---
title: "\"ПНД Ф 14.2:4.263-2011. Количественный химический анализ вод. Методика измерений массовых концентраций глифосата (раундапа) и его основного метаболита (аминометилфосфоновой кислоты) в питьевых и природных водах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии\""
number: "ПНД Ф 14.2:4.263-2011"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/metodika-pnd-f-14-24-263-2011"
---

## "ПНД Ф 14.2:4.263-2011. Количественный химический анализ вод. Методика измерений массовых концентраций глифосата (раундапа) и его основного метаболита (аминометилфосфоновой кислоты) в питьевых и природных водах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

# "ПНД Ф 14.2:4.263-2011. Количественный химический анализ вод. Методика измерений массовых концентраций глифосата (раундапа) и его основного метаболита (аминометилфосфоновой кислоты) в питьевых и природных водах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии"

(утв. ФБУ "ФЦАО" 17.10.2011)


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Директор ФБУ "Федеральный<br>
центр анализа и оценки<br>
техногенного воздействия"<br>
**С.А.ХАХАЛИН**

</div>

17 октября 2011 года

<a id="p100002"></a>**КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ ХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ВОД**

<a id="p100003"></a>**МЕТОДИКА**
**ИЗМЕРЕНИЙ МАССОВЫХ КОНЦЕНТРАЦИЙ ГЛИФОСАТА (РАУНДАПА)**
**И ЕГО ОСНОВНОГО МЕТАБОЛИТА (АМИНОМЕТИЛФОСФОНОВОЙ КИСЛОТЫ)**
**В ПИТЬЕВЫХ И ПРИРОДНЫХ ВОДАХ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<div align="center">

<a id="p100004"></a>**ПНД Ф 14.2:4.263-2011**

</div>


<a id="p100005"></a>Методика допущена для целей государственного экологического контроля.

<a id="p100006"></a>Настоящий документ устанавливает методику измерений массовых концентраций глифосата (раундапа) и его основного метаболита аминометилфосфоновой кислоты (АМФК) в питьевых и природных водах в диапазоне от 0,01 до 0,1 мг/куб. дм.
<a id="p100007"></a>Продолжительность анализа одной пробы не менее 7 часов.
<a id="p100008"></a>Блок-схема анализа приведена в [Приложении 1](#p100252).


### 1. <a id="p100009"></a>ПРИПИСАННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100010"></a>Настоящая методика обеспечивает получение результатов анализа с погрешностями, не превышающими значений, приведенных в таблице 1.

<a id="p100011"></a>Таблица 1

<div align="right">

<a id="p100012"></a>**ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ, ЗНАЧЕНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ТОЧНОСТИ,**

</div>

**ПРАВИЛЬНОСТИ, ПОВТОРЯЕМОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ МЕТОДИКИ**


| <a id="p100013"></a>Диапазон измерений, мг/куб. дм | <a id="p100014"></a>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , % | <a id="p100015"></a>Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , % | <a id="p100016"></a>Показатель правильности (границы относительной систематической погрешности при вероятности P = 0,95), $±\delta_{c}$ , % | <a id="p100017"></a>Показатель точности [<1>](#p100029) (границы относительной погрешности при вероятности P = 0,95), $\pm \delta$ , % |
| --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100018"></a>Глифосат (раундап) от 0,01 до 0,1 вкл. | <a id="p100019"></a>14 | <a id="p100020"></a>20 | <a id="p100021"></a>8 | <a id="p100022"></a>40 |
| <a id="p100023"></a>Аминометилфосфоновая кислота от 0,01 до 0,1 вкл. | <a id="p100024"></a>18 | <a id="p100025"></a>22,5 | <a id="p100026"></a>8 | <a id="p100027"></a>45 |



<a id="p100028"></a>

---

<a id="p100029"></a><1> Соответствует относительной расширенной неопределенности с коэффициентом охвата k = 2.


### 2. <a id="p100030"></a>МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100031"></a>Измерения выполняют методом ВЭЖХ с флуоресцентным детектированием после проведения реакции определяемых веществ с 9-флуоренилметилхлороформиатом.


