Методические указания по лабораторным исследованиям на злокачественный отек животных

(утв. Минсельхозом СССР 05.01.1984)

Утверждены Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 5 января 1984 года

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНЫМ ИССЛЕДОВАНИЯМ НА ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫЙ ОТЕК ЖИВОТНЫХ

1. Общие положения.

1.1. Злокачественный отек — острая неконтагиозная инфекционная болезнь всех видов животных, возникающая после ранений, родов, травм, кастраций и характеризующаяся быстрым появлением газовых отеков, распадом тканей и сепсисом.

1.2. Злокачественный отек имеет полимикробную этиологию. Основными возбудителями являются Cl. septicum, Cl. oedematiens, Cl. sordellii, Cl. perfringens, Cl. histolyticum, иногда Cl. chauvoei, каждый из которых может вызвать заболевание самостоятельно, но чаще в ассоциации друг с другом, другими анаэробными или аэробными микроорганизмами. Из сопутствующих микроорганизмов наиболее важную роль играет Cl. sporogenes, который усиливает действие других патогенных анаэробов, придает процессу гнилостный характер и тем самым отягощает течение болезни.

1.3. Диагноз на злокачественный отек ставят на основании клинических, эпизоотологических и патологоанатомических данных с обязательным подтверждением лабораторными исследованиями.

1.4. Для исследования в лабораторию направляют кусочки пораженных мышц, тканевый экссудат и паренхиматозные органы, а от трупов овец, кроме того, направляют часть сычуга и тонкого отдела кишечника с содержимым (для одновременного исследования на брадзот и энтеротоксемию).

1.5. Исследование на злокачественный отек включает микроскопию мазков из патологического материала, посевы на питательные среды и заражение лабораторных животных.

2. Микроскопическое исследование.

2.1. Из пораженных тканей и другого патологического материала делают мазки-отпечатки и окрашивают их по Граму или Муромцеву.

2.2. При микроскопии мазков отмечают форму микробов, их расположение, наличие вегетативных форм, спор (споры окраску не воспринимают), капсул. Описание морфологии отдельных возбудителей дано в таблице 1.

Таблица 1

Культурально-морфологические свойства основных возбудителей злокачественного отека

Название возбудителя	Окраска по Граму	Морфология микробов	Форма спор и их расположение	Подвижность	Оптимум разрежения воздуха, мм рт. ст.	Характеристика роста на среде Китта — Тароцци	Формы колоний на глюкозо-кровяном агаре Цейсслера
Cl. septicum	+	Изолированные палочки с закругленными концами, в мазках-отпечатках с серозных оболочек — нити	Овальные, расположены субтерминально или центрально	+	8 — 15	Интенсивное помутнение, обильное газообразование	Нежный бесцветный вуалеобразный налет с микроскопически изрезанными краями и часто с нежными отростками, колонии окружены зоной гемолиза (III форма)
Cl. oedematiens	+	Крупные полиморфные палочки с закругленными или обрубленными концами, расположены одиночно, редко попарно или цепочками из 3 — 4 члеников	Овальные, расположены центрально или субтерминально	+	3 — 5	Рост более интенсивный внизу, через 18 — 24 ч бульон просветляется, на дне выпадает хлопьевидный осадок. Газообразование слабое	Шероховатые, корневидные, складчатые с изрезанными краями и выпуклым темным центром: гемолиз сильный, прозрачный, но может отсутствовать (II форма)
Cl. sordellii	+	Полиморфные палочки с закругленными концами, расположены чаще цепочками по 2 — 4 членика	Овальные, расположены субтерминально или центрально	+	8 — 15	Помутнение, более интенсивное внизу, и умеренное газообразование: при старении культур — слизистый осадок	Колонии неправильной формы, корневидные, складчатые, с сероватой шероховатой поверхностью и изрезанными краями. Гемолиз сильный, но может отсутствовать (II форма)
Cl. perfringens	+	Толстые палочки со слегка закругленными концами, расположены одиночно	Овальные, расположены субтерминально или центрально. В мазках из свежего трупа и молодых культур спор не обнаруживают	-	10	Раннее помутнение и бурное, интенсивное газообразование	Округлые, гладкие, выпуклые, серовато-зеленые колонии. Гемолиз сильный, грязно-коричневого цвета, имеет две зоны. Среда буро-коричневого цвета (I форма)
Cl. histolyticum	+	Стройные тонкие палочки с закругленными концами, расположены одиночно, попарно, редко цепочками	Овальные, расположены субтерминально («игольное ушко»)	+	8 — 15	Интенсивное помутнение без газообразования	Мелкие, круглые, гладкие колонии с ровными краями, гемолиз отсутствует, иногда незначительный (VIII форма)
Cl. sporogenes	+	Палочки с закругленными концами, расположены одиночно, иногда цепочками	Овальные, расположены субтерминально или центрально. Образование спор происходит очень быстро, в мазках почти у всех палочек обнаруживают споры	+	15 — 20	Рост обильный, кусочки печени обволакиваются слизистым осадком, верх среды прозрачный, газообразование слабое. Культура издает неприятный гнилостный запах	Колонии вязкие, с изрезанными краями, напоминающие корневище, погружены в агар, поверхность матовая, с желтоватым центром, зона гемолиза интенсивная, резко ограниченная (VI форма)

