--- title: "\"Методические указания по лабораторным исследованиям на злокачественный отек животных\"" issuer: "Министерство сельского хозяйства СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/metodicheskie-ukazaniya-po-laboratornym-minselhoz-sssr-ministerstvo" --- ## "Методические указания по лабораторным исследованиям на злокачественный отек животных" # "Методические указания по лабораторным исследованиям на злокачественный отек животных" (утв. Минсельхозом СССР 05.01.1984) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563). Утверждены Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 5 января 1984 года **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ЛАБОРАТОРНЫМ ИССЛЕДОВАНИЯМ** **НА ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЙ ОТЕК ЖИВОТНЫХ** 1. Общие положения. 1.1. Злокачественный отек - острая неконтагиозная инфекционная болезнь всех видов животных, возникающая после ранений, родов, травм, кастраций и характеризующаяся быстрым появлением газовых отеков, распадом тканей и сепсисом. 1.2. Злокачественный отек имеет полимикробную этиологию. Основными возбудителями являются Cl. septicum, Cl. oedematiens, Cl. sordellii, Cl. perfringens, Cl. histolyticum, иногда Cl. chauvoei, каждый из которых может вызвать заболевание самостоятельно, но чаще в ассоциации друг с другом, другими анаэробными или аэробными микроорганизмами. Из сопутствующих микроорганизмов наиболее важную роль играет Cl. sporogenes, который усиливает действие других патогенных анаэробов, придает процессу гнилостный характер и тем самым отягощает течение болезни. 1.3. Диагноз на злокачественный отек ставят на основании клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных с обязательным подтверждением лабораторными исследованиями. 1.4. Для исследования в лабораторию направляют кусочки пораженных мышц, тканевый экссудат и паренхиматозные органы, а от трупов овец, кроме того, направляют часть сычуга и тонкого отдела кишечника с содержимым (для одновременного исследования на брадзот и энтеротоксемию). 1.5. Исследование на злокачественный отек включает микроскопию мазков из патологического материала, посевы на питательные среды и заражение лабораторных животных. 2. Микроскопическое исследование. 2.1. Из пораженных тканей и другого патологического материала делают мазки-отпечатки и окрашивают их по Граму или Муромцеву. 2.2. При микроскопии мазков отмечают форму микробов, их расположение, наличие вегетативных форм, спор (споры окраску не воспринимают), капсул. Описание морфологии отдельных возбудителей дано в [таблице 1](#p100013). Таблица 1 Культурально-морфологические свойства основных возбудителей злокачественного отека | Название возбудителя | Окраска по Граму | Морфология микробов | Форма спор и их расположение | Подвижность | Оптимум разрежения воздуха, мм рт. ст. | Характеристика роста на среде Китта - Тароцци | Формы колоний на глюкозо-кровяном агаре Цейсслера | | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- | | Cl. septicum | + | Изолированные палочки с закругленными концами, в мазках-отпечатках с серозных оболочек - нити | Овальные, расположены субтерминально или центрально | + | 8 - 15 | Интенсивное помутнение, обильное газообразование | Нежный бесцветный вуалеобразный налет с микроскопически изрезанными краями и часто с нежными отростками, колонии окружены зоной гемолиза (III форма) | | Cl. oedematiens | + | Крупные полиморфные палочки с закругленными или обрубленными концами, расположены одиночно, редко попарно или цепочками из 3 - 4 члеников | Овальные, расположены центрально или субтерминально | + | 3 - 5 | Рост более интенсивный внизу, через 18 - 24 ч бульон просветляется, на дне выпадает хлопьевидный осадок. Газообразование слабое | Шероховатые, корневидные, складчатые с изрезанными краями и выпуклым темным центром: гемолиз сильный, прозрачный, но может отсутствовать (II форма) | | Cl. sordellii | + | Полиморфные палочки с закругленными концами, расположены чаще цепочками по 2 - 4 членика | Овальные, расположены субтерминально или центрально | + | 8 - 15 | Помутнение, более интенсивное внизу, и умеренное газообразование: при старении культур - слизистый осадок | Колонии неправильной формы, корневидные, складчатые, с сероватой шероховатой поверхностью и изрезанными краями. Гемолиз сильный, но может отсутствовать (II форма) | | Cl. perfringens | + | Толстые палочки со слегка закругленными концами, расположены одиночно | Овальные, расположены субтерминально или центрально. В мазках из свежего трупа и молодых культур спор не обнаруживают | - | 10 | Раннее