---
title: "\"МУК 4.1.3875-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика определения остаточного содержания полипептидных антибиотиков в пищевой продукции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.3875-23"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/metodika-muk-4-1-3875-23"
---

## "МУК 4.1.3875-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика определения остаточного содержания полипептидных антибиотиков в пищевой продукции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"

# "МУК 4.1.3875-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика определения остаточного содержания полипептидных антибиотиков в пищевой продукции методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 26.06.2023)

> [!IMPORTANT]
> Документ [введен](#p100005) в действие с 26.09.2023.


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
**А.Ю.ПОПОВА**
26 июня 2023 года


#### <a id="p100002"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100003"></a>**МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ ПОЛИПЕПТИДНЫХ**
**АНТИБИОТИКОВ В ПИЩЕВОЙ ПРОДУКЦИИ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ**
**ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ С МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКИМ**
**ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ**

<a id="p100004"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**
**МУК 4.1.3875-23**

<a id="p100005"></a>Дата введения
26 сентября 2023 года

1. <a id="p100006"></a>Разработаны ФБУЗ "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Роспотребнадзора (А.А. Гарбузова, М.В. Зароченцев, О.В. Андросова, А.А. Константинов, И.П. Семенова, Н.А. Горячев, В.В. Бояркина, М.М. Дударев, С.А. Мокренская).
2. <a id="p100007"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 26 июня 2023 г.
3. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


### <a id="p100009"></a>I. Общие положения и область применения


<a id="p100010"></a>1.1. Настоящие методические указания (далее - МУК) распространяются на пищевую продукцию и продовольственное (пищевое) сырье: молоко и молочные продукты любой жирности, в т.ч. творог, сухое молоко, концентрированное и сгущенное молоко, сметана, жидкие молочные продукты (кефир, йогурт, сыворотка, сливки и т.д.), и устанавливают метод определения остаточного содержания полипептидных антибиотиков (бацитрацин, колистин A, колистин B, полимиксин B1, полимиксин B2, вирджиниамицин S, вирджиниамицин M) с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (далее - ВЭЖХ-МС/МС) в диапазоне от 0,01 до 0,2 мг/кг.

#### <a id="p100011"></a>1.2 МУК носят рекомендательный характер.



### <a id="p100012"></a>II. Физико-химические свойства полипептидных антибиотиков



#### <a id="p100013"></a>2.1 Физико-химические свойства бацитрацина.

<a id="p100014"></a>Бацитрацин - полипептидный антибиотик [(рисунок 1)](#p100016). Угнетает синтез клеточной стенки путем подавления кругооборота липидных переносчиков субъединиц пептидогликанов, что также реализуется в виде бактерицидного действия. Бацитрацин в сочетании с другими антибиотиками (неомицин, полимиксин B) используется для наружного применения при лечении заболеваний кожи, глаз или носа, но может назначаться и внутрь, в виде инъекций, в качестве кишечного антисептика.

<a id="p100015"></a> ![II. Физико-химические свойства полипептидных антибиотиков](https://i.bukva.ai/GDch0EUe/img_0.png) 

<a id="p100016"></a>Рис. 1. Структурная формула бацитрацина

<a id="p100017"></a>Регистрационный номер CAS: 22601-59-8.
<a id="p100018"></a>Эмпирическая формула: C<sub>66</sub>H<sub>103</sub>N<sub>17</sub>O<sub>15</sub>S.
<a id="p100019"></a>Молекулярная масса: 1422,69.
<a id="p100020"></a>Моноизотопная молекулярная масса: 1421,75.
<a id="p100021"></a>Цвет: белый порошок.
<a id="p100022"></a>Точка плавления - плюс 221 - 225 °C.
<a id="p100023"></a>Растворимость в воде: 24 мг/дм3 (при плюс 21 °C).
<a id="p100024"></a>Коэффициент распределения в системе октанол/вода (при плюс 25 °C): Kowlog P = -0,8.

#### <a id="p100025"></a>2.2 Физико-химические свойства колистина.

<a id="p100026"></a>Колистин-антибиотик, продуцируемый некоторыми штаммами бактерии Paenibacillus polymyxa, эффективен против большинства грамотрицательных бактерий. Колистин является лекарством последнего резерва для лечения инфекционных заболеваний, вызванных грамотрицательными бактериями с множественной лекарственной устойчивостью. В ветеринарии препарат используется в виде колистина сульфата, как в чистом виде, так и в комбинации с другими антибиотиками. Препарат эффективен при лечении животных и птиц с заболеваниями органов дыхания, желудочно-кишечного тракта и другими болезнями.

##### <a id="p100027"></a>2.2.1 Колистин A [(рис. 2)](#p100029).


<a id="p100028"></a> ![II. Физико-химические свойства полипептидных антибиотиков](https://i.bukva.ai/GDch0EUe/img_1.png) 

<a id="p100029"></a>Рис. 2. Структурная формула Колистина A

<a id="p100030"></a>Регистрационный номер CAS: 7722-44-3.
<a id="p100031"></a>Эмпирическая формула: C<sub>53</sub>H100<sub>N1</sub>6<sub>O1</sub>3.
<a id="p100032"></a>Молекулярная масса: 1169,46.
<a id="p100033"></a>Моноизотопная молекулярная масса: 1168,77.

##### <a id="p100034"></a>2.2.2 Колистин B [(рис. 3)](#p100036).


<a id="p100035"></a> ![II. Физико-химические свойства полипептидных антибиотиков](https://i.bukva.ai/GDch0EUe/img_2.png) 

<a id="p100036"></a>Рис. 3. Структурная формула Колистина B

<a id="p100037"></a>Регистрационный номер CAS: 7239-48-7.
<a id="p100038"></a>Эмпирическая формула: C<sub>52</sub>H<sub>98</sub>N<sub>16</sub>O<sub>13</sub>.
<a id="p100039"></a>Молекулярная масса: 1155,46.
<a id="p100040"></a>Моноизотопная молекулярная масса: 1154,75.

#### <a id="p100041"></a>2.3 Физико-химические свойства Полимиксина B.

<a id="p100042"></a>Полимиксин B - антибиотик полипептидной структуры. Механизм действия обусловлен главным образом блокадой проницаемости цитоплазматической мембраны бактериальных клеток, что приводит к их деструкции. Действует преимущественно на грамотрицательные микроорганизмы. Устойчивость развивается медленно; вызывает перекрестную с колистином резистентность.

