Методические указания по лабораторным исследованиям промежуточных (дополнительных) хозяев на личинки гельминтов

(одобрены Госагропромом СССР 29.12.1985)

1. Общие положения.

1.1. Промежуточными (дополнительными) хозяевами гельминтов являются моллюски, орибатидные клещи, муравьи, мошки, дождевые черви.

1.2. Исследование промежуточных (дополнительных) хозяев на личинки гельминтов проводят в летние месяцы в местностях (хозяйствах), неблагополучных по данным гельминтозам.

1.3. Для исследования в лабораторию направляют промежуточных (дополнительных) хозяев по 10 — 20 экз., собранных на увлажненном участке луга, в мелком водоеме, на прибрежье болота, в луже, пруде, муравейнике с пастбища.

Отобранные пробы помещают в пробирки, закрывают пробками и доставляют в лабораторию в день отбора.

2. Проведение исследования.

2.1. Исследование малого (усеченного) прудовика — промежуточного хозяина фасциолы обыкновенной. Моллюск имеет коническую тонкостенную раковину серовато-желтого цвета с 5 — 6 оборотами, устье — яйцевидной формы, повернутое вправо, сверху тупоугловатое.

Моллюска кладут на предметное стекло, отрезают ножницами верхушку раковины, переносят в каплю воды и исследуют под лупой. Моллюска можно исследовать целиком. Для чего его кладут на предметное стекло, накрывают другим стеклом, нажимают большими пальцами и исследуют в раздавленном препарате под лупой.

При микроскопии необходимо учитывать, что личинка (церкарий) — подвижна, молочного цвета, похожа на головастика, имеет ротовую и брюшную присоски, глотку, кишечные стволы.

2.2. Исследование орибатидного клеща — промежуточного хозяина мониезии жвачных. Это мелкие, темного цвета клещи.

Клеща кладут в каплю воды на предметное стекло, под лупой расщепляют панцирь и в полости тела находят личинок. При этом учитывают, что личинка (цистицеркоид) — шаровидной формы, покрыта толстой оболочкой, внутри тела расположен сколекс с четырьмя присосками и шейкой.

2.3. Исследование муравьев — дополнительных хозяев дикроцелий и промежуточных хозяев различных давэниат птиц.

Муравья кладут на предметное стекло, отсекают скальпелем брюшко, которое помещают в каплю воды и расщепляют препаровальными иглами под бинокулярной лупой или малым увеличением микроскопа.

При микроскопии учитывают, что личинка дикроцелии (метацеркарий) — овальной или яйцевидной формы, у нее хорошо различимы присоски, глотка, пищевод, кишечные стволы. Личинка давэниат (цистицеркоид) — также овальной или яйцевидной формы, внутри у нее сколекс и шейка, на сколексе заметны присоски и крючья.

2.4. Исследование мошек семейства симулиид — промежуточных хозяев онхоцерков крупного рогатого скота.

У мошки отделяют грудь с хоботком, которые помещают в каплю физиологического раствора на предметное стекло и вскрывают препаровальными иглами под лупой.

При микроскопии надо учитывать, что неинвазионные личинки находятся в грудке, инвазионные — в хоботке. Инвазионная личинка — удлиненной или сосискообразной формы, имеются пищевод, кишечник, нервное кольцо.

2.5. Исследование олигохет (дождевых червей) — промежуточных хозяев метастронгилюсов свиней и резервуарных — аскаридат.

Дождевых червей убивают, добавляя в пробирку несколько капель 1%-ного раствора формалина. Затем дождевого червя кладут на предметное стекло, разрезают ножницами кутикулу в передней четверти тела, отделяют пищевод, зоб, мускулистый желудок с окружающими кровеносными сосудами и помещают на предметное стекло, затем накрывают другим предметным, стекла сжимают и исследуют в раздавленном препарате под бинокулярной лупой.

2.6. Органы червей и моллюсков можно исследовать биохимическим методом — путем переваривания в искусственном желудочном соке (пепсин — 5 г, соляная кислота концентрированная — 10 мл, теплый физиологический раствор (43 °C) — 1000 мл). Органы червей и моллюска размельчают на предметном стекле, переносят в марлевый мешочек, кладут в воронку аппарата Бермана, заливают теплым искусственным желудочным соком в соотношении 1:15 и ставят в термостат при 43 °C на 1½ — 2ч . Затем пробирку аппарата Бермана отсоединяют, отстаивают в течение 5 — 10 мин, надосадочную жидкость отсасывают, а каплю осадка помещают на предметное или часовое стекло и исследуют под лупой.

При микроскопии необходимо учитывать, что у инвазионной личинки метастронгилюса задний конец острый, передний — тупой, недалеко от хвостового конца имеется маленький кутикулярный шип; личинка аскариды — белого цвета, имеет пищевод, кишечник в виде трубки.

3. Результат исследования считают положительным при обнаружении в препаратах личинок гельминтов.

4. Срок микроскопического исследования — 2 дня.

Сбор и учет гельминтов при вскрытиях животных. Червей из органов или их содержимого извлекают препаровальной иглой или кисточкой и помещают цестод, скребней и трематод в воду, а нематод — в 3%-ный раствор формалина. Оставлять гельминтов сухими на воздухе даже на короткое время не следует, так как в них проникает воздух, они становятся малопригодными для определения. Одновременно туда же помещают этикетку, написанную карандашом или тушью с указанием вида животного, органа, числа гельминтов, района, хозяйства, даты вскрытия и фамилии вскрывавшего. Пробирку закупоривают корковой пробкой и заливают воском или парафином.

