---
title: "\"Методические указания по лабораторной диагностике везикулярной болезни и везикулярной экзантемы свиней\""
issuer: "Министерство сельского хозяйства СССР"
status: действует
canonical: "https://bukva.ai/docs/metodicheskie-ukazaniya-po-laboratornoy-minselhoz-sssr-ministerstvo-3"
---

## "Методические указания по лабораторной диагностике везикулярной болезни и везикулярной экзантемы свиней"

# "Методические указания по лабораторной диагностике везикулярной болезни и везикулярной экзантемы свиней"

(утв. Минсельхозом СССР 15.06.1979)

> [!IMPORTANT]
> Документ включен в Перечень нормативной документации, разрешенной для использования в государственных ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных, рыб, пчел, а также контроля безопасности сырья животного и растительного происхождения (утв. Россельхознадзором 30.07.2009 N 02-03-48/563).
> Взамен "Временного наставления по лабораторной диагностике везикулярной болезни свиней", утв. Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 19.02.1975.


<a id="p100001"></a>Утверждены
Министерством сельского
хозяйства СССР
15 июня 1979 года

<a id="p100002"></a>**МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКЕ**
**ВЕЗИКУЛЯРНОЙ БОЛЕЗНИ И ВЕЗИКУЛЯРНОЙ ЭКЗАНТЕМЫ СВИНЕЙ**


## 1. <a id="p100003"></a>Общие положения.


#### <a id="p100004"></a>1.1 Лабораторная диагностика везикулярной болезни (ВБС) и везикулярной экзантемы синей (ВЭС) заключается в:

- <a id="p100005"></a>обнаружении антигена в патологическом материале (везикулы, везикулярная жидкость) методами реакции связывания комплемента (РСК), реакции диффузионной преципитации (РДП);
- <a id="p100006"></a>выделении возбудителя из патологического материала в культуре клеток и его идентификации в серологических реакциях: иммунофлуоресценции (ИФ), РСК или реакции нейтрализации (РН);
- <a id="p100007"></a>выявлении антител в крови больных и переболевших животных (ретроспективная диагностика) в одной из серологических реакций РСК, РДП, РН;
- <a id="p100008"></a>биологической пробе;
- <a id="p100009"></a>исследовании физико-химических свойств выделенного вируса.
<a id="p100010"></a>1.2. При диагностике везикулярной болезни и везикулярной экзантемы проводят дифференциацию везикулярного стоматита и ящура в РСК или РДП и биологической пробе с использованием сопутствующих каждой инфекции диагностических наборов, выпускаемых биологической промышленностью.
<a id="p100011"></a>1.3. Лабораторный диагноз на везикулярную болезнь и везикулярную экзантему свиней ставят на основании положительных результатов исследования патологического материала на обнаружение антигена с помощью одной из серологических реакций (РСК, РДП) или выделения возбудителя в РСК или РН или установления двукратного нарастания титра антител в организме животных с учетом эпизоотологических и клинических данных.
<a id="p100012"></a>1.4. Для постановки лабораторного диагноза методом обнаружения антигена в патологическом материале требуется 1 ... 3 дня, для выявления вируса и его идентификации - до 10 дней, для выявления прироста антител в крови животных - от 2 до 4 недель.


## 2. <a id="p100013"></a>Взятие и подготовка материала для исследования.

<a id="p100014"></a>2.1. В лабораторию для исследования направляют стенки невскрывшихся везикул и везикулярную жидкость от 2 ... 5 больных животных в количестве не менее 2 г. Везикулы от свиней берут с кожи "пятачка", венчика, мякишей или вымени, предварительно промыв эти участки кожи водой с антибиотиками (1000 ЕД пенициллина и стрептомицина на 1 мл). Стенки везикул срезают ножницами, помещают во флакон или пробирки, опечатывают и в термосе со льдом направляют в лабораторию с нарочным.
<a id="p100015"></a>Для ретроспективной диагностики на исследование направляют пробы крови от 5 ... 10 переболевших животных.
<a id="p100016"></a>2.2. В лаборатории везикулы отмывают физиологическим раствором, растирают в ступке и добавляют 1:5 фосфатно-буферный раствор с pH 7,2 ... 7,4. После двукратного замораживания и оттаивания взвесь центрифугируют при 10 000 об/мин на холоде в течение 30 мин. Надосадочную жидкость исследуют в РСК на наличие антигена. Для РДП используют неразведенную везикулярную жидкость из невскрывшихся везикул или 35 ... 50%-ную взвесь на физиологическом растворе из стенок везикул.
<a id="p100017"></a>2.3. Для выделения вируса в культуре клеток готовят 10%-ную взвесь из везикул на фосфатно-буферном растворе или питательной среде и, не подвергая замораживанию и оттаиванию, центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. В надосадочную жидкость добавляют антибиотики по 1000 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина и используют для заражения.


## 3. <a id="p100018"></a>Обнаружение типоспецифического антигена в патологическом материале в РСК.


#### <a id="p100019"></a>3.1 Компоненты реакции:

- <a id="p100020"></a>испытуемый антиген, приготовленный, как указано в [п. 2.2](#p100016);
- <a id="p100021"></a>два типоспецифических комплементсвязывающих (КС) антигена вируса ВБС (0-72 и Т-75);
- <a id="p100022"></a>два типоспецифических КС антигена вируса ВЭС (С-72 и А-48);
- <a id="p100023"></a>контрольный (отрицательный) антиген;
- <a id="p100024"></a>две типоспецифических комплементсвязывающих сыворотки к вирусу ВБС (0-72 и Т-75);
- <a id="p100025"></a>две типоспецифических КС сыворотки к вирусу ВЭС (С-72 и А-48);
- <a id="p100026"></a>контрольная (отрицательная) сыворотка;
- <a id="p100027"></a>гемолизин;
- <a id="p100028"></a>комплемент;
- <a id="p100029"></a>эритроциты барана (2%-ная взвесь).
<a id="p100030"></a>3.2. Испытуемый антиген исследуют в двукратных разведениях, остальные антигены и сыворотки - в удвоенном титре.
<a id="p100031"></a>3.3. Постановка реакции: реакцию ставят в пробирках, титрование гемолизина и комплемента проводят в объеме 2,5 мл, а основной опыт - в объеме 0,5 мл.
<a id="p100032"></a>РСК проводят в четыре этапа: титрование гемолизина, титрование комплемента, титрование антигенов и сывороток в присутствии комплемента и постановка главного опыта.
<a id="p100033"></a>3.3.1. Титрование гемолизина. Для титрования гемолизина готовят основное его разведение 1:100 (0,2 мл гемолизина и 9,8 мл физиологического раствора, с учетом того, что гемолизин в ампуле разведен глицерином), затем - разведение 1:1000 и из этого разведения готовят все последующие по схеме 1.

