---
title: "\"МУК 4.1.3878-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации гексахлорбензола в крови методом капиллярной газовой хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3878-23"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/metodika-muk-4-1-3878-23"
---

## "МУК 4.1.3878-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации гексахлорбензола в крови методом капиллярной газовой хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.3878-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации гексахлорбензола в крови методом капиллярной газовой хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 26.06.2023)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100002) в действие с 26.09.2023.


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
26 июня 2023 года

<a id="p100002"></a>Дата введения
26 сентября 2023 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**МЕТОДИКА**
**ИЗМЕРЕНИЙ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ ГЕКСАХЛОРБЕНЗОЛА**
**В КРОВИ МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3878-23**

1. <a id="p100006"></a>Разработаны Федеральным бюджетным учреждением науки "Федеральный научный центр медико-профилактических технологий управления рисками здоровью населения" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (Уланова Т.С., Зайцева Н.В., Нурисламова Т.В., Попова Н.А., Мальцева О.А., Терентьев Г.И.).
2. <a id="p100007"></a>Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой "26" июня 2023 г.
3. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


## <a id="p100009"></a>I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ


<a id="p100010"></a>1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) устанавливают порядок применения метода капиллярной газовой хроматографии для измерений массовых концентраций гексахлорбензола в пробах крови в диапазоне концентраций от 0,0001 до 0,01 мг/дм3.

#### <a id="p100011"></a>1.3 МУК носит рекомендательный характер.



## <a id="p100012"></a>II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА


<a id="p100013"></a>2.1. Гексахлорбензол - бесцветные кристаллы, нерастворимые в воде, малорастворимые в этаноле и бензоле. Гексахлорбензол находит применение в качестве инсектицида и фунгицида. Его используют, в смеси с другими препаратами, в качестве протравителя семян для борьбы с заболеваниями пшеницы, ржи, гречихи, сои и других зерновых культур. Гексахлорбензол не горит, не взрывается.

| <a id="p100014"></a>CAS | <a id="p100015"></a>118-74-1 |
| --- | --- |
| <a id="p100016"></a>Структурная формула | <a id="p100017"></a>C<sub>6</sub>Cl<sub>6</sub> |
| <a id="p100018"></a>Молекулярная масса | <a id="p100019"></a>284,8 |
| <a id="p100020"></a>Tплавл, °C | <a id="p100021"></a>231,0 |
| <a id="p100022"></a>Tкип, °C | <a id="p100023"></a>322,0 |
| <a id="p100024"></a>Плотность, г/см3 | <a id="p100025"></a>2,044 |
| <a id="p100026"></a>Растворимость в воде, г/100 см3 | <a id="p100027"></a>4,8 |
| <a id="p100028"></a>Давление насыщенных паров |  |
| <a id="p100029"></a>при T = 20 °C, Па | <a id="p100030"></a>101,37 |
| <a id="p100031"></a>Класс опасности | <a id="p100032"></a>1 |

<a id="p100033"></a>2.2. Гексахлорбензол - политропный яд. Наиболее ранние изменения наблюдаются со стороны печени (увеличение печени, объема гладкого эндоплазматического ретикулума и повышение активности микросомальных ферментов печени), центральной нервной и сердечно-сосудистой систем. Нарушает порфириновый обмен, обладает кумулятивным эффектом.


## <a id="p100034"></a>III. ПОКАЗАТЕЛИ ТОЧНОСТИ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100035"></a>3.1. При соблюдении всех условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значения погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышают значений, приведенных в [таблице 1](#p100037).

<a id="p100036"></a>Таблица 1

<a id="p100037"></a>Диапазон измерений массовой концентрации гексахлорбензола
в крови, значения показателей повторяемости,
воспроизводимости, правильности и точности измерений


| <a id="p100038"></a>Диапазон измерений массовой концентрации гексахлорбензола в крови, мг/дм3 | <a id="p100039"></a>Показатель точности (границы относительной погрешности при вероятности P = 0,95), $\pm \delta$ , % | <a id="p100040"></a>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), $\sigma_{r}$ , % | <a id="p100041"></a>Показатель воспроизводимости, (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), $\sigma_{R}$ , % | <a id="p100042"></a>Показатель правильности (границы относительной систематической погрешности при доверительной вероятности 0,95), $\pm \delta_{C}$ , % |
| --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100043"></a>От 0,0001 до 0,002 включ. | <a id="p100044"></a>19 | <a id="p100045"></a>4,3 | <a id="p100046"></a>9,3 | <a id="p100047"></a>7 |
| <a id="p100048"></a>Св. 0,002 до 0,01 включ. | <a id="p100049"></a>16 | <a id="p100050"></a>3,5 | <a id="p100051"></a>4,7 | <a id="p100052"></a>13 |


<a id="p100053"></a>Значение показателя точности используют при:
- <a id="p100054"></a>оформлении результатов измерений, выдаваемых лабораторией;
- <a id="p100055"></a>оценке деятельности лабораторий на качество проведения измерений;
- <a id="p100056"></a>оценке возможности использования результатов измерений при реализации методики измерений в конкретной лаборатории.


