--- title: "\"Методические указания по лабораторной диагностике эмфизематозного карбункула\"" issuer: "Министерство сельского хозяйства СССР" status: действует canonical: "https://bukva.ai/docs/metodicheskie-ukazaniya-po-laboratornoy-minselhoz-sssr-ministerstvo-9" --- ## "Методические указания по лабораторной диагностике эмфизематозного карбункула" # "Методические указания по лабораторной диагностике эмфизематозного карбункула" (утв. Минсельхозом СССР 10.10.1982) > [!IMPORTANT] > Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563). Утверждены Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 10 октября 1982 года **МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ** **ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ЭМФИЗЕМАТОЗНОГО КАРБУНКУЛА** 1. Общие положения. 1.1. Эмфизематозный (шумящий) карбункул - острая неконтагиозная инфекционная болезнь, преимущественно крупного рогатого скота, а иногда и овец, характеризующаяся крепитирующими отеками мышечной ткани. 1.2. Возбудитель заболевания Cl. chauvoei - строгий анаэроб, представляет собой спорообразующую, полиморфную, подвижную палочку с закругленными концами. В мазках-отпечатках и молодых культурах окрашивается грамположительно, в старых культурах - грамотрицательно. 1.3. Диагноз на эмфизематозный карбункул ставят на основании клинических патологоанатомических, эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований. 1.4. Для исследования в лабораторию направляют кусочки пораженных мышц, экссудат из крепитирующего отека. При этом прокипяченными инструментами вскрывают кожу, после чего инструменты меняют. Пораженный участок разрезают в глубину и из средней части мышцы отбирают кусочки пораженной ткани размером 3x3x3 см. В случае вскрытия трупа берут также кусочки печени и селезенки, кровь сердца. Материал для лабораторного исследования отбирают не позднее чем через 4 ч с момента гибели животного. В жаркое время года патологический материал консервируют 30%-ным стерильным водным раствором глицерина. 1.5 Исследование на эмфизематозный карбункул включает микроскопию мазков из патологического материала, посевы на питательные среды и заражение лабораторных животных. 2. Микроскопическое исследование. 2.1. Кусочками мышц и другого патологического материала на обезжиренных предметных стеклах делают мазки-отпечатки и окрашивают по Граму или Муромцеву. При микроскопии видны отдельные или попарно лежащие полиморфные (веретенообразные, шаровидные, грушевидные) зернистоокрашенные грамположительные палочки со спорами, которые расположены центрально или субтерминально, но могут лежать и свободно. Споры окраску не воспринимают. 3. Бактериологическое исследование. 3.1. Высевы из патологического материала делают в среду Китта - Тароцци, МПБ и на МПА. Для этого кусочки мышц, печени, селезенки обжигают на пламени и помещают в пробирки или флаконы со средой Китта - Тароцци; высевы в МПБ и на МПА, а также посевы крови и экссудата делают пастеровской пипеткой. Среду Китта - Тароцци предварительно регенерируют - прогревают в кипящей водяной бане в течение 15 - 30 мин, после чего быстро охлаждают до 45 - 50 °C. Одновременно высев можно делать и на глюкозо-кровяной агар Цейсслера в чашках Петри. При поступлении несвежего патологического материала из него готовят суспензию на физиологическом растворе (1:4), которую прогревают в течение 15 - 20 мин при 80 °C, после чего делают высев. Засеянные пробирки помещают в термостат на 24 - 48 ч при 37 - 38 °C. Чашки выдерживают в анаэробных условиях 24 - 48 ч. Для создания анаэробных условий наиболее приемлем физический метод. Чашки, не переворачивая (дном вниз), помещают в микроанаэростат или эксикатор, из которого удаляют воздух при помощи вакуум-насоса. Из других методов можно применять химический с использованием гидросульфита натрия (Na2S2O4) и бикарбоната натрия (Na2CO3). Чашки Петри с посевами ставят на обычное стекло дном вверх. Кислородпоглощающую смесь насыпают в 2 - 3 чашки Петри с разбитыми крышками и слегка увлажняют. Одну чашку ставят под чашки с посевами, другую - между ними, а третью - сверху. Все чашки закрывают стеклянным цилиндром, предварительно поместив под цилиндр индикаторную марлю. Герметичность создают, обмазывая пластилином края цилиндра в месте соприкосновения со стеклом. Обесцвечивание индикаторной марли через сутки инкубации посева в термостате указывает на создание условий анаэробиоза. Если марля не обесцветилась, необходимо добавить к поглощающей смеси гидросульфит. Приготовление индикатора. Марлю или фильтровальную бумагу пропитывают раствором следующего состава: 10%-ного раствора глюкозы 4,2 мл, нормального раствора едкого натра 0,1 мл, 1,5%-ного раствора метиленовой сини в дистиллированной воде 0,1 мл. После высыхания марлю или бумагу режут на кусочки и хранят в банках из темного стекла. 