<a id="p100034"></a>Схема 1

<a id="p100035"></a>Приготовление разведений гемолизина


| <a id="p100036"></a>Необходимые<br>разведения<br>Компоненты | <a id="p100037"></a>1:1500 | <a id="p100038"></a>1:2000 | <a id="p100039"></a>1:3000 | <a id="p100040"></a>1:4000 | <a id="p100041"></a>1:5000 | <a id="p100042"></a>1:6000 |
| --- | --- | --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100043"></a>Гемолизин 1:1000 | <a id="p100044"></a>1,0 | <a id="p100045"></a>1,0 | <a id="p100046"></a>1,0 | <a id="p100047"></a>1,0 | <a id="p100048"></a>1,0 | <a id="p100049"></a>1,0 |
| <a id="p100050"></a>Физиологический раствор | <a id="p100051"></a>0,5 | <a id="p100052"></a>1,0 | <a id="p100053"></a>2,0 | <a id="p100054"></a>3,0 | <a id="p100055"></a>4,0 | <a id="p100056"></a>5,0 |


<a id="p100057"></a>Схема 2

<a id="p100058"></a>Титрование гемолизина


<table>
<colgroup><col width="31%"><col width="11%"><col width="11%"><col width="11%"><col width="11%"><col width="11%"><col width="11%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100059"></a>Разведение<br>гемолизина<br>Компоненты</td><td><a id="p100060"></a>1:1000</td><td><a id="p100061"></a>1:1500</td><td><a id="p100062"></a>1:2000</td><td><a id="p100063"></a>1:3000</td><td><a id="p100064"></a>1:4000</td><td><a id="p100065"></a>1:5000</td></tr>
<tr><td><a id="p100066"></a>Гемолизин</td><td><a id="p100067"></a>0,5</td><td><a id="p100068"></a>0,5</td><td><a id="p100069"></a>0,5</td><td><a id="p100070"></a>0,5</td><td><a id="p100071"></a>0,5</td><td><a id="p100072"></a>0,5</td></tr>
<tr><td><a id="p100073"></a>Физиологический раствор</td><td><a id="p100074"></a>1,0</td><td><a id="p100075"></a>1,0</td><td><a id="p100076"></a>1,0</td><td><a id="p100077"></a>1,0</td><td><a id="p100078"></a>1,0</td><td><a id="p100079"></a>1,0</td></tr>
<tr><td><a id="p100080"></a>Комплемент 1:20</td><td><a id="p100081"></a>0,5</td><td><a id="p100082"></a>0,5</td><td><a id="p100083"></a>0,5</td><td><a id="p100084"></a>0,5</td><td><a id="p100085"></a>0,5</td><td><a id="p100086"></a>0,5</td></tr>
<tr><td><a id="p100087"></a>Эритроциты</td><td><a id="p100088"></a>0,5</td><td><a id="p100089"></a>0,5</td><td><a id="p100090"></a>0,5</td><td><a id="p100091"></a>0,5</td><td><a id="p100092"></a>0,5</td><td><a id="p100093"></a>0,5</td></tr>
<tr><td colspan="7"><a id="p100094"></a>Встряхивают, помещают на водяную баню при 37 °C на 30 мин</td></tr>
<tr><td><a id="p100095"></a>Учет степени гемолиза</td><td><a id="p100096"></a>0</td><td><a id="p100097"></a>0</td><td><a id="p100098"></a>0</td><td><a id="p100099"></a>0</td><td><a id="p100100"></a>+</td><td><a id="p100101"></a>++++</td></tr>
</table>


<a id="p100102"></a>Примечание: 0 - полный гемолиз; ++++ - полная задержка.

<a id="p100103"></a>Титром гемолизина считают наивысшее его разведение, дающее полный гемолиз эритроцитов.
<a id="p100104"></a>Рабочим разведением гемолизина считают четырехкратную концентрацию его предельного титра с учетом консервирования глицерином.
<a id="p100105"></a>Например, если предельный титр гемолизина 1:4000, рабочее разведение его составит 1:1000, то берут его в соотношении 2:1000 (0,2 мл гемолизина и 99,8 мл физиологического раствора).
<a id="p100106"></a>Для приготовления гемсистемы используют гемолизин в рабочем разведении и смешивают с равным количеством 2%-ной взвеси эритроцитов и выдерживают при комнатной температуре в течение 10 ... 15 мин.
<a id="p100107"></a>3.3.2. Титрование комплемента. Комплемент титруют в разведении 1:20 в различных дозах по схеме 3.

<a id="p100108"></a>Схема 3

<a id="p100109"></a>Титрование комплемента


<table>
<colgroup><col width="39%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="7%"><col width="8%"><col width="7%"><col width="7%"><col width="7%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100110"></a>Компоненты<br>реакции</td><td colspan="8"><a id="p100111"></a>Процентное содержание комплемента в дозах</td></tr>
<tr><td><a id="p100112"></a>0,5</td><td><a id="p100113"></a>1</td><td><a id="p100114"></a>1,5</td><td><a id="p100115"></a>2</td><td><a id="p100116"></a>2,5</td><td><a id="p100117"></a>3</td><td><a id="p100118"></a>3,5</td><td><a id="p100119"></a>4</td></tr>
<tr><td><a id="p100120"></a>Комплемент 1:20</td><td><a id="p100121"></a>0,05</td><td><a id="p100122"></a>0,1</td><td><a id="p100123"></a>0,15</td><td><a id="p100124"></a>0,2</td><td><a id="p100125"></a>0,25</td><td><a id="p100126"></a>0,3</td><td><a id="p100127"></a>0,35</td><td><a id="p100128"></a>0,4</td></tr>
<tr><td><a id="p100129"></a>Физиологический раствор</td><td><a id="p100130"></a>1,45</td><td><a id="p100131"></a>1,4</td><td><a id="p100132"></a>1,35</td><td><a id="p100133"></a>1,3</td><td><a id="p100134"></a>1,25</td><td><a id="p100135"></a>1,2</td><td><a id="p100136"></a>1,15</td><td><a id="p100137"></a>1,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100138"></a>Гемолизин в рабочем разведении</td><td><a id="p100139"></a>0,5</td><td><a id="p100140"></a>0,5</td><td><a id="p100141"></a>0,5</td><td><a id="p100142"></a>0,5</td><td><a id="p100143"></a>0,5</td><td><a id="p100144"></a>0,5</td><td><a id="p100145"></a>0,5</td><td><a id="p100146"></a>0,5</td></tr>
<tr><td><a id="p100147"></a>Эритроциты</td><td><a id="p100148"></a>0,5</td><td><a id="p100149"></a>0,5</td><td><a id="p100150"></a>0,5</td><td><a id="p100151"></a>0,5</td><td><a id="p100152"></a>0,5</td><td><a id="p100153"></a>0,5</td><td><a id="p100154"></a>0,5</td><td><a id="p100155"></a>0,5</td></tr>
<tr><td colspan="9"><a id="p100156"></a>Выдержать на водяной бане при 37 °C 15 мин</td></tr>
<tr><td><a id="p100157"></a>Учет результата</td><td><a id="p100158"></a>++++</td><td><a id="p100159"></a>++</td><td><a id="p100160"></a>+</td><td><a id="p100161"></a>0</td><td><a id="p100162"></a>0</td><td><a id="p100163"></a>0</td><td><a id="p100164"></a>0</td><td><a id="p100165"></a>0</td></tr>
</table>


