---
title: "\"МУК 4.1.2677-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика выполнения измерений остаточного содержания протиоконазола по метаболиту протиоконазол-дестио в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания\""
number: "МУК 4.1.2677-10"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/metodika-muk-4-1-2677-10"
---

## "МУК 4.1.2677-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика выполнения измерений остаточного содержания протиоконазола по метаболиту протиоконазол-дестио в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

# "МУК 4.1.2677-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика выполнения измерений остаточного содержания протиоконазола по метаболиту протиоконазол-дестио в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания"

(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 N 299).
> Документ [введен](#p100002) в действие с 1 октября 2010 года.


<div align="right">

<a id="p100001"></a>Утверждаю<br>
Руководитель Федеральной<br>
службы по надзору в сфере<br>
защиты прав потребителей<br>
и благополучия человека,<br>
Главный государственный<br>
санитарный врач<br>
Российской Федерации<br>
**Г.Г.ОНИЩЕНКО**

</div>

2 августа 2010 года


#### <a id="p100003"></a>4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ


<a id="p100004"></a>**МЕТОДИКА ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЙ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ**
**ПРОТИОКОНАЗОЛА ПО МЕТАБОЛИТУ ПРОТИОКОНАЗОЛ-ДЕСТИО В СЕМЕНАХ,**
**МАСЛЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ**
**ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ**

<a id="p100005"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ**

<div align="right">

**МУК 4.1.2677-10**

<a id="p100002"></a>Дата введения

</div>

1 октября 2010 года

1. <a id="p100006"></a>Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 N 1).
2. <a id="p100007"></a>Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.
3. <a id="p100008"></a>Введены впервые.