### 3. <a id="p100032"></a>СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ. ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА. РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ


<a id="p100033"></a>При выполнении измерений применяют следующие средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы:

#### <a id="p100034"></a>3.1 Средства измерений

<a id="p100035"></a>3.1.1. Хроматографическая система, например, Series 200 фирмы "Perkin Elmer" (США) или Agilent 1100 Series фирмы "Agilent Technologies" (США) или любая другая в комплекте:
- <a id="p100036"></a>Градиентный насос высокого давления на 2 или 4 элюента.
- <a id="p100037"></a>Флуоресцентный детектор.
- <a id="p100038"></a>Колонка хроматографическая металлическая с фазой на основе силикагеля с привитыми группами С18 размером 250 x 4,6 мм, зернением 5 мкм, например, Alltima фирмы "Grace" (США).
- <a id="p100039"></a>Устройство для автоматического отбора и ввода проб (автосэмплер), позволяющее вводить 10 - 30 мм пробы.
<a id="p100040"></a>Допускается использовать хроматограф любой другой марки, позволяющий проводить хроматографический анализ в условиях, приведенных в [п. 8.1](#p100102), с необходимой чувствительностью.
<a id="p100041"></a>3.1.2. Весы лабораторные высокого класса точности с максимальной нагрузкой 210 г по ГОСТ Р 53228.
<a id="p100042"></a>3.1.3. Колбы мерные вместимостью 10, 25, 100, 250, 500 и 1000 куб. см по ГОСТ 1770, класс точности 2.
<a id="p100043"></a>3.1.4. Микрошприцы вместимостью 0,025, 0,050, 0,10, 0,25 и 1,0 куб. см, например, фирмы "Hamilton".

##### <a id="p100044"></a>3.1.5 Пипетки вместимостью 1, 2 и 5 куб. см по ГОСТ 29227.

<a id="p100045"></a>3.1.6. Стандартный образец глифосата (ГСО) с содержанием основного вещества не менее 98%.
<a id="p100046"></a>3.1.7. Аминометилфосфоновая кислота (АМФК) - вещество гарантированной чистоты с содержанием основного вещества не менее 98%, например, фирмы "Dr.Ehrenstorfer" или любой другой.
<a id="p100047"></a>3.1.8. pH-метр с магнитной мешалкой, например, pH 673М.

#### <a id="p100048"></a>3.2 Вспомогательные устройства

<a id="p100049"></a>3.2.1. Бидистиллятор стеклянный по ТУ 25-11.1592 или установка для получения деионизированной воды 2 степени чистоты по ГОСТ Р 52501.

##### <a id="p100050"></a>3.2.2 Вакуумный дегазатор для дегазирования элюентов.

<a id="p100051"></a>3.2.3. Компьютер персональный, позволяющий работать с программным обеспечением, например, с программой "Totalchrom", версия 6.3, для сбора информации и обработки хроматограмм.

##### <a id="p100052"></a>3.2.4 Принтер любой модели.

<a id="p100053"></a>3.2.5. Пробирка стеклянная с притертой пробкой вместимостью 5 куб. см по ГОСТ 1770 или по ГОСТ 25336.
<a id="p100054"></a>3.2.6. Стакан вместимостью 1000 куб. см по ГОСТ 25336.
<a id="p100055"></a>3.2.7. Термостатируемое отделение для колонки, обеспечивающее температуру 35 - 40 °C.

##### <a id="p100056"></a>3.2.8 Фильтрационная установка, например, фирмы "Millipore".

<a id="p100057"></a>3.2.9. Флаконы, герметично закрывающиеся с завинчивающимися крышками вместимостью 1,5 - 2 куб. см, снабженные прокладками с тефлоновым покрытием.
<a id="p100058"></a>3.2.10. Форколонка с картриджем размером 15 x 3,2 мм с сорбентом на основе силикагеля с привитыми группами С18, зернением 7 мкм, например, фирмы "Perkin Elmer".
<a id="p100059"></a>3.2.11. Холодильник двухкамерный бытовой, обеспечивающий температуру холодильной камеры (2 - 10) °C и морозильной камеры минус (12 - 24) °C.

##### <a id="p100060"></a>3.2.12 Шкаф сушильный, например, СНОЛ, ТУ 16-681.032.

<a id="p100061"></a>Допускается использовать средства измерений и вспомогательные устройства с метрологическими и техническими характеристиками не хуже, чем у выше указанных.

#### <a id="p100062"></a>3.3 Материалы и реактивы

<a id="p100063"></a>3.3.1. Ацетонитрил для градиентной хроматографии, например, фирмы "Merck" или "ACROS".
<a id="p100064"></a>3.3.2. Бумага индикаторная для определения pH в диапазоне 5 - 10 ед. pH с шагом 0,5 ед. pH.
<a id="p100065"></a>3.3.3. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709 или деионизированная по ГОСТ Р 52501 2 степени чистоты.
<a id="p100066"></a>3.3.4. Диэтиловый эфир стабилизированный медицинский по ТУ 2600-001-45682126, или х.ч. по ГОСТ 6265.

##### <a id="p100067"></a>3.3.5 Калия гидроокись (гидроксид калия), ч.д.а., по ГОСТ 24363.

<a id="p100068"></a>3.3.6. Калий фосфорнокислый 1-замещенный, х.ч., по [ГОСТ 4198](https://bukva.ai/docs/gost-4198-75).