<a id="p100166"></a>Титром комплемента считают наименьшее его количество, при котором наступает полный гемолиз эритроцитов. Для титрования антигенов, сывороток и постановки главного опыта используют 2 дозы комплемента, которые соответствуют пробирке, находящейся через одну пробирку вправо от последней пробирки с полным гемолизом.
<a id="p100167"></a>По [схеме 3](#p100109) полный гемолиз дают 2% комплемента, следовательно, рабочей дозой комплемента является разведение с содержанием 3% комплемента. Разведение готовят из цельного комплемента.
<a id="p100168"></a>Например, по [схеме 3](#p100109) в опыт на 100 пробирок требуется 10 мл разведенного комплемента, для этого берут 0,3 мл цельного комплемента и добавляют 9,7 мл физиологического раствора.
<a id="p100169"></a>3.3.3. Титрование типоспецифических антигенов. Титрование антигенов проводят с целью установления рабочей дозы антигена по схеме 4. Типоспецифические сыворотки используют в двойном титре.

<a id="p100170"></a>Схема 4

<a id="p100171"></a>Титрование типоспецифических антигенов


<table>
<colgroup><col width="31%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100172"></a>Разведение<br>антигенов<br>Компоненты</td><td><a id="p100173"></a>1:2</td><td><a id="p100174"></a>1:3</td><td><a id="p100175"></a>1:4</td><td><a id="p100176"></a>1:6</td><td><a id="p100177"></a>1:8</td><td><a id="p100178"></a>1:10</td><td><a id="p100179"></a>1:12</td><td><a id="p100180"></a>1:16</td></tr>
<tr><td><a id="p100181"></a>Антиген типоспецифический</td><td><a id="p100182"></a>0,1</td><td><a id="p100183"></a>0,1</td><td><a id="p100184"></a>0,1</td><td><a id="p100185"></a>0,1</td><td><a id="p100186"></a>0,1</td><td><a id="p100187"></a>0,1</td><td><a id="p100188"></a>0,1</td><td><a id="p100189"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100190"></a>Сыворотка типоспецифическая</td><td><a id="p100191"></a>0,1</td><td><a id="p100192"></a>0,1</td><td><a id="p100193"></a>0,1</td><td><a id="p100194"></a>0,1</td><td><a id="p100195"></a>0,1</td><td><a id="p100196"></a>0,1</td><td><a id="p100197"></a>0,1</td><td><a id="p100198"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100199"></a>Комплемент</td><td><a id="p100200"></a>0,1</td><td><a id="p100201"></a>0,1</td><td><a id="p100202"></a>0,1</td><td><a id="p100203"></a>0,1</td><td><a id="p100204"></a>0,1</td><td><a id="p100205"></a>0,1</td><td><a id="p100206"></a>0,1</td><td><a id="p100207"></a>0,1</td></tr>
<tr><td colspan="9"><a id="p100208"></a>Водяная баня при 37 °C 30 мин</td></tr>
<tr><td><a id="p100209"></a>Гемсистема</td><td><a id="p100210"></a>0,2</td><td><a id="p100211"></a>0,2</td><td><a id="p100212"></a>0,2</td><td><a id="p100213"></a>0,2</td><td><a id="p100214"></a>0,2</td><td><a id="p100215"></a>0,2</td><td><a id="p100216"></a>0,2</td><td><a id="p100217"></a>0,2</td></tr>
<tr><td colspan="9"><a id="p100218"></a>Водяная баня при 37 °C 30 мин</td></tr>
<tr><td><a id="p100219"></a>Учет результата</td><td><a id="p100220"></a>++++</td><td><a id="p100221"></a>++++</td><td><a id="p100222"></a>+++</td><td><a id="p100223"></a>+</td><td><a id="p100224"></a>+</td><td><a id="p100225"></a>0</td><td><a id="p100226"></a>0</td><td><a id="p100227"></a>0</td></tr>
</table>


<a id="p100228"></a>Титром антигена считают его наибольшее разведение, давшее со специфической сывороткой задержку гемолиза не менее чем на три креста.
<a id="p100229"></a>Рабочим разведением антигена считается удвоенный титр антигена. По [схеме 4](#p100171) рабочее разведение антигена будет равно 1:2.
<a id="p100230"></a>3.3.4. Титрование типоспецифических сывороток проводят по [схеме 4](#p100171), используя разведения их до предельного титра, а антигены - в рабочих разведениях.
<a id="p100231"></a>3.3.5. Постановка главного опыта РСК. Реакции связывания комплемента ставят в объеме 0,5 мл. Первую фазу реакции (фазу связывания комплемента) проводят на водяной бане при температуре 37 °C в течение 20 ... 30 мин. Вторую фазу (фазу выявления) также проводят на водяной бане при температуре 37 °C в течение 20 ... 30 мин.

<a id="p100232"></a>Схема 5

<a id="p100233"></a>Определение серотипа вирусов ВБС и ВЭС


<table>
<colgroup><col width="33%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="12%"><col width="18%"></colgroup>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100234"></a>Компоненты</td><td colspan="4"><a id="p100235"></a>Сыворотки к типам вирусов</td><td rowspan="2"><a id="p100236"></a>Без сыворотки</td></tr>
<tr><td><a id="p100237"></a>0-72</td><td><a id="p100238"></a>Т-75</td><td><a id="p100239"></a>С-72</td><td><a id="p100240"></a>А-48</td></tr>
<tr><td><a id="p100241"></a>Испытуемый антиген</td><td><a id="p100242"></a>0,1</td><td><a id="p100243"></a>0,1</td><td><a id="p100244"></a>0,1</td><td><a id="p100245"></a>0,1</td><td><a id="p100246"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100247"></a>Типоспецифическая сыворотка</td><td><a id="p100248"></a>0,1</td><td><a id="p100249"></a>0,1</td><td><a id="p100250"></a>0,1</td><td><a id="p100251"></a>0,1</td><td><a id="p100252"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100253"></a>Комплемент</td><td><a id="p100254"></a>0,1</td><td><a id="p100255"></a>0,1</td><td><a id="p100256"></a>0,1</td><td><a id="p100257"></a>0,1</td><td><a id="p100258"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100259"></a>Физиологический раствор</td><td><a id="p100260"></a>-</td><td><a id="p100261"></a>-</td><td><a id="p100262"></a>-</td><td><a id="p100263"></a>-</td><td><a id="p100264"></a>0,1</td></tr>
<tr><td colspan="6"><a id="p100265"></a>Водяная баня при 37 °C, 30 мин</td></tr>
<tr><td><a id="p100266"></a>Гемсистема</td><td><a id="p100267"></a>0,2</td><td><a id="p100268"></a>0,2</td><td><a id="p100269"></a>0,2</td><td><a id="p100270"></a>0,2</td><td><a id="p100271"></a>0,2</td></tr>
<tr><td colspan="6"><a id="p100272"></a>Водяная баня при 37 °C, 30 мин</td></tr>
<tr><td><a id="p100273"></a>Учет результата</td><td><a id="p100274"></a>++++</td><td><a id="p100275"></a>-</td><td><a id="p100276"></a>-</td><td><a id="p100277"></a>-</td><td><a id="p100278"></a>-</td></tr>
</table>


<a id="p100279"></a>Учет РСК проводят по 100%-ному гемолизу. Главный опыт ставят по [схеме 5](#p100233).
<a id="p100280"></a>Учет результатов проводят по схеме 6.