## <a id="p100057"></a>IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100058"></a>4.1. Измерения выполняют газохроматографическим методом на капиллярной колонке с использованием детектора электронного захвата и применением жидкостной экстракции.
<a id="p100059"></a>Методика количественного определения гексахлорбензола в биосреде (кровь) основана на экстракционном концентрировании из крови, объемом 5 см3, органическим растворителем (толуол), объемом 3 см3, (время контакта фаз 5 мин), центрифугировании при 7000 об/мин в течение 15 мин (pH = 6 - 7) для денатурации белка крови и последующем определении на газовом хроматографе с детектором электронного захвата.
<a id="p100060"></a>Определению не мешают хлороформ, тетрахлорметан и другие хлорбензолы в количествах, не превышающих установленную величину.
<a id="p100061"></a>Длительность анализа, включая экстракцию и денатурацию биопробы - 1 час.


## <a id="p100062"></a>V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА, РЕАКТИВЫ И МАТЕРИАЛЫ


<a id="p100063"></a>5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в [таблице 2](#p100065).

<a id="p100064"></a>Таблица 2

<a id="p100065"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства,
материалы и реактивы


<table>
<colgroup><col width="48%"><col width="52%"></colgroup>
<tr><td colspan="2"><a id="p100066"></a>Средства измерений</td></tr>
<tr><td><a id="p100067"></a>Хроматограф газовый с детектором электронного захвата и капиллярной колонкой "Хроматэк-Кристалл 5000М"</td><td><a id="p100068"></a><a id="p100069"></a><a id="p100070"></a>Предел детектирования по линдану не более 3 x 10-14 г/с.<br>Среднее значение СКО параметров выходного сигнала для капиллярной колонки:<br>время удерживания - 0,42%; площадь, мВ·с - 0,86%, высота, мВ - 0,43%</td></tr>
<tr><td><a id="p100071"></a><a id="p100072"></a>Микрошприцы серии МШ-<br>Диапазон дозируемого объема (1 - 10) мм3, цена деления 0,2 мм3, предел допускаемой систематической составляющей погрешности не более +/- 5%. 10</td><td><a id="p100073"></a>ТУ 2.833.106</td></tr>
<tr><td><a id="p100074"></a><a id="p100075"></a><a id="p100076"></a><a id="p100077"></a><a id="p100078"></a>Весы неавтоматического действия<br>НПВ: 220 г<br>НмПВ: 0,001 г<br>Класс точности специальный<br>Предел допускаемой погрешности взвешивания при поверке для нагрузки m +/- 0,5 мг</td><td><a id="p100079"></a>A<sub>F225D</sub>RCE</td></tr>
<tr><td><a id="p100080"></a><a id="p100081"></a><a id="p100082"></a><a id="p100083"></a><a id="p100084"></a><a id="p100085"></a>Колбы мерные<br>2-100-2<br>2-1000-2<br>Пределы допускаемой погрешности:<br>$\Delta = \pm 0,2\text{см}^{3}$<br>$\Delta = \pm 0,8\text{см}^{3}$</td><td><a id="p100086"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-1770-74">ГОСТ 1770</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100087"></a><a id="p100088"></a><a id="p100089"></a><a id="p100090"></a><a id="p100091"></a><a id="p100092"></a><a id="p100093"></a><a id="p100094"></a>Пипетки градуированные<br>1-2-1-1<br>1-2-1-2<br>1-2-2-5<br>Пределы допускаемой погрешности:<br>$\Delta = \pm 0,01\text{см}^{3}$<br>$\Delta = \pm 0,02\text{см}^{3}$<br>$\Delta = \pm 0,05\text{см}^{3}$</td><td><a id="p100095"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-29227-91">ГОСТ 29227</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100096"></a><a id="p100097"></a><a id="p100098"></a>Пробирки П-2-15-14/23 ХС<br>Пределы допускаемой погрешности:<br>$\Delta = \pm 5\text{см}^{3}$</td><td><a id="p100099"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-1770-74">ГОСТ 1770-74</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100100"></a>Дозаторы жидкости механические</td><td><a id="p100101"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-28311-2021">ГОСТ 28311</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100102"></a><a id="p100103"></a>Дозаторы механические переменного объема дозирования (1 - 5) см3 с одноразовыми наконечниками.<br>Предел допустимого относительного среднего квадратического отклонения фактического объема дозы 1% при температуре (22 +/- 2) °C</td><td><a id="p100104"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-28311-2021">ГОСТ 28311</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100105"></a><a id="p100106"></a>Дозаторы механические переменного объема дозирования (0,100 - 1,000) см3 с одноразовыми наконечниками.<br>Предел допустимого относительного среднего квадратического отклонения фактического объема дозы (0,8 - 0,3)% при температуре (22 +/- 2) °C</td><td><a id="p100107"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-28311-2021">ГОСТ 28311</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100108"></a><a id="p100109"></a>Дозаторы механические переменного объема дозирования (0,0020 - 0,200) см3 с одноразовыми наконечниками.