##### <a id="p100069"></a>3.3.7 Кислота щавелевая, х.ч., по ГОСТ 22180.

<a id="p100070"></a>3.3.8. Натрий серноватистокислый (натрия тиосульфат), ч.д.а., по ГОСТ 27086.
<a id="p100071"></a>3.3.9. Натрий тетраборнокислый 10-водный (тетраборат натрия), х.ч., по [ГОСТ 4199](https://bukva.ai/docs/gost-4199-76).

##### <a id="p100072"></a>3.3.10 Фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

<a id="p100073"></a>3.3.11. 9-флуоренилметилхлороформиат с содержанием основного вещества не менее 97%, например, фирмы "ACROS".
<a id="p100074"></a>Допускается использовать реактивы более высокой квалификации, в том числе импортных.


### 4. <a id="p100075"></a>ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ, ОХРАНЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ


<a id="p100076"></a>4.1. При выполнении анализов необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.
<a id="p100077"></a>4.2. При работе с оборудованием необходимо соблюдать правила электробезопасности по ГОСТ Р 12.1.019.
<a id="p100078"></a>4.3. Обучение работающих безопасности труда должно быть организовано в соответствии с ГОСТ 12.0.004.
<a id="p100079"></a>4.4. Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.


### 5. <a id="p100080"></a>ТРЕБОВАНИЯ К КВАЛИФИКАЦИИ ОПЕРАТОРА


<a id="p100081"></a>К выполнению измерений и обработке их результатов допускают лиц, имеющих квалификацию инженера или техника-химика, владеющих методом хроматографического анализа, знающих конструкцию, принцип действия и правила эксплуатации данного оборудования.
<a id="p100082"></a>К выполнению работ по пробоподготовке допускают лиц, имеющих квалификацию техника-химика или лаборанта-химика, обученных методике подготовки пробы для хроматографического анализа.


### 6. <a id="p100083"></a>УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ


<div align="center">

<a id="p100084"></a>При выполнении измерений в лаборатории должны быть соблюдены следующие условия:

</div>



| <a id="p100085"></a>температура воздуха | <a id="p100086"></a>(20 - 28) °C |
| --- | --- |
| <a id="p100087"></a>относительная влажность воздуха | <a id="p100088"></a>не более 80% при 25 °C |
| <a id="p100089"></a>частота переменного тока | <a id="p100090"></a>(50 +/- 1) Гц |
| <a id="p100091"></a>напряжение в сети | <a id="p100092"></a>(220 +/- 22) В. |



### 7. <a id="p100093"></a>ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ ВОДЫ


<a id="p100094"></a>7.1. Отбор проб воды осуществляют в соответствии с [ГОСТ Р 51592](https://bukva.ai/docs/standart-gost-r-51592-2000) и [ГОСТ Р 51593](https://bukva.ai/docs/postanovlenie-gost-r-51593-2000) в стеклянные герметично закупоривающиеся флаконы. Флаконы заполняют пробой воды до пробки. Объем отбираемой пробы должен быть не менее 0,025 куб. дм.
<a id="p100095"></a>7.2. Отобранную пробу анализируют в течение суток, если такой возможности нет, то пробу хранят в холодильнике при температуре 2 - 10 °C не более 3-х суток. Пробу питьевой воды, содержащую остаточный хлор, консервируют на месте отбора, добавляя тиосульфат натрия из расчета 80 - 100 мг на 1 куб. дм пробы.

#### <a id="p100096"></a>7.3 При отборе проб составляется сопроводительный документ по утвержденной форме, в котором указывается:

<div align="center">

- <a id="p100097"></a>место, время и дата отбора;

</div>

- <a id="p100098"></a>определяемый показатель;
- <a id="p100099"></a>шифр пробы;
- <a id="p100100"></a>должность, фамилия отбирающего пробу.


### 8. <a id="p100101"></a>ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ



#### <a id="p100102"></a>8.1 Подготовка аппаратуры

<a id="p100103"></a>Подготовку хроматографической системы и компьютера к работе проводят в соответствии с инструкцией по эксплуатации. На компьютере в программе управления создают метод анализа с использованием абсолютной градуировки согласно руководству по эксплуатации программного обеспечения. В качестве элюентов используют элюент A и элюент B, которые представляют собой соответственно фосфатный буфер и ацетонитрил.
<a id="p100104"></a>Для удаления растворенных газов применяют вакуумный дегазатор.
<a id="p100105"></a>Ввод пробы в колонку осуществляют с помощью автосэмплера.
<a id="p100106"></a>Хроматографическую систему включают в соответствии с инструкцией по эксплуатации и выводят на режим при следующих условиях.

