МУК 4.1.3847-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации N-(2-амино-4,6-дихлорпиримидин-5-ил)формамида (АДХФ) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 02.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.3847-23. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика измерений массовой концентрации N-(2-амино-4,6-дихлорпиримидин-5-ил)формамида (АДХФ) в воздухе рабочей зоны методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.3847-23. https://bukva.ai/docs/metodika-muk-4-1-3847-23
(утв. Роспотребнадзором 02.02.2023)
Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главный государственный санитарный врач Российской Федерации А. Ю. Попова 2 февраля 2023 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИКА ИЗМЕРЕНИЙ МАССОВОЙ КОНЦЕНТРАЦИИ N-(2-АМИНО-4,6-ДИХЛОРПИРИМИДИН-5-ИЛ)ФОРМАМИДА (АДХФ) В ВОЗДУХЕ РАБОЧЕЙ ЗОНЫ МЕТОДОМ ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ МУК 4.1.3847-23
1. Разработаны АО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ» (Голубева М.И., Крымова Л.И.).
2. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой «2» февраля 2023 г.
I. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ И ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ
1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее — ВЭЖХ) для измерений массовой концентрации N-(2-амино-4,6-дихлорпиримидин-5-ил)формамида (далее — АДХФ) в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 0,20 — 1,6 мг/м3.
1.2. МУК предназначены для органов и организаций Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, а также могут быть использованы организациями, осуществляющими исследования в области качества и безопасности воздуха рабочей зоны по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны.
1.3 МУК носят рекомендательный характер.
II. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА
2.1 Физико-химические свойства АДХФ.
Эмпирическая формула C5H4Cl2N4O.
Регистрационный номер CAS 171887-03-9.
АДХФ — белый или светло-желтый кристаллический порошок с температурой плавления плюс 250 °C, растворим в диметилформамиде.
Агрегатное состояние в воздухе — аэрозоль.
2.2 Токсикологическая характеристика АДХФ:
- исходный продукт синтеза абакавира сульфата, противовирусного препарата, нуклеозидного ингибитора обратной транскриптазы ВИЧ;
- обладает общетоксическим и кожно-резорбтивным действием, оказывает умеренное раздражающее действие на слизистые оболочки глаз.
III. МЕТРОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
3.1. При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой, при выполнении измерений массовой концентрации АДХФ значения погрешности (и ее составляющих) результатов измерений, не превышает значений, приведенных в таблице 1, для соответствующего диапазона концентраций (при доверительной вероятности P = 0,95).
Метрологические характеристики методики
IV. МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ
4.1. Измерение массовой концентрации АДХФ выполняют методом ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектированием. Метод основан на разделении АДХФ и других компонентов анализируемой смеси на хроматографической колонке, заполненной сорбентом с последующей регистрацией АДХФ с помощью ультрафиолетового детектора. Сигнал детектора прямо пропорционален концентрации АДХФ в анализируемой пробе.
Измерение проводят при длине волны 240 нм.
Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.
Минимально определяемое содержание АДХФ в анализируемом объеме пробы — 0,02 мкг.
Нижний предел измерения массовой концентрации АХПФ в воздухе — 0,2 мг/м3 (при отборе 50 дм3 воздуха).
Метод специфичен в условиях синтеза абакавира сульфата. Измерению не мешает натрия гидрокарбонат.
V. СРЕДСТВА ИЗМЕРЕНИЙ, РЕАКТИВЫ, ВСПОМОГАТЕЛЬНЫЕ УСТРОЙСТВА И МАТЕРИАЛЫ
5.1 Средства измерений:
- хроматограф жидкостной с ультрафиолетовым детектором, термостатом колонки и системой сбора и обработки хроматографических данных;
- весы лабораторные с наибольшим пределом взвешивания 200 г, диапазон взвешивания по шкале 1 — 100 мг, цена деления шкалы 1 мг, погрешность взвешивания по шкале +/- 0,2 мг, ГОСТ OIML R 76-1;
- аспирационное устройство двухканальное с диапазоном расхода 2,0 — 20 дм3/мин и пределом допустимой погрешности +/- 5%, ТУ 4215-000-11696625;
- колбы мерные, 2-50-2, 2-100-2, 2-1000-2, 2-2000-2, ГОСТ 1770;
- пипетки 1-1-2-1, 1-1-2-5, 1-2-2-10, ГОСТ 29227;
- пробирки мерные с пришлифованными пробками, П-2-10-14/23 ХС, ГОСТ 1770;
- цилиндры мерные 1-100, 1-1000-1, ГОСТ 1770;
- микрошприц для хроматографии, вместимость 0,05 см3, ТУ 4215-002-84030495;
- иономер лабораторный с пределом pH от -1 до +19 ед., ГОСТ 22261.
Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
5.2 Реактивы:
- АДХФ с содержанием основного вещества не менее 98,0% в пересчете на сухое вещество. Сертификат анализа 08.05.2016; спецификация СПс-ОКК-001-01;
- ацетонитрил особо чистый, ТУ 6-09-14-2167;
- натрий фосфорнокислый однозамещенный дигидрат, чистый для анализа, ГОСТ 245;
- натрий 1-гептансульфонат моногидрат для хроматографии, CAS: 22767-50-6;
- O-фосфорная кислота, химически чистая, 85% раствор, плотность \rho = 1,698\text{г}/\text{см}^{3} , ГОСТ 6552;
- вода дистиллированная, ГОСТ Р 58144;
- вода особо чистая, ТУ 6-09-2502.
Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.
5.3 Вспомогательные устройства и материалы:
- колонка аналитическая, размером 250 мм x 4,6 мм, заполненная силикагелем высокой чистоты серии 3 с размером частиц 5 мкм;
- аналитические аэрозольные фильтры гидрофобные на основе перхлорвинила с площадью рабочей поверхности 10 см2, ТУ 95-1892;
- фильтродержатели, ТУ 95-1021;
- мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм, ТУ 9471-002-10471723;
- бюксы стеклянные, СН 50/30; ГОСТ 25336;
- палочки стеклянные, ГОСТ 25336;
- воронки химические, ГОСТ 25336;
- ультразвуковая ванна, ГОСТ 12.2.051;
- шкаф сушильный, ТУ 61-1-721.
Примечание. Допускается использование оборудования, вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.
VI. ТРЕБОВАНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ
6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007, ГОСТ 12.1.005.
6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004.
6.3. При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.
6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов <1>.
<1> Таблицы 2.1, 2.2 СанПиН 1.2.3685-21 «Гигиенические нормативы и требования к обеспечению безопасности и (или) безвредности для человека факторов среды обитания», утвержденных постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 28.01.2021 № 2 (зарегистрировано в Минюсте России 29.01.2021 регистрационный № 62296).
VII. КВАЛИФИКАЦИЯ ОПЕРАТОРА
7.1. Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на жидкостном хроматографе, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.
VIII. УСЛОВИЯ ИЗМЕРЕНИЙ
8.1 Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:
- <a id="p100088"></a>температура воздуха плюс (20 +/- 5) °C;
- <a id="p100089"></a>атмосферное давление (84,0 - 106,7) кПа;
- <a id="p100090"></a>относительная влажность воздуха, не более 80%.
8.2. Выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.
IX. ПОДГОТОВКА К ВЫПОЛНЕНИЮ ИЗМЕРЕНИЙ
9.1. Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка жидкостного хроматографа, установление градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.
9.2. Приготовление основного раствора АДХФ с массовой концентрацией 500 мкг/см3: основной раствор АДХФ с массовой концентрацией 500 мкг/см3 готовят растворением 0,0500 +/- 0,0002 г АДХФ в 70 см3 подвижной фазы в мерной колбе вместимостью 100 см3 и помещают в ультразвуковую ванну на 20 минут для лучшего растворения вещества. Затем раствор в колбе доводят до метки подвижной фазой и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.
9.3. Приготовление рабочего раствора АДХФ с массовой концентрацией 100 мкг/см3: рабочий раствор АДХФ с массовой концентрацией 100 мкг/см3 готовят разбавлением 10,0 см3 основного раствора АДХФ подвижной фазой в мерной колбе вместимостью 50 см3. Раствор используют свежеприготовленным.