3.2. При росте Cl. chauvoei на среде Китта - Тароцци сначала наблюдается помутнение бульона, равномерно распределяющееся по всему столбику. Через 20 - 24 ч питательная среда начинает просветляться, и к 36 - 48 ч столбик ее становится прозрачным, а на дне пробирки или флакона образуется осадок микробных клеток. Газообразование незначительное. При микроскопии культур обнаруживают отдельные или попарно лежащие грамположительные палочки и палочки со спорами. 3.3. Для выделения чистой культуры возбудителя из жидких питательных сред делают дробный рассев на 3 - 4 чашки с глюкозо-кровяным агаром Цейсслера, предварительно подсушенным в термостате в течение 5 - 6 ч. Засеянные чашки выдерживают в анаэробных условиях 24 - 48 ч в термостате при 37 - 38 °C. 3.4. На агаре Цейсслера наблюдается характерный рост колоний в виде перламутровой пуговицы или с изрезанными краями (виноградный лист), вокруг колоний - неширокая зона гемолиза. Если в первичных посевах была получена смешанная культура - характерные колонии отсевают в пробирки со средой Китта - Тароцци и выращивают 24 - 36 ч, отмечая характер роста, морфологию и тинкториальные свойства. 3.5. В случае, когда к моменту выделения чистой культуры возбудителя морские свинки, зараженные исходным материалом, живы, полученную культуру проверяют на патогенность путем заражения морских свинок в дозе 0,5 мл. 3.6. При наличии типичного роста на жидкой и плотной питательных средах, характерных морфологических и тинкториальных свойств выделенную культуру относят к Cl. chauvoei. 4. Биологическое исследование. 4.1. Одновременно с посевами заражают лабораторных животных. Для этого кусочки мышц, селезенки или печени измельчают и тщательно растирают в стерильной ступке с небольшим количеством МПБ в равномерную взвесь. Полученную взвесь (1:10) в дозе 0,5 - 1,0 мл вводят подкожно в области брюшных мышц двум морским свинкам массой 350 - 400 г. Кровь и мышечный экссудат вводят таким же способом в дозе 0,5 - 1,0 мл. Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 8 сут. 4.2. При наличии Cl. chauvoei животные погибают в течение 24 - 96 ч. У павших морских свинок на коже отмечается серозно-некротический выпот, разлитые или точечные кровоизлияния. Кожа от пораженных мышц отделяется с трудом. Мышцы груди, брюшного пресса, иногда и задних конечностей темно-красного цвета. В паховых и реже в подмышечных областях обнаруживаются незначительные скопления пузырьков газа. Кишечник не вздут, а как бы уложен, органы брюшной полости без видимых изменений. Желчный пузырь переполнен желчью. 4.3. Из трупа или убитой в агональном состоянии морской свинки делают посевы из места введения материала, крови сердца и печени в среду Китта - Тароцци, МПБ и на МПА. Готовят мазки-отпечатки из тех же органов, а также с диафрагмальной поверхности печени. 4.4. В мазках-отпечатках с диафрагмальной поверхности печени, окрашенных по Граму или Муромцеву, обнаруживают отдельно лежащие палочки, редко встречаются цепочки из 2 - 3 члеников, что является одним из дифференцирующих признаков от Cl. septicum, при заражении которым в мазках с поверхности печени обнаруживают нити или длинные цепочки. 4.5. При необходимости дифференциации эмфизематозного карбункула от злокачественного отека суспензией из органов (1:10) или культурой заражают кролика массой 2,0 - 2,5 кг подкожно в область спины в дозе 1,0 - 1,5 мл. При наличии возбудителя эмфизематозного карбункула кролик не погибает. 5. Диагноз на эмфизематозный карбункул считают установленным в случае: выделения из патологического материала культуры со свойствами, характерными для возбудителя этого заболевания, и гибели хотя бы одной морской свинки с типичной патологоанатомической картиной и выделением из ее органов культуры возбудителя; гибели хотя бы одной морской свинки из двух, зараженных исходным материалом, при наличии у нее типичной для данного заболевания патологоанатомической картины и выделении из ее органов культуры возбудителя, если даже в посевах из исходного материала культура возбудителя не выделена. 6. Срок исследования - до 8 дн. ---