##### <a id="p100043"></a>2.3.1 Полимиксин B1 [(рис. 4)](#p100045).


<a id="p100044"></a> ![II. Физико-химические свойства полипептидных антибиотиков](https://i.bukva.ai/GDch0EUe/img_3.png) 

<a id="p100045"></a>Рис. 4. Структурная формула Полимиксина B1

<a id="p100046"></a>Регистрационный номер CAS: 4135-11-9.
<a id="p100047"></a>Эмпирическая формула: C<sub>56</sub>H<sub>98</sub>N<sub>16</sub>O<sub>13</sub>.
<a id="p100048"></a>Молекулярная масса: 1203,50.
<a id="p100049"></a>Моноизотопная молекулярная масса: 1202,75.

##### <a id="p100050"></a>2.3.2 Полимиксин В2 [(рис. 5)](#p100052).


<a id="p100051"></a> ![II. Физико-химические свойства полипептидных антибиотиков](https://i.bukva.ai/GDch0EUe/img_4.png) 

<a id="p100052"></a>Рис. 5. Структурная формула Полимиксина B2

<a id="p100053"></a>Регистрационный номер CAS: 1404-26-8.
<a id="p100054"></a>Эмпирическая формула: C<sub>55</sub>H<sub>96</sub>N16O13.
<a id="p100055"></a>Молекулярная масса: 1189,45.
<a id="p100056"></a>Моноизотопная молекулярная масса: 1188,73.

#### <a id="p100057"></a>2.4 Физико-химические свойства вирджиниамицина.

<a id="p100058"></a>Вирджиниамицин продуцируется культурой Streptomyces virginiae, обладает бактериостатическим, а в высоких концентрациях - бактерицидным действием в отношении большинства грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий. Он представляет собой смесь семи макроциклических пептидлактонов, объединенных в две группы: M и S. Основными компонентами культуральных жидкостей Streptomyces virginiae являются вирджиниамицины M1 и S1. Применяется для профилактики и лечения некротического энтерита у цыплят-бройлеров, кур, а также для стабилизации кишечной микрофлоры, увеличения привесов, улучшения использования кормов.

##### <a id="p100059"></a>2.4.1 Вирджиниамицин M1 [(рис. 6)](#p100061).


<a id="p100060"></a> ![II. Физико-химические свойства полипептидных антибиотиков](https://i.bukva.ai/GDch0EUe/img_5.png) 

<a id="p100061"></a>Рис. 6. Структурная формула вирджиниамицина M1

<a id="p100062"></a>Регистрационный номер CAS: 21411-53-0.
<a id="p100063"></a>Эмпирическая формула: C28H35N3O7.
<a id="p100064"></a>Молекулярная масса: 525,59.
<a id="p100065"></a>Моноизотопная молекулярная масса: 525,25.

##### <a id="p100066"></a>2.4.2 Вирджиниамицин S1 [(рис. 7)](#p100068).


<a id="p100067"></a> ![II. Физико-химические свойства полипептидных антибиотиков](https://i.bukva.ai/GDch0EUe/img_6.png) 

<a id="p100068"></a>Рис. 7. Структурная формула вирджиниамицина S1

<a id="p100069"></a>Регистрационный номер CAS: 23152-29-6.
<a id="p100070"></a>Эмпирическая формула: C<sub>43</sub>H<sub>49</sub>N<sub>7</sub>O<sub>10</sub>.
<a id="p100071"></a>Молекулярная масса: 823,90.
<a id="p100072"></a>Моноизотопная молекулярная масса: 823,35.


### <a id="p100073"></a>III. Метод измерений


<a id="p100074"></a>3.1. Метод основан на определении полипептидных антибиотиков с помощью ВЭЖХ-МС/МС после его экстракции из образцов органическим растворителем и очистки экстракта с помощью твердофазной экстракции.
<a id="p100075"></a>3.2. Количественное определение остаточного содержания полипептидных антибиотиков проводят методом внутреннего стандарта по площадям хроматографических пиков с помощью градуировочной характеристики, полученной при анализе градуировочных растворов в аналогичных условиях.


### <a id="p100076"></a>IV. Метрологические характеристики


<a id="p100077"></a>4.1. При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности P = 0,95 не превышает значений, приведенных в [табл. 1](#p100079) для соответствующих диапазонов концентраций.

<a id="p100078"></a>Таблица 1

<a id="p100079"></a>Метрологические характеристики


<table>
<colgroup><col width="20%"><col width="13%"><col width="13%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="15%"><col width="16%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100080"></a>Анализируемый объект</td><td><a id="p100081"></a>Диапазон определяемых концентраций, мг/кг</td><td><a id="p100082"></a>Показатель точности (границы относительной погрешности), (P = 0,95), %</td><td><a id="p100083"></a>Показатель повторяемости (среднеквадратичное отклонение повторяемости), %</td><td><a id="p100084"></a>Показатель воспроизводимости (среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), %</td><td><a id="p100085"></a>Предел повторяемости (значение допустимого расхождения между двумя результатами параллельных определений), %</td><td><a id="p100086"></a>Предел воспроизводимости (значение допустимого расхождения между двумя результатами измерений, полученными в разных лабораториях), (P = 0,95), %</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100087"></a>Молоко и молочные продукты</td></tr>
<tr><td><a id="p100088"></a>Вирджиниамицин S1</td><td><a id="p100089"></a>0,01 - 0,2</td><td><a id="p100090"></a>40</td><td><a id="p100091"></a>5,1</td><td><a id="p100092"></a>7,2</td><td><a id="p100093"></a>14</td><td><a id="p100094"></a>20</td></tr>
<tr><td><a id="p100095"></a>Бацитрацин A</td><td><a id="p100096"></a>0,01 - 0,2</td><td><a id="p100097"></a>55</td><td><a id="p100098"></a>5,6</td><td><a id="p100099"></a>7,9</td><td><a id="p100100"></a>16</td><td><a id="p100101"></a>22</td></tr>
<tr><td><a id="p100102"></a>Полимиксин B1</td><td><a id="p100103"></a>0,01 - 0,2</td><td><a id="p100104"></a>35</td><td><a id="p100105"></a>5,5</td><td><a id="p100106"></a>7,7</td><td><a id="p100107"></a>15</td><td><a id="p100108"></a>22</td></tr>
<tr><td><a id="p100109"></a>Колистин A</td><td><a id="p100110"></a>0,01 - 0,2</td><td><a id="p100111"></a>45</td><td><a id="p100112"></a>6,8</td><td><a id="p100113"></a>9,5</td><td><a id="p100114"></a>19</td><td><a id="p100115"></a>27</td></tr>
<tr><td><a id="p100116"></a>Колистин B</td><td><a id="p100117"></a>0,01 - 0,2</td><td><a id="p100118"></a>40</td><td><a id="p100119"></a>6,6</td><td><a id="p100120"></a>9,3</td><td><a id="p100121"></a>19</td><td><a id="p100122"></a>26</td></tr>
<tr><td><a id="p100123"></a>Полимиксин B2</td><td><a id="p100124"></a>0,01 - 0,2</td><td><a id="p100125"></a>40</td><td><a id="p100126"></a>5,8</td><td><a id="p100127"></a>8,1</td><td><a id="p100128"></a>16</td><td><a id="p100129"></a>23</td></tr>
<tr><td><a id="p100130"></a>Вирджиниамицин M1</td><td><a id="p100131"></a>0,01 - 0,2</td><td><a id="p100132"></a>45</td><td><a id="p100133"></a>4,6</td><td><a id="p100134"></a>6,5</td><td><a id="p100135"></a>13</td><td><a id="p100136"></a>18</td></tr>
</table>