<div align="right">

<a id="p100107"></a>Параметры работы хроматографической системы:

</div>



| <a id="p100108"></a>Объем вводимой пробы | <a id="p100109"></a>20 куб. мм |
| --- | --- |
| <a id="p100110"></a>Скорость элюирования | <a id="p100111"></a>1,0 куб. см/мин. |


<div align="center">

<a id="p100112"></a>Хроматографирование проводится в градиентном режиме по программе, описанной в табл. 2. Температура хроматографирования 40 °C.

<a id="p100113"></a>Таблица 2

<a id="p100114"></a>**ПРОГРАММА РАБОТЫ ГРАДИЕНТНОГО НАСОСА**

</div>



| <a id="p100115"></a>Время, мин. | <a id="p100116"></a>A (фосфатный буфер), % | <a id="p100117"></a>B (ацетонитрил), % |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100118"></a>0 | <a id="p100119"></a>95 | <a id="p100120"></a>5 |
| <a id="p100121"></a>25 | <a id="p100122"></a>35 - 25 | <a id="p100123"></a>65 - 75 |
| <a id="p100124"></a>27 | <a id="p100125"></a>5 | <a id="p100126"></a>95 |
| <a id="p100127"></a>34 | <a id="p100128"></a>5 | <a id="p100129"></a>95 |


<a id="p100130"></a>Параметры работы флуоресцентного детектора:


| <a id="p100131"></a>Длина волны возбуждения | <a id="p100132"></a>260 нм |
| --- | --- |
| <a id="p100133"></a>Длина волны излучения | <a id="p100134"></a>310 нм. |



#### <a id="p100135"></a>8.2 Приготовление градуировочных растворов

<a id="p100136"></a>Основной градуировочный раствор глифосата с массовой концентрацией 1 мг/куб. см в воде готовят весовым способом. Для этого 10 мг глифосата помещают в мерную колбу вместимостью 10 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.
<a id="p100137"></a>Основной градуировочный раствор глифосата хранят не более 1 недели в холодильнике при температуре 2 - 10 °C в герметично закрытой мерной колбе. Перед использованием раствор выдерживают при комнатной температуре не менее 20 минут.
<a id="p100138"></a>Основной градуировочный раствор АМФК с массовой концентрацией 1 мг/куб. см в воде готовят весовым способом. Для этого 10 мг АМФК помещают в мерную колбу вместимостью 10 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.
<a id="p100139"></a>Основной градуировочный раствор АМФК хранят не более 1 недели в холодильнике при температуре 2 - 10 °C в герметично закрытой мерной колбе. Перед использованием раствор выдерживают при комнатной температуре не менее 20 минут.
<a id="p100140"></a>Промежуточный градуировочный раствор глифосата и АМФК с массовой концентрацией 0,01 мг/куб. см готовят путем разбавления основных растворов. Для этого 0,10 куб. см основного градуировочного раствора глифосата и 0,10 куб. см основного градуировочного раствора АМФК помещают в мерную колбу вместимостью 10 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.

<div align="right">

<a id="p100141"></a>Промежуточный градуировочный раствор глифосата и АМФК хранят не более 1 недели в холодильнике при температуре 2 - 10 °C в герметично закрытой мерной колбе. Перед использованием раствор выдерживают при комнатной температуре не менее 20 минут.

</div>

<a id="p100142"></a>    Градуировку  хроматографа  проводят  по шести градуировочным растворам:

<div align="center">

C ,  C ,  C ,  C ,  C   и  C .  В  качестве  C   используют холостую пробу,<br>
 0    1    2    3    4      5                 0

</div>

представляющую собой дистиллированную воду (см. [п. 3.3.3](#p100065)).

<div align="center">

<a id="p100143"></a>    Градуировочные  растворы  глифосата и  АМФК C , C , C , C  и C  готовят<br>
                                                 1   2   3   4    5<br>
непосредственно  перед  использованием.  Для  этого  необходимое количество<br>
промежуточного  градуировочного  раствора  (см.  табл. 3) помещают в мерную<br>
колбу   вместимостью   25  куб.  см  и  доводят  объем  раствора  до  метки<br>
дистиллированной водой (см. [п. 3.3.3](#p100065)).

<a id="p100144"></a>Таблица 3

<a id="p100145"></a>**ПРИГОТОВЛЕНИЕ ГРАДУИРОВОЧНЫХ РАСТВОРОВ ГЛИФОСАТА**<br>
**И АМФК В ВОДЕ**

</div>



| <a id="p100146"></a>N р-ра | <a id="p100147"></a>Массовая концентрация градуировочного раствора, мг/куб. дм | <a id="p100148"></a>Добавляемый объем промежуточного градуировочного раствора глифосата и АМФК, куб. мм |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100149"></a>$\text{С}_{1}$ | <a id="p100150"></a>0,010 | <a id="p100151"></a>25 |
| <a id="p100152"></a>$\text{С}_{2}$ | <a id="p100153"></a>0,020 | <a id="p100154"></a>50 |
| <a id="p100155"></a>$\text{С}_{3}$ | <a id="p100156"></a>0,040 | <a id="p100157"></a>100 |
| <a id="p100158"></a>$\text{С}_{4}$ | <a id="p100159"></a>0,060 | <a id="p100160"></a>150 |
| <a id="p100161"></a>$\text{С}_{5}$ | <a id="p100162"></a>0,10 | <a id="p100163"></a>250 |


<a id="p100164"></a>Примечание: Допускается в качестве градуировочных растворов использовать растворы с другой массовой концентрацией с корректировкой схемы приготовления градуировочных растворов.