## 1. <a id="p100009"></a>Назначение и область применения


<a id="p100010"></a>    Настоящий  документ  устанавливает  процедуру  измерений  массовой доли
протиоконазола по метаболиту протиоконазол-дестио в семенах и масле рапса в
                         -1
диапазоне 0,02 - 0,2 млн.   (мг/кг), в  зеленой  массе  рапса  в  диапазоне
               -1
0,05 - 0,5 млн.   (мг/кг) методом капиллярной газожидкостной хроматографии.
<a id="p100011"></a>Название вещества по ИСО: протиоконазол.
<a id="p100012"></a>Название вещества по ИЮПАК: 2-[(2RS)-2-(1-хлорциклопропил)-3-(2-хлорфенил)-2-оксипропил]-2Н-1,2,4-триазол-3(4Н)-тион.
<a id="p100013"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100014"></a>    C  H  Cl N OS.
     14 15  2 3
<a id="p100015"></a>    Мол. масса: 344,3.
<a id="p100016"></a>    Бесцветное  или светло-бежевое твердое вещество без запаха. Температура
                                                                     -7
плавления:  139,1  -  144,5  °C.  Давление паров при 20 °C: << 4 x 10   Па.
Коэффициент распределения н-октанол/вода: K   log P = 4,16 (pH 4), 3,82 (pH
                                           ow
7)  и  2,0  (pH  9).  Растворимость  (г/куб. дм) при 20 °C: ацетон - > 250,
этилацетат  -  >  250,  дихлорметан - 88, ацетонитрил - 69; растворимость в
воде - 0,005 (pH 4), 0,3 (pH 8) и 2,0 (pH 9).
<a id="p100017"></a>    Вещество  стабильно  при   хранении   на  воздухе,  а  также  в  кислой
(DT   = 120 дней) и щелочной (DT   = > 1 года) средах.
   50                           50
<a id="p100018"></a>    В присутствии света  в  водных  фотолитических  условиях  протиоконазол
достаточно быстро деградирует с периодом полураспада 47,7 часа.
<a id="p100019"></a>    Краткая токсикологическая характеристика
                                                                         -1
<a id="p100020"></a>    Острая  пероральная  токсичность  (LD  )  для  крыс - более 6200 млн.
                                         50
                                                                         -1
(мг/кг);  острая дермальная токсичность (LD  ) для крыс - более 2000 млн.
                                           50
(мг/кг);  острая  ингаляционная  токсичность  (LC  )  для крыс - более 4990
                                                 50
мг/куб. м воздуха.
<a id="p100021"></a>    Протиоконазол  не  оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую
оболочку  глаз,  не  обладает эмбриотоксическим или тератогенным действием.
LC   для рыб - 1,83 мг/куб. дм (96 ч).
  50
<a id="p100022"></a>    Фунгицид нетоксичен для птиц, пчел, дождевых червей, дафний и почвенных
микроорганизмов.
<a id="p100023"></a>    В России установлены следующие гигиенические нормативы:
                      -1
<a id="p100024"></a>    ДСД  -  0,05  млн.   (мг/кг) массы тела человека; ПДК в воде водоемов -
                                          -1
0,03  мг/куб.  дм;  ОДК в почве - 0,1 млн.   (мг/кг); МДУ в семенах и масле
                 -1
рапса - 0,05 млн.   (мг/кг).
<a id="p100025"></a>Основной метаболит протиоконазола: протиоконазол-дестио (SXX 0665)
<a id="p100026"></a>альфа-(1-хлорциклопропил)-альфа-(2-хлорфенил)метил-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол (С.А.)
<a id="p100027"></a>Структурная формула (не приводится).
<a id="p100028"></a>    C  H  Cl N O.
     14 15  2 3
<a id="p100029"></a>    Мол. масса: 312,2.
<a id="p100030"></a>    Бесцветный   порошок  без  запаха.  Температура  плавления:  108,5  °C.
                                         -7
Давление  паров  при  20  °C:  2,7  x  10    Па.  Коэффициент распределения
н-октанол/вода:  K    log  P  =  3,04. Растворимость (г/куб. дм) при 20 °C:
                  ow
гексан  -  3,  толуол - 84, ацетон - 100, ацетонитрил - 43, дихлорметан - >
200, вода - 0,051.
<a id="p100031"></a>    Метаболит стабилен в кислой и щелочной средах (DT   = > 500 часов).
                                                     50
<a id="p100032"></a>Область применения препарата
<a id="p100033"></a>Протиоконазол - фунгицид системного действия из группы ингибиторов синтеза эргостерина. Вещество обладает защитным, искореняющим и лечебным действием. При обработке вегетирующих растений оно эффективно подавляет развитие возбудителей ржавчины, мучнистой росы, септориоза, фузариоза колоса, ломкости стеблей и пятнистостей листьев на посевах ячменя, пшеницы и других культур, а при протравливании семян защищает последние от заражения твердой и пыльной головней и фузариозной корневой гнилью.
<a id="p100034"></a>Применяется в России в качестве фунгицида системного действия в составе смесевых препаратов для протравливания зерна колосовых культур и обработки вегетирующих растений зерновых злаков и рапса с нормой расхода (37 - 50) г д.в./т семян или (80 - 100) г д.в./га.
<a id="p100035"></a>Протиоконазол весьма лабильное вещество и при поступлении в растение очень быстро метаболизируется до более устойчивого соединения - протиоконазол-дестио (альфа-(1-хлорциклопропил)-альфа-(2-хлорфенил)метил-1Н-1,2,4-1-этанол). В связи с этим разработан метод, позволяющий осуществлять контроль за содержанием остаточных количеств протиоконазола в зеленой массе растений, семенах и масле рапса по протиоконазол-дестио.


## 2. <a id="p100036"></a>Метрологические характеристики


<a id="p100037"></a>При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.

