МУК 4.1.2677-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика выполнения измерений остаточного содержания протиоконазола по метаболиту протиоконазол-дестио в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания
Актуально на 02.11.2026.
Как цитировать: "МУК 4.1.2677-10. 4.1. Методы контроля. Химические факторы. Методика выполнения измерений остаточного содержания протиоконазола по метаболиту протиоконазол-дестио в семенах, масле и зеленой массе рапса методом капиллярной газожидкостной хроматографии. Методические указания". МУК 4.1.2677-10. https://bukva.ai/docs/metodika-muk-4-1-2677-10
(утв. Роспотребнадзором 02.08.2010)
Примечание
Документ включен в Перечень методов (методик) определения остаточных количеств действующих веществ пестицидов в продукции (товарах), подлежащий государственному санитарно-эпидемиологическому надзору (контролю) на таможенной границе и таможенной территории Евразийского экономического союза (Решение Комиссии Таможенного союза от 28.05.2010 № 299). Документ введен в действие с 1 октября 2010 года.
Утверждаю
Руководитель Федеральной
службы по надзору в сфере
защиты прав потребителей
и благополучия человека,
Главный государственный
санитарный врач
Российской Федерации
Г. Г. Онищенко
2 августа 2010 года
4.1 МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
МЕТОДИКА ВЫПОЛНЕНИЯ ИЗМЕРЕНИЙ ОСТАТОЧНОГО СОДЕРЖАНИЯ ПРОТИОКОНАЗОЛА ПО МЕТАБОЛИТУ ПРОТИОКОНАЗОЛ-ДЕСТИО В СЕМЕНАХ, МАСЛЕ И ЗЕЛЕНОЙ МАССЕ РАПСА МЕТОДОМ КАПИЛЛЯРНОЙ ГАЗОЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
1 октября 2010 года
1. Рекомендованы к утверждению Комиссией по государственному санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 10.06.2010 № 1).
2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 2 августа 2010 г.
1. Назначение и область применения
Настоящий документ устанавливает процедуру измерений массовой доли протиоконазола по метаболиту протиоконазол-дестио в семенах и масле рапса в -1 диапазоне 0,02 — 0,2 млн. (мг/кг), в зеленой массе рапса в диапазоне -1 0,05 — 0,5 млн. (мг/кг) методом капиллярной газожидкостной хроматографии.
Название вещества по ИСО: протиоконазол.
Название вещества по ИЮПАК: 2-[(2RS)-2-(1-хлорциклопропил)-3-(2-хлорфенил)-2-оксипропил]-2Н-1,2,4-триазол-3(4Н)-тион.
Структурная формула (не приводится).
C H Cl N OS. 14 15 2 3
Бесцветное или светло-бежевое твердое вещество без запаха. Температура -7
плавления: 139,1 - 144,5 °C. Давление паров при 20 °C: << 4 x 10 Па. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 4,16 (pH 4), 3,82 (pH
ow
7) и 2,0 (pH 9). Растворимость (г/куб. дм) при 20 °C: ацетон - > 250, этилацетат - > 250, дихлорметан - 88, ацетонитрил - 69; растворимость в
воде — 0,005 (pH 4), 0,3 (pH 8) и 2,0 (pH 9).
Вещество стабильно при хранении на воздухе, а также в кислой (DT = 120 дней) и щелочной (DT = > 1 года) средах. 50 50 В присутствии света в водных фотолитических условиях протиоконазол
достаточно быстро деградирует с периодом полураспада 47,7 часа.
Краткая токсикологическая характеристика -1
Острая пероральная токсичность (LD ) для крыс — более 6200 млн. 50 -1 (мг/кг); острая дермальная токсичность (LD ) для крыс — более 2000 млн. 50 (мг/кг); острая ингаляционная токсичность (LC ) для крыс — более 4990 50 мг/куб. м воздуха.
Протиоконазол не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз, не обладает эмбриотоксическим или тератогенным действием. LC для рыб - 1,83 мг/куб. дм (96 ч).
50
Фунгицид нетоксичен для птиц, пчел, дождевых червей, дафний и почвенных микроорганизмов.