### <a id="p100137"></a>V. Средства измерений, посуда, реактивы, вспомогательные устройства и материалы


<a id="p100138"></a>5.1. При выполнении измерений и подготовке проб применяют средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы, приведенные в [табл. 2](#p100140) - [4](#p100190).

<a id="p100139"></a>Таблица 2

<a id="p100140"></a>Средства измерений


| <a id="p100141"></a>Наименование средства измерения | <a id="p100142"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| --- | --- |
| <a id="p100143"></a>1 | <a id="p100144"></a>2 |
| <a id="p100145"></a>Хроматограф жидкостный с масс-спектрометическим детектором типа тройной квадруполь | <a id="p100146"></a>Диапазон измерений от 5 до 1200 атомных единиц массы (а.е.м.), массовое разрешение не менее 1200, точность измерения массы не ниже 0,5 а.е.м., с режимом получения и анализа фрагментных ионов (режим MC/MC).<br>Внесено в Реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| <a id="p100147"></a>Весы лабораторные аналитические | <a id="p100148"></a>Класса точности по [ГОСТ OIML R 76-1](https://bukva.ai/docs/gost-oiml-r-76-1-2011) с пределами допускаемой абсолютной погрешности не более +/- 0,01 г и весы лабораторные по ГОСТ 24104, высокого или специального класса точности, с действительной ценой деления 0,1 мг.<br>Внесено в реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| <a id="p100149"></a>Дозатор пипеточный одноканальный переменного объема | <a id="p100150"></a>Переменная вместимость 10 - 100 мм3, 20 - 200 мм3, 100 - 1000 мм3, 1000 - 10000 мм3, с допустимой относительной погрешностью дозирования по метанолу и ацетонитрилу не более 1%.<br>Внесено в реестр "Утвержденные типы средств измерений" Федерального информационного фонда по обеспечению единства измерений |
| <a id="p100151"></a>Колбы мерные лабораторные | <a id="p100152"></a>Тип 1-10-2, 1-100-2, 1-500-2, 1-1000-2 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |
| <a id="p100153"></a>Пипетки градуированные лабораторные стеклянные | <a id="p100154"></a>Тип 1-2-2-5 и 1-2-2-10 по [ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) |
| <a id="p100155"></a>Цилиндры мерные лабораторные стеклянные | <a id="p100156"></a>Тип 1-100-2, 1-500-2, 1-1000-2 по [ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) |


<a id="p100157"></a>*Примечание.* Допускается применение других средств измерений, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам.

<a id="p100158"></a>Таблица 3

<a id="p100159"></a>Реактивы


| <a id="p100160"></a>Наименование реактива | <a id="p100161"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| --- | --- |
| <a id="p100162"></a>1 | <a id="p100163"></a>2 |
| <a id="p100164"></a>Бацитрацин A, аналитический стандарт | <a id="p100165"></a>Содержание основного вещества не менее 80% |
| <a id="p100166"></a>Колистин A сульфат гидрат, аналитический стандарт | <a id="p100167"></a>Содержание основного вещества не менее 90% |
| <a id="p100168"></a>Колистин B сульфат, аналитический стандарт | <a id="p100169"></a>Содержание основного вещества не менее 90% |
| <a id="p100170"></a>Полимиксин B1 формиат, аналитический стандарт | <a id="p100171"></a>Содержание основного вещества не менее 95% |
| <a id="p100172"></a>Полимиксин B2 формиат, аналитический стандарт | <a id="p100173"></a>Содержание основного вещества не менее 95% |
| <a id="p100174"></a>Вирджиниамицин M1, аналитический стандарт | <a id="p100175"></a>Содержание основного вещества не менее 95% |
| <a id="p100176"></a>Вирджиниамицин S1, аналитический стандарт | <a id="p100177"></a>Содержание основного вещества не менее 99% |
| <a id="p100178"></a>Вирджиниамицин M1-d2, аналитический стандарт | <a id="p100179"></a>Содержание основного вещества не менее 90% |
| <a id="p100180"></a>Ацетонитрил, осч | <a id="p100181"></a>Содержание основного вещества не менее 99,8% |
| <a id="p100182"></a>Вода для лабораторного анализа (бидистиллированная или деионизованная) | <a id="p100183"></a>[ГОСТ Р 52501](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) |
| <a id="p100184"></a>Метиловый спирт (метанол), осч | <a id="p100185"></a>[ГОСТ 6995](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) |
| <a id="p100186"></a>Муравьиная кислота, чда | <a id="p100187"></a>[ГОСТ 5848](https://bukva.ai/docs/gost-5848-73) |


<a id="p100188"></a>*Примечание.* Допускается применение других реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.