<a id="p100038"></a>Таблица 1


<table>
<colgroup><col width="11%"><col width="16%"><col width="15%"><col width="15%"><col width="15%"><col width="12%"><col width="17%"></colgroup>
<tr><td>Анализируемый объект</td><td>Диапазон измерений содержания протиоконазол-дестио, -1 млн. (мг/кг)</td><td>Показатель точности (границы относительной погрешности), +/- дельта, %, при P = 0,95</td><td>Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), сигма , % r</td><td>Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), сигма , % R</td><td>Предел повторяемости, r, %, P = 0,95, n = 2</td><td>Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, CD , % 0,95 (n = n = 2) 1 2 P = 0,95</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Зеленая масса</td><td>От 0,05 до 0,10 вкл.</td><td>34</td><td>6</td><td>9</td><td>17</td><td>22</td></tr>
<tr><td>Св. 0,10 до 0,5 вкл.</td><td>23</td><td>4</td><td>6</td><td>11</td><td>15</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Семена</td><td>От 0,02 до 0,10 вкл.</td><td>50</td><td>10</td><td>15</td><td>28</td><td>37</td></tr>
<tr><td>Св. 0,10 до 0,20 вкл.</td><td>33</td><td>6</td><td>9</td><td>17</td><td>22</td></tr>
<tr><td rowspan="2">Масло</td><td>От 0,02 до 0,10 вкл.</td><td>57</td><td>10</td><td>15</td><td>28</td><td>37</td></tr>
<tr><td>Св. 0,10 до 0,20 вкл.</td><td>35</td><td>6</td><td>9</td><td>17</td><td>22</td></tr>
</table>



## 3. <a id="p100046"></a>Метод измерений


<a id="p100047"></a>Метод основан на экстракции метоболита протиоконазол-дестио из зеленой массы водным раствором ацетона, из семян и масла ацетонитрилом, очистке экстрактов, содержащих коэкстрактивные компоненты, перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с оксидом алюминия с последующим измерением содержания протиоконазол-дестио в очищенных экстрактах методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) при программировании температуры с термоионным детектором (ТИД) и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.
<a id="p100048"></a>В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.


## 4. <a id="p100049"></a>Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы



### <a id="p100050"></a>4.1. Средства измерений


<a id="p100051"></a>Газовый хроматограф "Кристалл 2000М" с ТИД на
азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше
         -14
2,82 x 10    г/с (СКБ "Хроматэк", Россия)
<a id="p100052"></a>Весы лабораторные общего назначения модели ВЛА-200 с
наибольшим пределом взвешивания 200 г ГОСТ 24104-2001
<a id="p100053"></a>Весы лабораторные общего назначения с наибольшим
пределом взвешивания 500 г ГОСТ 24104-2001
<a id="p100054"></a>Набор гирь ГОСТ 7328-2001
<a id="p100055"></a>Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100056"></a>Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2; 1-2-2-5;
1-2-2-10 [ГОСТ 29227-91](https://bukva.ai/docs/gost-29227-91)
<a id="p100057"></a>Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой
П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100058"></a>Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-500; 1-1000 [ГОСТ 1770-74](https://bukva.ai/docs/gost-1770-74)
<a id="p100059"></a>Шприц для ввода образцов для газового хроматографа
вместимостью 1 - 10 куб. мм ("Hamilton", США)


### <a id="p100060"></a>4.2. Реактивы


<a id="p100061"></a>Аналитический стандарт протиоконазол-дестио (SXX 0665) с
содержанием основного вещества 98,5% (Байер, Германия)
<a id="p100062"></a>Ацетон квалификации ч.д.а. ГОСТ 2603-79
<a id="p100063"></a>Гелий очищенный марки "А" (или азот)                        ТУ 51-940-80
<a id="p100064"></a>Ацетонитрил квалификации х.ч.                               ТУ 6-09-3534-87
<a id="p100065"></a>Вода дистиллированная или деионизованная ГОСТ 6709-72
<a id="p100066"></a>н-Гексан                                                    ТУ 6-09-3375
<a id="p100067"></a>Метилен хлористый (дихлорметан) квалификации х.ч. [ГОСТ 12794-80](https://bukva.ai/docs/standart-gost-12794-80)
<a id="p100068"></a>Натрия сульфат безводный квалификации х.ч. [ГОСТ 4166-76](https://bukva.ai/docs/gost-4166-76)
<a id="p100069"></a>Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат)
квалификации ч. [ГОСТ 22300-76](https://bukva.ai/docs/gost-22300-76)
<a id="p100070"></a>Оксид алюминия 90 (0,063 - 0,2 мм) для колоночной
хроматографии, нейтральный ("Мерк", Германия), I степени
активности


