Методические указания по лабораторным исследованиям на дизентерию свиней, вызываемую трепонемой

(утв. Минсельхозом СССР 25.12.1983)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНЫМ ИССЛЕДОВАНИЯМ НА ДИЗЕНТЕРИЮ СВИНЕЙ, ВЫЗЫВАЕМУЮ ТРЕПОНЕМОЙ

1. Общие положения.

1.1. Дизентерия свиней, вызываемая трепонемой (Treponema hyodysenteriae), — острая инфекционная болезнь.

Бактероиды, фузобактерии, вибрионы, клостридии и другие микроорганизмы кишечника свиней способствуют созданию благоприятных условий для проявления трепонемами патогенного действия.

1.2. Диагноз на дизентерию свиней ставят на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных, а также результатов лабораторного исследования.

1.3. Лабораторные исследования на дизентерию заключаются в обнаружении трепонем при микроскопическом исследовании патологического материала.

1.4. Материалом для прижизненной диагностики служат фекалии, для посмертной — слизистая оболочка большой ободочной кишки павших или убитых с диагностической целью свиней.

1.4.1. Фекалии от больных свиней берут ватным тампоном из прямой кишки. Для этого стерильный ватный тампон вводят в прямую кишку на глубину 7 — 8 см и делают вращательные движения, прижимая тампон к стенке кишки, затем его извлекают и помещают в пробирку с 8 — 10 мл физиологического раствора.

1.4.2. У животных, убитых с диагностической целью, вырезают участок большой ободочной кишки, освобождают ее от содержимого, промывают водопроводной водой, затем соскабливают скальпелем около 1 г слизистой оболочки, переносят в пробирку с 8 — 10 мл физиологического раствора и суспендируют.

Допускается отбор материала и от трупов не позднее 2 ч после гибели.

1.5. Приготовленную суспензию исследуют непосредственно в хозяйстве или отправляют в ветеринарную лабораторию. При пересылке материала в лабораторию пробирки закрывают резиновыми пробками и помещают в термос со льдом.

1.6. Материал должен быть исследован в течение 2 — 4 ч, при хранении на холоде — в течение 6 — 8 ч.

2. Порядок исследования материала.

2.1. Материал исследуют микроскопически, методом фазового контраста, путем просмотра в темном поле или в проходящем свете (подкрашенных и окрашенных препаратов).

2.1.1. Стекла, используемые для микроскопии, должны быть бесцветными, прозрачными, чистыми, без царапин и бликов.

2.2. Метод фазового контраста. Для исследования этим методом используют устройство КФ-4 или МФА-2, осветитель ОИ-9 или подобный, окуляр 7x — 10x, объектив 40x и светофильтр ЗС-2. Установку фазово-контрастного устройства и работу с ним выполняют, руководствуясь указаниями прилагаемой к нему инструкции.

2.2.1. Для исследования на чистое обезжиренное предметное стекло наносят 1 — 2 капли заранее приготовленной суспензии слизистой оболочки или фекалий и накрывают их покровным стеклом, избегая образования под ним пузырьков воздуха. На одном предметном стекле можно готовить три раздавленных капли.

2.3. Микроскопия в темном поле. Препараты готовят, как указано в подпункте 2.2.1, и просматривают при увеличении в 280 — 400 раз (окуляр 7x или 10x, объектив 40x — водная иммерсия).

2.4. Исследование подкрашенных нативных препаратов. На предметное стекло наносят каплю суспензии исследуемого материала и к ней добавляют каплю красителя (см. приложение), накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом в проходящем свете при увеличении в 200 — 400 раз.

2.5. Исследование окрашенных препаратов. Из суспензии готовят мазки, фиксируют метиловым спиртом или над пламенем горелки и окрашивают по Граму, Романовскому — Гимзе или фуксином Пфейффера.

2.6. В нативных препаратах трепонемы имеют вид подвижных извитых нитей с острыми концами, перемещающихся поступательно, змеевидно. Различают 3 вида трепонем свиней: крупные — длиной до 20 мкм, шириной 0,2 мкм, с 8 — 12 завитками; средние — длиной 8 — 12 мкм, с 6 — 8 завитками и малые — длиной до 8 мкм, шириной 0,1 мкм, с 3 — 4 завитками. Завитки расположены равномерно.

По размерам вибрионы в сравнении с трепонемами в 2 — 4 раза толще, с тупыми концами. Могут приобретать вид спирали с тремя и более изгибами, но меньшей амплитудой их расположения, чем у трепонем. Движение вибрионов — вращательное вокруг длинной оси.

У большинства больных дизентерией свиней при исследовании раздавленной капли в одном поле зрения микроскопа обнаруживают 5 — 10 и более (в зависимости от тяжести процесса) средних и крупных трепонем.

В окрашенных фиксированных препаратах обнаруживают грамотрицательные микроорганизмы с характерной для трепонем морфологией.

1. Краситель состоит из метиленовой сини — 3 г, спирта-ректификата — 25 мл, воды дистиллированной — 90 мл, 1%-ного раствора едкого кали — 1 мл, глицерина — 10 мл.

Метиленовую синь растворяют в водно-спиртовой смеси и помещают на 48 ч в термостат при 37 °C. Затем фильтруют и добавляют раствор едкого кали и глицерина.

2. При отсутствии метиленовой сини можно использовать краску, приготовленную по следующей прописи: бытовая краска для шерсти — черная или коричневая — 1 таблетка (около 5 г), спирт-ректификат — 25 мл, вода дистиллированная — 65 мл, карболовая кислота кристаллическая — 1 г, глицерин — 10 мл.

Техника приготовления краски такая же, как указано в п. 1.

---