помутнение и бурное, интенсивное газообразование | Округлые, гладкие, выпуклые, серовато-зеленые колонии. Гемолиз сильный, грязно-коричневого цвета, имеет две зоны. Среда буро-коричневого цвета (I форма) | | Cl. histolyticum | + | Стройные тонкие палочки с закругленными концами, расположены одиночно, попарно, редко цепочками | Овальные, расположены субтерминально ("игольное ушко") | + | 8 - 15 | Интенсивное помутнение без газообразования | Мелкие, круглые, гладкие колонии с ровными краями, гемолиз отсутствует, иногда незначительный (VIII форма) | | Cl. sporogenes | + | Палочки с закругленными концами, расположены одиночно, иногда цепочками | Овальные, расположены субтерминально или центрально. Образование спор происходит очень быстро, в мазках почти у всех палочек обнаруживают споры | + | 15 - 20 | Рост обильный, кусочки печени обволакиваются слизистым осадком, верх среды прозрачный, газообразование слабое. Культура издает неприятный гнилостный запах | Колонии вязкие, с изрезанными краями, напоминающие корневище, погружены в агар, поверхность матовая, с желтоватым центром, зона гемолиза интенсивная, резко ограниченная (VI форма) | 3. Бактериологическое исследование. 3.1. Высевы из патологического материала делают в среду Китта - Тароцци, МПБ и на МПА. Среду Китта - Тароцци предварительно регенерируют прогреванием в кипящей водяной бане в течение 15 - 30 мин, после чего быстро охлаждают до 45 - 50 °C. Одновременно высев можно делать и на глюкозо-кровяной агар Цейсслера в чашках Петри. 3.2. Засеянные пробирки помещают в термостат на 24 - 48 ч при 37 - 38 °C. Чашки выдерживают в анаэробных условиях 24 - 48 ч. 3.3. Для создания анаэробных условий наиболее приемлем физический метод. Чашки, не переворачивая (дном вниз), помещают в микроанаэростат, или эксикатор, из которого удаляют воздух при помощи вакуум-насоса. Из других методов можно применять химический с использованием гидросульфита натрия (Na2S2O4) и бикарбоната натрия (Na2CO3). 3.4. При просмотре роста в жидких питательных средах необходимо обращать внимание на интенсивность и равномерность помутнения среды, степень газообразования. Характеристика роста отдельных возбудителей дана в [таблице 1](#p100013). 3.5. При обнаружении в среде Китта - Тароцци роста микроорганизмов, сходных с возбудителями злокачественного отека, делают дробный пересев на 3 - 4 чашки с агаром Цейсслера. Посевы инкубируют, как указано в [п. 3.3](#p100074). Просмотр посевов проводят с помощью лупы или под малым увеличением микроскопа, обращая внимание на форму колоний и наличие гемолиза (см. [табл. 1](#p100013)). 4. Биологическое исследование. 4.1. Одновременно с посевом материала на питательные среды проводят заражение морских свинок. Для этого кусочки пораженных тканей и другой патологический материал измельчают, тщательно растирают в стерильной ступке с песком и готовят равномерную взвесь, добавляя небольшое количество МПБ. Полученную взвесь вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам массой 350 - 400 г в дозе 0,5 - 1,0 мл. 4.2. При наличии в исследуемом материале возбудителей злокачественного отека морские свинки погибают через 16 - 48 ч в зависимости от вида возбудителя. При вскрытии у павших животных обнаруживают патологоанатомические изменения, характерные для того или иного возбудителя (см. табл. 2). 4.3. Из трупа морской свинки делают посевы из места введения материала, крови сердца и печени в среду Китта - Тароцци, МПБ и на МПА. Мазки-отпечатки готовят из тех же органов, а также с диафрагмальной поверхности печени. 4.4. При необходимости проверки вирулентности выделенных культур суточную культуру, выращенную на среде Китта - Тароцци, вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам в дозе 0,5 - 1,0 мл. #### 4.5 Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 8 сут. 5. Диагноз на злокачественный отек считается установленным в случае получения одного из следующих результатов: выделение из патологического материала культуры со свойствами, характерными для одного из возбудителей данного заболевания, и гибель хотя бы одной из двух зараженных исходным материалом или полученной культурой морских свинок с типичной для данного возбудителя патологоанатомической картиной и выделением из органов культуры возбудителя; гибели хотя бы одной морской свинки из двух, зараженных исходным материалом, при наличии у нее типичной для данного возбудителя патологоанатомической картины и выделения из нее культуры возбудителя, если даже в посевах из исходного материала культуры возбудителя не выделено. 6. Срок исследования 8 сут. ---