### <a id="p100071"></a>4.3. Вспомогательные устройства, материалы


<a id="p100072"></a>Гомогенизатор "Omni-mixer" ("Sorvall", США)
или гомогенизатор                                      МРТУ 42-1505
<a id="p100073"></a>Ванна ультразвуковая, модель D-50,
фирма "Branson Instr. Co." (США)
<a id="p100074"></a>Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с                   ТУ 64-1-2851-78
<a id="p100075"></a>Вата медицинская                                       ТУ 9393-001-00302238
<a id="p100076"></a>Воронки делительные вместимостью 100 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100077"></a>Воронки конусные диаметром 30 - 37 мм ГОСТ 25336-82
<a id="p100078"></a>Колбы круглодонные на шлифе вместимостью
50, 100 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100079"></a>Колонка кварцевая капиллярная ZB-1 длиной 20 м,
внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм,
неподвижная фаза SE-30, фирма "Phenomenex" (США)
<a id="p100080"></a>Колонка хроматографическая стеклянная
длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм
<a id="p100081"></a>Компрессор (СКБ "Хроматэк", Россия)
<a id="p100082"></a>Насос водоструйный вакуумный                           ГОСТ 10696-75
<a id="p100083"></a>Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или             ТУ 25-11-917-74
ротационный вакуумный испаритель B-169 фирмы "Buchi"
(Швейцария)
<a id="p100084"></a>Генератор водорода, модель SPE, фирма
"General Electric" (США)
<a id="p100085"></a>Стаканы химические вместимостью 100 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100086"></a>Стекловата
<a id="p100087"></a>Установка для перегонки растворителей
с дефлегматором [ГОСТ 9737-93](https://bukva.ai/docs/standart-gost-9737-93)
                                                       (ИСО 641-75)
<a id="p100088"></a>Фильтры бумажные "красная лента" обеззоленные          ТУ 6-09-2678-77
или фильтры из хроматографической бумаги
<a id="p100089"></a>Ватман 3ММ
<a id="p100090"></a>Воронка Бюхнера ГОСТ 9147-80
<a id="p100091"></a>Колба Бунзена вместимостью 250 куб. см ГОСТ 25336-82
<a id="p100092"></a>*Примечание.* Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 4.


## 5. <a id="p100093"></a>Требования безопасности, охраны окружающей среды


<a id="p100094"></a>5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.
<a id="p100095"></a>5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.
<a id="p100096"></a>5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
<a id="p100097"></a>5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.


## 6. <a id="p100098"></a>Требования к квалификации операторов


<a id="p100099"></a>К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на газовом хроматографе.
<a id="p100100"></a>К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией "лаборант", имеющего опыт работы в химической лаборатории.


## 7. <a id="p100101"></a>Условия измерений



#### <a id="p100102"></a>7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия.

<a id="p100103"></a>Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:
- <a id="p100104"></a>температура воздуха (20 +/- 5) °C;
- <a id="p100105"></a>атмосферное давление (84 - 106) кПа;
- <a id="p100106"></a>относительная влажность воздуха не более 80%.

