Унифицированный метод определения остатков пестицидов при их совместном присутствии в пищевых рационах

(утв. Минздравом СССР 08.06.1987 № 4380-87)

8 июня 1987 г. № 4380-87

УНИФИЦИРОВАННЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ОСТАТКОВ ПЕСТИЦИДОВ

---

<*> Методические указания разработаны Д.Б. Гиренко, М.А. Клисенко, М.В. Письменной, В.Д. Чмилем (ВНИИГИНТОКС).

Унифицированный метод предназначен для определения пестицидов различного химического строения (ХОП, ФОП, симм-триазинов, производных 2,4-Д и ТХА) в пищевых рационах. Основу его составляет схема, которая позволяет проводить определение пестицидов названных групп из одной пробы (рис. 18).

Гомогенизированная навеска рациона 60 г
	подкислить до pH 3

                                \/

Экстракция органическим растворителем (гексан — ацетон, 1:2) общий V = 300 мл

     \/                         \/                             \/

<pre class="legal-pre">┌────────────────┐        ┌───────────────────┐         ┌──────────────────┐
│  Определение   │        │  Определение ХОП  │         │ Определение ФОП  │
│ 2,4-Д и ТХА в  │        │ и симм-триазинов  │         │в 100 мл экстракта│
│100 мл экстракта│        │в 100 мл экстракта │         └─────────┬────────┘
└────────┬───────┘        └─────────┬─────────┘                   │
         │        │\                │                             │
         \/       │ \               │          ┌────────────────┐ │
     ┌────────┐   │  \              \/         │  Определение   │ │
     │ Анализ │   │1 н\   ┌─────────────────┐  │ симм-триазинов │ │
     └────────┘   │HCl/──>│Перераспределение├─>│ в солянокислом │ │
                  │  /    └─────────┬───────┘  │слое по методике│ │
                  │ /               \/         └───────┬────────┘ │
                  │/      ┌───────────────────┐        \/         │
                          │ Органический слой │    ┌────────┐     │
                          │    упаривают,     │    │ Анализ │     │
                          │растворяют остаток │    └────────┘     │
                          │ в 10 мл н-гексана;│                   │
                          │очищают конц. H SO │                   \/
                          │               2  4│     ┌──────────────────────┐
                          └─────────┬─────────┘     │   Упарить до 5 мл.   │
                                    \/              │Анализировать по схеме│
                          ┌───────────────────┐     │  идентификации ФОП   │
                          │  Определение ХОП  │     │  хроматоферментным   │
                          │    по методике    │     │       методом        │
                          └───────────────────┘     └──────────────────────┘</pre>

Рис. 18. Схема определения пестицидов различных групп в пищевом рационе

В основу унифицированной схемы положены методики определения пестицидов указанных групп, утвержденные Минздравом СССР и опубликованные в сборниках «Методические указания по определению пестицидов в продуктах питания, кормах и внешней среде».

Принцип метода. Метод основан на извлечении пестицидов различного химического строения (ХОП, ФОП, симм-триазинов, производных 2,4-Д и ТХА) из единой пробы трехфазной смесью растворителей (водный раствор HCl, гексан, ацетон), разделении экстракта на три равные части, в одной из которых определяют производные 2,4-Д и ТХА, во второй — ХОП и симм-триазины, в третьей — ФОП в соответствии с представленной схемой. Для аналитического определения используют методы ГЖХ и ТСХ.

Ход анализа. Экстракция. Доводят pH гомогенизированной смеси рациона (60 г) до pH 3 1 M водным раствором хлороводородной кислоты в стакане на 0,5 л, приливают 150 мл смеси гексан — ацетон (1:2), перемешивают электромешалкой 30 мин. Содержимое стакана переносят в центрифужный стакан, центрифугируют и сливают растворитель. Вместо центрифугирования можно фильтровать с отсасыванием в колбу Бунзена через плотный фильтр. Остаток промывают двумя порциями смеси гексана с ацетоном по 75 мл, каждый раз центрифугируют и объединяют. Общий объем экстракта 300 мл. Делят экстракт на три равные части, одну из которых используют для определения производных 2,4-Д и трихлорацетата натрия; вторую — для определения ХОП и триазинов; третью — для определения ФОП.

