---
title: "\"Методика оценки санитарно-гигиенического состояния на предприятиях, выпускающих радиационно стерилизуемую продукцию медицинского назначения\""
number: "2534-82"
issuer: "Министерство здравоохранения СССР"
status: утратил силу
canonical: "https://bukva.ai/docs/metodika-2534-82-minzdrav-sssr-ministerstvo"
---

## "Методика оценки санитарно-гигиенического состояния на предприятиях, выпускающих радиационно стерилизуемую продукцию медицинского назначения"

# "Методика оценки санитарно-гигиенического состояния на предприятиях, выпускающих радиационно стерилизуемую продукцию медицинского назначения"

(утв. Минздравом СССР 11.02.1982 N 2534-82)

> [!WARNING]
> Документ утратил силу на территории Российской Федерации в связи с изданием Приказа Роспотребнадзора от 04.12.2020 N 797.


<a id="p100001"></a>Утверждаю
Заместитель Главного
государственного
санитарного врача СССР
**В.Е.КОВШИЛО**
11 февраля 1982 г. N 2534-82

<a id="p100002"></a>**МЕТОДИКА**
**ОЦЕНКИ САНИТАРНО-ГИГИЕНИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ**
**НА ПРЕДПРИЯТИЯХ, ВЫПУСКАЮЩИХ РАДИАЦИОННО СТЕРИЛИЗУЕМУЮ**
**ПРОДУКЦИЮ МЕДИЦИНСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ**


## 1. <a id="p100003"></a>Общие положения


<a id="p100004"></a>1.1. Величина стерилизующей дозы излучения зависит от инициальной контаминации продукции, подлежащей радиационной стерилизации. Инициальная контаминация характеризуется количеством микроорганизмов и их резистентностью к ионизирующим излучениям.
<a id="p100005"></a>1.2. Инициальная контаминация продукции формируется микроорганизмами, обсеменяющими руки, спецодежду персонала, воздух, поверхности производственных помещений и оборудования.
<a id="p100006"></a>1.3. Предприятие, выпускающее изделия, стерилизуемые радиационным методом, обязано обеспечить регулярный контроль обсемененности микроорганизмами рук, спецодежды персонала, воздуха, поверхностей производственных помещений цехов и участков, на которых осуществляется изготовление элементов изделий и их сборка.
<a id="p100007"></a>1.4. Контроль обсемененности объектов, перечисленных в [п. 1.3](#p100006), проводят первоначально не реже 1 раза в неделю. После достижения санитарного состояния производства, стабильно характеризующегося приведенными ниже нормами обсемененности этих объектов, контроль проводят не реже 1 раза в месяц.
<a id="p100008"></a>1.5. Контроль радиорезистентности производственной микрофлоры по методике, изложенной в [п. 3](#p100055), проводится 1 раз в полугодие.


## 2. <a id="p100009"></a>Контроль микробной обсемененности объектов, формирующих инициальную контаминацию продукции



#### <a id="p100010"></a>2.1 Определение обсемененности рук обслуживающего персонала.

<a id="p100011"></a>2.1.1. Пробы с кожи рук обслуживающего персонала отбирают во второй половине рабочего дня у 10 - 30% занятого персонала (в зависимости от количества персонала, работающего в цехе, на участке).

##### <a id="p100012"></a>2.1.2 Микробную обсемененность кожи рук определяют методом смыва.

<a id="p100013"></a>2.1.3. Взятие смывов производят стерильными марлевыми салфетками размером 5 x 5 см. При использовании салфеток их увлажняют физиологическим раствором с 0,5% твина-80 в чашках Петри из расчета 2 мл раствора на 10 салфеток.
<a id="p100014"></a>2.1.4. Смывы производят с межпальцевых, подногтевых пространств, с ладоней и с тыльной поверхности руки. Для каждой руки используют отдельную марлевую салфетку.
<a id="p100015"></a>2.1.5. После взятия смыва салфетки помещают в 10 мл стерильного физиологического раствора с 0,5% твина-80, разлитого в широкогорлые пробирки, обе салфетки [(п. 2.1.4)](#p100014) помещают в одну пробирку с бусами (3 - 4 штуки на пробирку).
<a id="p100016"></a>2.1.6. После встряхивания пробирок в течение 10 минут производят посев смывной жидкости в толщу агара Хоттингера с 0,5% глюкозы для определения микробной обсемененности.
<a id="p100017"></a>В зависимости от предполагаемой массивности обсеменения микроорганизмами, засевают 0,5 мл смывной жидкости на поверхность питательного агара, разлитого в чашки Петри и предварительно подсушенного, или 2,0 мл в толщу агара. В последнем случае определенный объем смывной жидкости вносят пипеткой в чашки Петри, затем вливают в них 15 - 20 мл расплавленного и остуженного до 45 - 50 град. C питательного агара; круговыми движениями на ровной гладкой поверхности вращают чашки Петри в течение 30 - 45 сек., перемешивая смывную жидкость и агаризированную среду для равномерного распределения в ней микроорганизмов; оставляют чашки на ровной поверхности до застывания агара, после чего помещают их в термостат и инкубируют при 32 град. в течение 72 часов.
<a id="p100018"></a>2.1.7. Обсемененность рук не должна превышать 200 микробных клеток на кисть руки.
<a id="p100019"></a>2.1.8. Для ориентировочного контроля обсемененности кожи рук можно использовать метод отпечатков.
<a id="p100020"></a>2.1.9. Отпечатки производят на поверхность плотной питательной среды в чашке Петри или на предметном стекле (см. [п. п. 2.2.4](#p100026) - [2.2.5](#p100027)) путем прикладывания ногтевой фаланги каждого пальца.
<a id="p100021"></a>2.1.10. При контроле методом отпечатков общая обсемененность не должна превышать 10 колоний на каждую фалангу.