#### <a id="p100107"></a>7.2 Условия хроматографического анализа:

<a id="p100108"></a>Температура термостата испарителя 260 °C.
<a id="p100109"></a>Температура детектора 300 °C.
<a id="p100110"></a>Режим программирования температуры колонки
<a id="p100111"></a>Начальная температура 150 °C (2 мин.), скорость подъема температуры до 230 °C (0 мин.) 20 °C/мин.;
<a id="p100112"></a>от 230 °C до 240 °C (4 мин.) скорость подъема температуры 3 °C/мин.;
<a id="p100113"></a>от 240 °C до 270 °C (20 - 30 мин.) скорость подъема температуры 20 °C/мин.
<a id="p100114"></a>Расход газов:
<a id="p100115"></a>газа-носителя (гелий, азот) 2,2 куб. см/мин.;
<a id="p100116"></a>водорода к ТИД 12,2 куб. см/мин.;
<a id="p100117"></a>воздуха к ТИД 200 куб. см/мин.
<a id="p100118"></a>Деление потока 1:1.
<a id="p100119"></a>Объем вводимой пробы 1 куб. мм.
<a id="p100120"></a>Время удерживания протиоконазол-дестио 7 мин. 20 с +/- 0,2 мин.
<a id="p100121"></a>Линейный диапазон детектирования 0,1 - 2,0 нг.


## 8. <a id="p100122"></a>Подготовка к выполнению измерений


<a id="p100123"></a>Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, градуировка хроматографа, подготовка колонки с оксидом алюминия.


### <a id="p100124"></a>8.1. Очистка органических растворителей



##### <a id="p100125"></a>8.1.1 Очистка н-гексана

<a id="p100126"></a>Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.

##### <a id="p100127"></a>8.1.2 Очистка этилацетата

<a id="p100128"></a>Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%
<a id="p100129"></a>Навеску (5 +/- 0,1) г натрия углекислого в конической колбе растворяют в 40 - 60 куб. см дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.
<a id="p100130"></a>Срок хранения раствора 1 неделя.
<a id="p100131"></a>Этилацетат промывают последовательно раствором натрия углекислого с массовой долей 5%, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.

##### <a id="p100132"></a>8.1.3 Очистка ацетона

<a id="p100133"></a>    Ацетон  перегоняют  над  перманганатом  калия  и  поташом (на 1 куб. дм
ацетона 10 г KMnO  и 2 г K CO ).
                 4        2  3


### <a id="p100134"></a>8.2. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта


<a id="p100135"></a>Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 - 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г оксида алюминия нейтрального III степени активности в 15 куб. см гексана (оксид алюминия III степени активности по Брокману получают добавлением 6% воды к навеске оксида алюминия фирмы "Мерк" (Германия) I степени активности). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 куб. см гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.


### <a id="p100136"></a>8.3. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания протиоконазол-дестио из колонки с оксидом алюминия


<a id="p100137"></a>При отработке методики или поступлении новой партии оксида алюминия проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания протиоконазол-дестио из колонки с оксидом алюминия.
<a id="p100138"></a>Готовят раствор гексан-этилацетат (85:15, по объему). Для этого в мерную колбу вместимостью 500 куб. см вносят 75 куб. см этилацетата и доводят объем раствора до метки гексаном. Срок хранения раствора 1 неделя.
<a id="p100139"></a>Готовят раствор гексан-этилацетат (7:3, по объему). Для этого в мерную колбу вместимостью 500 куб. см носят 150 куб. см этилацетата и доводят объем раствора до метки гексаном. Срок хранения раствора 1 неделя.
<a id="p100140"></a>В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см в этилацетате [(8.5.2)](#p100148) и отдувают растворитель током теплого воздуха. Остаток растворяют в 3 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с оксидом алюминия, подготовленную по [8.2](#p100134). Промывают колонку 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 40 куб. см смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему), отбирая последовательно по 10 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., а затем хроматографируют. Условия хроматографирования в соответствии с [7.2](#p100107).
<a id="p100141"></a>По результатам обнаружения протиоконазол-дестио в каждой из фракций определяют объем элюента, необходимого для полного вымывания протиоконазол-дестио из колонки.


### <a id="p100142"></a>8.4. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки


<a id="p100143"></a>Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °C и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 - 10 часов.