<a id="p100189"></a>Таблица 4

<a id="p100190"></a>Вспомогательное оборудование и материалы


| <a id="p100191"></a>Наименование реактива | <a id="p100192"></a>Обозначение и наименование документов, технические характеристики |
| --- | --- |
| <a id="p100193"></a>1 | <a id="p100194"></a>2 |
| <a id="p100195"></a>Виалы закрываемые (с завинчивающейся или запрессовывающейся крышкой с тефлонированной резиновой прокладкой) | <a id="p100196"></a>Объем 1,5 см3 |
| <a id="p100197"></a>Ножевая мельница для измельчения и гомогенизации продуктов питания и кормов (гомогенизатор) | <a id="p100198"></a>Скорость (частота) вращения не менее 2000 об/мин, объем пробы не менее 0,3 л |
| <a id="p100199"></a>Центрифуга лабораторная рефрижераторная | <a id="p100200"></a>Скорость (частота) вращения не менее 4000 об/мин или относительное ускорение не менее 1600 g для пробирок вместимостью 15 см3 и 14000 об/мин или 18000 g для микроцентрифужных пробирок вместимостью до 2,0 см3, поддержание температуры плюс 4 °C |
| <a id="p100201"></a>Баня ультразвуковая | <a id="p100202"></a>Рабочая частота не менее 20 кГц |
| <a id="p100203"></a>Пробирки полипропиленовые микроцентрифужные | <a id="p100204"></a>Объем не менее 1,5 см3 |
| <a id="p100205"></a>Пробирки полипропиленовые с завинчивающимися крышками | <a id="p100206"></a>Объем 15 см3 |
| <a id="p100207"></a>Пробирки полипропиленовые с завинчивающимися крышками | <a id="p100208"></a>Объем 50 см3 |
| <a id="p100209"></a>Ротационный перемешиватель | <a id="p100210"></a>С максимальной скоростью вращения не менее 99 об/мин |
| <a id="p100211"></a>Вортекс для пробирок | <a id="p100212"></a>С максимальной скоростью вращения не менее 1000 об/мин |
| <a id="p100213"></a>Колонка хроматографическая стальная | <a id="p100214"></a>Длина не менее 150 мм, с внутренним диаметром не более 3 мм, зернением не более 3 мкм, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18 |
| <a id="p100215"></a>Предколонка хроматографическая | <a id="p100216"></a>Длина не более 12,5 мм, внутренним диаметром не более 3 мм, зернением не более 3 мкм, заполненная сорбентом с привитыми неполярными группами C18 |
| <a id="p100217"></a>Фильтры мембранные | <a id="p100218"></a>Размер пор не более 0,45 мкм |
| <a id="p100219"></a>Холодильник бытовой | <a id="p100220"></a>Рабочий диапазон температур от плюс 2 до плюс 4 °C |
| <a id="p100221"></a>Камера лабораторная морозильная | <a id="p100222"></a>Рабочий диапазон температур от минус 18 °C до минус 22 °C |
| <a id="p100223"></a>Устройство вакуумное для твердофазной экстракции | <a id="p100224"></a>- |
| <a id="p100225"></a>Картриджи для твердофазной экстракции с сорбентом типа HLB | <a id="p100226"></a>Объемом не менее 6 см3 и массой сорбента не менее 200 мкг |
| <a id="p100227"></a>Модуль термостатируемый нагревательный | <a id="p100228"></a>С системой отдувки растворителей инертным газом, поддерживающий температуру плюс 40 °C |
| <a id="p100229"></a>Система для получения деионизованной воды высокой чистоты | <a id="p100230"></a>- |


<a id="p100231"></a>*Примечание.* Допускается применение другого вспомогательного оборудования, не уступающего вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам.


### <a id="p100232"></a>VI. Требования безопасности и квалификация операторов


<a id="p100233"></a>6.1. При выполнении измерений необходимо соблюдать требования техники безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, требования электробезопасности при работе с электроустановками по ГОСТ 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на жидкостный хроматограф с масс-спектрометрическим детектированием.
<a id="p100234"></a>6.2. Помещение должно соответствовать требованиям пожаробезопасности по ГОСТ 12.1.004 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Организация обучения работников безопасности труда - по ГОСТ 12.0.004.
<a id="p100235"></a>6.3. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.


### <a id="p100236"></a>VII. Отбор и хранение проб


<a id="p100237"></a>7.1. Для учета специфики отбора проб отдельных видов пищевой продукции и продовольственного (пищевого) сырья следует руководствоваться действующей нормативно-технической документацией на конкретную продукцию.


### <a id="p100238"></a>VIII. Условия проведения измерений



#### <a id="p100239"></a>8.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия:

- <a id="p100240"></a>процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха плюс (15 - 30) °C, относительной влажности не более 85%;
- <a id="p100241"></a>выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.


### <a id="p100242"></a>IX. Подготовка к проведению измерений


<a id="p100243"></a>9.1. Выполнению измерений предшествуют приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, установление градуировочной характеристики.

#### <a id="p100244"></a>9.2 Приготовление растворов для проведения анализа.


##### <a id="p100245"></a>9.2.1 Приготовление подвижных фаз А и Б.


###### <a id="p100246"></a>9.2.1.1 Приготовление подвижной фазы А.

<a id="p100247"></a>Для приготовления подвижной фазы А в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят с помощью мерного цилиндра 500 см3 деионизированной воды, добавляют 5,0 см3 муравьиной кислоты и доводят раствор деионизированной водой до метки, перемешивают.
<a id="p100248"></a>Приготовленный раствор хранят при комнатной температуре не более 1 недели.

###### <a id="p100249"></a>9.2.1.2 Приготовление подвижной фазы Б.

<a id="p100250"></a>В качестве подвижной фазы Б используют ацетонитрил. Подвижную фазу хранят при комнатной температуре не более 3 месяцев.

##### <a id="p100251"></a>9.2.2 Приготовление рабочих растворов.


###### <a id="p100252"></a>9.2.2.1 Приготовление смеси метанол:вода в объемном соотношении 1:1.

<a id="p100253"></a>В мерную колбу объемом 1000 см3 приливают с помощью мерного цилиндра 500 см3 метанола и доводят деионизированной водой до метки.
<a id="p100254"></a>Приготовленный раствор хранят при комнатной температуре не более 1 месяца.