<br>Предел допустимого относительного среднего квадратического отклонения фактического объема дозы (0,7 - 0,3)% при температуре (22 +/- 2) °C</td><td><a id="p100110"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-28311-2021">ГОСТ 28311</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100111"></a><a id="p100112"></a>Барометр-анероид метеорологический БАММ-1<br>Измерения атмосферного давления в диапазоне от 80 до 106 кПа (от 600 до 800 мм рт. ст.), с ценой деления 0,1 кПа, предел допускаемой основной погрешности (при введении поправок) не более +/- 0,2 кПа (+/- 1,5 мм рт. ст.)</td><td><a id="p100113"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100114"></a><a id="p100115"></a>Термогигрометр <a href="#p100169">&lt;1&gt;</a><br>Измерения: температуры - в диапазоне от 0 до плюс 50 °C, относительной влажности - в диапазоне от 0 до 98%, предел допускаемой абсолютной погрешности измерения: температуры - не более +/- 0,5 °C, относительной влажности - не более +/- 3%</td><td><a id="p100116"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100117"></a>Метеоскоп-М давление воздуха (80 - 110 кПа), влажность воздуха (3 - 97%), температура воздуха (-40 + 85)</td><td><a id="p100118"></a>ТУ 43 1110-003-18446736-11</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100119"></a>Примечание. Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100120"></a>Реактивы</td></tr>
<tr><td><a id="p100121"></a>Вода для лабораторного анализа степень 1</td><td><a id="p100122"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005">ГОСТ Р 52501</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100123"></a>Калий двухромовокислый чистый для анализа</td><td><a id="p100124"></a>ГОСТ 4220</td></tr>
<tr><td><a id="p100125"></a><a id="p100126"></a>Азот газообразный особой чистоты 1 сорт<br>Объемная доля азота, %, не менее 99,999</td><td><a id="p100127"></a>ГОСТ 9293</td></tr>
<tr><td><a id="p100128"></a><a id="p100129"></a>Толуол<br>Массовая доля основного вещества, %, не менее 99,5%</td><td><a id="p100130"></a><a href="https://bukva.ai/docs/gost-5789-78">ГОСТ 5789-78</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100131"></a>Водород технический</td><td><a id="p100132"></a><a href="https://bukva.ai/docs/usloviya-gost-3022-80">ГОСТ 3022</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100133"></a>Кислота серная химически чистая</td><td><a id="p100134"></a><a href="https://bukva.ai/docs/standart-gost-14262-78">ГОСТ 14262</a></td></tr>
<tr><td><a id="p100135"></a>Гелий газообразный, в баллонах</td><td><a id="p100136"></a>ТУ 0271-001-459055715</td></tr>
<tr><td><a id="p100137"></a>Азот газообразный особой чистоты 1 сорт, объемная доля азота, %, не менее 99,999</td><td><a id="p100138"></a>ГОСТ 9293</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100139"></a>Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100140"></a>Вспомогательные устройства и материалы</td></tr>
<tr><td><a id="p100141"></a>Колонка хроматографическая капиллярная из кварцевого стекла с внутренним диаметром 0,32 мм длиной 35 м и толщиной пленки 0,25 мкм с неполярной фазой</td><td><a id="p100142"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100143"></a>Капиллярная колонка режим программирования: от 70 °C - 180 °C - 210 °C - 230 °C</td><td rowspan="3"><a id="p100144"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100145"></a>режим детектора: температура 270 °C</td></tr>
<tr><td><a id="p100146"></a>режим испарителя: температура 270 °C</td></tr>
<tr><td><a id="p100147"></a>Редуктор кислородный</td><td><a id="p100148"></a>ТУ 3645-032-00220531</td></tr>
<tr><td><a id="p100149"></a>Сушильный шкаф</td><td><a id="p100150"></a>ТУ 16-531.743</td></tr>
<tr><td><a id="p100151"></a>Шкаф вытяжной химический</td><td><a id="p100152"></a>ТУ 25-11.1630</td></tr>
<tr><td><a id="p100153"></a>Стакан В-1-2000 ТС</td><td><a id="p100154"></a>ГОСТ 25336</td></tr>
<tr><td><a id="p100155"></a>Центрифуга лабораторная медицинская ОПн-8</td><td><a id="p100156"></a><a id="p100157"></a>Частота вращения ротора центрифуги регулируется ступенчато в диапазоне от 1000 до 8000 min-1;<br>Допускаемое приведенное отклонение частоты вращения не более +/- 10% от максимальной частоты вращения</td></tr>
<tr><td><a id="p100158"></a>Вакуумные пробирки <a href="#p100170">&lt;2&gt;</a> с литий гепарином</td><td><a id="p100159"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100160"></a>Холодильник бытовой для хранения проб, обеспечивающий поддержание температуры в холодильном отделении от +4 до 10 °C, в морозильном отделении минус 18 °C</td><td><a id="p100161"></a>-</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100162"></a>Материалы</td></tr>
<tr><td><a id="p100163"></a>Бумага фильтровальная лабораторная</td><td><a id="p100164"></a>ГОСТ 12026</td></tr>
<tr><td><a id="p100165"></a>Бумага универсальная pH 0 - 12</td><td><a id="p100166"></a>ПНД 50-975-84</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100167"></a>Примечание. Допускается использование других вспомогательных устройств и материалов аналогичного назначения, технические характеристики которых не уступают указанным.</td></tr>
</table>