### <a id="p100144"></a>8.5. Приготовление градуированных растворов



##### <a id="p100145"></a>8.5.1 Исходный градуировочный раствор протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см

<a id="p100146"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0001) г протиоконазол-дестио, растворяют в 40 - 50 куб. см этилацетата, доводят этим же растворителем до метки, тщательно перемешивают.
<a id="p100147"></a>Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °C в течение 3-х месяцев.

##### <a id="p100148"></a>8.5.2 Градуировочный раствор протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (раствор N 1)

<a id="p100149"></a>В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного градуировочного раствора протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 100,0 мкг/куб. см [(8.5.1)](#p100145), разбавляют этилацетатом и доводят объем до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов N 2 - 5.
<a id="p100150"></a>Градуировочный раствор N 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °C в течение месяца.
<a id="p100151"></a>8.5.3. Градуировочные растворы протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 0,1 - 1,0 мкг/куб. см (растворы N 2 - 5)
<a id="p100152"></a>В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см [(8.5.2)](#p100148), доводят объем раствора до метки этилацетатом, тщательно перемешивают, получают градуировочные растворы N 2 - 5 с массовой концентрацией протиоконазол-дестио 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/куб. см, соответственно.
<a id="p100153"></a>Растворы готовят непосредственно перед использованием.


### <a id="p100154"></a>8.6. Градуировка хроматографа


<a id="p100155"></a>Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ x с) от массовой концентрации протиоконазол-дестио в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4 градуировочным растворам.
<a id="p100156"></a>В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора [(8.5.3)](#p100151) и анализируют при условиях хроматографирования по [7.2](#p100107). Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предел повторяемости r.


### <a id="p100157"></a>8.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики


<a id="p100158"></a>Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.
<a id="p100159"></a>Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.
<a id="p100160"></a>Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1)

                        |S    - S  |
                          изм    гр
<a id="p100161"></a>                        ------------ x 100 <= K  ,                      (1)
                            S                  гр
                             гр

<a id="p100162"></a>    где:
<a id="p100163"></a>    S   ,  S    -  значение площади пика протиоконазол-дестио в образце для
     изм    гр
контроля,   измеренное   и   найденное   по  градуировочной  характеристике
соответственно, усл. ед.;
<a id="p100164"></a>    K   - норматив контроля, K   = 0,5 x дельта,
     гр                       гр
<a id="p100165"></a> где +/- дельта - границы относительной погрешности, %, [(табл. 1)](#p100038).
<a id="p100166"></a>Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.
<a id="p100167"></a>Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.


## 9. <a id="p100168"></a>Отбор, подготовка и хранение проб


<a id="p100169"></a>Отбор проб производят в соответствии с "Унифицированными [правилами](https://bukva.ai/docs/2051-79) отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными [ГОСТ 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979) "Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб" и [ГОСТ 8988-77](https://bukva.ai/docs/gost-8988-77) "Масло рапсовое. ТУ".
<a id="p100170"></a>Пробы зеленой массы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более одного дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре -18 °C до анализа. Пробы семян высушивают до влажности (в соответствии [ГОСТ 10852-86](https://bukva.ai/docs/3979)) и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу. Пробы масла хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °C. В некоторых случаях масло получают из семян рапса экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.


### <a id="p100171"></a>9.1. Экстракция протиоконазол-дестио



##### <a id="p100172"></a>9.1.1 Экстракция протиоконазол-дестио из зеленой массы

<a id="p100173"></a>Приготовление водного раствора ацетона (8:2, по объему)
<a id="p100174"></a>В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 400 куб. см ацетона и доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой.
<a id="p100175"></a>Срок хранения раствора 1 неделя.
<a id="p100176"></a>Образец измельченного растительного материала массой 20 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему) и гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему). Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/4 его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Далее проводят очистку экстракта по [9.2](#p100181).