###### <a id="p100255"></a>9.2.2.2 Приготовление смеси метанол:вода в объемном соотношении 4:6.

<a id="p100256"></a>В мерную колбу объемом 1000 см3 приливают с помощью мерного цилиндра 400 см3 метанола и доводят деионизированной водой до метки.
<a id="p100257"></a>Приготовленный раствор хранят при комнатной температуре не более 1 месяца.
<a id="p100258"></a>9.2.2.3. Приготовление раствора 1% муравьиной кислоты в смеси метанол:вода в объемном соотношении 4:6.
<a id="p100259"></a>В мерную колбу объемом 1000 см3 с помощью мерного цилиндра добавляют 500 мл смеси по [п. 9.2.2.2](#p100255), вносят 10 мл муравьиной кислоты и доводят до метки смесью по [п. 9.2.2.2](#p100255).
<a id="p100260"></a>Приготовленный раствор хранят при комнатной температуре не более 1 месяца.

###### <a id="p100261"></a>9.2.2.4 Приготовление 0,5%-го раствора муравьиной кислоты в метаноле.

<a id="p100262"></a>В мерную колбу на 500 см3 с помощью мерного цилиндра вносят 450 см3 метанола, добавляют 2,5 см3 муравьиной кислоты, доводят раствор до метки метанолом и перемешивают.
<a id="p100263"></a>Приготовленный раствор хранят при комнатной температуре не более 3 месяцев.
<a id="p100264"></a>9.2.2.5. Приготовление раствора для перерастворения (смесь подвижной фазы А и подвижной фазы Б в объемном соотношении 8:2).
<a id="p100265"></a>В мерную колбу на 100 см3 с помощью мерного цилиндра вносят 80 см3 подвижной фазы А и 20 см3 подвижной фазы Б.
<a id="p100266"></a>Приготовленный раствор хранят при комнатной температуре не более 2 недель.

##### <a id="p100267"></a>9.2.3 Приготовление градуировочных растворов.


###### <a id="p100268"></a>9.2.3.1 Приготовление исходных растворов C0.

<a id="p100269"></a>Для приготовления исходных растворов Колистина A, Колистина Б, Полимиксина B<sub>2</sub>, Вирджиниамицина-S1, Бацитрацина A, Вирджиниамицина-M1, Полимиксина B<sub>1</sub> с концентрацией 1 мг/см3 рассчитывают необходимое количество препарата с известным содержанием основного вещества, соответствующее 10 мг чистого вещества.
<a id="p100270"></a>В мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят рассчитанную массу препарата для градуировки. Добавляют 8 см3 смеси метанол:вода [(п. 9.2.2.1)](#p100252), перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин, далее доводят полученный раствор до метки 10 см3 смесью метанол:вода [(п. 9.2.2.1)](#p100252).

###### <a id="p100271"></a>9.2.3.2 Приготовление рабочего раствора C1 концентрацией 10 мкг/см3.

<a id="p100272"></a>Раствор C<sub>1</sub> готовят в мерной колбе на 10 см<sub>3</sub> согласно [табл. 5](#p100274).

<a id="p100273"></a>Таблица 5

<a id="p100274"></a>Приготовление рабочего раствора C1


<table>
<colgroup><col width="33%"><col width="43%"><col width="24%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100275"></a>Аналит</td><td><a id="p100276"></a>Объем аналита (исходного раствора C0), мкл</td><td><a id="p100277"></a>V метанола, мкл</td></tr>
<tr><td><a id="p100278"></a>Бацитрацин A</td><td><a id="p100279"></a>100</td><td rowspan="7"><a id="p100280"></a>9300</td></tr>
<tr><td><a id="p100281"></a>Вирджиниамицин M1</td><td><a id="p100282"></a>100</td></tr>
<tr><td><a id="p100283"></a>Полимиксин B1</td><td><a id="p100284"></a>100</td></tr>
<tr><td><a id="p100285"></a>Вирджиниамицин S1</td><td><a id="p100286"></a>100</td></tr>
<tr><td><a id="p100287"></a>Колистин A</td><td><a id="p100288"></a>100</td></tr>
<tr><td><a id="p100289"></a>Колистин B</td><td><a id="p100290"></a>100</td></tr>
<tr><td><a id="p100291"></a>Полимиксин B2</td><td><a id="p100292"></a>100</td></tr>
</table>


<a id="p100293"></a>Массовая концентрация всех аналитов в растворе составляет 10 мкг/см3.
<a id="p100294"></a>Приготовленный раствор хранят при температуре от минус 18 до минус 37 °C не более 3 месяцев.

###### <a id="p100295"></a>9.2.3.3 Приготовление рабочего раствора C2 концентрацией 2 мкг/см3.

<a id="p100296"></a>Для приготовления рабочего раствора C2 переносят 2,0 см3 рабочего раствора C1 в мерную колбу вместимостью 10 см3, доводят до метки метанолом и перемешивают. Массовая концентрация всех аналитов в растворе составляет 2 мкг/см3.
<a id="p100297"></a>Приготовленный раствор хранят при температуре от плюс 2 до плюс 4 °C не более 3 дней.

###### <a id="p100298"></a>9.2.3.4 Приготовление рабочего раствора C3 концентрацией 200 нг/см3.

<a id="p100299"></a>Для приготовления рабочего раствора C3 переносят 1,0 см3 рабочего раствора C2 в мерную колбу вместимостью 10 см3, доводят до метки метанолом и перемешивают. Массовая концентрация всех аналитов в растворе составляет 200 нг/см3.
<a id="p100300"></a>Приготовленный раствор хранят при температуре от плюс 2 до плюс 4 °C не более 3 дней.

###### <a id="p100301"></a>9.2.3.5 Приготовление исходного раствора внутреннего стандарта D0.

<a id="p100302"></a>Для приготовления рабочего раствора D0 на аналитических весах взвешивают 10 мг чистого вещества стандартного образца Вирджиниамицина-M1-d2 и вносят в мерную колбу на 10 см3. Добавляют 8 см3 смеси метанол:вода [(п. 9.2.2.1)](#p100252), перемешивают и помещают в ультразвуковую баню на 1 мин, далее доводят полученный раствор до метки 10 см3 смесью метанол:вода [(п. 9.2.2.1)](#p100252). Массовая концентрация Вирджиниамицина-M1-d2 в исходном растворе составляет 1 мг/см3.
<a id="p100303"></a>Приготовленный раствор хранят при температуре от -18 до -37 °C не более 6 месяцев.