#### <a id="p100165"></a>8.3 Установление градуировочной характеристики

<a id="p100166"></a>Компьютер устанавливают в режим измерения факторов отклика по методу абсолютной градуировки.
<a id="p100167"></a>Градуировку хроматографа проводят в условиях выполнения измерений. При этом для каждого градуировочного раствора (см. [табл. 3](#p100145)) и холостой пробы (в качестве холостой пробы используется дистиллированная вода, см. [п. 3.3.3](#p100065)) проводят пробоподготовку (см [п. 9.3](#p100185)). Полученные градировочные растворы хроматографируют в тот же день, если такой возможности нет, то градуировочные растворы хранят в герметично закрытой посуде в холодильнике при температуре 2 - 10 °C не более трех суток. Растворы, хранившиеся в холодильнике, перед анализом выдерживают при комнатной температуре не менее 20 минут.
<a id="p100168"></a>    Каждый   градуировочный   раствор  (C  - C ),  подвергшийся   процедуре
                                         0    5
пробоподготовки, хроматографируют дважды при условиях, указанных в [п. 8.1](#p100102),
рассчитывая среднее значение площади пика определяемого соединения (S ) для
                                                                     i
каждого  из  растворов.  Затем  с  помощью  программного модуля градуировки
управляющей  программы для каждого соединения строят градуировочный график,
описываемый уравнением:

<a id="p100169"></a>                            S  = A  * C  + b ,
                             i    i    i    i

    где:
    A  - относительный градуировочный коэффициент;
     i
    C  -  массовая  концентрация  определяемого соединения в градуировочном
     i
растворе;
    b  - площадь пика определяемого соединения в холостой пробе (C ).
     i                                                            0
<a id="p100170"></a>Установление градуировочных характеристик проводят не реже одного раза в 6 месяцев, при смене хроматографической колонки или после ремонта оборудования, повлекшего за собой изменение условий хроматографирования.
<a id="p100171"></a>Проверку стабильности градуировочных характеристик проводят для каждой серии проб по результатам анализа одного из градуировочных растворов. Градуировочную характеристику считают стабильной в случае, если измеренное значение массовой концентрации отличается от аттестованного значения не более чем на 25%, а время удерживания глифосата и АМФК в градуировочном растворе отклоняется от установленного при градуировке времени удерживания не более чем на 0,2 мин.
<a id="p100172"></a>Глифосат и АМФК идентифицируют по абсолютным временам удерживания.
<a id="p100173"></a>Пример типичной хроматограммы глифосата и АМФК представлен в [Приложении 2](#p100255).


### 9. <a id="p100174"></a>ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100175"></a>При измерении массовых концентраций глифосата и АМФК выполняют следующие операции.

#### <a id="p100176"></a>9.1 Подготовка реактивов

<a id="p100177"></a>9.1.1. Приготовление раствора щавелевой кислоты с молярной концентрацией 1,11 моль/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 500 куб. см, содержащую 300 - 400 куб. см дистиллированной воды, помещают (50,00 +/- 0,05) г щавелевой кислоты, перемешивают. Затем доводят объем раствора до 500 куб. см дистиллированной водой. Раствор хранят не более 3 месяцев в холодильнике при температуре 2 - 10 °C.
<a id="p100178"></a>9.1.2. Приготовление раствора гидроксида калия с молярной концентрацией 3 моль/куб. дм. В мерную колбу вместимостью 100 куб. см, содержащую 50 - 70 куб. см дистиллированной воды, помещают (16,80 +/- 0,05) г гидроксида калия, перемешивают. Затем доводят объем раствора до 100 куб. см дистиллированной водой. Раствор хранят не более 3 месяцев при комнатной температуре.

##### <a id="p100179"></a>9.1.3 Приготовление  боратного  буфера  - раствора тетрабората натрия

Na B O  x 10H O  с молярной концентрацией 0,05 моль/куб. дм. В мерную колбу
  2 4 7      2
вместимостью  250  куб.  см,  содержащую 100 - 150 куб. см дистиллированной
воды,  помещают  (4,80  +/- 0,05) г тетрабората натрия, перемешивают. Затем
доводят  объем  раствора  до  250  куб.  см дистиллированной водой. Раствор
хранят не более 3 месяцев в холодильнике при температуре 2 - 10 °C.