<a id="p100281"></a>Схема 6

<a id="p100282"></a>Учет результатов постановки РСК


<table>
<colgroup><col width="19%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="8%"><col width="5%"><col width="5%"><col width="5%"><col width="6%"><col width="8%"><col width="9%"><col width="9%"></colgroup>
<tr><td rowspan="3"><a id="p100283"></a>Антигены</td><td colspan="9"><a id="p100284"></a>Типоспецифические сыворотки в рабочих титрах</td><td rowspan="3"><a id="p100285"></a>Нормальная сыворотка</td><td rowspan="3"><a id="p100286"></a>Без сыворотки</td></tr>
<tr><td rowspan="2"><a id="p100287"></a>ВБС шт. 0-72</td><td rowspan="2"><a id="p100288"></a>ВБС шт. Т-75</td><td rowspan="2"><a id="p100289"></a>ВЭС шт. С-72</td><td rowspan="2"><a id="p100290"></a>ВЭС шт. А-48</td><td colspan="3"><a id="p100291"></a>Ящур</td><td colspan="2"><a id="p100292"></a>ВС</td></tr>
<tr><td><a id="p100293"></a>А</td><td><a id="p100294"></a>О</td><td><a id="p100295"></a>С</td><td><a id="p100296"></a>Инд.</td><td><a id="p100297"></a>Н-Дж.</td></tr>
<tr><td><a id="p100298"></a>Шт. 0-72 станд. (ВБС)</td><td><a id="p100299"></a>++++</td><td><a id="p100300"></a>-</td><td><a id="p100301"></a>-</td><td><a id="p100302"></a>-</td><td><a id="p100303"></a>-</td><td><a id="p100304"></a>-</td><td><a id="p100305"></a>-</td><td><a id="p100306"></a>-</td><td><a id="p100307"></a>-</td><td><a id="p100308"></a>-</td><td><a id="p100309"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100310"></a>Шт. Т-75 станд. (ВБС)</td><td><a id="p100311"></a>-</td><td><a id="p100312"></a>++++</td><td><a id="p100313"></a>-</td><td><a id="p100314"></a>-</td><td><a id="p100315"></a>-</td><td><a id="p100316"></a>-</td><td><a id="p100317"></a>-</td><td><a id="p100318"></a>-</td><td><a id="p100319"></a>-</td><td><a id="p100320"></a>-</td><td><a id="p100321"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100322"></a>Шт. С-72 станд. (ВЭС)</td><td><a id="p100323"></a>-</td><td><a id="p100324"></a>-</td><td><a id="p100325"></a>++++</td><td><a id="p100326"></a>-</td><td><a id="p100327"></a>-</td><td><a id="p100328"></a>-</td><td><a id="p100329"></a>-</td><td><a id="p100330"></a>-</td><td><a id="p100331"></a>-</td><td><a id="p100332"></a>-</td><td><a id="p100333"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100334"></a>Шт. А-48 этал. (ВЭС)</td><td><a id="p100335"></a>-</td><td><a id="p100336"></a>-</td><td><a id="p100337"></a>-</td><td><a id="p100338"></a>++++</td><td><a id="p100339"></a>-</td><td><a id="p100340"></a>-</td><td><a id="p100341"></a>-</td><td><a id="p100342"></a>-</td><td><a id="p100343"></a>-</td><td><a id="p100344"></a>-</td><td><a id="p100345"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100346"></a>Испытуемый антиген в виде 20%-ной взвеси, цельн.</td><td><a id="p100347"></a>++++</td><td><a id="p100348"></a>+</td><td><a id="p100349"></a>-</td><td><a id="p100350"></a>-</td><td><a id="p100351"></a>-</td><td><a id="p100352"></a>-</td><td><a id="p100353"></a>-</td><td><a id="p100354"></a>-</td><td><a id="p100355"></a>-</td><td><a id="p100356"></a>-</td><td><a id="p100357"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100358"></a>То же 1:2</td><td><a id="p100359"></a>+++</td><td><a id="p100360"></a>-</td><td><a id="p100361"></a>-</td><td><a id="p100362"></a>-</td><td><a id="p100363"></a>-</td><td><a id="p100364"></a>-</td><td><a id="p100365"></a>-</td><td><a id="p100366"></a>-</td><td><a id="p100367"></a>-</td><td><a id="p100368"></a>-</td><td><a id="p100369"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100370"></a>То же 1:4</td><td><a id="p100371"></a>++</td><td><a id="p100372"></a>-</td><td><a id="p100373"></a>-</td><td><a id="p100374"></a>-</td><td><a id="p100375"></a>-</td><td><a id="p100376"></a>-</td><td><a id="p100377"></a>-</td><td><a id="p100378"></a>-</td><td><a id="p100379"></a>-</td><td><a id="p100380"></a>-</td><td><a id="p100381"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100382"></a>Контрольный антиген</td><td><a id="p100383"></a>-</td><td><a id="p100384"></a>-</td><td><a id="p100385"></a>-</td><td><a id="p100386"></a>-</td><td><a id="p100387"></a>-</td><td><a id="p100388"></a>-</td><td><a id="p100389"></a>-</td><td><a id="p100390"></a>-</td><td><a id="p100391"></a>-</td><td><a id="p100392"></a>-</td><td><a id="p100393"></a>-</td></tr>
<tr><td><a id="p100394"></a>Без антигена</td><td><a id="p100395"></a>-</td><td><a id="p100396"></a>-</td><td><a id="p100397"></a>-</td><td><a id="p100398"></a>-</td><td><a id="p100399"></a>-</td><td><a id="p100400"></a>-</td><td><a id="p100401"></a>-</td><td><a id="p100402"></a>-</td><td><a id="p100403"></a>-</td><td><a id="p100404"></a>-</td><td><a id="p100405"></a>-</td></tr>
</table>


<a id="p100406"></a>*Примечания.* Испытуемый антиген относится к 1-му серотипу вируса ВБС шт. 0-72.

<a id="p100407"></a>Обозначение результатов РСК: ++++ - 100%-ная задержка гемолиза; +++ - 75%-ная задержка гемолиза; ++ - 50%-ная задержка гемолиза; + - 25%-ная задержка гемолиза; - - полный гемолиз.

<a id="p100408"></a>3.4. Положительной РСК считается в том случае, когда наблюдается 100%-ная или 75%-ная задержка гемолиза (четыре-три креста) в присутствии одной из типоспецифических сывороток и антигена из испытуемого материала при полной задержке гемолиза в контрольных пробирках с соответствующими специфическими антигенами и сыворотками и при полном гемолизе в пробирках с контрольным - нормальным антигеном и гетерологичными сыворотками.
<a id="p100409"></a>При получении сомнительного результата (один-два креста) РСК повторяют.
<a id="p100410"></a>При получении повторного сомнительного результата реакцию считают положительной.
<a id="p100411"></a>При получении отрицательного результата в РСК (тепловой вариант с учетом по 100%-ному гемолизу) проводят постановку модифицированной РСК с регистрацией результатов фотоэлектроколориметрией.