###### <a id="p100304"></a>9.2.3.6 Приготовление рабочего раствора D1 внутреннего стандарта.

<a id="p100305"></a>Для приготовления рабочего раствора D1 в мерную колбу вместимостью 10 см3 с помощью мерного цилиндра добавляют 7 см3 метанола, переносят 1 см3 раствора D0, доводят до метки метанолом и перемешивают. Массовая концентрация Вирджиниамицина-M1-d2 в рабочем растворе D1 составляет 100 мкг/см3.
<a id="p100306"></a>Приготовленный раствор хранят при температуре от минус 18 до минус 37 °C не более 3 месяцев.

###### <a id="p100307"></a>9.2.3.7 Приготовление рабочего раствора D2 внутреннего стандарта.

<a id="p100308"></a>Для приготовления рабочего раствора D2 в мерную колбу вместимостью 10 см3 с помощью мерного цилиндра добавляют 7 см3 метанола, переносят 200 мм3 раствора D1, доводят до метки метанолом и перемешивают. Массовая концентрация Вирджиниамицина-M1-d2 в рабочем растворе D2 составляет 2 мкг/см3.
<a id="p100309"></a>Приготовленный раствор хранят при температуре от минус 18 до минус 37 °C не более 3 месяцев.

#### <a id="p100310"></a>9.3 Установление градуировочной характеристики.

<a id="p100311"></a>9.3.1. Для построения градуировочной характеристики берут "чистые" пробы, приготовленные и проанализированные ранее, не содержащие определяемые аналиты более 0,01 мг/кг, в зависимости от типа исследуемой матрицы. Взвешивают по 2,0 г, в пробы добавляют 50 мм3 рабочего раствора внутреннего стандарта D1, градуировочные растворы G1 - G5, с таким расчетом, чтобы массовые доли определяемых антибиотиков полипептидной группы находились в пределах от 0,01 до 0,2 мг/кг (схема приготовления градуировки представлена в [табл. 6](#p100313)), далее проводят пробоподготовку по [п. 10.1](#p100349).

<a id="p100312"></a>Таблица 6

<a id="p100313"></a>Построение градуировочной характеристики


| <a id="p100314"></a>Название градуировочного уровня | <a id="p100315"></a>Концентрация градуировочного уровня, мг/кг | <a id="p100316"></a>Объем рабочего раствора C2, мкл | <a id="p100317"></a>Объем рабочего раствора C3, мкл | <a id="p100318"></a>Объем рабочего раствора внутреннего стандарта D1, мкл |
| --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100319"></a>G1 | <a id="p100320"></a>0,01 | <a id="p100321"></a>- | <a id="p100322"></a>100 | <a id="p100323"></a>50 |
| <a id="p100324"></a>G2 | <a id="p100325"></a>0,02 | <a id="p100326"></a>- | <a id="p100327"></a>200 | <a id="p100328"></a>50 |
| <a id="p100329"></a>G3 | <a id="p100330"></a>0,05 | <a id="p100331"></a>50 | <a id="p100332"></a>- | <a id="p100333"></a>50 |
| <a id="p100334"></a>G4 | <a id="p100335"></a>0,1 | <a id="p100336"></a>100 | <a id="p100337"></a>- | <a id="p100338"></a>50 |
| <a id="p100339"></a>G5 | <a id="p100340"></a>0,2 | <a id="p100341"></a>200 | <a id="p100342"></a>- | <a id="p100343"></a>50 |


<a id="p100344"></a>9.3.2. Для получения градуировочной характеристики используют не менее четырех уровней концентраций матричных градуировочных растворов. Каждый градуировочный раствор измеряют два раза. Определяют значения времени удерживания ион-продуктов аналитов и их внутренних стандартов.
<a id="p100345"></a>9.3.3. При построении градуировочной зависимости для количественного определения полипептидных антибиотиков анализируют матричные градуировочные растворы различных уровней концентраций в условиях, описанных в [п. 8.1](#p100239) и [п. 12.1](#p100458).
<a id="p100346"></a>9.3.4. Вычисление площади пика проводят для каждого анализируемого вещества и внутреннего стандарта. Количественное определение полипептидных антибиотиков проводят по одному, наиболее интенсивному и характерному, ион-продукту.
<a id="p100347"></a>9.3.5. Градуировочную характеристику строят в координатах "отношение площади пика определяемого соединения к площади пика внутреннего стандарта этого соединения" - "отношение концентраций аналита и внутреннего стандарта". При построении градуировочной характеристики используют линейную регрессию вида y = ax + b, при этом коэффициент корреляции должен быть не менее 0,98. Построение градуировочной характеристики проводят при каждой серии измерений заново. Построение графиков может проводиться при помощи программы обработки данных ВЭЖХ-МС/МС или при помощи сторонних программ расчета градуировочных характеристик.