##### <a id="p100177"></a>9.1.2 Экстракция протиоконазол-дестио из семян

<a id="p100178"></a>Образец размолотых семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на аппарат для встряхивания на 1 ч. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 25 куб. см ацетонитрила. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/2 его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 10 куб. см гексана, насыщенного ацетонитрилом, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После расслоения фаз гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию переносят в круглодонную колбу, куда приливают 20 куб. см деионизованной воды. Дальнейшую очистку экстракта проводят по [9.2](#p100181).

##### <a id="p100179"></a>9.1.3 Экстракция протиоконазол-дестио из масла

<a id="p100180"></a>К образцу масла массой 5 г, помещенного в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 10 куб. см гексана и перемешивают. К раствору добавляют 50 куб. см ацетонитрила и колбу помещают на встряхиватель на 30 мин. Верхний ацетонитрильный слой декантируют в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см через слой ваты, помещенной в конусную воронку. К оставшемуся в колбе маслу приливают 30 куб. см ацетонитрила и операцию экстракции повторяют. После декантации ацетонитрильного слоя вату промывают 10 куб. см ацетонитрила, которые объединяют с фильтратом. Объединенную ацетонитрильную фазу переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 10 куб. см гексана, насыщенного ацетонитрилом, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После расслоения фаз гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию фильтруют через слой ваты, помещенный в конусную воронку, в круглодонную колбу. Содержимое колбы упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Далее проводят очистку экстракта по [9.3](#p100183).


### <a id="p100181"></a>9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей


<a id="p100182"></a>Отобранные аликвоты экстрактов зеленой массы и семян, полученные по [9.1.1](#p100172) и [9.1.2](#p100177) и помещенные в круглодонные колбы, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (4 - 6 куб. см) при температуре не выше 40 °C. К водному остатку добавляют 20 куб. см деионизованной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 30 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 30 и 20 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °C и подвергают дополнительной очистке на колонке с оксидом алюминия по 9.3.


### <a id="p100183"></a>9.3. Очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия


<a id="p100184"></a>Остаток в круглодонной колбе, полученный по [9.1.3](#p100179) и [9.2](#p100181), растворяют в 2 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по [8.2](#p100134). Колбу обмывают 2 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 20 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Протиоконазол-дестио элюируют с колонки 15 куб. см смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) при анализе экстракта масла и 25 куб. см этой же смеси при анализе экстрактов семян и зеленой массы, собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Остаток экстракта зеленой массы растворяют в 2,5 куб. см, а семян и масла - в 1 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют растворы на содержание протиоконазол-дестио. Условия хроматографирования по [7.2](#p100107).
<a id="p100185"></a>Полнота извлечения протиоконазол-дестио при проведении всех операций подготовки пробы не менее 82%.


## 10. <a id="p100186"></a>Выполнение измерений


<a id="p100187"></a>10.1. В испаритель хроматографа вводят 1 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы ([9.1](#p100171) - 9.3), анализируют при условиях [7.2](#p100107) и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.
<a id="p100188"></a>10.2. Для каждого образца повторяют операции по ([9.1](#p100171) - 9.3), [10.1](#p100187).


## 11. <a id="p100189"></a>Обработка результатов измерений


<a id="p100190"></a>11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используют программу сбора и обработки хроматографической информации "Хроматэк Аналитик", версия 1.20.
<a id="p100191"></a>Альтернативная обработка результатов
                                                  -1
<a id="p100192"></a>    Массовую  долю  протиоконазол-дестио  X,  млн.  ,  в  семенах,  масле и
зеленой массе рапса рассчитывают по формуле (2):

                                  S  x A x V
                                   1
<a id="p100193"></a>                             X = -------------,                         (2)
                                 0,82 x S  x m
                                         0