<a id="p100168"></a>

---

<a id="p100169"></a><1> Например, термогигрометр Testo-625.
<a id="p100170"></a><2> Например, вакуумные пробирки PST Tube.


## <a id="p100171"></a>VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ


<a id="p100172"></a>6.1. При выполнении измерений соблюдают меры противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, имеются средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009 и соблюдаются правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019.
<a id="p100173"></a>6.2. При работе в лаборатории необходимо соблюдать правила техники безопасности [<3>](#p100175).

<a id="p100174"></a>

---

<a id="p100175"></a><3> [ПНД Ф 12.13.1-03](https://bukva.ai/docs/pnd-f-12-13-1-03) "Методические рекомендации. Техника безопасности при работе в аналитических лабораториях (общие положения)".

<a id="p100176"></a>6.3. При работе с химическими реактивами соблюдают требования безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.007 и ГОСТ 12.1.005. Помещение должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией.
<a id="p100177"></a>6.4. При работе с биологическими средами соблюдают санитарно-эпидемиологические правила [<4>](#p100179).

<a id="p100178"></a>

---

<a id="p100179"></a><4> СанПиН 3.3686-21 "Санитарно-эпидемиологические требования по профилактике инфекционных болезней", утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 4 (зарегистрировано Минюстом России 15.02.2021 N 62500).

<a id="p100180"></a>6.5. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать гигиенические нормативы [<5>](#p100182).

<a id="p100181"></a>

---

<a id="p100182"></a><5> СанПиН 1.2.3685-21 "Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания", утвержденные постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 N 2 (зарегистрировано Минюстом России 29.01.2021 N 62296).

<a id="p100183"></a>6.6. При выполнении измерений на жидкостном хроматографе соблюдают меры безопасности, указанные в руководстве по правилам эксплуатации прибора.
<a id="p100184"></a>6.7. Утилизацию растворов после выполнения измерений проводят в соответствии с инструкцией по обращению с химическими отходами, действующей на предприятии.


## <a id="p100185"></a>VII. КВАЛИФИКАЦИЯ ОПЕРАТОРОВ


<a id="p100186"></a>7.1. К выполнению измерений и обработке их результатов допускаются специалисты, имеющие квалификацию не ниже инженера-химика и опыт работы в химической лаборатории, прошедшие обучение и владеющие техникой проведения работ на газовом хроматографе.


## <a id="p100187"></a>VIII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЯ



#### <a id="p100188"></a>8.1 При выполнении измерений в лаборатории соблюдают следующие условия:

- <a id="p100189"></a>температура окружающего воздуха плюс (20 +/- 5) °C;
- <a id="p100190"></a>атмосферное давление от 84,0 до 106,7 кПа (630 - 800 мм рт. ст.);
- <a id="p100191"></a>относительная влажность воздуха от 30% до 80%;
- <a id="p100192"></a>напряжение в сети (220 +/- 10) В;
- <a id="p100193"></a>частота переменного тока (50 +/- 10) Гц.
<a id="p100194"></a>Выполнение измерений на газовом хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


## <a id="p100195"></a>IX. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ



#### <a id="p100196"></a>9.1 Приготовление хромовой смеси.

<a id="p100197"></a>В термостойкий стакан вместимостью 2 дм3 помещают 50 г калия двухромовокислого, осторожно приливают по палочке частями, тщательно перемешивая, 1 дм3 концентрированной серной кислоты.
<a id="p100198"></a>Хромовую смесь хранят в фарфоровых стаканах, снабженных крышками, или в стеклянных эксикаторах. Срок хранения не более 1 месяца.