##### <a id="p100180"></a>9.1.4 Приготовление  фосфатного буфера с молярной концентрацией 0,002

моль/куб. дм и pH 7,0. В мерную колбу вместимостью 1000 куб. см, содержащую
200 - 400 куб. см дистиллированной воды, помещают (0,270 +/- 0,001) г калия
фосфорнокислого   1-замещенного  (KH PO ),  перемешивают  и  доводят  объем
                                    2  4
раствора до метки дистиллированной водой. Далее содержимое колбы переливают
в  стакан  (вместимостью 1000 куб. см), кладут в стакан магнитную мешалку и
при  перемешивании  проводят  измерения  pH.  Добавляя  в  стакан по каплям
гидроксид  калия с молярной концентрацией 3 моль/куб. дм, доводят pH буфера
до  7,00 с точностью до 0,02 единицы pH. Раствор хранят не более 1 месяца в
холодильнике  при  температуре  2 - 10 °C.  Перед  использованием фосфатный

<div align="center">

буфер необходимо отфильтровать через фильтр с диаметром пор 0,45 мкм.

</div>

<a id="p100181"></a>9.1.5. Приготовление раствора дериватизирующего агента - раствора 9-флуоренилметилхлороформиата в ацетонитриле с массовой концентрацией 1 мг/куб. см. Основной раствор 9-флуоренилметилхлороформиата в ацетонитриле с массовой концентрацией 1 мг/куб. см готовят весовым способом. Для этого (10,0 +/- 0,2) мг 9-флуоренилметилхлороформиата помещают в мерную колбу вместимостью 10 куб. см и доводят объем раствора до метки ацетонитрилом.
<a id="p100182"></a>Основной раствор 9-флуоренилметилхлороформиата хранят не более 2 недель в морозильной камере при температуре минус (12 - 24) °C в герметично закрытой мерной колбе.

#### <a id="p100183"></a>9.2 Подготовка аппаратуры

<a id="p100184"></a>Хроматографическую систему выводят на режим в соответствии с условиями, указанными в [п. 8.1](#p100102). На компьютере в программе управления активизируют метод измерения.

#### <a id="p100185"></a>9.3 Подготовка пробы

<a id="p100186"></a>Отмеряют пипеткой 3,0 куб. см пробы воды и помещают в пробирку вместимостью 5 куб. см. В пробирку добавляют микрошприцем 60 куб. мм раствора щавелевой кислоты [(п. 9.1.1)](#p100177) и выдерживают 1 час.
<a id="p100187"></a>Затем добавляют микрошприцем 40 куб. мм раствора гидроксида калия [(п. 9.1.2)](#p100178) и контролируют значение pH (по индикаторной бумаге). Если значение pH выходит за пределы диапазона 6 - 7 ед. pH, то по каплям добавляют раствор щавелевой кислоты или раствор гидроксида калия. После установления необходимого значения pH пробу выдерживают 3 минуты.
<a id="p100188"></a>Затем пипеткой добавляют 1 куб. см боратного буфера [(п. 9.1.3)](#p100179) и контролируют значение pH (по индикаторной бумаге). Если значение pH менее 9 ед. pH, то по каплям добавляют боратный буфер. После достижения необходимого значения pH пробу выдерживают 15 минут.
<a id="p100189"></a>Затем пипеткой добавляют 3 куб. см диэтилового эфира [(п. 3.3.4)](#p100066), пробирку встряхивают в течение 3 минут и оставляют в покое на 15 минут для разделения слоев.
<a id="p100190"></a>После этого пипеткой отбирают 1,5 куб. см водной фазы и перемещают в другую пробирку. В эту пробирку микрошприцем добавляют 250 куб. мм ацетонитрила, 250 куб. мм раствора дериватизирующего агента [(п. 9.1.5)](#p100181) и оставляют в покое на 1 час.
<a id="p100191"></a>Затем в пробирку пипеткой добавляют 2 куб. см диэтилового эфира, встряхивают в течение 3 минут и оставляют на час.
<a id="p100192"></a>После этого из пробирки пипеткой отбирают 0,5 - 1 куб. см водной фазы и помещают в герметично закрывающийся флакон вместимостью 2 куб. см.