<a id="p100194"></a>    где:
<a id="p100195"></a>    S  - площадь пика протиоконазол-дестио в образце, мВ x с;
     1
<a id="p100196"></a>    S  - площадь пика в градуировочном растворе, мВ x с;
     0
<a id="p100197"></a>    A      -     массовая     концентрация     градуировочного     раствора
протиоконазол-дестио, мкг/куб. см;
<a id="p100198"></a>    V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
<a id="p100199"></a>    m  - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта,
использованной  для  очистки  на  колонке с оксидом алюминия и последующего
хроматографического определения, г.
<a id="p100200"></a>При расчете содержания протиоконазол-дестио в эквивалентах протиоконазола полученное значение X умножают на 1,1.
<a id="p100201"></a>11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (3):

                       2 x |X  - X | x 100
                             1    2
<a id="p100202"></a>                       ------------------- <= r,                        (3)
                            (X  + X )
                              1    2

<a id="p100203"></a>    где:
<a id="p100204"></a>    X ,   X    -   результаты   параллельных   определений   массовой  доли
     1     2
                          -1
протиоконазол-дестио, млн.   (мг/кг);
<a id="p100205"></a> r - значение предела повторяемости, % [(табл. 1)](#p100038).
<a id="p100206"></a>Если [условие (3)](#p100202) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.

#### <a id="p100207"></a>11.3 Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:

                  _                     _
<a id="p100208"></a>                  X +/- 0,01 x дельта x X, при P = 0,95,

<a id="p100209"></a>    где:
    _
<a id="p100210"></a>    X   -   среднее  арифметическое  значение  результатов  n  определений,
                                    -1
признанных приемлемыми по [11.2](#p100201), млн. (мг/кг);
<a id="p100211"></a> +/- дельта - границы относительной погрешности измерений, % [(табл. 1)](#p100038).
<a id="p100212"></a>В случае, если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале:
                                                                  -1
<a id="p100213"></a>    "массовая  доля протиоконазол-дестио в семенах менее 0,02 млн.   (более
        -1
0,2 млн.  )";
                                                                  -1
<a id="p100214"></a>    "массовая  доля  протиоконазол-дестио  в масле менее 0,02 млн.   (более
        -1
0,2 млн.  )";
                                                                         -1
<a id="p100215"></a>    "массовая  доля  протиоконазол-дестио в зеленой массе менее 0,05 млн.
               -1
(более 0,5 млн.  )".
<a id="p100216"></a>Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал протиоконазол-дестио, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют этилацетатом, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой. При расчете содержания протиоконазол-дестио учитывают разбавление.


## 12. <a id="p100217"></a>Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости



#### <a id="p100218"></a>12.1 Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

<a id="p100219"></a>а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;
<a id="p100220"></a>б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).
<a id="p100221"></a>12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.
<a id="p100222"></a>    12.3.   Приемлемость   результатов   измерений,   полученных   в   двух
лабораториях  оценивают  сравнением разности этих результатов с критической
разностью CD     по формуле (4):
            0,95

                  2 x |X    - X   | x 100
                        ср1    ср2
<a id="p100223"></a>                  ----------------------- <= CD    ,                    (4)
                       (X    + X   )           0,95
                         ср1    ср2

<a id="p100224"></a>    где:
<a id="p100225"></a>    X   ,  X     -  средние  значения  массовой  доли протиоконазол-дестио,
     ср1    ср2
                                               -1
полученные в первой и второй лабораториях, млн.  ;
<a id="p100226"></a> CD - значение критической разности, % [(табл. 1)](#p100038).
      0,95
<a id="p100227"></a>Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 [(5.3.3)](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002#p100287).
<a id="p100228"></a>При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 [(5.3.4)](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002#p100294).


## 13. <a id="p100229"></a>Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории


<a id="p100230"></a>Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по [ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002), используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по [6.2.2](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002#p100341) ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по [6.2.4](https://bukva.ai/docs/gost-r-iso-5725-6-2002#p100518) ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.
<a id="p100231"></a>Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.
<a id="p100232"></a>Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.
<a id="p100233"></a>При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.


## 14. <a id="p100234"></a>Разработчики


<a id="p100235"></a>ГНУ ВНИИ фитопатологии.



<a id="p100236"></a>

---