие термины и определения:
Генотоксичность — способность факторов различной природы влиять на целостность генетического материала в клетке — изменять структуру, информационное содержание или сегрегацию ДНК, а также повреждать ДНК <5>.
<5> ГОСТ Р 57454-2017 «Руководство по применению критериев классификации опасности химической продукции по воздействию на организм. Мутагенность», введенный приказом Росстандарта от 27.04.2017 № 333-ст (далее — ГОСТ Р 57454-2017).
Воспроизведенное действующее вещество — вещество, которое является аналогом оригинального действующего вещества пестицида и поступает в обращение после истечения срока действия исключительных патентных прав на оригинальный продукт.
Мутагенность — способность факторов различной природы вызывать мутации <6>.
Примесь — любой компонент, отличный от действующего вещества, который присутствует в техническом продукте (включая компоненты, образованные в процессе производства или в результате деградации при хранении) [9].
Методические рекомендации разработаны ФБУН «ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана» Роспотребнадзора (С.В. Кузьмин, Н.А. Илюшина, О.В. Егорова, Ю.А. Ревазова).