В России установлены следующие гигиенические нормативы: -1
ДСД — 0,05 млн. (мг/кг) массы тела человека; ПДК в воде водоемов — -1 0,03 мг/куб. дм; ОДК в почве — 0,1 млн. (мг/кг); МДУ в семенах и масле -1 рапса — 0,05 млн. (мг/кг).
Основной метаболит протиоконазола: протиоконазол-дестио (SXX 0665)
альфа-(1-хлорциклопропил)-альфа-(2-хлорфенил)метил-1Н-1,2,4-триазол-1-этанол (С.А.)
Структурная формула (не приводится).
C H Cl N O. 14 15 2 3
Бесцветный порошок без запаха. Температура плавления: 108,5 °C. -7
Давление паров при 20 °C: 2,7 x 10 Па. Коэффициент распределения н-октанол/вода: K log P = 3,04. Растворимость (г/куб. дм) при 20 °C:
ow
гексан — 3, толуол — 84, ацетон — 100, ацетонитрил — 43, дихлорметан — > 200, вода — 0,051.
Метаболит стабилен в кислой и щелочной средах (DT = > 500 часов). 50
Протиоконазол — фунгицид системного действия из группы ингибиторов синтеза эргостерина. Вещество обладает защитным, искореняющим и лечебным действием. При обработке вегетирующих растений оно эффективно подавляет развитие возбудителей ржавчины, мучнистой росы, септориоза, фузариоза колоса, ломкости стеблей и пятнистостей листьев на посевах ячменя, пшеницы и других культур, а при протравливании семян защищает последние от заражения твердой и пыльной головней и фузариозной корневой гнилью.
Применяется в России в качестве фунгицида системного действия в составе смесевых препаратов для протравливания зерна колосовых культур и обработки вегетирующих растений зерновых злаков и рапса с нормой расхода (37 — 50) г д.в./т семян или (80 — 100) г д.в./га.
Протиоконазол весьма лабильное вещество и при поступлении в растение очень быстро метаболизируется до более устойчивого соединения — протиоконазол-дестио (альфа-(1-хлорциклопропил)-альфа-(2-хлорфенил)метил-1Н-1,2,4-1-этанол). В связи с этим разработан метод, позволяющий осуществлять контроль за содержанием остаточных количеств протиоконазола в зеленой массе растений, семенах и масле рапса по протиоконазол-дестио.
2. Метрологические характеристики
При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой значение погрешности (и ее составляющих) результатов измерений не превышает значений, приведенных в табл. 1.
| Анализируемый объект | Диапазон измерений содержания протиоконазол-дестио, -1 млн. (мг/кг) | Показатель точности (границы относительной погрешности), +/- дельта, %, при P = 0,95 | Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), сигма , % r | Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), сигма , % R | Предел повторяемости, r, %, P = 0,95, n = 2 | Критическая разность для результатов анализа, полученных в двух лабораториях, CD , % 0,95 (n = n = 2) 1 2 P = 0,95 |
| Зеленая масса | От 0,05 до 0,10 вкл. | 34 | 6 | 9 | 17 | 22 |
| Св. 0,10 до 0,5 вкл. | 23 | 4 | 6 | 11 | 15 | |
| Семена | От 0,02 до 0,10 вкл. | 50 | 10 | 15 | 28 | 37 |
| Св. 0,10 до 0,20 вкл. | 33 | 6 | 9 | 17 | 22 | |
| Масло | От 0,02 до 0,10 вкл. | 57 | 10 | 15 | 28 | 37 |
| Св. 0,10 до 0,20 вкл. | 35 | 6 | 9 | 17 | 22 |
3. Метод измерений
Метод основан на экстракции метоболита протиоконазол-дестио из зеленой массы водным раствором ацетона, из семян и масла ацетонитрилом, очистке экстрактов, содержащих коэкстрактивные компоненты, перераспределением в системе несмешивающихся растворителей, а также на колонке с оксидом алюминия с последующим измерением содержания протиоконазол-дестио в очищенных экстрактах методом капиллярной газожидкостной хроматографии (ГЖХ) при программировании температуры с термоионным детектором (ТИД) и обработкой хроматограмм методом абсолютной градуировки.