## 4. <a id="p100412"></a>Модифицированный метод РСК с учетом результатов фотоэлектроколориметрии.

<a id="p100413"></a>4.1. Данный метод используют для исследования проб патологического материала (везикул и везикулярной жидкости) с низкой комплементсвязывающей активностью. Метод основан на учете результатов гемолиза на спектрофотометре (фотоэлектроколориметре) с нефелометром.

#### <a id="p100414"></a>4.2 Компоненты реакции:

- <a id="p100415"></a>испытуемый антиген, приготовленный, как указано в [п. 2.2](#p100016);
- <a id="p100416"></a>два типоспецифических КС антигена вируса ВБС (0-72 и Т-75);
- <a id="p100417"></a>два типоспецифических КС антигена вируса ВЭС (С-72 и А-46);
- <a id="p100418"></a>контрольный (отрицательный) антиген;
- <a id="p100419"></a>две типоспецифические КС сыворотки к вирусу ВБС (0-72 и Т-75);
- <a id="p100420"></a>две типоспецифические КС сыворотки к вирусу ВЭС (С-72 и А-48);
- <a id="p100421"></a>три типоспецифические сыворотки к вирусу ящура типов А, О и С;
- <a id="p100422"></a>две типоспецифические сыворотки к вирусу везикулярного стоматита типов "Индиана" и "Нью-Джерси";
- <a id="p100423"></a>контрольная (отрицательная) сыворотка;
- <a id="p100424"></a>гемолизин;
- <a id="p100425"></a>комплемент;
- <a id="p100426"></a>эритроциты барана, приготовленные на вероналовом буфере;
- <a id="p100427"></a>физиологический раствор.

#### <a id="p100428"></a>4.3 Приготовление стандартной суспензии эритроцитов.

<a id="p100429"></a>Эритроциты барана 3 ... 4 раза отмывают и из осадка готовят 0,6 ... 0,7%-ную взвесь на вероналовом буфере. Стандартную взвесь готовят по следующей схеме:


| <a id="p100430"></a>N пробирок | <a id="p100431"></a>Суспензия отмытых эритроцитов (мл) | <a id="p100432"></a>Вероналовый буфер (мл) | <a id="p100433"></a>Физиологический раствор | <a id="p100434"></a>Оптическая плотность |
| --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100435"></a>1 | <a id="p100436"></a>0,25 | <a id="p100437"></a>1,75 | <a id="p100438"></a>3,0 | <a id="p100439"></a>0,51 |
| <a id="p100440"></a>2 | <a id="p100441"></a>0,25 | <a id="p100442"></a>1,75 | <a id="p100443"></a>3,0 | <a id="p100444"></a>0,50 |
| <a id="p100445"></a>3 | <a id="p100446"></a>0,25 | <a id="p100447"></a>1,75 | <a id="p100448"></a>3,0 | <a id="p100449"></a>0,49 |


<a id="p100450"></a>В РСК используют взвесь эритроцитов, в которой средний показатель оптической плотности должен быть равен 0,50.

##### <a id="p100451"></a>4.3.1 Примечание: Состав вероналового буфера:

- <a id="p100452"></a>барбитуровая кислота - 2,875 г;
- <a id="p100453"></a>барбитурат натрия - 1,875 г;
- <a id="p100454"></a>сернокислый магний - 0,616 г;
- <a id="p100455"></a>хлористый кальций - 0,080 г;
- <a id="p100456"></a>хлористый натрий - 45,5 г;
- <a id="p100457"></a>дистиллированная вода - 2 л.
<a id="p100458"></a>Вначале в мерной колбе на 2 л растворяют барбитуровую кислоту в 500 мл подогретой дистиллированной воды, а затем все остальные компоненты с добавлением воды до метки. Раствор стерилизуют автоклавированием при 110 °C в течение одного часа. Хранят до 2 мес при 4 °C. Перед употреблением разбавляют 2:3 дистиллированной водой.
<a id="p100459"></a>4.4. Гемолитическая система. Готовят разведение гемолизина соответственно удвоенному его титру в обычной РСК. Смешивают равные объемы раствора гемолизина и стандартной суспензии эритроцитов. Смесь выдерживают в течение 15 мин при комнатной температуре.

#### <a id="p100460"></a>4.5 Титрование комплемента проводят трехкратно. Комплемент разводят 1:200 и титруют по следующей схеме:



<table>
<colgroup><col width="22%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100461"></a>Комплемент<br>1:200</td><td><a id="p100462"></a>0,20</td><td><a id="p100463"></a>0,25</td><td><a id="p100464"></a>0,30</td><td><a id="p100465"></a>0,35</td><td><a id="p100466"></a>0,40</td><td><a id="p100467"></a>0,45</td><td><a id="p100468"></a>0,50</td><td><a id="p100469"></a>0,55</td><td><a id="p100470"></a>0,66</td></tr>
<tr><td><a id="p100471"></a>Вероналовый<br>буфер</td><td><a id="p100472"></a>1,3</td><td><a id="p100473"></a>1,75</td><td><a id="p100474"></a>1,20</td><td><a id="p100475"></a>1,15</td><td><a id="p100476"></a>1,10</td><td><a id="p100477"></a>1,05</td><td><a id="p100478"></a>1,00</td><td><a id="p100479"></a>0,95</td><td><a id="p100480"></a>0,90</td></tr>
<tr><td colspan="10"><a id="p100481"></a>30 мин при 57 °C на водяной бане</td></tr>
<tr><td><a id="p100482"></a>Гемсистема</td><td><a id="p100483"></a>0,5</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
<tr><td><a id="p100484"></a>Физ. раствор</td><td><a id="p100485"></a>3,0</td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr>
</table>


<a id="p100486"></a>Учет результатов.
<a id="p100487"></a>Полученные результаты наносят на миллиметровую бумагу и находят точку, соответствующую 50%-ному гемолизу эритроцитов (ОП = 0,25). В опыт берут 1,2 CH50 комплемента.
<a id="p100488"></a>4.6. Постановка основного опыта. Готовят двукратные разведения испытуемого антигена от 1:5 до 1:400, а далее в зависимости от примерной исходной активности антигена. Разливают по 0,5 мл каждого разведения антигена. Количество пробирок зависит от числа специфических сывороток, взятых в опыт. Вносят по 0,5 мл рабочего разведения сывороток согласно титру в обычной РСК. Добавляют комплемент в рабочем разведении и инкубируют при 37 °C в течение 30 мин. Затем вносят по 0,5 мл гемсистемы, выдерживают снова 30 мин при 37 °C и проводят учет реакции.
<a id="p100489"></a>4.7. Учет реакции. В левый кюветодержатель ФЭКН-57 ставят кювету с буфером, а в правый кюветодержатель - кювету с измеряемой пробой. Вращением правого барабана устанавливают стрелки прибора на нуль. Проводят отсчет показания прибора по правому барабану. Разница показания прибора на 0,15 и более между опытной пробиркой и контрольной - на антикомплементарность антигена + сыворотки, принимается за положительный результат. Разница 0,10 ... 0,14 - за сомнительный, 0,10 и ниже - за отрицательный результат.
<a id="p100490"></a>4.8. Настройку прибора ФЭКН-57 и измерение проводят по инструкции, прикладываемой к прибору.
<a id="p100491"></a>Для измерения используют фотоэлектроколориметр с нефелометром. Учет результатов проводят с использованием кюветы на 10 мм при переключении на нефелометрическое измерение с красным светофильтром (N 8).
<a id="p100492"></a>При малых объемах материала объем каждого реагента можно уменьшить до 0,25 мл, добавить физраствора 1,5 мл. Измерение при этом проводят в кюветах на 5 мм.