9.4. Приготовление раствора А: в мерную колбу вместимостью 1000 см3 вносят 7,8 г натрия фосфорнокислого однозамещенного дигидрата и 2,5 г натрия 1-гептансульфоната моногидрата, растворяют в воде особо чистой, доводят до метки водой особо чистой и тщательно перемешивают. Устанавливают pH полученного раствора равным 2,6 с потенциометрическим контролем путем прибавления o-фосфорной кислоты с помощью пипетки вместимостью 1 см3.
9.5. Приготовление подвижной фазы: смесь ацетонитрила и раствора А с объемным соотношением (3:40): в мерную колбу вместимостью 2000 см3 наливают 75 см3 ацетонитрила и 1000 см3 раствора А (pH = 2,6) и тщательно перемешивают. Перед использованием подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют. Срок хранения раствора 1 неделя в хорошо укупоренной таре в защищенном от света месте.
9.6. Подготовку хроматографа проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.
Установление градуировочной характеристики
9.7. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пиков (приборные единицы) от содержания АДХФ в анализируемом объеме градуировочных растворов, устанавливают по методу абсолютной градуировки по шести сериям измерений по шести концентрациям вещества в каждой серии и контрольного раствора № 0 согласно таблице 2.
Растворы для установления градуировочной характеристики при определении АДХФ
На аэрозольные фильтры, помещенные в бюксы, пипеткой вместимостью 1 см3 наносят основной раствор АДХФ с массовой концентрацией 500 мкг/см3 и рабочий раствор АДХФ с массовой концентрацией 100 мкг/см3 в соответствии с таблицей 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре, затем, используя пипетку вместимостью 5,0 см3, приливают по 5,0 см3 подвижной фазы и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры отжимают, растворы сливают в мерные пробирки вместимостью 10 см3. Фильтры повторно обрабатывают 5,0 см3 подвижной фазы и оставляют на 15 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы сливают в те же пробирки, объем доводят до 10,0 см3 подвижной фазой. Далее растворы фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографические виалы. Аналогично обрабатывается чистый аэрозольный фильтр (контрольный раствор № 0, таблица 2).
Инжектируют в хроматограф по 0,02 см3 каждого из градуировочных растворов.
По полученным данным строят градуировочную характеристику зависимости площади пика (приборные единицы) от содержания АДХФ в анализируемом объеме градуировочных растворов (мкг).
9.8 Условия хроматографирования градуировочных растворов и анализируемых проб:
Контроль стабильности градуировочной характеристики
9.9. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.
Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества по п. 9.7 (соответствующих началу, середине и концу диапазона измерений) и анализируют в точном соответствии с методикой.
Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:
\frac{|S_{\text{изм}} - S_{\text{гр}}|}{S_{\text{гр}}} \cdot 100 \leq \text{К}_{\text{гр}}, (1)
где: Sизм, Sгр — значение площади пика (приборные единицы) АДХФ в образце для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике соответственно;
Кгр — норматив контроля, \text{К}_{\text{гр}} = 0,5 \cdot \delta ,
где: \pm \delta — границы относительной погрешности, % (таблица 1).
Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное хроматографирование этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.
Если градуировочная характеристика не стабильна, условие (1) не выполняется для двух или более образцов градуировочных растворов, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов (таблица 2) для установления градуировочной характеристики, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.
9.11. Отбор проб проводят в соответствии с методическими документами <2>.
<2> Глава 2 приложения 9 руководства Р 2.2.2006-05 «Общие методические требования к организации и проведению контроля содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны», утвержденного Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 29.07.2005; ГОСТ 12.1.005 «ССБТ. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны».
Одновременно отбирают две пробы. При отборе проб фиксируется температура воздуха и атмосферное давление.
Воздух с объемным расходом 5 дм3/мин аспирируют через аналитический аэрозольный фильтр с площадью рабочей поверхности 10 см2, помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой. Для определения массовой концентрации АДХФ на уровне 0,2 мг/м3 отбирают не менее 50 дм3 воздуха в течение 10 минут. Срок хранения отобранных проб в бюксах 1 сутки в холодильнике при температуре от плюс 2 до плюс 8 °C, в защищенном от света месте.