В предлагаемых условиях анализа метод специфичен.
4. Средства измерений, вспомогательные устройства, реактивы и материалы
4.1. Средства измерений
Газовый хроматограф «Кристалл 2000М» с ТИД на азотсодержащие вещества с пределом детектирования не выше -14 2,82 x 10 г/с (СКБ «Хроматэк», Россия)
Весы лабораторные общего назначения модели ВЛА-200 с наибольшим пределом взвешивания 200 г ГОСТ 24104-2001
Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 500 г ГОСТ 24104-2001
Колбы мерные вместимостью 2-100-2, 2-1000-2 ГОСТ 1770-74
Пипетки градуированные 1-1-2-1; 1-1-2-2; 1-2-2-5; 1-2-2-10 ГОСТ 29227-91
Пробирки градуированные с пришлифованной пробкой П-2-5-0,1; П-2-10-0,2 ГОСТ 1770-74
Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100; 1-500; 1-1000 ГОСТ 1770-74
Шприц для ввода образцов для газового хроматографа вместимостью 1 — 10 куб. мм («Hamilton», США)
4.2. Реактивы
Аналитический стандарт протиоконазол-дестио (SXX 0665) с содержанием основного вещества 98,5% (Байер, Германия)
Ацетон квалификации ч.д.а. ГОСТ 2603-79
Гелий очищенный марки "А" (или азот) ТУ 51-940-80 Ацетонитрил квалификации х.ч. ТУ 6-09-3534-87
Вода дистиллированная или деионизованная ГОСТ 6709-72
Метилен хлористый (дихлорметан) квалификации х.ч. ГОСТ 12794-80
Натрия сульфат безводный квалификации х.ч. ГОСТ 4166-76
Этиловый эфир уксусной кислоты (этилацетат) квалификации ч. ГОСТ 22300-76
Оксид алюминия 90 (0,063 — 0,2 мм) для колоночной хроматографии, нейтральный («Мерк», Германия), I степени активности
4.3. Вспомогательные устройства, материалы
Гомогенизатор «Omni-mixer» («Sorvall», США) или гомогенизатор МРТУ 42-1505
Ванна ультразвуковая, модель D-50, фирма «Branson Instr. Co.» (США)
Аппарат для встряхивания типа АВУ-6с ТУ 64-1-2851-78 Вата медицинская ТУ 9393-001-00302238
Воронки делительные вместимостью 100 куб. см ГОСТ 25336-82
Воронки конусные диаметром 30 — 37 мм ГОСТ 25336-82
Колбы круглодонные на шлифе вместимостью 50, 100 куб. см ГОСТ 25336-82
Колонка кварцевая капиллярная ZB-1 длиной 20 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма «Phenomenex» (США)
Колонка хроматографическая стеклянная длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм
Компрессор (СКБ «Хроматэк», Россия)
Насос водоструйный вакуумный ГОСТ 10696-75 Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М или ТУ 25-11-917-74
ротационный вакуумный испаритель B-169 фирмы «Buchi» (Швейцария)
Генератор водорода, модель SPE, фирма «General Electric» (США)
Стаканы химические вместимостью 100 и 500 куб. см ГОСТ 25336-82
Установка для перегонки растворителей с дефлегматором ГОСТ 9737-93 (ИСО 641-75)
Фильтры бумажные «красная лента» обеззоленные ТУ 6-09-2678-77 или фильтры из хроматографической бумаги
Колба Бунзена вместимостью 250 куб. см ГОСТ 25336-82
Примечание. Допускается применение других средств измерений, вспомогательных устройств, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не хуже приведенных в разделе 4.
5. Требования безопасности, охраны окружающей среды
5.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.007-76, ГОСТ 12.1.005-88.
5.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009-90.
5.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.
5.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать ПДК (ОБУВ), установленных ГН 2.2.5.1313-03 и ГН 2.2.5.2308-07.
6. Требования к квалификации операторов
К выполнению измерений допускают специалистов, имеющих квалификацию не ниже лаборанта-исследователя с опытом работы на газовом хроматографе.
К проведению пробоподготовки допускают оператора с квалификацией «лаборант», имеющего опыт работы в химической лаборатории.