3. Бактериологическое исследование.

3.1. Высевы из патологического материала делают в среду Китта — Тароцци, МПБ и на МПА. Среду Китта — Тароцци предварительно регенерируют прогреванием в кипящей водяной бане в течение 15 — 30 мин, после чего быстро охлаждают до 45 — 50 °C.

Одновременно высев можно делать и на глюкозо-кровяной агар Цейсслера в чашках Петри.

3.2. Засеянные пробирки помещают в термостат на 24 — 48 ч при 37 — 38 °C. Чашки выдерживают в анаэробных условиях 24 — 48 ч.

3.3. Для создания анаэробных условий наиболее приемлем физический метод. Чашки, не переворачивая (дном вниз), помещают в микроанаэростат, или эксикатор, из которого удаляют воздух при помощи вакуум-насоса.

Из других методов можно применять химический с использованием гидросульфита натрия (Na2S2O4) и бикарбоната натрия (Na2CO3).

3.4. При просмотре роста в жидких питательных средах необходимо обращать внимание на интенсивность и равномерность помутнения среды, степень газообразования. Характеристика роста отдельных возбудителей дана в таблице 1.

3.5. При обнаружении в среде Китта — Тароцци роста микроорганизмов, сходных с возбудителями злокачественного отека, делают дробный пересев на 3 — 4 чашки с агаром Цейсслера. Посевы инкубируют, как указано в п. 3.3. Просмотр посевов проводят с помощью лупы или под малым увеличением микроскопа, обращая внимание на форму колоний и наличие гемолиза (см. табл. 1).

4. Биологическое исследование.

4.1. Одновременно с посевом материала на питательные среды проводят заражение морских свинок. Для этого кусочки пораженных тканей и другой патологический материал измельчают, тщательно растирают в стерильной ступке с песком и готовят равномерную взвесь, добавляя небольшое количество МПБ. Полученную взвесь вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам массой 350 — 400 г в дозе 0,5 — 1,0 мл.

4.2. При наличии в исследуемом материале возбудителей злокачественного отека морские свинки погибают через 16 — 48 ч в зависимости от вида возбудителя. При вскрытии у павших животных обнаруживают патологоанатомические изменения, характерные для того или иного возбудителя (см. табл. 2).

4.3. Из трупа морской свинки делают посевы из места введения материала, крови сердца и печени в среду Китта — Тароцци, МПБ и на МПА. Мазки-отпечатки готовят из тех же органов, а также с диафрагмальной поверхности печени.

4.4. При необходимости проверки вирулентности выделенных культур суточную культуру, выращенную на среде Китта — Тароцци, вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам в дозе 0,5 — 1,0 мл.

4.5 Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 8 сут.

5. Диагноз на злокачественный отек считается установленным в случае получения одного из следующих результатов:

выделение из патологического материала культуры со свойствами, характерными для одного из возбудителей данного заболевания, и гибель хотя бы одной из двух зараженных исходным материалом или полученной культурой морских свинок с типичной для данного возбудителя патологоанатомической картиной и выделением из органов культуры возбудителя;

гибели хотя бы одной морской свинки из двух, зараженных исходным материалом, при наличии у нее типичной для данного возбудителя патологоанатомической картины и выделения из нее культуры возбудителя, если даже в посевах из исходного материала культуры возбудителя не выделено.

6. Срок исследования 8 сут.

---