#### <a id="p100199"></a>9.2 Подготовка посуды.

<a id="p100200"></a>В используемую посуду, уже после того, как она была предварительно обмыта водой, наливают хромовую смесь в таком количестве, чтобы она занимала около 74% емкости посуды и, осторожно поворачивая ее, медленно обмывают внутренние стенки. Затем, медленно поворачивая посуду, хромовую смесь выливают в ту же банку, в которой она хранится. После этого посуде дают постоять 2 - 3 мин и моют ее проточной водой, ополаскивают дистиллированной водой и сушат в сушильном шкафу при температуре плюс 105 °C.

#### <a id="p100201"></a>9.3 Подготовка хроматографической системы.

<a id="p100202"></a>Подготовку хроматографа к работе осуществляют в соответствии с инструкцией по эксплуатации хроматографа.

##### <a id="p100203"></a>9.3.1 Подготовка хроматографической колонки.

<a id="p100204"></a>Хроматографическую колонку перед эксплуатацией устанавливают в хроматограф и, не подключая к детектору, кондиционируют в токе газа-носителя (азота) с расходом 4 см3/мин при температуре 240 °C в течение 2 ч. После охлаждения колонку подключают к детектору и проверяют стабильность нулевой линии при рабочей температуре термостата колонок. При отсутствии мешающих влияний колонка готова к работе.

##### <a id="p100205"></a>9.3.2 Условия хроматографирования.

<a id="p100206"></a>Устанавливают режим работы газового хроматографа в соответствии со следующими условиями: температурный режим термостата колонки: плюс 70 °C подъем со скоростью 25 °C/мин до плюс 180 °C, подъем со скоростью 10 °C/мин до плюс 210 °C, подъем со скоростью 5 °C/мин до плюс 230 °C.
<a id="p100207"></a>Режим испарителя: температура 270 °C.
<a id="p100208"></a>Режим детектора: температура 270 °C.
<a id="p100209"></a>Режим расхода газа-носителя (азота): 20 см3/мин.
<a id="p100210"></a>Время удерживания гексахлорбензола: (9,42 +/- 0,05) мин.
<a id="p100211"></a>Записывают нулевую линию при установленных режимных параметрах. При отсутствии флуктуации приступают к работе.

#### <a id="p100212"></a>9.4 Приготовление растворов.


##### <a id="p100213"></a>9.4.1 Приготовление исходного раствора.

<a id="p100214"></a>В мерную колбу вместимостью 100 см3, заполненную на 70 см3 гексаном, вносят навеску гексахлорбензола массой 10 мг. Доводят объем смеси в колбе до метки гексаном. Полученный раствор имеет массовую концентрацию гексахлорбензола C = 100 мкг/см3. Срок хранения раствора 6 месяцев. Приготовленный раствор хранят в колбе, в которой готовили раствор.

##### <a id="p100215"></a>9.4.2 Приготовление рабочего раствора.

<a id="p100216"></a>В мерную пробирку объемом 10 см3, дозатором добавляют воду для лабораторного анализа в объеме 4 см3, вводят микрошприцем 2 мм3 исходного раствора гексахлорбензола концентрацией C = 100 мкг/см3. Концентрация рабочего раствора 0,05 мкг/см3. Срок хранения раствора 12 часов. Хранят в пробирке, в которой готовили раствор.

##### <a id="p100217"></a>9.4.3 Приготовление градуировочных растворов.

<a id="p100218"></a>Градуировочные растворы гексахлорбензола готовят в мерных пробирках вместимостью 10 см3. Для этого в каждую пробирку дозатором вносят воду для лабораторного анализа объемом 5 см3 и рабочий раствор в соответствии с [таблицей 3](#p100220) и тщательно перемешивают.

<a id="p100219"></a>Таблица 3

<a id="p100220"></a>Растворы для установления градуировочной характеристики


| <a id="p100221"></a>Градуировочный раствор | <a id="p100222"></a>1 | <a id="p100223"></a>2 | <a id="p100224"></a>3 | <a id="p100225"></a>4 | <a id="p100226"></a>5 |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100227"></a>Объем рабочего раствора, мм3 | <a id="p100228"></a>15 | <a id="p100229"></a>30 | <a id="p100230"></a>125 | <a id="p100231"></a>250 | <a id="p100232"></a>500 |
| <a id="p100233"></a>Объем воды для лабораторного анализа, см3 | <a id="p100234"></a>5 | <a id="p100235"></a>5 | <a id="p100236"></a>4,9 | <a id="p100237"></a>4,8 | <a id="p100238"></a>4,5 |
| <a id="p100239"></a>Массовая концентрация гексахлорбензола, мг/дм3 | <a id="p100240"></a>0,00015 | <a id="p100241"></a>0,0003 | <a id="p100242"></a>0,00125 | <a id="p100243"></a>0,00250 | <a id="p100244"></a>0,005 |


<a id="p100245"></a>Градуировочные растворы готовят в день использования, хранению не подлежат.

