---
title: "\"Методика определения биосовместимости полимерных материалов и изделий для эндопротезирования по их влиянию на лимфоидную ткань\""
issuer: "Министерство здравоохранения СССР"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/metodika-opredeleniya-biosovmestimosti"
---

## "Методика определения биосовместимости полимерных материалов и изделий для эндопротезирования по их влиянию на лимфоидную ткань"

# "Методика определения биосовместимости полимерных материалов и изделий для эндопротезирования по их влиянию на лимфоидную ткань"

(утв. Минздравом СССР 27.11.1985)


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждена<br>
Начальником Управления<br>
по внедрению новых<br>
лекарственных средств<br>
и медицинской техники<br>
**Э.А.БАБАЯНОМ**

</div>

<div align="center">

27 ноября 1985 года

</div>


<a id="p100002"></a>**МЕТОДИКА**
**ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИОСОВМЕСТИМОСТИ ПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ**
**И ИЗДЕЛИЙ ДЛЯ ЭНДОПРОТЕЗИРОВАНИЯ ПО ИХ ВЛИЯНИЮ**
**НА ЛИМФОИДНУЮ ТКАНЬ**

<a id="p100003"></a>В связи со все увеличивающимся объемом разработок новых материалов и изделий особое значение приобретает разработка экспресс-методов на биологических тест-объектах и тест-системах. Эти методы можно применять в следующих случаях: а) при отборе оптимальных лабораторных образцов материалов и изделий на первом этапе их разработки; б) при оценке различных технологий переработки материалов в изделие; в) при выборе оптимального способа стерилизации изделия; г) при незначительном изменении рецептуры материала; д) при изменении сферы применения хорошо изученного материала.


## 1. <a id="p100004"></a>ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ


<a id="p100005"></a>При непосредственном введении материалов во внутреннюю среду организма способность их вызывать состояние сенсибилизации иммунокомпетентных систем во многом определяет степень совместимости материала с организмом (биосовместимость).
<a id="p100006"></a>Современная неинфекционная иммунология располагает методами, позволяющими оценить степень биосовместимости вживляемых материалов по характеру их влияния на органы иммунитета, представляемые в организме лимфоидной тканью.
<a id="p100007"></a>Настоящая Методика предполагает комплекс методов оценки состояния лимфоидной ткани при имплантации синтетических материалов. Эти методы апробированы и адаптированы к задачам токсикологической оценки полимеров медицинского назначения.
<a id="p100008"></a>Комплекс предлагаемых методов предназначается для использования в качестве экспресс-метода оценки биосовместимости при отборе перспективных для медицины полимерных материалов, а также в качестве этапа токсикологического изучения при гигиенической оценке материалов и изделий, длительно контактирующих с внутренними средами организма.


## 2. <a id="p100009"></a>ПЕРЕЧЕНЬ МАТЕРИАЛОВ И ИЗДЕЛИЙ, ПОДЛЕЖАЩИХ ОЦЕНКЕ НА БИОСОВМЕСТИМОСТЬ


<a id="p100010"></a>2.1. Материалы для пластики тканей, изготовления эндопротезов или частей и деталей к ним.

#### <a id="p100011"></a>2.2 Клеи медицинского назначения.


#### <a id="p100012"></a>2.3 Шовные и перевязочные материалы.


#### <a id="p100013"></a>2.4 Материалы для микрокапсулирования лекарственных средств.


#### <a id="p100014"></a>2.5 Крове- и плазмозаменители.



## 3. <a id="p100015"></a>ПОДГОТОВКА МАТЕРИАЛОВ К ИССЛЕДОВАНИЮ


<a id="p100016"></a>3.1. Твердые материалы должны иметь форму, удобную для имплантации. Предпочтительна форма в виде бруска, имеющего размеры 6 x 4 x 2 мм (грани бруска и углы не должны быть острыми).
<a id="p100017"></a>3.2. Жидкие, порошкообразные и вспенивающиеся материалы готовятся для имплантации в виде порций по 0,5 куб. см (0,5 мл).

#### <a id="p100018"></a>3.3 Тканые и пленочные материалы должны иметь размеры 10 x 10 кв. мм.

<a id="p100019"></a>3.4. Все материалы, подлежащие оценке на биосовместимость, должны быть стерильны. Способ стерилизации должен соответствовать [ОСТ 42-21-2-85](https://bukva.ai/docs/770) "Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения", отобранному для данного вида изделий.