#### <a id="p100022"></a>2.2 Определение обсемененности спецодежды персонала.

<a id="p100023"></a>2.2.1. Пробы отбирают предпочтительно перед сменой спецодежды у 10 - 30% занятого персонала (в зависимости от количества персонала, работающего в цехе, на участке).
<a id="p100024"></a>2.2.2. Микробную обсемененность спецодежды определяют методом отпечатков на предметные стекла, залитые питательной средой (агаром Хоттингера с 0,5% глюкозы).
<a id="p100025"></a>2.2.3. Отпечаток на питательную среду производят путем прикладывания предметного стекла со средой к исследуемой поверхности. Количество микробных клеток определяют по количеству выросших на питательной среде колоний.
<a id="p100026"></a>2.2.4. Для приготовления пластинок предметные стекла раскладывают стерильным пинцетом в стерильные чашки Петри. Питательную среду растапливают на водяной бане и при помощи пипетки, осторожно приоткрыв чашки, наливают среду на поверхность каждого стекла до его полного покрытия (около 1,5 мл). Чашки с пластинами после застывания среды можно сохранять до 3 суток в холодильнике.
<a id="p100027"></a>2.2.5. Посевы - отпечатки производят следующим образом: берут пальцами за края предметного стекла, не касаясь питательной среды, и плотно прикладывают питательной средой к исследуемой поверхности на 2 - 3 сек. После соприкосновения с исследованной поверхностью предметное стекло с питательной средой отпечатком кверху помещают в чашку Петри, закрывают крышкой и ставят в термостат при 32 град. на 72 часа, после чего производят подсчет выросших колоний. Делают пересчет количества выросших колоний на 1 кв. см поверхности.
<a id="p100028"></a>2.2.6. При изучении микробной обсемененности халатов отпечатки берут с 5 участков (нижние части рукава, верхняя, средняя и нижняя части передней поверхности). Смывы с косынок, масок, шапочек берут с различных мест наружной поверхности (1 - 2 точки).
<a id="p100029"></a>2.2.7. Обсемененность спецодежды не должна превышать 10 микробных клеток на 1 кв. см.

#### <a id="p100030"></a>2.3 Определение обсемененности воздуха производственных помещений.

<a id="p100031"></a>2.3.1. Обсемененность воздуха производственных помещений контролируют преимущественно в конце рабочей смены в 3 - 5 точках помещения на уровне рабочих столов.
<a id="p100032"></a>2.3.2. Отбор проб воздуха следует проводить аспирационным методом с помощью аппарата Ю.А. Кротова или мембранных фильтров.
<a id="p100033"></a>Для отбора проб с помощью прибора для бактериологического анализа воздуха - модель 818 (аппарат Кротова) предварительно в чашки Петри заливают питательную среду (агар Хоттингера с 0,5% глюкозы). Заливку чашки производят на строго горизонтальной поверхности, наливая в каждую чашку по 15 мл питательной среды. Чашки с агаром подсушивают в термостате.
<a id="p100034"></a>Прибор устанавливают на ровной горизонтальной поверхности и включают в сеть, затем при помощи вентиля устанавливают скорость проходящего через прибор воздуха (25 - 30 л в минуту). При включенном электродвигателе с прибора снимают крышку и помещают на диск чашку Петри с питательной средой, чашке придают некоторое вращение от руки, крышку закрывают и одновременно производят отметку времени по секундомеру. По истечении 3 - 10 минут (в зависимости от предполагаемой обсемененности) выключают прибор и открывают крышку, вынимают чашку и помещают ее в термостат при 32 град. на 48 часов.
<a id="p100035"></a>Зная количество пропущенного воздуха и время отбора проб, определяют общий объем воздуха, из которого производят посев. По количеству выросших в чашке Петри колоний определяют количество бактерий в 1 куб. м воздуха.
<a id="p100036"></a>*Пример* подсчета: пропущено 100 л воздуха (по 25 л в минуту), число выросших колоний 80, в 1 кубическом метре воздуха содержится:

<a id="p100037"></a> $X = \frac{80\text{Ч}1000}{100} = 800.$ 

<a id="p100040"></a>Для отбора проб воздуха с помощью мембранных фильтров используют мембранные фильтры, выпускаемые отечественной промышленностью, N 1 или N 2 (диаметр пор соответственно 0,3 и 0,5 мкм, диаметр фильтра 35 мм). Мембраны предварительно обрабатывают: погружают в дистиллированную воду и прогревают до 60 град., затем воду сливают, фильтры снова заливают дистиллированной водой и кипятит 10 минут. Фильтры до употребления оставляют в воде, в которой их кипятили последний раз. Обработанные мембраны вкладывают в стерильные фильтры Зейтца или устройства других типов.
<a id="p100041"></a>Перед стерилизацией в устройства на сетку помещают кружочки фильтровальной бумаги, равные по диаметру мембранным фильтрам, для предотвращения повреждений последних. Устройства стерилизуют в упаковке из бумаги или ткани в паровых стерилизаторах при давлении водяного насыщенного пара 2,0 кгс/кв. см в течение 20 минут.
<a id="p100042"></a>Заправленные мембранами устройства можно стерилизовать ионизирующим излучением.
<a id="p100043"></a>Заправленные мембранами устройства подсоединяют резиновым шлангом к аспиратору для отбора проб воздуха (модель 822). Воздух пропускают со скоростью 20 л в мин. в течение 3 - 5 мин., в зависимости от предполагаемой обсемененности воздуха, после чего мембраны фильтрующей поверхностью вверх помещают на агар Хоттингера с 0,5% глюкозы в чашках Петри. Инкубируют посевы в термостате при 32 град. в течение 72 час.
<a id="p100044"></a>Зная скорость прохождения воздуха и время его фильтрации, определяют объем воздуха, прошедшего через фильтр, подсчитав количество колоний, выросших на фильтре, рассчитывают обсемененность 1 куб. м воздуха.
<a id="p100045"></a>2.3.3. Обсемененность воздуха при определении с помощью мембранной фильтрации не должна превышать в производственных помещениях [(1.3)](#p100006), не обеспеченных вентиляцией с помощью ламинарного потока стерильного воздуха, 500 м.к./куб. м, обеспеченных такой вентиляцией - 10 м.к./куб. м.
<a id="p100046"></a>2.3.4. При учете обсемененности воздуха с помощью аппарата Кротова поправочный коэффициент к приведенным выше нормам составляет 2,8, т.е. число колоний, выросших на чашках, следует умножить на 2,8. Показатель не должен превышать 200 м.к./куб. м.

#### <a id="p100047"></a>2.4 Определение обсемененности поверхностей помещений и оборудования.

<a id="p100048"></a>2.4.1. Определение обсемененности поверхностей проводят во время рабочей смены. Следует брать не менее 5 проб.
<a id="p100049"></a>2.4.2. Для определения обсемененности микроорганизмами поверхностей помещений (стены, окна, двери, пол) и оборудования (рабочие столы, приборы, машины и т.д.) могут быть использованы 2 метода: метод отпечатков (прямого оттиска) и метод смыва.
<a id="p100050"></a>Для гладких, ровных поверхностей рекомендуется метод отпечатков, для неровных, труднодоступных - метод смыва.
<a id="p100051"></a>Отбор проб с поверхности методом отпечатков производят в соответствии с рекомендациями, изложенными в [п. п. 2.2.2](#p100024) - [2.2.5](#p100027).
<a id="p100052"></a>При отборе проб методом смыва изучаемые поверхности (10 x 10 см) тщательно в течение 30 сек. протирают увлажненной салфеткой размером 5 x 5 см. Увлажнение салфеток и дальнейшую после смыва обработку материала проводят согласно [п. п. 2.1.5](#p100015) и [2.1.6](#p100016) соответственно.
<a id="p100053"></a>Если предполагается, что изучаемые поверхности предметов обильно обсеменены микроорганизмами, то перед посевом испытуемую жидкость разводят в 10, 100 раз и т.д. Затем посевы помещают в термостат при температуре 32 град. и выдерживают 72 часа. Через 72 часа подсчитывают количество выросших колоний и рассчитывают плотность обсеменения на 100 кв. см.
<a id="p100054"></a>2.4.3. Обсемененность поверхностей пола производственных помещений не должна превышать 25 микробных клеток на 1 кв. см (м.к./кв. см), оборудования 5 м.к./кв. см.