### <a id="p100348"></a>X. Проведение измерений



#### <a id="p100349"></a>10.1 Подготовка проб молока и молочной продукции.

<a id="p100350"></a>10.1.1. Образец тщательно перемешивают с помощью гомогенизатора, взвешивают по 2,0 г в полипропиленовой пробирке объемом 15 см3. В пробирку с образцом добавляют 50 мм3 раствора внутреннего стандарта D1 по [(п. 9.2.3.6)](#p100304), перемешивают на вортексе для пробирок и оставляют для уравновешивания на 10 мин в темном месте. Затем добавляют 7 см3 1% муравьиной кислоты в смеси метанол:вода в объемном соотношении 4:6 по [п. 9.2.2.3](#p100258), закрывают крышкой и интенсивно перемешивают на ротационном перемешивателе в течение 20 минут. Далее пробирки с образцами помещают на предварительно охлажденную до плюс 4 °C центрифугу и центрифугируют при 4000 об/мин в течение 15 мин. Полученный экстракт очищают методом твердофазной экстракции по [п. 10.1.2](#p100351).
<a id="p100351"></a>10.1.2. Картриджи для твердофазной экстракции предварительно кондиционируют, последовательно пропуская 6 см3 метанола и 6 см3 деионизованной воды (вакуум или избыточное давление не применяют). Затем пропускают через картридж экстракт, полученный в соответствии с [10.1.1](#p100350). После этого промывают картридж деионизованной водой 2 раза порциями по 6 см3 и сушат под вакуумом в течение 5 мин. Элюируют определяемые вещества в новую полипропиленовую пробирку вместимостью 15 см3 с использованием 5 см3 раствора 0,5% муравьиной кислоты в метаноле [(п. 9.2.2.4)](#p100261). Упаривают элюат в токе азота до (0,1 - 0,2) см3 при температуре плюс 40 °C. Добавляют 500 мкл раствора для перерастворения [(п. 9.2.2.5)](#p100264), помещают в ультразвуковую баню на 1 мин, перемешивают и переносят в микроцентрифужную пробирку. Доводят объем раствора до 1 см3 раствором для перерастворения [(п. 9.2.2.5)](#p100264) и центрифугируют при плюс 4 °C со скоростью вращения 14000 об/мин в течение 15 мин. Пипеточным дозатором переносят центрифугат в виалу для автосамплера жидкостного хроматографа. При необходимости раствор фильтруют через мембранный фильтр. Полученный раствор используют для ВЭЖХ-МС/МС анализа.
<a id="p100352"></a>10.1.3. В случае если массовая доля полипептидного антибиотика выше верхнего диапазона определяемых концентраций разбавить пробу в 10 раз, используя образец, не содержащий соответствующего полипептидного антибиотика, повторить пробоподготовку [(п. 10.1)](#p100349). При расчете массовой доли полипептидных антибиотиков в пробах молока и молочных продуктов учесть разбавление в конечном расчете концентрации, умножив полученное содержание на коэффициент разбавления.

#### <a id="p100353"></a>10.2 Условия хроматографирования.

<a id="p100354"></a>10.2.1. Жидкостный хромато-масс-спектрометр включают в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации и устанавливают параметры, рекомендуемые изготовителем аналитических колонок. Например, для колонки диаметром 2 мм, длиной 150 мм, с обращенно-фазным сорбентом C18 с размером частиц 2,2 мкм, применяют следующие хроматографические условия:
- <a id="p100355"></a>температура колонки - плюс 40 °C;
- <a id="p100356"></a>скорость потока подвижной фазы - 0,25 см<sub>3</sub>/мин;
- <a id="p100357"></a>объем вводимой пробы - 5 мм3.
<a id="p100358"></a>10.2.2. Разделение проводят в режиме градиентного элюирования в соответствии с [таблицей 7](#p100360).

<a id="p100359"></a>Таблица 7

<a id="p100360"></a>Примеры условий градиентного элюирования при регистрации
положительных ионов


| <a id="p100361"></a>Время, мин | <a id="p100362"></a>Подвижная фаза А, % | <a id="p100363"></a>Подвижная фаза Б, % |
| --- | --- | --- |
| <a id="p100364"></a>0,0 | <a id="p100365"></a>90 | <a id="p100366"></a>10 |
| <a id="p100367"></a>2,0 | <a id="p100368"></a>90 | <a id="p100369"></a>10 |
| <a id="p100370"></a>12,0 | <a id="p100371"></a>10 | <a id="p100372"></a>90 |
| <a id="p100373"></a>15,0 | <a id="p100374"></a>10 | <a id="p100375"></a>90 |
| <a id="p100376"></a>15,2 | <a id="p100377"></a>90 | <a id="p100378"></a>10 |
| <a id="p100379"></a>24,0 | <a id="p100380"></a>90 | <a id="p100381"></a>10 |


<a id="p100382"></a>Условия детектирования на тройном квадрупольном масс-спектрометрическом детекторе (пример):
- <a id="p100383"></a>поток газа-осушителя - 6,0 л/мин;
- <a id="p100384"></a>поток газа-распылителя - 2,5 л/мин;
- <a id="p100385"></a>температура интерфейса - плюс 300 °C;
- <a id="p100386"></a>температура линии десольватации - плюс 200 °C;
- <a id="p100387"></a>температура нагревательного блока - плюс 300 °C;
- <a id="p100388"></a>скорость сканирования - 10 сканов/с.
<a id="p100389"></a>Детектирование пиков проводят методом "регистрации выбранных реакций" (MRM). Для каждого соединения измеряют сигнал для двух дочерних ионов согласно [таблице 8](#p100391).

<a id="p100390"></a>Таблица 8

<a id="p100391"></a>MRM-переходы в режиме регистрации положительных ионов
и их условия для антибиотиков полипептидной группы


<table>
<colgroup><col width="33%"><col width="20%"><col width="18%"><col width="14%"><col width="15%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100392"></a>Наименование</td><td><a id="p100393"></a>Ион предшественник, m/z</td><td><a id="p100394"></a>Дочерние ионы, m/z</td><td><a id="p100395"></a>Энергия соударения, B</td><td><a id="p100396"></a>Время удерживания, мин</td></tr>
<tr><td><a id="p100397"></a>1</td><td><a id="p100398"></a>2</td><td><a id="p100399"></a>3</td><td><a id="p100400"></a>4</td><td><a id="p100401"></a>5</td></tr>
<tr><td><a id="p100402"></a>Колистин A</td><td><a id="p100403"></a>390,6 (+)</td><td><a id="p100404"></a>101,1/241,2</td><td><a id="p100405"></a>-21/-15</td><td><a id="p100406"></a>6,54</td></tr>
<tr><td colspan="5"><a id="p100407"></a><a id="p100408"></a>Колистин Б<br>385,9 (+)</td></tr>
<tr><td><a id="p100409"></a>101,1/374,3</td><td><a id="p100410"></a>-21/-13</td><td><a id="p100411"></a>6,36</td><td><a id="p100412"></a>Полимиксин B1</td><td><a id="p100413"></a>401,9 (+)</td></tr>
<tr><td><a id="p100414"></a>101,1/390,4</td><td><a id="p100415"></a>-23/-14</td><td><a id="p100416"></a>6,63</td><td><a id="p100417"></a>Полимиксин B2</td><td><a id="p100418"></a>397,1 (+)</td></tr>
<tr><td><a id="p100419"></a>101,1/385,7</td><td><a id="p100420"></a>-21/-14</td><td><a id="p100421"></a>6,47</td><td><a id="p100422"></a>Бацитрацин A</td><td><a id="p100423"></a>474,9 (+)</td></tr>
<tr><td><a id="p100424"></a>199,2/110,1</td><td><a id="p100425"></a>-28/-50</td><td><a id="p100426"></a>7,40</td><td><a id="p100427"></a>Вирджиниамицин-M1</td><td><a id="p100428"></a>526,1 (+)</td></tr>
<tr><td><a id="p100429"></a>337,0/355,1</td><td><a id="p100430"></a>-22/-19</td><td><a id="p100431"></a>10,67</td><td><a id="p100432"></a>Вирджиниамицин-S1</td><td><a id="p100433"></a>824,0 (+)</td></tr>
<tr><td><a id="p100434"></a>205,2/290,1</td><td><a id="p100435"></a>-52/-35</td><td><a id="p100436"></a>11,93</td><td><a id="p100437"></a>Вирджиниамицин-M1-d2</td><td><a id="p100438"></a>527,9 (+)</td></tr>
<tr><td><a id="p100439"></a>510,2/135,2</td><td><a id="p100440"></a>-22/-26</td><td><a id="p100441"></a>10,68</td><td></td><td><a id="p100442"></a>Примечание. Приведенные выше параметры хроматографического разделения и масс-спектрометрического детектирования могут отличаться в зависимости от используемого оборудования и хроматографической колонки.</td></tr>
</table>


