Методические указания по лабораторной диагностике некробактериоза

(утв. Минсельхозом СССР 12.02.1985)

1. Общие положения.

1.1. Некробактериоз — острая контагиозная болезнь всех видов животных и птиц, проявляющаяся гнойно-некротическим распадом соединительной и мышечной тканей.

1.2. Возбудитель болезни Fusobacterium necrophorum — строгий анаэроб, представляет собой грамотрицательную неподвижную, не образующую спор полиморфную палочку.

1.3. Диагноз на некробактериоз ставят на основании клинических, эпизоотологических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.

1.4. Для исследования в лабораторию направляют трупы мелких животных целиком, от крупных животных — пораженные ткани и части паренхиматозных органов с некротическими очагами.

Для прижизненного исследования из мест поражения берут соскобы на границе здоровой и некротизированной тканей. Материал направляют в свежем виде или консервируют 30%-ным раствором глицерина.

1.5. Исследование на некробактериоз включает микроскопию мазков из патологического материала, посевы на питательные среды и заражение лабораторных животных.

2. Микроскопическое исследование.

2.1. Из некротизированных тканей делают мазки и окрашивают по Муромцеву, Романовскому-Гимзе или синькой Леффлера, а также по Граму.

2.2. В мазках из патологического материала, взятого на границе здоровой и некротизированной тканей, возбудитель имеет вид грамотрицательных, а при окраске специальными методами — зернистоокрашенных нитей различной длины, в старых очагах — коротких палочек и даже кокков.

3. Бактериологическое исследование.

3.1. Высевы из патологического материала делают в среду Китта-Тароцци, МПБ и на МПА. Кроме того, можно использовать сывороточно-глюкозный агар (чашки с агаром помещают в анаэробные условия, которые создают одним из общепринятых методов).

Среду Китта-Тароцци перед посевом регенерируют — прогревают в кипящей водяной бане в течение 20 — 30 мин, после чего быстро охлаждают до 45 — 50 °C.

Посевы инкубируют при 37 — 38 °C до 5 сут, просматривая ежедневно.

3.2. На среде Китта-Тароцци F. necrophorum через 13 — 24 ч образует интенсивную муть вначале в нижних слоях среды, а позднее — и в верхних, газообразование очень слабое. Просветление бульона наступает на 5 — 8-е сут, при этом на дно пробирки выпадает крошковатый осадок.

При микроскопии мазков из культуры обнаруживают зернистоокрашенные длинные переплетающиеся нити, местами в них могут быть колбовидные расширения.

3.3. На чашках с сывороточно-глюкозным агаром в строго анаэробных условиях через 48 — 72 ч появляются мелкие росинчатые колонии, в дальнейшем колонии увеличиваются в размерах и принимают более очерченную круглую или продолговатую форму с зоной гемолиза.

В связи с тем, что получение чистой культуры F. necrophorum из первичного материала на плотных средах затруднительно, выделение ее целесообразно проводить биологическим методом.

4. Биологическое исследование.

4.1. Одновременно с посевами проводят заражение кролика. Из патологического материала готовят суспензию на физиологическом растворе 1:10. Полученную суспензию в дозе 0,5 — 1 мл вводят под кожу средней трети наружной поверхности уха. Для заражения можно использовать суточную бульонную культуру возбудителя в тех же дозах.

Наблюдение за зараженными животными ведут в течение 10 сут.

4.2. При наличии в патологическом материале или исследуемой культуре F. necrophorum у кролика на месте инъекции через 3 — 4 дня развивается некроз. Из очага некроза делают мазки и окрашивают, как описано в п. 2.1. При обнаружении в мазках зернистоокрашенных нитей, характерных для возбудителя некробактериоза, биопроба считается положительной.

5. Диагноз на некробактериоз считают установленным в случаях:

выделения из патологического материала культуры со свойствами, характерными для возбудителя некробактериоза, и развития некротического очага у кролика на месте введения суспензии исходного материала или культуры с последующим обнаружением в мазках из этого очага типичных микроорганизмов;

развития у зараженного кролика некротического очага на месте введения материала и обнаружения в мазках из него типичных микробов, даже при отсутствии роста возбудителя в посевах из исходного материала.

6. Срок исследования — до 10 дн.

---