## 3. <a id="p100055"></a>Методика обнаружения радиорезистентных микроорганизмов на предприятиях медицинской промышленности, выпускающих радиационно стерилизуемую продукцию


<a id="p100056"></a>Методика включает три этапа работы: выделение на производстве с помощью обычных методов смешанной микрофлоры, облучение смешанной популяции суббактерицидными дозами ионизирующих излучений с целью селекции радиорезистентных микроорганизмов и качественное определение радиорезистентности у микроорганизмов и после радиоселекции.
<a id="p100057"></a>3.1. Выделение производственной микрофлоры проводится в цехе окончательной сборки и упаковки продукции ватными тампонами, а также из готовой продукции путем смыва. Одним тампоном, увлажненным физиологическим раствором, в который рекомендуется добавить 1% твина-80, протирают поверхность оборудования и рабочих мест площадью 0,2 кв. м. Смывы с изделий производят так же, как и при определении инициальной контаминации. Одновременно используют 5 тампонов и выборку изделий, равную удвоенной выборке, используемой для определения инициальной контаминации.
<a id="p100058"></a>Тампоны встряхивают в течение 10 минут в пробирках с 5 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Смывную жидкость смешивают и фильтруют через мембранный фильтр (размером пор < 0,3 мкм; диаметр диска предпочтительно 60 мм) 0,1 мл нефильтрованной смывной жидкости высевают в разведениях 1:100 - 1:10 на плотную питательную среду (МПА, агар Хоттингера, 75% аминного азота, pH 7,0 - 7,2) для подсчета числа жизнеспособных клеток в испытуемой жидкости. Учет результатов высева проводят через 18 - 24 ч после инкубации при 32 град. C.
<a id="p100059"></a>Смыв с изделий смешивают и обрабатывают так же, как и смывную жидкость с тампонов.
<a id="p100060"></a>Фильтры по окончании фильтрации высушивают в боксе на открытом воздухе при комнатной температуре и отключенных бактерицидных лампах в течение 12 - 18 час.
<a id="p100061"></a>Пригодными для дальнейшей работы считаются фильтры, через которые профильтрована испытуемая жидкость, содержащая в целом не менее 10 (в третьей степени) микроорганизмов (данные о содержании микроорганизмов находят путем пересчета результатов высева, с учетом общего объема профильтрованной жидкости, разведения и объема инокулята).
<a id="p100062"></a>3.2. Выделение радиорезистентных микроорганизмов из смешанной популяции.
<a id="p100063"></a>Сухие фильтры с микроорганизмами облучают в дозе 10 кГр и помещают на плотную питательную среду (агар Хоттингера, 75% аминного азота, pH 7,0 - 7,2; МПА). Инкубацию проводят при 32 град. в течение 7 дней. Если на фильтре не вырастают колонии микроорганизмов, то делается вывод о практическом отсутствии в составе производственной микрофлоры высокорадиорезистентных микроорганизмов.
<a id="p100064"></a>3.3. Качественное определение радиорезистентности микроорганизмов, выделенных из смешанной популяции после облучения.
<a id="p100065"></a>Выросшие на фильтре после облучения колонии пересевают в пробирки со скошенным агаром [(пункт 3.2)](#p100062), инкубируют при 32 град. в течение 18 - 24 час, а для спорообразующих микроорганизмов после инкубации в термостате дополнительно выдерживают в затемненном помещении при комнатной температуре 7 дней, и готовят по оптическому стандарту мутности на 10 ед. взвеси путем смыва физиологическим раствором микробной массы. 0,1 мл этой взвеси переносят в пробирку с 0,9 мл стерильного 0,8% раствора хлорида натрия и облучают в дозе 35 кГр. После излучения в пробирку с соблюдением правил асептики добавляют 9 мл бульона Хоттингера или МПБ, посевы инкубируют в течение 7 дней. Наличие роста свидетельствует о высокой радиорезистентности данного микроорганизма. Количественно определить радиорезистентность можно по показаниям Д(10) (дозы облучения, при которых численность популяции микроорганизмов уменьшается в 10 раз).
<a id="p100066"></a>Высокорадиорезистентными считаются микроорганизмы, для которых показатели Д(10) равны или превышают 5 кГр. Такие микроорганизмы встречаются в окружающей среде весьма редко (10-4). При их обнаружении с помощью описанной методики следует улучшить соблюдение на производстве санитарно-гигиенического режима, а также при необходимости провести дополнительные санитарно-гигиенические мероприятия.
<a id="p100067"></a>Контроль радиорезистентности производственной микрофлоры по изложенной методике рекомендуется проводить два раза в год.
<a id="p100068"></a>Все выделенные штаммы микроорганизмов с положительным результатом качественного теста на радиорезистентность направляются для количественного определения радиорезистентности этих микроорганизмов в учреждение, в котором проводятся соответствующие исследования - Институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи АМН СССР, Институт биофизики Министерства здравоохранения СССР, ВНИИ дезинфекции и стерилизации Минздрава СССР.



---