#### <a id="p100246"></a>9.5 Построение градуировочной характеристики.

<a id="p100247"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади хроматографического пика (Гц·с) от массовой концентрации гексахлорбензола (мг/дм3) в стандартном растворе, устанавливают по 5 сериям измерений по 5 концентрациям вещества в каждой серии в соответствии с [таблицей 3](#p100220).
<a id="p100248"></a>В приготовленный градуировочный раствор объемом 5 см3 дозатором добавляют органический растворитель (толуол) объемом 3 см3 и выполняют жидкостную экстракцию (время контакта фаз 5 мин). После экстракции раствор центрифугируют при 7000 об/мин в течение 15 мин. Затем 1 мм3 верхнего слоя органического растворителя (толуол) вкалывают в хроматографическую колонку через испаритель. Процедуру повторяют аналогично для каждого градуировочного раствора. На полученной хроматограмме определяют площади пиков компонента и по средним результатам из 6 серий строят градуировочную характеристику.
<a id="p100249"></a>Процедуру градуировки проводят 1 раз в 3 месяца, а также при внедрении методики в практику лаборатории, после ремонта хроматографа, а также при отрицательных результатах контроля стабильности градуировочной характеристики.

#### <a id="p100250"></a>9.6 Контроль стабильности градуировочной характеристики.

<a id="p100251"></a>Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят 1 раз в квартал с анализируемой серией измерений. Образцами для контроля стабильности являются градуировочные растворы, выбранные таким образом, чтобы массовая концентрация гексахлорбензола соответствовала нижней, верхней границам и середине диапазона построения градуировочной характеристики. Градуировка признается стабильной при выполнении условия:

<a id="p100252"></a>|Cm - Cгр| <= Кгр, (1)

<a id="p100253"></a>где Cгр - заданная массовая концентрация гексахлорбензола в градуировочном растворе, мг/дм3;
<a id="p100254"></a>Cm - результат измерения массовой концентрации гексахлорбензола в градуировочном растворе, мг/дм3;
<a id="p100255"></a>Кгр - норматив контроля стабильности градуировочной характеристики, мг/дм3, рассчитывают по формуле:

<a id="p100256"></a> $\text{К}_{\text{гр}} = 0,01 \cdot \delta_{\text{гр}} \cdot \text{С}_{\text{гр}},$ (2)

<a id="p100257"></a>где $\delta_{\text{гр}}$ - относительная погрешность построения градуировочной характеристики, %, $\delta_{\text{гр}} = 7\%$ .
<a id="p100258"></a>При невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики эксперимент повторяют с другим градуировочным раствором. При повторном невыполнении условия стабильности градуировочной характеристики выясняют и устраняют причины нестабильности градуировочной характеристики или устанавливают новую градуировочную характеристику.

#### <a id="p100259"></a>9.7 Отбор проб.

<a id="p100260"></a>Отбор проб крови в объеме не менее 5 см3 производят в вакуумные пробирки с гепарином (из расчета на 5 см3 крови - 0,05 см3 гепарина с концентрацией 5000 ЕД/см3) для забора крови. Анализ проб крови проводят непосредственно после отбора проб. Допускается хранение проб в морозильной камере не более 5 дней.


## <a id="p100261"></a>X. ПОРЯДОК ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100262"></a>10.1. Пробу крови объемом 5 см3 помещают в мерную пробирку вместимостью 10 см3, дозатором добавляют органический растворитель (толуол) объемом 3 см3 и выполняют жидкостную экстракцию (время контакта фаз 5 мин). Для денатурации белка выполняют центрифугирование биосреды при 7000 об/мин в течение 15 мин при pH = 6 - 7 по лакмусовой бумаге. Затем 1 мм3 верхнего слоя органического растворителя (толуол) вкалывают в хроматографическую колонку через испаритель. Процедуру повторяют аналогично для второго образца и проводят выполнение измерений двух параллельных проб крови.
<a id="p100263"></a>Условия выполнения измерений аналогичны условиям при установлении градуировочной характеристики [(п. 9.5)](#p100246).