7. Условия измерений
7.1 При выполнении измерений соблюдают следующие условия.
Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу:
- температура воздуха (20 +/- 5) °C;
- атмосферное давление (84 — 106) кПа;
- относительная влажность воздуха не более 80%.
7.2 Условия хроматографического анализа:
Температура термостата испарителя 260 °C.
Режим программирования температуры колонки
Начальная температура 150 °C (2 мин.), скорость подъема температуры до 230 °C (0 мин.) 20 °C/мин.;
от 230 °C до 240 °C (4 мин.) скорость подъема температуры 3 °C/мин.;
от 240 °C до 270 °C (20 — 30 мин.) скорость подъема температуры 20 °C/мин.
газа-носителя (гелий, азот) 2,2 куб. см/мин.;
водорода к ТИД 12,2 куб. см/мин.;
воздуха к ТИД 200 куб. см/мин.
Объем вводимой пробы 1 куб. мм.
Время удерживания протиоконазол-дестио 7 мин. 20 с +/- 0,2 мин.
Линейный диапазон детектирования 0,1 — 2,0 нг.
8. Подготовка к выполнению измерений
Измерениям предшествуют следующие операции: очистка органических растворителей (при необходимости), приготовление растворов, кондиционирование хроматографической колонки, градуировка хроматографа, подготовка колонки с оксидом алюминия.
8.1. Очистка органических растворителей
8.1.1 Очистка н-гексана
Растворитель последовательно промывают порциями концентрированной серной кислоты до прекращения окрашивания последней в желтый цвет, затем водой до нейтральной реакции промывных вод, перегоняют над поташом.
8.1.2 Очистка этилацетата
Приготовление раствора натрия углекислого с массовой долей 5%
Навеску (5 +/- 0,1) г натрия углекислого в конической колбе растворяют в 40 — 60 куб. см дистиллированной воды. Полученный раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора 1 неделя.
Этилацетат промывают последовательно раствором натрия углекислого с массовой долей 5%, насыщенным раствором хлористого кальция, сушат над безводным карбонатом калия и перегоняют.
8.1.3 Очистка ацетона
Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 куб. дм ацетона 10 г KMnO и 2 г K CO ). 4 2 3
8.2. Подготовка колонки с оксидом алюминия для очистки экстракта
Нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 8 — 10 мм уплотняют тампоном из стекловаты, медленно выливают в колонку (при открытом кране) суспензию 5 г оксида алюминия нейтрального III степени активности в 15 куб. см гексана (оксид алюминия III степени активности по Брокману получают добавлением 6% воды к навеске оксида алюминия фирмы «Мерк» (Германия) I степени активности). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку промывают 15 куб. см гексана со скоростью 1 — 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.
8.3. Определение объема элюента, необходимого для полного вымывания протиоконазол-дестио из колонки с оксидом алюминия
При отработке методики или поступлении новой партии оксида алюминия проводят определение объема элюента, необходимого для полного вымывания протиоконазол-дестио из колонки с оксидом алюминия.
Готовят раствор гексан-этилацетат (85:15, по объему). Для этого в мерную колбу вместимостью 500 куб. см вносят 75 куб. см этилацетата и доводят объем раствора до метки гексаном. Срок хранения раствора 1 неделя.
Готовят раствор гексан-этилацетат (7:3, по объему). Для этого в мерную колбу вместимостью 500 куб. см носят 150 куб. см этилацетата и доводят объем раствора до метки гексаном. Срок хранения раствора 1 неделя.
В круглодонную колбу вместимостью 10 куб. см помещают 0,1 куб. см градуировочного раствора протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см в этилацетате (8.5.2) и отдувают растворитель током теплого воздуха. Остаток растворяют в 3 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку с оксидом алюминия, подготовленную по 8.2. Промывают колонку 30 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Затем колонку промывают 40 куб. см смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему), отбирая последовательно по 10 куб. см элюата. Каждую фракцию упаривают, остатки растворяют в 1 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., а затем хроматографируют. Условия хроматографирования в соответствии с 7.2.
По результатам обнаружения протиоконазол-дестио в каждой из фракций определяют объем элюента, необходимого для полного вымывания протиоконазол-дестио из колонки.