#### <a id="p100193"></a>9.4 Проведение измерений

<a id="p100194"></a>Полученные растворы хроматографируют в тот же день. В случае невозможности немедленного проведения анализа полученные растворы хранят в герметично закрытой посуде в холодильнике при температуре 2 - 10 °C не более трех суток. Растворы, хранившиеся в холодильнике, перед анализом выдерживают при комнатной температуре не менее 20 минут.
<a id="p100195"></a>Глифосат и АМФК идентифицируют по абсолютным временам удерживания в соответствии с градуировкой (см. [п. 8.3](#p100165)). В случае, когда массовая концентрация определяемого вещества в пробе выше, чем максимальная массовая концентрация градуировочного раствора, то исходную пробу следует разбавить дистиллированной водой, подвергнуть процедуре пробоподготовки по [п. 9.3](#p100185) и провести измерение массовой концентрации разбавленной пробы. При вычислении результатов измерений необходимо учесть степень разбавления.


### 10. <a id="p100196"></a>ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100197"></a>Обработку результатов измерений массовых концентраций глифосата или АМФК выполняют с помощью управляющей программы компьютера в соответствии с градуировочной характеристикой по формуле:

                                (S  - b )

<div align="center">

                                  i    i<br>
<a id="p100198"></a>                           X  = ---------, мг/куб. дм,

</div>

                            i      A
                                    i

<div align="center">

    где:

</div>

    X  - содержание определяемого соединения в пробе, мг/куб. дм;
     i
    S  - площадь пика  определяемого соединения  в анализируемом экстракте,
     i
мВ * с;
    A  - относительный градуировочный коэффициент, мВ * с * куб. дм/мг (см.
     i
[п. 8.3](#p100165));
    b  - площадь пика определяемого соединения в холостой пробе, мВ * с.
     i


### 11. <a id="p100199"></a>ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ



#### <a id="p100200"></a>11.1 Результаты измерений представляют в виде:


<a id="p100201"></a> $X \pm \Delta,\text{мг}/\text{куб}.\text{дм},P = 0,95,$ 

<a id="p100202"></a>где:
<a id="p100203"></a>X - результат анализа, мг/куб. дм;
<a id="p100204"></a> $\Delta$ - значение показателя точности, $\Delta = \delta*0,01*\text{Х}$ , мг/куб. дм;
<a id="p100205"></a> $\delta$ - значение показателя точности, % (см. [табл. 1](#p100012)).

#### <a id="p100206"></a>11.2 Результаты измерений округляют с точностью до:

<a id="p100207"></a>при концентрации от 0,01 мг/куб. дм до 0,1 мг/куб. дм     0,001 мг/куб. дм;
<a id="p100208"></a>                 свыше 0,1 мг/куб. дм до 1 мг/куб. дм     0,01 мг/куб. дм;
<a id="p100209"></a>                 свыше 1 мг/куб. дм                       0,1 мг/куб. дм.


### 12. <a id="p100210"></a>ОЦЕНКА ПРИЕМЛЕМОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100211"></a>    12.1. При  получении  двух  результатов  измерений  (X , X ) в условиях
                                                          1   2
повторяемости (сходимости) осуществляют проверку приемлемости результатов в
соответствии с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725 (часть 6, раздел 5.2).
<a id="p100212"></a>    Результат измерений считают приемлемым при выполнении условия:

                                |X  - X |
                                  1    2
<a id="p100213"></a>                            200 --------- <= r.
                                 X  + X
                                  1    2

<a id="p100214"></a> Значения r приведены в [таблице 4](#p100220).

#### <a id="p100215"></a>12.2 При  получении результатов измерений в двух лабораториях (X    ,

                                                                      лаб1
X    )  проводят проверку приемлемости результатов измерений в соответствии
 лаб2

<div align="right">

с требованиями ГОСТ Р ИСО 5725 (часть 6, раздел 5.3).

</div>

<a id="p100216"></a>    Результат измерений считают приемлемым при выполнении условия:

<div align="center">

                             |X     - X    |

</div>

                               лаб1    лаб2

<div align="center">

<a id="p100217"></a>                         200 --------------- <= R.<br>
                              X     + X<br>
                               лаб1    лаб2

<a id="p100218"></a>Значения R приведены в таблице 4.

<a id="p100219"></a>Таблица 4

<a id="p100220"></a>**ПРЕДЕЛЫ ПОВТОРЯЕМОСТИ И ВОСПРОИЗВОДИМОСТИ**<br>
**РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ**

</div>



| <a id="p100221"></a>Диапазон измерений, мг/куб. дм | <a id="p100222"></a>Предел повторяемости (для двух результатов измерений при P = 0,95), r, % | <a id="p100223"></a>Предел воспроизводимости (для двух результатов измерений при P = 0,95), R, % |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100224"></a>Глифосат (раундап) от 0,01 до 0,1 вкл. | <a id="p100225"></a>39 | <a id="p100226"></a>56 |
| <a id="p100227"></a>Аминометилфосфоновая кислота от 0,01 до 0,1 вкл. | <a id="p100228"></a>50 | <a id="p100229"></a>63 |



### 13. <a id="p100230"></a>КОНТРОЛЬ ТОЧНОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ



#### <a id="p100231"></a>13.1 Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории предусматривает:

<a id="p100232"></a>Контроль стабильности результатов измерений путем контроля стабильности среднеквадратического отклонения повторяемости, среднеквадратического отклонения промежуточной прецизионности и погрешности в соответствии с рекомендациями ГОСТ Р ИСО 5725, часть 6 (образец для контроля, приготовленный с использованием ГСО или вещества гарантированной чистоты и дистиллированной воды).

