--- title: "\"Методика определения токсического действия вытяжек из материалов и изделий на половых клетках крупного рогатого скота\"" issuer: "Министерство здравоохранения СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/metodika-opredeleniya-toksicheskogo-deystviya-minzdrav-sssr-ministerstvo" --- ## "Методика определения токсического действия вытяжек из материалов и изделий на половых клетках крупного рогатого скота" # "Методика определения токсического действия вытяжек из материалов и изделий на половых клетках крупного рогатого скота" (утв. Минздравом СССР 27.11.1985)
Утверждена
Начальником Управления
по внедрению новых
лекарственных средств
и медицинской техники
**Э.А.БАБАЯНОМ**
27 ноября 1985 года **МЕТОДИКА** **ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ВЫТЯЖЕК ИЗ МАТЕРИАЛОВ**
**И ИЗДЕЛИЙ НА ПОЛОВЫХ КЛЕТКАХ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА**
В связи со все увеличивающимся объемом разработок новых материалов и изделий особое значение приобретает разработка экспресс-методов на биологических тест-объектах и тест-системах. Эти методы можно применять в следующих случаях: а) при отборе оптимальных лабораторных образцов материалов и изделий на первом этапе их разработки; б) при оценке различных технологий переработки материалов в изделие; в) при выборе оптимального способа стерилизации изделия; г) при незначительном изменении рецептуры материала; д) при изменении сферы применения хорошо изученного материала. ## 1. ПРИНЦИП МЕТОДИКИ Визуально под микроскопом наблюдают двигательную активность сперматозоидов быка, подвергавшихся воздействию водных экстрактов из полимерных материалов, до полного прекращения прямолинейно-поступательного движения. ## 2. ТЕСТ-ОБЪЕКТ В качестве биологического тест-объекта экспресс-метода используется замороженная в парах жидкого азота гранулированная сперма быка. Сперму замораживают в виде гранул весом 0,1 - 0,2 г. При низкотемпературной консервации обменные процессы в сперме полностью приостанавливаются. Замороженную сперму можно получать на станциях искусственного осеменения или в Республиканском банке семени Госагропрома СССР. ## 3. ЭТАПЫ ВЫПОЛНЕНИЯ ### 3.1. Приготовление опытной и контрольной проб Для определения степени токсичности вытяжку необходимо сравнивать с контрольным раствором. Контрольной пробой служит глюкозо-цитратная среда (состав среды: глюкоза - 4 г, цитрат натрия - 0,58 г, вода дистиллированная до 100 мл). Опытным образцом является водный экстракт из полимерного материала или изделие, приготовленное в соответствии с научно-методическими документами для данного вида изделий. Изотонию достигают путем добавления сухих реактивов глюкозы (4 г) и цитрата натрия (0,58 г) на 100 мл вытяжки. ### 3.2. Приготовление пробы спермы Перед оттаиванием замороженной спермы отмеривают пипеткой в пробирку 0,5 мл контрольной пробы. Четыре пробирки с глюкозо-цитратной средой ставят в водяную баню при температуре +40 °C. Охлажденным до температуры жидкого азота длинным анатомическим пинцетом извлекают из сосуда Дьюара гранулу спермы и быстро опускают в нагретый раствор. В одной пробирке оттаивают только одну гранулу спермы. Сразу после оттаивания содержимое пробирок сливают в одну колбочку и тщательно перемешивают (маточный раствор). ### 3.3. Ход определения Из маточного раствора оттаянной разбавленной спермы добавляют 0,3 мл суспензии сперматозоидов в 1 мл опытного образца. Аналогично поступают и с контрольной пробой. Конечная концентрация сперматозоидов в образцах - 6 - 7 млн/мл. Все пробирки с опытными и контрольными растворами должны быть помещены в водяную баню при температуре + 40 °C в течение всего эксперимента. ### 3.4. Оценка результатов Главным критерием оценки функционального состояния сперматозоидов принимается длительность их движения. Оценка подвижности производится микроскопированием капли спермы из опытных и контрольных проб каждые 10 - 15 минут. Предметный столик микроскопа должен быть постоянно нагрет до температуры +40 °C. Время подвижности сперматозоидов определяется как среднее между двумя последними измерениями, из которых первое определение регистрирует наличие хотя бы одной - двух поступательно-подвижных клеток, а второе - полное прекращение поступательного движения. Степень токсичности испытуемого раствора определяется отношением величин времени подвижности сперматозоидов в опыте и контроле: опыт Т = ------ x 100, контр. где:
Т - степень токсичности;
опыт - время подвижности сперматозоидов в испытуемом растворе;
контр. - время подвижности сперматозоидов в контрольном растворе.
Результаты опытов обрабатываются статистическим методом парных сравнений по Стьюденту.
---