## 4. <a id="p100020"></a>УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА



#### <a id="p100021"></a>4.1 Вид животных: белые крысы - самцы линии Вистор или беспородные.

<a id="p100022"></a>4.2. Количество групп животных в эксперименте должно быть не менее четырех: а) подопытная; б) контроль интактный; в) контроль ложнооперированный; г) контрольная имплантация традиционного биосовместимого материала.
<a id="p100023"></a>4.2.1. В качестве традиционного биосовместимого материала при оценке нерассасывающихся имплантатов следует применять тефлон, для рассасывающихся - кетгут, для кровезаменителей - поливинилпирролидон мол. массы 12600, для порошкообразных - порошок тефлона или кетгута, для сплавов - сплав КХС.

#### <a id="p100024"></a>4.3 Количество животных в группе - не менее 6 голов.


#### <a id="p100025"></a>4.4 Продолжительность эксперимента - 1 месяц.

<a id="p100026"></a>4.5. Сроки взятия лимфоидных органов - через 2 недели и через 4 недели после имплантации.
<a id="p100027"></a>4.6. Техника операции: под нембуталовым наркозом (доза 40 мг/кг) на наружной поверхности верхней трети бедра крысы делается разрез кожи длиной около 1 см. Анатомическим глазным пинцетом расчленяется бедренная мышца (вдоль волокон), в которой при помощи того же пинцета формируется карман. Изучаемый материал помещается в этот карман. На мышцу накладывается один шов, на кожу два шва. Применяется хирургический шелк высоких номеров.
<a id="p100028"></a>Одной из контрольных групп животных имплантируется биосовместимый материал, другой - производится ложная операция (те же манипуляции без имплантации материала).
<a id="p100029"></a>4.6.1. В случае изучения жидких или вспенивающихся материалов имплантация производится инъекционным способом.


## 5. <a id="p100030"></a>МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ЛИМФОИДНОЙ ТКАНИ



#### <a id="p100031"></a>5.1 Патоморфологический анализ отпечатков лимфатических узлов.


##### <a id="p100032"></a>5.1.1 Взятие материала и приготовление отпечатков.

<a id="p100033"></a>Животные забиваются методом декапитации. При вскрытии извлекается правый (регионарный к месту имплантации) и левый (отдаленный) лимфоузлы, освобождаются от жировой ткани и острым лезвием перерезаются поперек. При помощи пинцета половинка узла прикладывается несколько раз к обезжиренному предметному стеклу поверхностью среза.
<a id="p100034"></a>Отпечатки высушиваются на воздухе при комнатной температуре, затем фиксируются метанолом в течение двух минут (или спиртом-ректификатом в течение 15 мин.) и промываются проточной водой. Окраска отпечатков производится стандартными растворами красителей Май-Грюнвальд (в течение 4 мин.) и азур-эозиновой смесью (10 мл красителя на 100 мл дистиллированной воды); окрашивать в течение 45 - 60 мин.
<a id="p100035"></a>5.1.2. Проведение анализа отпечатков и техника оформления получаемых результатов.
<a id="p100036"></a>Отпечатки изучаются под микроскопом с применением иммерсии. В отпечатках производится подсчет иммунокомпетентных клеток: малых лимфоцитов, бластов, зрелых плазматических клеток и ретикулярных клеток, а также количество делящихся клеток (митозов).
<a id="p100037"></a>Подсчет клеток производится в 10 полях зрения, и в дальнейшем принимаются во внимание средние (М) из 10 полей зрения показатели для каждого из видов клеток. Поля зрения берутся в разных частях отпечатков, преимущественно в парокортикальных зонах и у основания мозговых тяжей.
<a id="p100038"></a>Запись протокола подсчета клеток производится по нижеприведенному образцу (табл. 1).