8.4. Подготовка и кондиционирование хроматографической колонки
Капиллярную кварцевую колонку ZB-1 (типа SE-30) устанавливают в термостат хроматографа и, не подсоединяя к детектору, кондиционируют при температуре 280 °C и скорости газа-носителя 2 куб. см/мин. в течение 8 — 10 часов.
8.5. Приготовление градуированных растворов
8.5.1 Исходный градуировочный раствор протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 100 мкг/куб. см
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают (0,010 +/- 0,0001) г протиоконазол-дестио, растворяют в 40 — 50 куб. см этилацетата, доводят этим же растворителем до метки, тщательно перемешивают.
Раствор хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °C в течение 3-х месяцев.
8.5.2 Градуировочный раствор протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (раствор № 1)
В мерную колбу вместимостью 100 куб. см помещают 10 куб. см исходного градуировочного раствора протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 100,0 мкг/куб. см (8.5.1), разбавляют этилацетатом и доводят объем до метки. Этот раствор используют для приготовления градуировочных растворов № 2 — 5.
Градуировочный раствор № 1 хранят в морозильной камере при температуре не выше (-18) °C в течение месяца.
8.5.3. Градуировочные растворы протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 0,1 — 1,0 мкг/куб. см (растворы № 2 — 5)
В 4 мерные колбы вместимостью 100 куб. см помещают 1,0, 2,0, 5,0 и 10,0 куб. см градуировочного раствора протиоконазол-дестио с массовой концентрацией 10 мкг/куб. см (8.5.2), доводят объем раствора до метки этилацетатом, тщательно перемешивают, получают градуировочные растворы № 2 — 5 с массовой концентрацией протиоконазол-дестио 0,1, 0,2, 0,5 и 1,0 мкг/куб. см, соответственно.
Растворы готовят непосредственно перед использованием.
8.6. Градуировка хроматографа
Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика (мВ x с) от массовой концентрации протиоконазол-дестио в растворе (мкг/куб. см), устанавливают методом абсолютной градуировки по 4 градуировочным растворам.
В инжектор хроматографа вводят по 1 куб. мм каждого градуировочного раствора (8.5.3) и анализируют при условиях хроматографирования по 7.2. Осуществляют не менее 3-х параллельных измерений. Расхождение между параллельными определениями не должно превышать предел повторяемости r.
8.7. Контроль стабильности градуировочной характеристики
Контроль стабильности градуировки проводят не реже 1 раза в три месяца, а также при смене реактивов или изменении условий анализа.
Для контроля стабильности используют вновь приготовленные градуировочные растворы с массовой концентрацией исследуемого вещества в начале, середине и в конце диапазона измерений, которые анализируют в точном соответствии с методикой.
Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие (1)
|S - S |
изм гр
------------ x 100 <= K , (1)
S гр
гр
S , S - значение площади пика протиоконазол-дестио в образце для изм гр контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике
соответственно, усл. ед.;
K - норматив контроля, K = 0,5 x дельта, гр гр
где +/- дельта — границы относительной погрешности, %, (табл. 1).
Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то повторно анализируют этот образец для исключения результата, содержащего грубую ошибку.
Если градуировка нестабильна, выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов для градуировки, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировки прибор градуируют заново.
9. Отбор, подготовка и хранение проб
Отбор проб производят в соответствии с «Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов» (N 2051-79 от 21.08.79) и правилами, определенными ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб» и ГОСТ 8988-77 «Масло рапсовое. ТУ».
Пробы зеленой массы хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более одного дня; для длительного хранения пробы замораживают и хранят при температуре -18 °C до анализа. Пробы семян высушивают до влажности (в соответствии ГОСТ 10852-86) и хранят в бумажных или тканевых мешочках в сухом, хорошо проветриваемом шкафу. Пробы масла хранят в плотно закрытой стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике при температуре не выше 4 °C. В некоторых случаях масло получают из семян рапса экстракцией органическими неполярными растворителями (петролейный и диэтиловый эфиры) непосредственно перед проведением анализа.