## <a id="p100264"></a>XI. ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100265"></a>11.1. На хроматограмме рассчитывают с помощью программного обеспечения площадь пика и по градуировочной характеристике определяют массовую концентрацию гексахлорбензола в крови.
<a id="p100266"></a>11.2. За окончательный результат измерения $\overline{C}$ , мг/дм3, принимают среднее арифметическое значение двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости C1, C2 (параллельных определений), для которых выполняется условие:

<a id="p100267"></a> $|C_{1} - C_{2}| \leq 0,01 \cdot r \frac{C_{1} + C_{2}}{2} ,$ (3)

<a id="p100268"></a>где r - предел повторяемости, %. Значение предела повторяемости приведено в [таблице 4](#p100270).

<a id="p100269"></a>Таблица 4

<a id="p100270"></a>Диапазон измерений, значения предела
повторяемости, критического диапазона при доверительной
вероятности P = 0,95


| <a id="p100271"></a>Диапазон измерений массовых концентраций гексахлорбензола в крови, мг/дм3 | <a id="p100272"></a>Предел повторяемости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в одной лаборатории в условиях повторяемости), r, % | <a id="p100273"></a>Критический диапазон (относительное значение допускаемого расхождения между наибольшим и наименьшим четырех результатов измерений, полученных в одной лаборатории в условиях повторяемости), CR0,95(4), % |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100274"></a>От 0,0001 до 0,002 включ. | <a id="p100275"></a>12 | <a id="p100276"></a>16 |
| <a id="p100277"></a>Св. 0,002 до 0,01 включ. | <a id="p100278"></a>10 | <a id="p100279"></a>13 |


<a id="p100280"></a>При невыполнении [условия (3)](#p100267) получают дополнительно еще два результата измерений. За результат измерений принимают среднее арифметическое четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, для которых выполняется условие:

<a id="p100281"></a> $|C_{max,4} - C_{min,4}| \leq 0,01 \cdot CR_{0,95}(4) \cdot \frac{C_{1} + C_{2} + C_{3} + C_{4}}{4} ,$ (4)

<a id="p100282"></a>где CR0,95(4) - критический диапазон, %. Значение критического диапазона приведено в [таблице 4](#p100270).
<a id="p100283"></a>При невыполнении [условия (4)](#p100281) в качестве окончательного результата измерений может быть принята медиана четырех результатов измерений, полученных в условиях повторяемости (параллельных определений). Дополнительно выявляют и устраняют причины, приводящие к невыполнению [условий (3)](#p100267) и [(4)](#p100281).


## <a id="p100284"></a>XII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ



#### <a id="p100285"></a>12.1 Результат измерений представляют в виде:


<a id="p100286"></a> $(\overline{C} \pm \Delta)\text{мг}/\text{дм}^{3}$ , P = 0,95, (5)

<a id="p100287"></a>где $\overline{C}$ - результат измерений, полученный в соответствии с [главами IX](#p100195) - [XI](#p100264), мг/дм3;
<a id="p100288"></a> $\pm \Delta$ - границы абсолютной погрешности измерений массовой концентрации гексахлорбензола, мг/дм3, при P = 0,95.
<a id="p100289"></a>Значение $\Delta$ рассчитывают по формуле:

<a id="p100290"></a> $\Delta = \frac{\delta \cdot \overline{C}}{100} ,$ (6)

<a id="p100291"></a>где значение $\delta$ приведено в [таблице 1](#p100037).
<a id="p100292"></a>Допустимо результат измерения в документах, выдаваемых лабораторией, представлять в виде:

<a id="p100293"></a> $(\overline{C} \pm \Delta_{\text{л}})\text{мг}/\text{дм}^{3}$ , P = 0,95, при условии: $\Delta_{\text{л}}<\Delta,$ 

<a id="p100294"></a>где: $\pm \Delta_{\text{л}}$ - значение характеристики погрешности результатов измерений, установленное при внедрении методики в лаборатории, и обеспечиваемое контролем стабильности результатов измерений, мг/дм3.


## <a id="p100295"></a>XIII. КОНТРОЛЬ ТОЧНОСТИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ


<a id="p100296"></a>13.1. Контроль точности результатов измерений организуют и проводят путем проведения проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях повторяемости [(п. 11.2)](#p100266), воспроизводимости [(п. 13.2)](#p100297), оперативного контроля процедуры измерений [(п. 13.3)](#p100312), контроля стабильности градуировочной характеристики [(п. 9.6)](#p100250) и контроля стабильности результатов измерений в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-6](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002).
<a id="p100297"></a>13.2. Проверка приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости.
<a id="p100298"></a>Образцами для проверки приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости, являются образцы крови с внесенными в них добавками растворов гексахлорбензола, подготовленных в соответствии с [п. 9.4.2](#p100215).
<a id="p100299"></a>Проверку приемлемости результатов измерений, получаемых в условиях воспроизводимости (результаты измерений получены в разных лабораториях), проводят по результатам измерений массовых концентраций гексахлорбензола в образцах крови с одинаковым содержанием гексахлорбензола. Результаты измерений признают приемлемыми при выполнении условия:

<a id="p100300"></a> $\frac{|C_{1} - C_{2}|}{(C_{1} + C_{2})/2} \cdot 100\% \leq R,$ (7)

<a id="p100301"></a>где C<sub>1</sub> и C<sub>2</sub> - результаты измерений массовых концентраций гексахлорбензола, полученные в условиях воспроизводимости, мг/дм3;
<a id="p100302"></a>R - предел воспроизводимости, %. Значения предела воспроизводимости приведены в [таблице 5](#p100304).