<a id="p100039"></a>Таблица 1

<a id="p100040"></a>**ОБРАЗЕЦ ЗАПИСИ ПРОТОКОЛА ПОДСЧЕТА ВИДОВ КЛЕТОК**


<table>
<colgroup><col width="28%"><col width="6%"><col width="6%"><col width="6%"><col width="6%"><col width="6%"><col width="6%"><col width="6%"><col width="6%"><col width="6%"><col width="6%"><col width="9%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2">Виды клеток</td><td colspan="10">Поля зрения</td><td rowspan="2">М</td></tr>
<tr><td>1</td><td>2</td><td>3</td><td>4</td><td>5</td><td>6</td><td>7</td><td>8</td><td>9</td><td>10</td></tr>
<tr><td>Малые лимфоциты</td><td>25</td><td>20</td><td>36</td><td>21</td><td>30</td><td>20</td><td>18</td><td>26</td><td>27</td><td>22</td><td>24,5</td></tr>
<tr><td>Бласты</td><td>8</td><td>7</td><td>10</td><td>4</td><td>5</td><td>3</td><td>6</td><td>7</td><td>12</td><td>4</td><td>6,6</td></tr>
<tr><td>Плазматические клетки</td><td>-</td><td>-</td><td>1</td><td>2</td><td>-</td><td>-</td><td>1</td><td>-</td><td>-</td><td>1</td><td>0,5</td></tr>
<tr><td>Ретикулярные клетки</td><td>-</td><td>1</td><td>-</td><td>1</td><td>-</td><td>2</td><td>-</td><td>1</td><td>-</td><td>-</td><td>0,5</td></tr>
<tr><td>Митозы</td><td>-</td><td>-</td><td>-</td><td>-</td><td>-</td><td>-</td><td>1</td><td>-</td><td>-</td><td>1</td><td>0,2</td></tr>
</table>



##### <a id="p100048"></a>5.2.1 Взятие материала и приготовление мазков.

<a id="p100049"></a>Взятие материала. Забой животных и взятие материала производится так же, как в [п. 5.1.1](#p100032). Можно использовать лимфоузлы, из которых готовились отпечатки.
<a id="p100050"></a>Приготовление мазков. На предметное стекло в каплю физиологического раствора помещается лимфоузел. Затем при помощи двух инъекционных игл ткань органа размельчается в этой капле до получения гомогенной взвеси. Из капли обычным образом готовится мазок, который высушивается на воздухе при комнатной температуре.
<a id="p100051"></a>Фиксация мазков. Приготовление фиксатора: готовится 60% раствор ацетона (60 мл ацетона и 40 мл дистиллированной воды), куда добавляется трилон (250 мг на 100 мл 60% раствора ацетона); pH раствора 4,8 - 5,0 (доводить pH 0,1 раствором HCl).
<a id="p100052"></a>Высушенные мазки фиксируются в ацетоновом фиксаторе в течение 30 с, затем промываются в проточной воде и высушиваются на воздухе.
<a id="p100053"></a>5.2.2. Выявление сукцинатдегидрогеназы и бета-глицерофосфат-дегидрогеназы.
<a id="p100054"></a>Приготовление фосфатного буфера:
<a id="p100055"></a>а) приготовить раствор калия фосфорнокислого однозамещенного с мол. весом 136,09 (3,78 г растворяют в 100 мл воды);
<a id="p100056"></a>б) приготовить раствор калия фосфорнокислого двузамещенного (4,56 г растворить в 100 мл воды);
<a id="p100057"></a>в) оба раствора слить для получения pH = 7,0 - 7,4 (30 мл раствора калия однозамещенного и 70 мл раствора калия двузамещенного).
<a id="p100058"></a>Буфер хранить в холодильнике.
<a id="p100059"></a>Приготовление инкубационной среды для выявления сукцинатдегидрогеназы (СДГ):
<a id="p100060"></a>а) 10 мг трилона Б; б) 540 мг сукцината натрия; в) 10 мг паранитротетразолия фиолетового; г) 40 мл фосфатного буфера.
<a id="p100061"></a>Приготовление инкубационной среды для выявления бета-глицерофосфатдегидрогеназы (бета-ГДГ):
<a id="p100062"></a>а) 10 мг трилона Б; б) 650 мг бета-глицерофосфата; в) 10 мг паранитротетразолия фиолетового; г) 10 мг фосфатного буфера.
<a id="p100063"></a>Примечание: п-нитротетразолий лучше добавить после того, как pH среды будет доведен до рабочего.