X. ВЫПОЛНЕНИЕ ИЗМЕРЕНИЙ
10.1. Аэрозольный фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс и с помощью пипетки вместимостью 5 см3 приливают 5,0 см3 подвижной фазы, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 минут для лучшего растворения вещества. Затем фильтр тщательно отжимают, раствор сливают в мерную пробирку вместимостью 10 см3. Фильтр повторно обрабатывают 5,0 см3 подвижной фазы, помешивая при этом стеклянной палочкой в течение 15 минут, фильтр снова тщательно отжимают и удаляют. Раствор сливают в ту же пробирку, объем раствора доводят до 10 см3 подвижной фазой. Далее раствор фильтруют через мембранный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм в хроматографическую виалу.
Хроматографический анализ проб выполняют в тех же условиях, что и хроматографирование градуировочных растворов.
Регистрируют не менее двух хроматограмм для каждой анализируемой пробы, соблюдая все условия, требуемые для градуировки хроматографической системы.
Устанавливают содержание АДХФ (в мкг) в анализируемом объеме пробы по градуировочной характеристике (п. 9.7).
XI. ВЫЧИСЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
11.1 Массовую концентрацию АДХФ в воздухе рабочей зоны C, мг/м3, вычисляют по формуле:
C = \frac{a \cdot B}{\text{б} \cdot V_{20}} , (2)
где: а — содержание вещества в анализируемом объеме раствора пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;
B — общий объем раствора пробы, см3;
б — анализируемый объем раствора пробы, см3;
V20 — объем воздуха, отобранный для анализа, приведенный к условиям в соответствии с ГОСТ 8.395 при температуре 293 °К (плюс 20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.), дм3 (приложение 1 к настоящим МУК).
За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:
\frac{2 \cdot |C_{1} - C_{2}| \cdot 100}{(C_{1} + C_{2})} \leq r, (3)
где: C1, C2 - результаты параллельных определений массовой концентрации АДХФ в воздухе рабочей зоны, мг/м3;
r — значение предела повторяемости, % (таблица 1).
Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.
XII. ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
12.1 Результат количественного химического анализа представляют в виде:
\overline{C} \pm 0,01 \cdot \delta \cdot \overline{C} , при P = 0,95,
где: \overline{C} — среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, мг/м3;
\pm \delta — границы относительной погрешности измерений, % (таблица 1).
Если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: «массовая концентрация АДХФ менее 0,2 мг/м3 (более 1,6 мг/м3)».
XIII. КОНТРОЛЬ РЕЗУЛЬТАТОВ ИЗМЕРЕНИЙ
13.1 Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:
а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;
б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сравнительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).
Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.
Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD0,95 по формуле:
\frac{2 \cdot |C_{cp1} - C_{cp2}| \cdot 100}{(C_{cp1} + C_{cp2})} \leq CD_{0,95}, (4)
где: Cср1, Cср2 — средние значения массовой концентрации АДХФ, полученные в первой и второй лабораториях, мг/м3;
CD0,95 — значение критической разности, % (таблица 1).
Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в п. 5.3.3 ГОСТ Р ИСО 5725-6.
При разногласиях руководствуются п. 5.3.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.
Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории
13.2. Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6 и показателя правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.
Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.
При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.
Приложение 1 к МУК 4.1.3847-23
ПРИВЕДЕНИЕ ОБЪЕМА ВОЗДУХА, ОТОБРАННОГО ДЛЯ АНАЛИЗА
Приведение объема воздуха, отобранного для анализа, в соответствии с ГОСТ 8.395 при температуре 293 °К (плюс 20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.), дм3.
V_{20} = \frac{V_{t} \cdot 293 \cdot P}{(273 + t) \cdot 101,33} ,
где: Vt — объем воздуха, отобранный для анализа, дм3;
P — барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);
t — температура воздуха в месте отбора пробы, °C.
Для удобства расчета V20 следует пользоваться таблицей коэффициентов (приложение 2 к настоящим МУК). Для приведения воздуха к температуре 293 °К (плюс 20 °C) и атмосферному давлению 101,33 кПа надо умножить Vt на соответствующий коэффициент.
Приложение 2 к МУК 4.1.3847-23
КОЭФФИЦИЕНТЫ ДЛЯ ПРИВЕДЕНИЯ ОБЪЕМА ВОЗДУХА
Коэффициенты для приведения объема воздуха, отобранного для анализа, в соответствии с ГОСТ 8.395 при температуре 293 °К (плюс 20 °C) и атмосферном давлении 101,33 кПа (760 мм рт. ст.)