<a id="p100303"></a>Таблица 5

<a id="p100304"></a>Диапазон измерений, значения предела внутрилабораторной
прецизионности при доверительной вероятности P = 0,95


| <a id="p100305"></a>Диапазон измерений массовых концентраций гексахлорбензола в крови, мг/дм3 | <a id="p100306"></a>Предел воспроизводимости (относительное значение допускаемого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), R, % |
| --- | --- |
| <a id="p100307"></a>От 0,0001 до 0,002 включ. | <a id="p100308"></a>26 |
| <a id="p100309"></a>Св. 0,002 до 0,01 включ. | <a id="p100310"></a>13 |


<a id="p100311"></a>Если [условие (7)](#p100300) не выполняется, процедуру повторяют. При повторном превышении предела воспроизводимости выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
<a id="p100312"></a>13.3. Оперативный контроль процедуры измерений с использованием метода добавок.
<a id="p100313"></a>Образцами для оперативного контроля процедуры измерений с использованием метода добавок являются образцы крови без добавок и образцы крови с внесенными в них добавками растворов гексахлорбензола, подготовленных в соответствии с [п. 9.4.2](#p100215). Измерения в этих образцах проводят по [п. 10.1](#p100262), а обработку результатов измерений - по [п. 12.1](#p100285) данной методики измерений.
<a id="p100314"></a>Оперативный контроль процедуры измерений с использованием метода добавок проводят путем сравнения результата отдельно взятой контрольной процедуры Кк с нормативом контроля К.
<a id="p100315"></a>Результат контрольной процедуры Кк рассчитывают по формуле:

<a id="p100316"></a> $\text{К}_{\text{к}} = |\overline{\text{С}}\prime - \overline{\text{С}} - \text{С}_{\text{д}}|,$ (8)

<a id="p100317"></a>где $\overline{\text{С}}\prime$ - результат измерений массовой концентрации гексахлорбензола в пробе с известной добавкой - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет [условию (3)](#p100267), мг/дм3;
<a id="p100318"></a> $\overline{\text{С}}$ - результат измерений массовой концентрации гексахлорбензола в исходной пробе - среднее арифметическое двух результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, расхождение между которыми удовлетворяет [условию (3)](#p100267), мг/дм3;
<a id="p100319"></a>Cд - величина добавки, мг/дм3.
<a id="p100320"></a>Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

<a id="p100321"></a> $\text{К } = \sqrt{\Delta_{\text{л},\text{С}\prime}^{2} + \Delta_{\text{л},\text{С}}^{2}} ,$ (9)

<a id="p100322"></a>где $\Delta_{\text{л},\text{С}\prime}^{2}$ и $\Delta_{\text{л},\text{С}}^{2}$ - значения характеристик погрешности результатов измерений, установленные в лаборатории при реализации методики, соответствующие массовой концентрации гексахлорбензола в пробе с известной добавкой и в исходной пробе соответственно, мг/дм3.
<a id="p100323"></a>*Примечание.* Допустимо характеристику погрешности результатов измерений при внедрении методики в лаборатории устанавливать на основе выражений:

<a id="p100324"></a> $\Delta_{\text{л},\text{С}\prime} = 0,84 \cdot 0,01 \cdot \delta \cdot \overline{\text{С}}\prime,$ (10)

<a id="p100325"></a> $\Delta_{\text{л},\text{С}} = 0,84 \cdot 0,01 \cdot \delta \cdot \overline{\text{С}},$ (11)

<a id="p100326"></a>с последующим уточнением по мере накопления информации в процессе контроля стабильности результатов измерений.

<a id="p100327"></a>Процедуру измерений признают удовлетворительной, при выполнении условия:

<a id="p100328"></a>Кк <= К. (12)

<a id="p100329"></a>При невыполнении [условия (12)](#p100328) контрольную процедуру повторяют. При повторном невыполнении [условия (12)](#p100328) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры по их устранению.
<a id="p100330"></a>13.4. Оперативный контроль процедуры измерений, а также реализуемые процедуры контроля стабильности результатов выполняемых измерений, приводят в документах лаборатории, устанавливающих порядок и содержание работ по организации методов контроля стабильности результатов измерений в пределах лаборатории.



<a id="p100331"></a>

---