<a id="p100064"></a>Приготовление красителя метилового зеленого: 2,7 г уксуснокислого натрия растворить в 100 мл дистиллированной воды, довести ледяной кислотой до pH 4,8 - 5,0 (1,5 мл) 500 мг метилового зеленого растворить в 100 мл шуфера из уксуснокислого натрия. Смесь очищают при помощи делительной воронки хлороформом до тех пор, пока хлороформ не станет чистым.
<a id="p100065"></a>Выявление ферментов и окраска мазков. Зафиксированные мазки помещают в одну из инкубационных сред (в зависимости от того, какая дегидрогеназа выявляется) и нагревают до 38 - 39 °C, после чего помещают в термостат (37 °C) на 60 минут. После инкубации мазки промывают в проточной воде и окрашивают метиловым зеленым в течение 60 минут. Затем следует отмывка препаратов.
<a id="p100066"></a>5.2.3. Проведение анализа мазков и техника оформления полученных результатов.
<a id="p100067"></a>Подсчет гранул ферментов в клетках производится под микроскопом с применением иммерсии. В окрашенном препарате лимфоциты и прочие клетки лимфоидного ряда имеют бледно-зеленую окраску. Гранулы фермента располагаются в ядре и цитоплазме, имеют округлую сферическую форму и темно-фиолетовый (почти черный) цвет. Техника анализа мазка предполагает подсчет количества гранул в 50 клетках, последние считают в разных полях зрения, в разных участках мазка.
<a id="p100068"></a>Активность фермента в клетке выражается средним количеством гранул в одной клетке (общее количество гранул в 50 клетках, деленное на 50). Запись протокола подсчета гранул фермента производится по нижеприведенному образцу ("0" обозначает отсутствие фермента в клетке).

<a id="p100069"></a>Таблица 2

<a id="p100070"></a>**ОБРАЗЕЦ ЗАПИСИ ПРОТОКОЛА ПОДСЧЕТА ГРАНУЛ ФЕРМЕНТА**


```text
┌──────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┐
│  1       5       6       0       0       10      6       0       1       4   │
├──────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┤
│  0       3       0       0       8       12      15      4       6       0   │
├──────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┤
│  4       3       2       0       0       8       9       0       6       0   │
├──────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┤
│  0       5       5       4       0       0       0       8       10      11  │
├──────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┤
│  4       1       1       2       4       6       0       5       10      0   │
└──────────────────────────────────────────────────────────────────────────────┘
```


<a id="p100072"></a>Коэффициент активности фермента в этом случае равен 158 / 50 = 3,74.
<a id="p100073"></a>5.3. Гистохимическое выявление рибонуклеиновой кислоты в ткани селезенки по методу Браше.
<a id="p100074"></a>5.4. Гистохимическое выявление щелочной фосфатазы в лимфоузлах по методу Гомори.

#### <a id="p100075"></a>5.5 Определение весовых коэффициентов тимуса и селезенки.


#### <a id="p100076"></a>5.6 Оценка результатов экспериментов.

<div align="center">

<a id="p100077"></a>Для оценки степени совместимости материала главное значение имеют данные цитоморфологического анализа лимфоузлов. Эти данные должны получить подтверждение в результате гистохимического исследования селезенки и анализа весовых коэффициентов лимфоидных органов.<br>
<a id="p100078"></a>Цитохимическое определение сукцинатдегидрогеназы и бета-гли-церофосфатдегидрогеназы проводится факультативно, но обязательно в совокупности с гистохимическим определением щелочной фосфатазы в лимфоузлах.<br>
<a id="p100079"></a>Материал следует считать биологически несовместимым, если через 1 месяц после имплантации материалов не наблюдается нормализации показателей или выраженной тенденции к таковой и отличия их от контроля существенны (статистически достоверны).<br>
<a id="p100080"></a>В случае если показатели состояния лимфоидной ткани подопытных животных отличаются от контроля менее существенно (носят характер тенденции к изменению Р, равном или меньше 0,1), вопрос о биологической совместимости исследуемого материала должен решаться с учетом всей совокупности данных токсикологического эксперимента.

</div>


##### <a id="p100081"></a>5.6.1 Статистическая обработка данных.

<div align="center">

<a id="p100082"></a>Для цифровых показателей, получаемых методами, указанными в [п. п. 5.1](#p100031); [5.2.3](#p100066); [5.5](#p100075), - статистическая обработка обязательна. Она проводится с использованием критерия "t" по Стьюденту. Для результатов цитохимических исследований [(п. 5.2.3)](#p100066) предпочтительнее метод Уилкоксона - Манна - Уитна.<br>
<a id="p100083"></a>Результаты, полученные в опытной группе животных, сравниваются с контролем, которому вживлялся "инертный материал". Если этот контроль не имеет достоверных отличий от ложнооперированного контроля, опытная группа может быть сравнена непосредственно с интактным контролем.

</div>




<a id="p100084"></a>

---