## 5. <a id="p100493"></a>Выявление типоспецифического антигена в патологическом материале методом РДП.

<a id="p100494"></a>5.1. Для постановки РДП используют 1,5%-ный агар, приготовленный на дистиллированной воде с добавлением 1,6% хлористого натрия. Для сохранения агара к нему добавляют 10%-ный раствор фенола из расчета 50 мл раствора на 1 л агара и 0,03 г мертиолята. Такой агар хранится в течение двух месяцев. Перед постановкой реакции его разливают в чашки Петри и штампом делают лунки (диаметр лунок 5 мм, расстояние между лунками 5 мм).

#### <a id="p100495"></a>5.2 Компоненты реакции:

- <a id="p100496"></a>испытуемые антигены, приготовленные, как указано в [п. 2.2](#p100016);
- <a id="p100497"></a>два контрольных типоспецифических антигена штаммов ВБС (0-72 и Т-75);
- <a id="p100498"></a>контрольный типоспецифический антиген штамма ВЭС (С-72);
- <a id="p100499"></a>две типоспецифические сыворотки к штаммам ВБС (0-72 и Т-75);
- <a id="p100500"></a>типоспецифическая сыворотка к штамму ВЭС (С-72);
- <a id="p100501"></a>типоспецифические сыворотки к 7 типам вируса ящура.
<a id="p100502"></a>5.3. Постановка реакции. В центральные лунки вносят испытуемый и контрольный антигены, в периферические - типоспецифические сыворотки. Чашки инкубируют при 37 °C. Учет реакции проводят через 24, 48 и 72 ч.
<a id="p100503"></a>5.4. Учет реакции. Положительная реакция характеризуется образованием четкой, белого цвета одной или двух линий преципитации между антигеном и гомологичной сывороткой.
<a id="p100504"></a>Возбудитель относят к тому виду (типу), с сывороткой которого испытуемый антиген дает положительную реакцию.


## 6. <a id="p100505"></a>Выделение вируса в культуре клеток.

<a id="p100506"></a>6.1. Для выделения вируса используют перевиваемую (ПП) или первично-трипсинизированную культуры клеток почки поросенка. Для заражения используют 10%-ную взвесь из стенок везикул, приготовленную, как указано в [п. 2.3](#p100017).
<a id="p100507"></a>Одной исследуемой пробой заражают не менее 4 ... 6 пробирок или флаконов с культурой клеток, внося в каждую пробирку по 0,1 мл (во флакон - по 0,5 мл) взвеси, предварительно удалив из пробирок питательную среду и промыв культуру клеток раствором Хенкса.
<a id="p100508"></a>Пробирки выдерживают в течение 60 мин при комнатной температуре, после чего в них добавляют поддерживающую питательную среду (0,9 мл в пробирки, 10 мл - во флаконы) и инкубируют в течение 3 ... 5 сут, не меняя среды. Для контроля оставляют 4 ... 6 пробирок с незараженной культурой клеток.
<a id="p100509"></a>6.2. Поддерживающая среда состоит из раствора Хенкса с 0,5%-ным гидролизатом лактальбумина с добавлением по 200 ЕД/мл пенициллина и стрептомицина, с pH 7,2 ... 7,4.
<a id="p100510"></a>6.3. Учет реакции. Для выявления цитопатического действия вируса в зараженных культурах их ежедневно просматривают под малым увеличением микроскопа в течение 3 ... 5 дней. При наличии вируса ВБС или ВЭС в исследуемом материале ЦПД обнаруживается через 24 ... 48 ч. Оно характеризуется мелкоклеточной деструкцией по всему монослою с последующим образованием мелких конгломератов и отслоением от стекла. Для вируса ВЭС характерно появление светопреломляющих округлых клеток по всему монослою с последующим образованием гроздевидных скоплений, которые затем также отслаиваются от стекла.
<a id="p100511"></a>6.4. При наличии ЦПД-вируса на два креста (деструкция 50% клеток) проводят его идентификацию в РСК (как описано в [п. 3](#p100018)) или в реакциях нейтрализации и иммунофлуоресценции.


## 7. <a id="p100512"></a>Идентификация выделенного вируса с помощью метода иммунофлуоресценции (прямой вариант).

<a id="p100513"></a>7.1. Метод иммунофлуоресценции используется только для идентификации вируса ВЭС.
<a id="p100514"></a>7.2. Выделенный вирус выращивают в культуре клеток на покровных стеклах. При появлении ЦПД (через 6 ... 8 ч инкубации) покровные стекла вынимают из пробирок и многократно отмывают фосфатно-буферным раствором, затем стекла подсушивают на воздухе и фиксируют метиловым спиртом в течение 5 мин.
<a id="p100515"></a>7.3. Для выявления вируса ВЭС используют специфическую флуоресцирующую сыворотку в рабочем разведении. Для контроля используют нормальную флуоресцирующую сыворотку в том же разведении.
<a id="p100516"></a>7.4. Проведение реакции. Фиксированные препараты многократно отмывают фосфатно-буферным раствором, высушивают на воздухе в течение 10 ... 20 мин и обрабатывают флуоресцирующей сывороткой. Для контроля однотипные препараты обрабатывают нормальной флуоресцирующей сывороткой. Препараты помещают во влажную камеру и выдерживают в течение 30 мин при 37 °C. Окрашенные препараты многократно промывают фосфатно-буферным раствором, высушивают на воздухе, покрывают забуференным глицерином (9:1) и покровным стеклом и микроскопируют.
<a id="p100517"></a>7.5. Оценка результатов. Положительной считается реакция, при которой в препарате наблюдается специфическое флуоресцирующее свечение клеток или цитоплазмы клеток не менее чем на два креста в трех и более полях зрения.
<a id="p100518"></a>7.6. В сомнительных случаях окончательный диагноз на ВЭС ставят по результатам РН.