9.1. Экстракция протиоконазол-дестио
9.1.1 Экстракция протиоконазол-дестио из зеленой массы
Приготовление водного раствора ацетона (8:2, по объему)
В мерную колбу вместимостью 500 куб. см помещают 400 куб. см ацетона и доводят объем раствора в колбе до метки дистиллированной водой.
Срок хранения раствора 1 неделя.
Образец измельченного растительного материала массой 20 г помещают в стакан гомогенизатора вместимостью 500 куб. см, добавляют 100 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему) и гомогенизируют 3 мин. при 10000 об./мин. Гомогенат фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 50 куб. см смеси ацетон-вода (8:2, по объему). Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/4 его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Далее проводят очистку экстракта по 9.2.
9.1.2 Экстракция протиоконазол-дестио из семян
Образец размолотых семян массой 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, добавляют 50 куб. см ацетонитрила и помещают на аппарат для встряхивания на 1 ч. Суспензию фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 куб. см. Осадок на фильтре промывают 25 куб. см ацетонитрила. Экстракт и промывную жидкость переносят в химический стакан, перемешивают, измеряют объем раствора и 1/2 его часть (эквивалентную 5 г образца) переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 10 куб. см гексана, насыщенного ацетонитрилом, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После расслоения фаз гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию переносят в круглодонную колбу, куда приливают 20 куб. см деионизованной воды. Дальнейшую очистку экстракта проводят по 9.2.
9.1.3 Экстракция протиоконазол-дестио из масла
К образцу масла массой 5 г, помещенного в плоскодонную колбу вместимостью 250 куб. см, приливают 10 куб. см гексана и перемешивают. К раствору добавляют 50 куб. см ацетонитрила и колбу помещают на встряхиватель на 30 мин. Верхний ацетонитрильный слой декантируют в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см через слой ваты, помещенной в конусную воронку. К оставшемуся в колбе маслу приливают 30 куб. см ацетонитрила и операцию экстракции повторяют. После декантации ацетонитрильного слоя вату промывают 10 куб. см ацетонитрила, которые объединяют с фильтратом. Объединенную ацетонитрильную фазу переносят в делительную воронку вместимостью 250 куб. см, добавляют 10 куб. см гексана, насыщенного ацетонитрилом, интенсивно встряхивают в течение 2-х минут. После расслоения фаз гексановый слой отбрасывают, а ацетонитрильную фракцию фильтруют через слой ваты, помещенный в конусную воронку, в круглодонную колбу. Содержимое колбы упаривают до маслянистого остатка на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Далее проводят очистку экстракта по 9.3.
9.2. Очистка экстракта перераспределением в системе несмешивающихся растворителей
Отобранные аликвоты экстрактов зеленой массы и семян, полученные по 9.1.1 и 9.1.2 и помещенные в круглодонные колбы, упаривают на ротационном вакуумном испарителе до водного остатка (4 — 6 куб. см) при температуре не выше 40 °C. К водному остатку добавляют 20 куб. см деионизованной воды, перемешивают и переносят в делительную воронку вместимостью 100 куб. см. В воронку вносят 30 куб. см хлористого метилена, интенсивно встряхивают в течение 2 мин. После разделения фаз нижний органический слой фильтруют через слой безводного сульфата натрия в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Операцию экстракции водной фазы повторяют еще дважды, используя 30 и 20 куб. см хлористого метилена. Объединенную органическую фазу, пропущенную через слой сульфата натрия, упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 30 °C и подвергают дополнительной очистке на колонке с оксидом алюминия по 9.3.
9.3. Очистка экстракта на колонке с оксидом алюминия
Остаток в круглодонной колбе, полученный по 9.1.3 и 9.2, растворяют в 2 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему), помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин. Раствор наносят на колонку, подготовленную по 8.2. Колбу обмывают 2 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему), которые также наносят на колонку. Промывают колонку 20 куб. см смеси гексан-этилацетат (85:15, по объему) со скоростью 1 — 2 капли в секунду, элюат отбрасывают. Протиоконазол-дестио элюируют с колонки 15 куб. см смеси гексан-этилацетат (7:3, по объему) при анализе экстракта масла и 25 куб. см этой же смеси при анализе экстрактов семян и зеленой массы, собирая элюат непосредственно в круглодонную колбу вместимостью 100 куб. см. Раствор упаривают досуха на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °C. Остаток экстракта зеленой массы растворяют в 2,5 куб. см, а семян и масла — в 1 куб. см этилацетата, помещая в ультразвуковую ванну на 1 мин., и анализируют растворы на содержание протиоконазол-дестио. Условия хроматографирования по 7.2.