<div align="center">

<a id="p100233"></a>Периодичность контроля регламентируют во внутренних документах лаборатории.

</div>

<a id="p100234"></a>Оперативный контроль процедуры измерения путем оценки погрешности (при необходимости), например, с использованием образцов для контроля (см. п. 13.2).

#### <a id="p100235"></a>13.2 Оперативный контроль процедуры измерений с применением образцов для контроля

<a id="p100236"></a>В качестве образцов для контроля используют водные растворы, приготовленные с использованием ГСО или вещества гарантированной чистоты.
<a id="p100237"></a>Оперативный контроль процедуры измерений проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры Кк с нормативом контроля К.

<div align="center">

<a id="p100238"></a>Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:

</div>


<a id="p100239"></a>Кк = |X - C|,

<a id="p100240"></a>X - результат анализа, (мг/куб. дм);
<a id="p100241"></a>C - аттестованное значение определяемого компонента в образце для контроля (мг/куб. дм).

<div align="center">

<a id="p100242"></a>Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

</div>


<a id="p100243"></a> $K = \Delta_{\text{л}},$ 

<a id="p100244"></a>где $\Delta_{\text{л}}$ - характеристика погрешности результатов анализа, установленная в лаборатории при реализации методики.
<a id="p100245"></a>Примечание: На первом этапе проведения контроля после внедрения методики допускается считать $\Delta_{\text{л}} = 0,84\Delta$ , где $\Delta$ - приписанная характеристика погрешности методики, которую рассчитывают по формуле:

<a id="p100246"></a> $\Delta = 0,01 \times C \times \delta.$ 

<a id="p100247"></a>Значения $\delta$ приведены в [таблице 1](#p100012).

<div align="right">

<a id="p100248"></a>Качество контрольной процедуры признают удовлетворительным при выполнении условия:

</div>


<div align="center">

<a id="p100249"></a>Кк <= К.

</div>


<a id="p100250"></a>При невыполнении условия контроль повторяют. При повторном невыполнении условия выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам.





<a id="p100251"></a>Приложение 1

<a id="p100252"></a>**БЛОК-СХЕМА ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА**


<table>
<colgroup><col width="49%"><col width="51%"></colgroup>
<tr><td colspan="2">Отбор 3 куб. см пробы воды</td></tr>
<tr><td></td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Добавление 60 куб. мм раствора щавелевой кислоты. Выдержка 1 час</td></tr>
<tr><td></td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Добавление 40 куб. мм раствора KOH (до pH 6 - 7). Выдержка 3 мин.</td></tr>
<tr><td></td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Добавление 1 куб. см боратного буфера (до pH 9). Выдержка 15 мин.</td></tr>
<tr><td></td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Добавление 3 куб. см диэтилового эфира. Встряхивание 3 мин. Выдержка 15 мин.</td></tr>
<tr><td></td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Отбор 1,5 куб. см водной фазы и перемещение в другую пробирку</td></tr>
<tr><td></td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Добавление 250 куб. мм ацетонитрила и 250 куб. мм раствора дериватизирующего агента. Выдержка 1 час</td></tr>
<tr><td></td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Добавление 2 куб. см диэтилового эфира. Встряхивание 3 мин. Выдержка 1 час</td></tr>
<tr><td></td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Отбор 0,5 - 1 куб. см водной фазы и помещение в герметично закрывающийся флакон</td></tr>
<tr><td></td><td></td></tr>
<tr><td colspan="2">Хроматографический анализ</td></tr>
</table>






<a id="p100254"></a>Приложение 2

<div align="center">

<a id="p100255"></a>**ПРИМЕР**<br>
**ТИПИЧНОЙ ХРОМАТОГРАММЫ ПРОДУКТОВ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ**<br>
**ГЛИФОСАТА И АМФК С 9-ФЛУОРЕНИЛМЕТИЛХЛОРОФОРМИАТОМ <*>**

</div>



<a id="p100256"></a>

---

<a id="p100257"></a><*> Массовая концентрация глифосата и АМФК составляла 0,040 мг/куб. дм. Раствор приготовлен на деионизированной воде.

<div align="center">

<a id="p100258"></a> ![13. Контроль точности результатов измерений](https://i.bukva.ai/LS3EZpHr/img_0.png) 

</div>




<a id="p100259"></a>

---