## 8. <a id="p100519"></a>Идентификация и серотипирование выделенного вируса ВБС и ВЭС в реакции нейтрализации.

<a id="p100520"></a>8.1. Идентификацию и серотипирование выделенного вируса проводят с помощью типоспецифических вируснейтрализующих сывороток:
- <a id="p100521"></a>две сыворотки к вирусам ВБС (к штаммам 0-72 и Т-75);
- <a id="p100522"></a>две сыворотки к вирусам ВЭС (к штаммам С-72 и А-46).
<a id="p100523"></a>8.2. При необходимости дифференциации выделенного вируса от вируса ящура и вируса везикулярного стоматита в РН дополнительно используют сыворотки к указанным вирусам.
<a id="p100524"></a>8.3. Постановка реакции. Выделенный вирус в культуре клеток отстаивают при комнатной температуре (20 °C), затем центрифугируют при 3000 об/мин в течение 20 мин и надосадочную жидкость используют для постановки РН. Из надосадочной жидкости готовят десятикратные разведения (от 10-1 до 10-6) на 0,5%-ном гидролизате лактальбумина и к 0,5 мл каждого разведения добавляют такой же объем типоспецифической сыворотки. В реакции используют в четырехкратном титре сыворотки, инактивированные при температуре 57 °C в течение 30 мин. Смесь встряхивают, выдерживают при комнатной температуре в течение 60 мин. Затем по 0,2 мл каждой смеси вносят в пробирки с культурами и доливают в них поддерживающую среду до объема 1 мл. Перед заражением проводят однократное отмывание монослоя поддерживающей средой.

##### <a id="p100525"></a>8.3.1 Контроли:

- <a id="p100526"></a>незараженная культура клеток;
- <a id="p100527"></a>культура клеток, зараженная выделенным вирусом в разведении от 10-1 до 10-6;
- <a id="p100528"></a>культура клеток, в которую внесены типоспецифические сыворотки в разведении 1:10.
<a id="p100529"></a>Культуры клеток инкубируют при 37 °C и ежедневно просматривают под микроскопом.
<a id="p100530"></a>8.4. Учет реакции. Культуры просматривают в течение 3 ... 5 дней до выявления ЦПД в пробирках с культурой, зараженной вирусом.
<a id="p100531"></a>По выявлении ЦПД определяют титр инфекционности выделенного вируса (предельное его разведение, которое вызывает ЦПД в 50% зараженных пробирок не менее, чем на два креста).
<a id="p100532"></a>Предельное разведение вируса, дающее ЦПД, обозначают как одну дозу ТЦД50 (титр высчитывают по методу Рида и Менча). Индекс нейтрализации высчитывают по разности показателей ТЦД50 выделенного вируса в присутствии типоспецифических сывороток и определяют серотиповую принадлежность вируса.


## 9. <a id="p100533"></a>Ретроспективная диагностика.

<a id="p100534"></a>9.1. Для ретроспективной диагностики исследуют парные или однократно отобранные сыворотки переболевших животных. Сыворотки исследуют на наличие антител с помощью типоспецифических антигенов в РСК, РДП или РН.
<a id="p100535"></a>9.2. Реакция связывания комплемента. РСК проводят в варианте длительного связывания.
<a id="p100536"></a>Компоненты реакции:
- <a id="p100537"></a>типоспецифические антигены ВБС (штаммы 0-72 и Т-75);
- <a id="p100538"></a>типоспецифические антигены ВЭС (штаммы С-72 и А-48);
- <a id="p100539"></a>контрольный отрицательный антиген;
- <a id="p100540"></a>типоспецифические сыворотки к штаммам (0-72, Т-75, С-72 и А-48);
- <a id="p100541"></a>контрольная отрицательная сыворотка;
- <a id="p100542"></a>испытуемые сыворотки, инактивированные;
- <a id="p100543"></a>гемолизин к эритроцитам теленка;
- <a id="p100544"></a>комплемент.
<a id="p100545"></a>9.3. В РСК используют 3%-ную взвесь эритроцитов теленка и гемолизин соответственно к ним. Комплемент используют биофабричного производства. Типоспецифические антигены предварительно титруют с соответствующими типоспецифическими сыворотками для определения рабочего разведения, как указано в п. 3.7.
<a id="p100546"></a>9.4. Для дифференциации везикулярного стоматита и ящура при исследовании сывороток используют соответствующие антигены.

#### <a id="p100547"></a>9.5 Схема постановки главного опыта при ретроспективной диагностике.



<table>
<colgroup><col width="77%"><col width="23%"></colgroup>
<tr><td><a id="p100548"></a>Ингредиенты</td><td><a id="p100549"></a>Количество (мл)</td></tr>
<tr><td><a id="p100550"></a>Испытуемая сыворотка в двукратных разведениях, начиная с 1:4 до 1:32</td><td><a id="p100551"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100552"></a>Антиген в рабочем разведении</td><td><a id="p100553"></a>0,1</td></tr>
<tr><td><a id="p100554"></a>Комплемент в рабочей дозе</td><td><a id="p100555"></a>0,1</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100556"></a>Выдерживают при 4 °C в течение 18 ч</td></tr>
<tr><td><a id="p100557"></a>Гемсистема</td><td><a id="p100558"></a>0,2</td></tr>
<tr><td colspan="2"><a id="p100559"></a>Выдерживают на водяной бане при 37 °C 30 ... 40 мин</td></tr>
<tr><td><a id="p100560"></a>Учет реакции</td><td></td></tr>
</table>



#### <a id="p100561"></a>9.6 Схема учета главного опыта при ретроспективной диагностике.



<table>
<colgroup><col width="21%"><col width="42%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"><col width="9%"></colgroup>
<tr><td colspan="2"><a id="p100562"></a>Ингредиенты</td><td colspan="4"><a id="p100563"></a>Разведение сывороток</td></tr>
<tr><td><a id="p100564"></a>Сыворотки</td><td><a id="p100565"></a>Антигены</td><td><a id="p100566"></a>1:4</td><td><a id="p100567"></a>1:8</td><td><a id="p100568"></a>1:16</td><td><a id="p100569"></a>1:32</td></tr>
<tr><td rowspan="6"><a id="p100570"></a>От больного животного в остром периоде</td><td><a id="p100571"></a>1. Типоспецифический антиген штамма 0-72</td><td><a id="p100572"></a>++++</td><td><a id="p100573"></a>++</td><td><a id="p100574"></a>0</td><td><a id="p100575"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100576"></a>2. Типоспецифический антиген штамма Т-75</td><td><a id="p100577"></a>++</td><td><a id="p100578"></a>+</td><td><a id="p100579"></a>0</td><td><a id="p100580"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100581"></a>3. Типоспецифический антиген штамма С-72</td><td><a id="p100582"></a>0</td><td><a id="p100583"></a>0</td><td><a id="p100584"></a>0</td><td><a id="p100585"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100586"></a>4. Типоспецифический антиген штамма А-48</td><td><a id="p100587"></a>0</td><td><a id="p100588"></a>0</td><td><a id="p100589"></a>0</td><td><a id="p100590"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100591"></a>5. Контрольный (отрицательный) антиген</td><td><a id="p100592"></a>0</td><td><a id="p100593"></a>0</td><td><a id="p100594"></a>0</td><td><a id="p100595"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100596"></a>6. Без антигена (контрольная сыворотка на антикомплементарность)</td><td><a id="p100597"></a>0</td><td><a id="p100598"></a>0</td><td><a id="p100599"></a>0</td><td><a id="p100600"></a>0</td></tr>
<tr><td rowspan="6"><a id="p100601"></a>От реконвалесцента</td><td><a id="p100602"></a>1. Типоспецифический антиген штамма 0-72</td><td><a id="p100603"></a>++++</td><td><a id="p100604"></a>++++</td><td><a id="p100605"></a>++++</td><td><a id="p100606"></a>++</td></tr>
<tr><td><a id="p100607"></a>2. Типоспецифический антиген штамма Т-75</td><td><a id="p100608"></a>++++</td><td><a id="p100609"></a>++++</td><td><a id="p100610"></a>++</td><td><a id="p100611"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100612"></a>3. Типоспецифический антиген штамма С-72</td><td><a id="p100613"></a>0</td><td><a id="p100614"></a>0</td><td><a id="p100615"></a>0</td><td><a id="p100616"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100617"></a>4. Типоспецифический антиген штамма А-48</td><td><a id="p100618"></a>0</td><td><a id="p100619"></a>0</td><td><a id="p100620"></a>0</td><td><a id="p100621"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100622"></a>5. Контрольный (отрицательный) антиген</td><td><a id="p100623"></a>0</td><td><a id="p100624"></a>0</td><td><a id="p100625"></a>0</td><td><a id="p100626"></a>0</td></tr>
<tr><td><a id="p100627"></a>6. Без антигена (контрольная сыворотка на антикомплементарность)</td><td><a id="p100628"></a>0</td><td><a id="p100629"></a>0</td><td><a id="p100630"></a>0</td><td><a id="p100631"></a>0</td></tr>
</table>