<a id="p100443"></a>10.2.3. Контроль чувствительности хромато-масс-спектрометрической системы осуществляют введением в инжектор хроматографа 0,005 см3 матричного градуировочного раствора G1, полученное соотношение сигнал/шум для каждого аналита должно быть не менее 10.


### <a id="p100444"></a>XI. Обработка результатов измерений


<a id="p100445"></a>11.1. В соответствии с данными, полученными при анализе градуировочных растворов, проводят количественную обработку хроматограмм с использованием программного обеспечения, получая значения массовой концентрации антибиотиков полипептидной группы в двух параллельных измерениях анализируемой пробы.
<a id="p100446"></a>11.2. Массовую долю полипептидных антибиотиков в пробах молока и молочных продуктов вычисляют при помощи встроенной программы обработки данных ВЭЖХ-МС/МС или при помощи других программ расчета градуировочных характеристик по линейному уравнению вида:

<a id="p100447"></a>y = ax + b, (1)

<a id="p100448"></a>где y - отношение площади пика аналита к площади пика внутреннего стандарта;
<a id="p100449"></a>x - отношение концентрации аналита к концентрации внутреннего стандарта;
<a id="p100450"></a>a - угловой коэффициент прямой;
<a id="p100451"></a>b - показатель ординаты точки пересечения прямой с осью ординат.
<a id="p100452"></a>Расчет содержания полипептидных антибиотиков Cв-ва мкг/кг выполняется в соответствии с формулой:

<a id="p100453"></a> $C_{\text{в} - \text{ва}} = (\frac{C_{\text{в} - \text{ва}}}{C_{\text{ст}}} - b) \times \frac{C_{\text{ст}}}{a} ,$ (2)

<a id="p100454"></a>где Cст - концентрация внутреннего стандарта, мкг/кг;
<a id="p100455"></a>Sв-ва - площадь пика аналита;
<a id="p100456"></a>Sст - площадь пика внутреннего стандарта.


### <a id="p100457"></a>XII. Проверка приемлемости результатов параллельных определений


<a id="p100458"></a>12.1. За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (3):

<a id="p100459"></a> $\frac{2 \times |X_{1} - X_{2}| \times 100}{(X_{1} + X_{2})} \leq r,$ (3)

<a id="p100460"></a>где X<sub>1</sub>, X<sub>2</sub> - результаты параллельных определений, мг/кг;
<a id="p100461"></a>r - значение предела повторяемости [(табл. 1)](#p100079), при этом $r = 2,8 \times \sigma_{r}$ .
<a id="p100462"></a>При невыполнении [условия (1)](#p100447) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.


### <a id="p100463"></a>XIII. Оформление результатов



#### <a id="p100464"></a>13.1 Результат анализа представляют в виде:

<a id="p100465"></a> $(\overline{X} \pm \Delta)$ , мг/кг при вероятности P = 0,95,
<a id="p100466"></a>где $\overline{X}$ - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;
<a id="p100467"></a> $\Delta$ - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

<a id="p100468"></a> $\Delta = \delta \times X/100,$ (4)

<a id="p100469"></a>где $\delta$ - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций, [таблица 1](#p100079)), %.
<a id="p100470"></a>В случае, если содержание полипептидных антибиотиков менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

<a id="p100471"></a>"не обнаружено (менее 0,01 мг/кг*)",

<a id="p100472"></a>где * 0,01 мг/кг - предел количественного обнаружения полипептидных антибиотиков в молоке и молочных продуктах.


### <a id="p100473"></a>XIV. Контроль качества результатов


<a id="p100474"></a>14.1. Контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с [ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6)](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002).
<a id="p100475"></a>Периодичность и формы контроля определяются руководством по качеству.






## <a id="p100476"></a>БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЕ ССЫЛКИ


1. <a id="p100477"></a>Федеральный закон от 30.03.1999 N 52-ФЗ "О санитарно-эпидемиологическом благополучии населения".
2. <a id="p100478"></a>ГОСТ 12.1.004 "Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования".
3. <a id="p100479"></a>ГОСТ 12.1.005 "Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны".
4. <a id="p100480"></a>ГОСТ 12.1.007 "Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности".
5. <a id="p100481"></a>[ГОСТ Р ИСО 5725-(1 - 6)](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002) "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений".
6. <a id="p100482"></a>ГОСТ Р 53228 "Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания".
7. <a id="p100483"></a>[ГОСТ 1770](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74) (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) "Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия".
8. <a id="p100484"></a>[ГОСТ 29169-91](https://bukva.ai/docs/gost-29169-91) (ИСО 648-77) "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой".
9. <a id="p100485"></a>[ГОСТ 29227](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91) "Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования".
10. <a id="p100486"></a>[ГОСТ 5848](https://bukva.ai/docs/gost-5848-73) "Реактивы. Кислота муравьиная. Технические условия".
11. <a id="p100487"></a>[ГОСТ 6995](https://bukva.ai/docs/standart-gost-6995-77) "Реактивы. Метанол-яд. Технические условия".
12. <a id="p100488"></a>[ГОСТ Р 52501](https://bukva.ai/docs/gost-r-52501-2005) "Вода для лабораторного анализа. Технические условия".



<a id="p100489"></a>

---