Полнота извлечения протиоконазол-дестио при проведении всех операций подготовки пробы не менее 82%.
10. Выполнение измерений
10.1. В испаритель хроматографа вводят 1 куб. мм очищенного экстракта анализируемой пробы (9.1 - 9.3), анализируют при условиях 7.2 и регистрируют хроматограмму. Каждый экстракт хроматографируют дважды.
10.2. Для каждого образца повторяют операции по (9.1 - 9.3), 10.1.
11. Обработка результатов измерений
11.1. Для обработки результатов хроматографического анализа используют программу сбора и обработки хроматографической информации «Хроматэк Аналитик», версия 1.20.
Альтернативная обработка результатов -1
Массовую долю протиоконазол-дестио X, млн. , в семенах, масле и зеленой массе рапса рассчитывают по формуле (2):
S x A x V
1
X = -------------, (2) 0,82 x S x m
0
S — площадь пика протиоконазол-дестио в образце, мВ x с; 1
S — площадь пика в градуировочном растворе, мВ x с; 0
A — массовая концентрация градуировочного раствора протиоконазол-дестио, мкг/куб. см;
V — объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, куб. см;
m - масса анализируемой части образца, соответствующая доле экстракта, использованной для очистки на колонке с оксидом алюминия и последующего
хроматографического определения, г.
При расчете содержания протиоконазол-дестио в эквивалентах протиоконазола полученное значение X умножают на 1,1.
11.2. За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости (3):
2 x |X - X | x 100
1 2
------------------- <= r, (3)
(X + X )
1 2
X , X - результаты параллельных определений массовой доли 1 2
-1
протиоконазол-дестио, млн. (мг/кг);
r — значение предела повторяемости, % (табл. 1).
Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями МВИ.
11.3 Результат анализа в документах, предусматривающих его использование, представляют в виде:
_ _
X +/- 0,01 x дельта x X, при P = 0,95,
X — среднее арифметическое значение результатов n определений, -1 признанных приемлемыми по 11.2, млн. (мг/кг);
+/- дельта — границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).
В случае, если полученный результат измерений ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: -1
«массовая доля протиоконазол-дестио в семенах менее 0,02 млн. (более -1 0,2 млн. )»; -1
«массовая доля протиоконазол-дестио в масле менее 0,02 млн. (более -1 0,2 млн. )»; -1
«массовая доля протиоконазол-дестио в зеленой массе менее 0,05 млн. -1 (более 0,5 млн. )».
Экстракты, при хроматографировании которых получают аналитический сигнал протиоконазол-дестио, превышающий аналитический сигнал, получаемый при хроматографировании градуировочного раствора с массовой концентрацией 1,0 мкг/куб. см, разбавляют этилацетатом, но не более чем в 10 раз, и анализируют в соответствии с данной методикой. При расчете содержания протиоконазол-дестио учитывают разбавление.
12. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости
12.1 Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:
а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;
б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сличительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).
12.2. Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.
12.3. Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD по формуле (4):
0,95
2 x |X - X | x 100
ср1 ср2
----------------------- <= CD , (4)
(X + X ) 0,95
ср1 ср2
X , X - средние значения массовой доли протиоконазол-дестио, ср1 ср2
-1
полученные в первой и второй лабораториях, млн. ;
CD — значение критической разности, % (табл. 1). 0,95
Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднеарифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.3).
При разногласиях руководствуются ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 (5.3.4).
13. Контроль качества результатов измерений при реализации методики в лаборатории
Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 и показателя правильности по 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002. Проверку стабильности осуществляют с применением контрольных карт Шухарта.
Периодичность контроля стабильности результатов выполнения измерений регламентируют в Руководстве по качеству лаборатории.
Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.
При неудовлетворительных результатах контроля, например при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.