Определение 2,4-Д и ТХА. Экстракт 100 мл (1/3 часть) помещают в круглодонную колбу на 1 л, прибавляют 8 мл концентрированной соляной кислоты, упаривают ацетон и гексан на ротационном испарителе и затем выдерживают 1 ч на кипящей водяной бане с обратным холодильником.

После охлаждения содержимое колбы переносят дистиллированной водой (3 x 30 мл) в делительную воронку и трижды экстрагируют диэтиловым эфиром (50, 30 и 30 мл). Объединенный эфирный экстракт промывают небольшими порциями дистиллированной воды (15 — 20 мл) до нейтральной реакции промывных вод и затем трижды экстрагируют тремя порциями 0,5 М водного раствора бикарбоната натрия по 20 мл. Объединенный водный экстракт дважды промывают хлороформом порциями по 20 мл и 20 мл н-гексана, отбрасывают эти растворители, подкисляют концентрированной хлороводородной кислотой до pH 1 и экстрагируют тремя порциями диэтилового эфира (50, 30 и 30 мл). Объединенный эфирный экстракт промывают дистиллированной водой (порциями по 15 — 20 мл) до нейтральной реакции промывных вод, упаривают растворитель на ротационном испарителе до 2 мл и затем досуха потоком сухого воздуха. Сухой остаток метилируют диметилсульфатом и определяют ТХА [1].

Для определения 2,4-Д растворяют в 2 — 3 мл н-гексана продукт метилирования и переносят этот раствор на стеклянный фильтр № 4 (d = 2,5 см) с 1 г силикагеля. Промывают силикагель 15 мл н-гексана и элюируют метиловый эфир 2,4-Д 25 мл бензола. Бензольный элюат упаривают на ротационном испарителе до 1 мл и затем досуха потоком сухого воздуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл н-гексана и определяют метиловый эфир 2,4-Д [2].

Определение ХОП и симм-триазинов. Экстракт 100 мл (1/3 часть) помещают в делительную воронку на 500 мл, прибавляют 50 мл 1 н водного раствора HCl, осторожно встряхивают и дают слоям разделиться. Сливают в другую делительную воронку на 500 мл нижний водный слой, а из органического экстрагируют еще дважды по 25 мл 1 н водным раствором HCl. Водные экстракты объединяют и определяют в этой фазе симм-триазины.

    Органическую фазу сливают через слой безводного Na SO  в колбу
                                                      2  4
для  отгонки  растворителей  и  досуха  упаривают  на  ротационном
вакуумном  испарителе  при  температуре бани не более 45 °C. Сухой
остаток  из  колбы  смывают  10  -  15  мл н-гексана в делительную
воронку  на  50  мл,  чистят  концентрированной  серной кислотой и
анализируют  по  методике  определения  ХОП  в продуктах питания и

объектах окружающей среды [3 - 5].

Водную фазу подщелачивают 200 мл 1 н едкого натра до pH 7 — 8, прибавляют 15 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 50 мл дистиллированной воды и трижды экстрагируют хлороформом порциями по 50 мл. Экстракт объединяют, высушивают над безводным сульфатом натрия и упаривают на ротационном испарителе досуха при температуре бани 50 °C. Колбу смывают 1 мл смеси гексан — ацетон (1:1) и аликвоту вводят в хроматограф либо эфиром наносят пробу на пластинку и анализируют ТСХ. Степень определения триазинов при использовании схемы — 70 — 75%. Условия ГЖХ и ТСХ определения триазинов проводят по [6].

Определение ФОП. Экстракт 100 мл (1/3 часть) переносят в колбу для отгонки растворителей, фильтруя через безводный сульфат натрия. Растворитель отгоняют на вакуумном ротационном испарителе при температуре бани не более 40 °C до 0,5 мл. Экстракт переносят в мерную пробирку, ополаскивая колбу небольшими порциями ацетона. Объем в пробирке доводят ацетоном точно до 5 мл, перемешивают и анализируют хроматоферментным методом [7].

Количественную оценку и расчет результатов анализа проводят методом сравнения с идентифицированным стандартом, как описано в методике.

На втором этапе исследования вместо хроматоферментного определения (или параллельно) можно применить соответствующий метод ГЖХ или ТСХ (см. методические указания) при использовании в качестве стандарта пестицида, идентифицированного на первом этапе исследования.

---