Фиксация гельминтов. Круглых червей и пузырчатые формы ленточных червей фиксируют, сохраняют в жидкости Барбагалло (1000 мл воды, 30 г формалина и 9 г поваренной соли). Цестод, скребней и трематод, чтобы предварительно умертвить, промывают водой, в которой выдерживают несколько часов; затем для хранения переносят в 70%-ный спирт. Ленточных червей и трематод после промывания водой помещают между двумя предметными стеклами (мелкие формы между покровными стеклами). На препараты для их прессования кладут груз. В таком виде червей помещают в бактериологическую чашку, в которую осторожно наливают 70%-ный спирт. Через 10 — 12 ч их можно переложить в пробирку с тем же 70%-ным спиртом.

При полных гельминтологических вскрытиях и макрогельминтоскопиях фекалий не полностью просмотренные материалы (сливы) часто фиксируют 5 — 10%-ным раствором формалина, чтобы материал был пригоден для последующих исследований.

Обнаружение гельминтов при патологоанатомических вскрытиях и боенском осмотре. У жвачных животных могут быть замечены невооруженным глазом следующие гельминты:

в брюшной полости — цистицерки тонкошейные (на серозных покровах), сетарии;

в мозгу — ценуры, элафостронгилы;

в конъюнктивальной полости, слезных железах и их протоках — телязии;

в пищеводе (под слизистой оболочкой) — гонгилонемы;

в рубце — парамфистомататы, пигаргинемы;

в сычуге — гемонхи, парабронемы, пигаргинемы, трихостронгилиды;

в тонких кишках — аноплоцефаляты (мониезии, тизаниезии и др.), буностомы, аскаридаты (неоаскариды, аскариды), трихостронгилиды, скрябинемы;

в толстых кишках — эзофагостомы, хабертии, трихоцефалы (власоглавы);

в печени — фасциолы, дикроцелии, эхинококки (личиночная пузырчатая стадия);

в поджелудочной железе — эуритремы;

в альвеолах, бронхиолах, бронхах, трахее — диктиокаулы, протострогилы, мюллерии;

в легких — эхинококки (личиночная пузырчатая стадия);

в кровеносной системе — орнитобильхарции (в кровеносных сосудах печени), дипеталонемы (в кровеносных сосудах легких, печени, семенников, сосудах брыжейки, в полостях сердца у верблюдов);

в поперечнополосатой мускулатуре — цистицерки бычьи (у крупного рогатого скота), цистицерки овечьи (у ряда мелких животных);

в подкожной клетчатке — парафилярии (у крупного рогатого скота);

в шейных и гастролинеальной связках крупного рогатого скота — онхоцерки;

в коже крупного рогатого скота — стефанофилярии, рабдитиды.

У лошади и осла:

в брюшной полости — цистицерки тонкошейные (на серозных покровах), сетарии;

в мозгу — ценуры (личиночная стадия);

в сердце, глазах, межмышечной соединительной ткани — финны, сетарии;

в желудке — трихостронгилиды, физоцефалюсы свиней (факультативно);

в тонких кишках — аноплоцефалы, параскариды, трихонематиды, физоцефалюсы свиней (факультативно);

в толстых кишках — аноплоцефалы, оксиурисы, делафондии половозрелые (личинки делафондии — в узелках слизистой, в артериальной системе, печени, легких); альфортии половозрелые (личинки альфортий — под серозными покровами брюшной полости и в слизистой); стронгилюсы половозрелые (личинки стронгилюсов — в поджелудочной железе и слизистой); трихонематиды половозрелые (личинки трихонематид — в слизистой);

в печени — фасциолы, дикроцелии, сетарии;

в селезенке — сетарии;

в трахее и бронхах — диктиокаулы;

в подкожной клетчатке — парафилярии;

в выйной связке и сухожилиях сгибателей — онхоцерки (личиночная стадия).

У свиней:

в брюшной полости — цистицерки тонкошейные (на серозных покровах);

в мышце сердца, межмышечной соединительной ткани — финны (личиночная стадия), спарганумы;

в слизистой пищевода и глотки — гонгилонемы жвачных;

в желудке — аскаропсы, физоцефалюсы, оллуланы;

в тонких кишках — эхинохазмусы, лентецы широкие, аскариды, глобоцефалюсы, физоцефалюсы, тизаниезии (факультативно), оллуланы;

в толстых кишках — власоглавы, эзофагостомы, трихинеллы (половозрелые);

в желчных ходах печени — фасциолы, описторхисы;

в печени и легких — эхинококки (личиночная стадия);

в задних долях бронхов — метастронгилюсы;

в поперечнополосатой мускулатуре — личинки (трихинеллы).

У плотоядных:

в лобных пазухах — скрябингилы;

в правом желудочке сердца и в легочной артерии — дирофилярии сердца;

в опухолях аорты, пищевода, желудка — спироцерки;

в тонких кишках — эхинохазмусы, метагонимусы, алярии, мезоцестоидесы, дипилидиумы, эхинококки, цепень гидатигенный, цепень мультицепс, цепень пизиформный, лентец широкий, токсаскарисы, токсокары, трихинеллы (половозрелые), анкилостомы, унцинарии, капиллярии;

в толстых кишках — власоглавы;

в желчных ходах печени — описторхисы, клонорхисы;

в желчном пузыре, реже в поджелудочной железе — клонорхисы;

в разветвлениях бронхов, реже в печени и в других органах — парагонимусы, томинксы, филярииды;

в почечной лоханке, реже в брюшной полости — диоктофимы;

в мочевом пузыре — капиллярии;

в подкожной клетчатке — дирофилярии подкожной клетчатки;

в поперечнополосатой мускулатуре — личинки трихинелл.

---