<a id="p100632"></a>Ретроспективный диагноз считается положительным при двукратном нарастании титра специфических антител к вирусу ВБС или ВЭС.
<a id="p100633"></a>9.7. Реакция диффузионной преципитации. Для исследования в РДП используют парные пробы сывороток и типоспецифические антигены ВБС (штаммы 0-72 и Т-75), ВЭС (штаммы С-72 и А-48), ящура (А, О, С, Сат-1, Сат-2, Сат-3 и Азия-1), а также контрольные положительные и контрольные отрицательные сыворотки. Постановку и учет РДП проводят, как указано в [пп. 4.3](#p100428) и [4.4](#p100459).
<a id="p100634"></a>9.8. Реакция нейтрализации. Для реакции нейтрализации используют парные сыворотки свиней и вирусы ВБС (штаммы 0-72 и Т-75), ВЭС (штаммы С-72 и А-48) и вирусы ВС и ящура (7 серотипов). Испытуемые сыворотки инактивируют и разводят от 1:8 до 1:64. Вирусы предварительно титруют в культуре клеток и используют в РН в дозе 1000 ТЦД50 в 1 мл. Постановку реакции проводят общепринятым методом.
<a id="p100635"></a>9.9. Ретроспективный диагноз считается положительным при нарастании титра антител в парных сыворотках или при обнаружении титра антител 1:32 и выше у 10 и более свиней от числа однократно обследованных.


## 10. <a id="p100636"></a>Биологическая проба.

<a id="p100637"></a>10.1. Биопробу проводят на белых мышах однодневного возраста и морских свинках. Материалом для заражения служит взвесь из стенок везикул (1:10) от больных свиней.
<a id="p100638"></a>10.2. Испытуемый материал вводят морским свинкам интраплантарно в дозе 0,2 мл, мышам - интрацеребрально в дозе 0,02 мл. Наблюдают за животными в течение 10 дней после заражения.
<a id="p100639"></a>10.3. Морские свинки чувствительны к вирусам везикулярного стоматита и ящура, мыши чувствительны только к вирусу ВБС. Через 36 ... 72 ч при наличии вируса ВБС мыши гибнут с явлениями паралича. Из органов и тканей павших животных готовят суспензию (как указано в [п. 2.2](#p100016)) и исследуют в РСК на наличие антигена вируса ВБС.


## 11. <a id="p100640"></a>Идентификация вируса ВБС и ВЭС и дифференциация их от вирусов ящура и везикулярного стоматита по физико-химическим свойствам.

<a id="p100641"></a>11.1. Для определения чувствительности выделенного вируса к эфиру и к pH 5,0, а также стабилизирующего действия MgCl2 при 50 °C используют нативную культуральную вируссодержащую жидкость.
<a id="p100642"></a>11.2. Определение чувствительности вируса к эфиру. Вируссодержащую жидкость в количестве 5 ... 10 мл смешивают с равным объемом эфира, встряхивают в течение 20 мин при комнатной температуре и смесь оставляют на 18 ... 20 ч при 4 °C. Затем смесь центрифугируют при 2000 об/мин в течение 10 мин, верхний слой, содержащий эфир, удаляют, а нижний слой, содержащий вирус, титруют в культуре клеток ПП.
<a id="p100643"></a>11.3. Определение чувствительности вируса к pH 5,0. К 9 частям среды с pH 5,0 (доводят до нужного значения добавлением 1 N HCl) добавляют 1 часть вируссодержащего материала, выдерживают в течение 1 ... 2 ч при комнатной температуре и затем титруют в культуре клеток ПП.
<a id="p100644"></a>11.4. Определение стабилизирующего действия 1 М MgCl2 при 50 °C. Вируссодержащий материал смешивают с равным объемом 2 М MgCl2 и подогревают в течение одного часа при 50 °C, затем его титруют в культуре клеток ПП.

#### <a id="p100645"></a>11.5 Сравнительные данные физико-химических свойств вирусов.



| <a id="p100646"></a>Свойства | <a id="p100647"></a>ВЭС | <a id="p100648"></a>ВБС | <a id="p100649"></a>ВС | <a id="p100650"></a>Ящур |
| --- | --- | --- | --- | --- |
| <a id="p100651"></a>Чувствительность к эфиру | <a id="p100652"></a>Устойчив | <a id="p100653"></a>Устойчив | <a id="p100654"></a>Неустойчив | <a id="p100655"></a>Устойчив |
| <a id="p100656"></a>Чувствительность к pH 5,0 | <a id="p100657"></a>Устойчив | <a id="p100658"></a>Устойчив | <a id="p100659"></a>Устойчив | <a id="p100660"></a>Неустойчив |
| <a id="p100661"></a>Стабилизация 1 М MgCl2 | <a id="p100662"></a>Не стабилизируется | <a id="p100663"></a>Стабилизируется | <a id="p100664"></a>Не стабилизируется | <a id="p100665"></a>Не стабилизируется |


<a id="p100666"></a>По результатам физико-химических исследований проводят идентификацию и дифференциацию вирусов ВБС, ВЭС, везикулярного стоматита (ВС) и ящура.
<a id="p100667"></a>С изданием настоящих Методических указаний считается утратившим силу "Временное наставление по лабораторной диагностике везикулярной болезни свиней", утвержденное Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 19 февраля 1975 г.



<a id="p100668"></a>

---